用于心房纤颤的评价中的循环BMP10 (骨形态发生蛋白10)

摘要

本发明涉及用于评价受试者中的心房纤颤的方法，所述方法包括以下步骤：测定来自所述受试者的样品中的BMP10的量，和将BMP10的量与参考量进行比较，由此评价心房纤颤。此外，本发明涉及基于来自受试者的样品中的BMP10的测定来诊断心力衰竭的方法。进一步，本发明涉及基于来自受试者的样品中的BMP10‑型肽的测定来预测受试者由于心力衰竭而住院的风险的方法。

说明书

本发明涉及用于评价受试者中的心房纤颤的方法，所述方法包括以下步骤：测定来自所述受试者的样品中的BMP10-型肽的量，和将BMP10-型肽的量与参考量进行比较，由此评价心房纤颤。此外，本发明涉及基于来自受试者的样品中的BMP10-型肽的测定来诊断心力衰竭的方法。进一步，本发明涉及基于来自受试者的样品中的BMP10-型肽的测定来预测受试者由于心力衰竭而住院的风险的方法。

背景部分

心房纤颤(AF)是最常见类型的心律失常，并且是老年人群中最普遍的病况之一。心房纤颤的特征在于心脏跳动不规律，并且经常始于短暂时段的异常跳动，其可随时间增加，并可能成为永久性病况。据估计，美国270-610万人患有心房纤颤，且全球约3300万人患有心房纤颤(Chugh S.S.等人, Circulation 2014;129:837-47)。

心律失常诸如心房纤颤的诊断通常涉及心律失常的原因的确定和心律失常的分类。根据美国心脏病学会(ACC)、美国心脏协会(AHA)和欧洲心脏病学会(ESC)的心房纤颤的分类指南主要基于简单性和临床相关性。第一类别被称为“首次检测到的AF”。该类别中的人最初被诊断具有AF，并且可能具有或可能没有先前未检测到的发作。如果首次检测到的发作在少于一周内自行停止，但随后后来有另一次发作，则类别将变为“阵发性AF”。尽管该类别中的患者具有持续最长达7天的发作，但在大多数阵发性AF的病例中，发作将在少于24小时内停止。如果发作持续超过一周，则将其分类为“持续性AF”。如果不能停止这种发作(即通过电或药物复律)，并且继续超过一年，则将分类改变为“永久性AF”。心房纤颤的早期诊断是高度期望的，因为心房纤颤是中风和全身性栓塞的重要危险因素(Hart等人, AnnIntern Med 2007; 146(12): 857-67; Go AS等人 JAMA 2001; 285(18): 2370-5)。中风作为高收入国家的失能调整寿命年数(disability-adjusted life years)损失的原因以及作为全球的死亡原因在缺血性心脏病之后排序第二。为了降低中风的风险，抗凝疗法似乎是最适当的疗法。

非常期望允许评价心房纤颤的生物标志物。

Latini R.等人 (J Intern Med. 2011 Feb; 269(2): 160-71)测量了具有心房纤颤的患者中的各种循环生物标志物(hsTnT、NT-proBNP、MR-proANP、MR-proADM、和肽素(copeptin)和CT-内皮素原-1)。

骨形态发生蛋白10(缩写为BMP10)是蛋白的TGF-β(转化生长因子-β)超家族的配体。该家族的配体结合各种TGF-β受体，导致募集和激活某些调节基因表达的转录因子。BMP10结合激活素受体样激酶1(ALK1)，并且已被显示是内皮细胞中该激酶的功能性激活物(David等人, Blood. 2007, 109(5):1953-61)。

BMP10合成为无活性的前体蛋白(pro-BMP10，∼60 kDa)，其通过蛋白水解切割而被激活，产生108 aa的非糖基化的C-末端肽(∼14 kDa; BMP10)和∼50 kDa 的N-末端前区段(Susan-Resiga等人, J Biol Chem. 2011 Jul 1;286(26):22785-94)。两者均保持结构邻近，形成BMP10的同二聚体或异二聚体，或与其他BMP-家族蛋白组合(Yadin等人, CYTOGFR2016, 27 (2016) 13–34)。通过在两个结合配偶体的C-末端肽中形成Cys-Cys桥或强粘附来发生二聚化。因此，形成由两个亚单元组成的架构。

已经显示BMP10在心血管发育(包括心肌细胞增殖和心脏大小的调节，动脉导管的闭合，血管生成和心室小梁形成)中发挥作用。

已发现参与调节组织修复的可溶性BMP10是心血管疾病中也参与组织纤维化的诊断和治疗靶标(参见例如，US2013209490)。已经描述了BMP10参与血管纤维化和心脏纤维化。

US 2012/0213782公开了BMP10前肽可用于治疗心脏疾病。

BMP10的一般作用是在血管重塑的发育调节中(Ricard等人, Blood. 2012 Jun21; 119(25): 6162–6171)。此外，BMP10是心脏发育因子(Huang等人, J Clin Invest.2012;122(10):3678-3691)，并在心肌梗塞后诱导心肌细胞增殖(Sun等人, J CellBiochem. 2014;115(11)_1868-1876)。其被描述也源自内皮细胞(Jiang等人, JBC 2016,291(6): 2954–2966)。

转录组学分析揭示，健康状况下的BMP10 mRNA在心脏右心房和右心耳中强烈表达。与左心耳相比，其主要在右侧表达(Kahr等人, Plos ONE, 2010, 6(10): e26389)。

迄今为止，循环的BMP10-型肽尚未与心房纤颤相关联。

需要用于评价心房纤颤，包括心房纤颤的诊断、具有心房纤颤的患者的风险分层(诸如中风的发生)，评价心房纤颤的严重程度以及在具有心房纤颤的患者中评价疗法的可靠方法。

作为本发明基础的技术问题可以被视为提供用于符合前述需求的方法。所述技术问题通过权利要求中和本文下面表征的实施方案解决。

有利地，在本发明的研究的背景下发现，测定来自受试者的样品中BMP10-型肽的量允许改进心房纤颤的评价。由于本发明，可以例如诊断受试者是否患有心房纤颤，或是否处于患有与心房纤颤相关的中风的风险中。

本发明概述

本发明涉及用于评价受试者中的心房纤颤的方法，其包括以下步骤：

a) 在来自受试者的至少一种样品中测定BMP10-型肽(骨形态发生蛋白10-型肽)的量，和任选地，选自利尿钠肽、ESM-1 (Endocan)、Ang2(血管生成素2)和FABP3(脂肪酸结合蛋白3)的至少一种另外的生物标志物的量，和

b) 将所述BMP10-型肽的量与所述BMP10-型肽的参考量进行比较，和任选地，将所述至少一种另外的生物标志物的量与所述至少一种另外的生物标志物的参考量进行比较，由此评价心房纤颤。

本发明进一步涉及辅助评价心房纤颤的方法，所述方法包括以下步骤：

a) 提供来自受试者的至少一种样品，

b) 在步骤a)中提供的至少一种样品中测定BMP10-型肽(骨形态发生蛋白10-型肽)的量，和任选地，选自利尿钠肽、ESM-1 (Endocan)、Ang2和FABP3(脂肪酸结合蛋白3)的至少一种另外的生物标志物的量，和

c) 向医师提供关于所述BMP10-型肽的测定量和任选地所述至少一种另外的生物标志物的测定量的信息，由此辅助评价心房纤颤。

进一步，本发明考虑用于辅助评价心房纤颤的方法，其包括：

a) 提供用于BMP10-型肽的测定，和任选地用于选自利尿钠肽、ESM-1 (Endocan)、Ang2和FABP3(脂肪酸结合蛋白3)的另外的生物标志物的至少一种另外的测定，和

b) 提供用于在评价心房纤颤中使用通过所述测定获得或可获得的测定结果的说明书。

本发明还涵盖用于评价心房纤颤的计算机执行的方法，其包括：

a) 在处理单元处接收BMP10-型肽的量的值，和任选地选自利尿钠肽、ESM-1(Endocan)、Ang2和FABP3(脂肪酸结合蛋白3)的至少一种另外的生物标志物的量的至少一种另外的值，其中已经在来自受试者的样品中测定所述BMP10的量和任选地至少一种另外的生物标志物的量，

b) 通过所述处理单元将步骤(a)中接收的一个或多个值与一个或多个参考进行比较，和

c) 基于比较步骤b)评价心房纤颤。

本发明进一步涉及用于诊断心力衰竭的方法，所述方法包括以下步骤：

(a) 在来自受试者的至少一种样品中测定BMP10-型肽(骨形态发生蛋白10-型肽)的量，和任选地，选自利尿钠肽、ESM-1 (Endocan)、Ang2和FABP3(脂肪酸结合蛋白3)的至少一种另外的生物标志物的量，和

(b) 将所述BMP10-型肽的量与所述BMP10-型肽的参考量进行比较，和任选地，将所述至少一种另外的生物标志物的量与所述至少一种另外的生物标志物的参考量进行比较，由此诊断心力衰竭。

本发明进一步涉及用于预测受试者由于心力衰竭而住院的风险的方法，所述方法包括以下步骤：

(a) 在来自受试者的至少一种样品中测定BMP10-型肽(骨形态发生蛋白10-型肽)的量，和任选地，选自利尿钠肽、ESM-1 (Endocan)、Ang2和FABP3(脂肪酸结合蛋白3)的至少一种另外的生物标志物的量，

(b) 将所述BMP10-型肽的量与参考量进行比较，和任选地，将所述至少一种另外的生物标志物的量与所述至少一种另外的生物标志物的参考量进行比较，和

(c) 预测受试者由于心力衰竭而住院的风险。

本发明进一步涉及试剂盒，其包含：特异性结合BMP10-型肽的试剂，和选自以下的至少一种另外的试剂：特异性结合利尿钠肽的试剂，特异性结合ESM-1的试剂，特异性结合Ang2的试剂和特异性结合FABP3的试剂。

此外，本发明涉及以下物质用于评价心房纤颤、用于预测中风的风险、或用于诊断心力衰竭、或用于预测受试者由于心力衰竭而住院的风险的体外用途：

i) BMP10-型肽，和任选地选自利尿钠肽、ESM-1 (Endocan)、Ang2和FABP3(脂肪酸结合蛋白3)的至少一种另外的生物标志物，和/或

ii)至少一种特异性结合BMP10-型肽的试剂，和任选地，选自以下的至少一种另外的试剂：特异性结合利尿钠肽的试剂，特异性结合ESM-1的试剂，特异性结合Ang2的试剂和特异性结合FABP3的试剂。

发明详述/定义

本发明涉及用于评价受试者中的心房纤颤的方法，其包括以下步骤：

a) 在来自所述受试者的至少一种样品中测定BMP10-型肽(骨形态发生蛋白10-型肽)的量，和

b) 将所述BMP10-型肽的量与所述BMP10-型肽的参考量进行比较，由此评价心房纤颤。

所述BMP10-型肽优选选自BMP10、BMP10的N-末端前区段(N-末端proBMP10)、proBMP10和preproBMP10。更优选地，所述BMP10-型肽是BMP10和/或N-末端proBMP10。

在本发明的方法的一个实施方案中，所述方法进一步包括测定步骤a)中来自所述受试者的样品中的选自利尿钠肽、ESM-1 (Endocan)、Ang2 (血管生成素2)和FABP-3(脂肪酸结合蛋白3)的至少一种另外的标志物的量，和在步骤b)中将所述至少一种另外的生物标志物的量与参考量进行比较。

因此，本发明涉及用于评价受试者中的心房纤颤的方法，其包括以下步骤：

a) 在来自受试者的至少一种样品中测定BMP10-型肽(骨形态发生蛋白10-型肽)的量，和任选地，选自利尿钠肽、ESM-1 (Endocan)、Ang2(血管生成素2)和FABP-3(脂肪酸结合蛋白3)的至少一种另外的生物标志物的量，和

b) 将所述BMP10-型肽的量与所述BMP10-型肽的参考量进行比较，和任选地，将所述至少一种另外的生物标志物的量与所述至少一种另外的生物标志物的参考量进行比较，由此评价心房纤颤。

心房纤颤(AF)的评价应当基于比较步骤b)的结果。

因此，本发明优选包括以下步骤：

a) 在来自受试者的至少一种样品中测定BMP10-型肽的量，和任选地，选自利尿钠肽、ESM-1 (Endocan)、Ang2(血管生成素2)和FABP-3(脂肪酸结合蛋白3)的至少一种另外的生物标志物的量，

b) 将所述BMP10-型肽的量与所述BMP10-型肽的参考量进行比较，和任选地，将所述至少一种另外的生物标志物的量与所述至少一种另外的生物标志物的参考量进行比较，和

c) 基于比较步骤b)的结果评价心房纤颤。

如根据本发明所提及的方法包括基本上由前述步骤组成的方法或包括另外步骤的方法。此外，本发明的方法优选地是离体(

根据本发明，应当评价心房纤颤。如本文所用的术语“评价心房纤颤”优选是指诊断心房纤颤，区分阵发性和持续性心房纤颤，预测与心房纤颤相关的不良事件(诸如中风)的风险，鉴定应当经历心电描记术(ECG)的受试者，或评价用于心房纤颤的疗法。

如本领域技术人员将理解，本发明的评价通常不意在对100%的待测试的受试者是正确的。该术语优选地要求能够对于统计学显著部分的受试者进行正确的评价(诸如如本文所提及的诊断、区分、预测、鉴定或评价疗法)。一部分是否是统计学显著的可以通过本领域技术人员使用各种众所周知的统计评估工具例如置信区间的确定、p-值确定、Student氏t-检验、Mann-Whitney检验等来确定而无需费力。详述可见Dowdy和Wearden, Statisticsfor Research, John Wiley & Sons, New York 1983。优选的置信区间是至少90%、至少95%、至少97%、至少98%或至少99%。优选地，p-值是0.4、0.1、0.05、0.01、0.005或0.0001。

根据本发明，表述“心房纤颤的评价”被理解为辅助评价心房纤颤，且因此理解为辅助诊断心房纤颤，辅助区分阵发性和持续性心房纤颤，辅助预测与心房纤颤相关的不良事件的风险，辅助鉴定应当经历心电描记术(ECG)的受试者，或理解为辅助评价用于心房纤颤的疗法。原则上，最终诊断将由医生实施。

在本发明的一个优选实施方案中，心房纤颤的评价是心房纤颤的诊断。因此，诊断受试者是否患有心房纤颤。

因此，本发明设想了用于诊断受试者中的心房纤颤的方法，其包括以下步骤：

a) 测定来自所述受试者的样品中的BMP10-型肽的量，和

b) 将BMP10-型肽的量与参考量进行比较，由此诊断心房纤颤。

在一个实施方案中，前述方法包括以下步骤：

(a) 在来自受试者的至少一种样品中测定BMP10-型肽(骨形态发生蛋白10)的量，和任选地，选自利尿钠肽、ESM-1 (Endocan)、Ang2(血管生成素2)和FABP-3(脂肪酸结合蛋白3)的至少一种另外的生物标志物的量，和

(b) 将所述BMP10-型肽的量与所述BMP10-型肽的参考量进行比较，和任选地，将所述至少一种另外的生物标志物的量与所述至少一种另外的生物标志物的参考量进行比较，由此诊断心房纤颤。

优选地，与用于诊断心房纤颤的方法相关的待测试的受试者是怀疑患有心房纤颤的受试者。然而，还考虑受试者先前已经被诊断患有AF并且通过实施本发明的方法证实先前的诊断。

在本发明的另一个优选实施方案中，心房纤颤的评价是区分阵发性和持续性心房纤颤。因此，确定受试者患有阵发性还是持续性心房纤颤。

因此，本发明设想了用于区分受试者中的阵发性和持续性心房纤颤的方法，其包括以下步骤：

a) 测定来自所述受试者的样品中的BMP10-型肽的量，和

b) 将BMP10-型肽的量与参考量进行比较，由此区分阵发性和持续性心房纤颤。

在一个实施方案中，前述方法包括以下步骤：

a) 在来自受试者的至少一种样品中测定BMP10-型肽(骨形态发生蛋白10)的量，和任选地，选自利尿钠肽、ESM-1 (Endocan)、Ang2(血管生成素2)和FABP-3(脂肪酸结合蛋白3)的至少一种另外的生物标志物的量，和

b) 将所述BMP10-型肽的量与所述BMP10-型肽的参考量进行比较，和任选地，将所述至少一种另外的生物标志物的量与所述至少一种另外的生物标志物的参考量进行比较，由此区分阵发性和持续性心房纤颤。

在本发明的另一个优选实施方案中，心房纤颤的评价是预测与心房纤颤相关的不良事件(诸如中风)的风险。因此，预测受试者处于所述不良事件的风险中和/或不处于所述不良事件的风险中。

因此，本发明设想了用于预测受试者中的与心房纤颤相关的不良事件的风险的方法，其包括以下步骤：

a) 测定来自所述受试者的样品中的BMP10-型肽的量，和

b) 将BMP10-型肽的量与参考量进行比较，由此预测与心房纤颤相关的不良事件的风险。

在一个实施方案中，前述方法包括以下步骤：

a) 在来自受试者的至少一种样品中测定BMP10-型肽(骨形态发生蛋白10)的量，和任选地，选自利尿钠肽、ESM-1 (Endocan)、Ang2(血管生成素2)和FABP-3(脂肪酸结合蛋白3)的至少一种另外的生物标志物的量，和

b) 将所述BMP10-型肽的量与所述BMP10-型肽的参考量进行比较，和任选地，将所述至少一种另外的生物标志物的量与所述至少一种另外的生物标志物的参考量进行比较，由此预测与心房纤颤相关的不良事件的风险。

设想可以预测各种不良事件。优选的待预测的不良事件是中风。

因此，本发明尤其考虑用于预测受试者中的中风的风险的方法，其包括以下步骤：

a) 测定来自所述受试者的样品中的BMP10-型肽的量，和

b) 将BMP10-型肽的量与参考量进行比较，由此预测中风的风险。

前述方法可以进一步包括基于步骤b)的比较结果预测中风的步骤c)。因此，步骤a)、b)、c)优选如下：

a) 测定来自所述受试者的样品中的BMP10-型肽的量，和

b) 将BMP10-型肽的量与参考量进行比较，和

c) 基于步骤b)的比较结果预测中风。

在本发明的另一个优选实施方案中，心房纤颤的评价是评价用于心房纤颤的疗法。

因此，本发明设想了用于评价用于受试者中的心房纤颤的疗法的方法，其包括以下步骤：

a) 测定来自所述受试者的样品中的BMP10-型肽的量，和

b) 将BMP10-型肽的量与参考量进行比较，由此评价用于心房纤颤的疗法。

在一个实施方案中，前述方法包括以下步骤：

a) 在来自受试者的至少一种样品中测定BMP10-型肽(骨形态发生蛋白10)的量，和任选地，选自利尿钠肽、ESM-1 (Endocan)、Ang2(血管生成素2)和FABP-3(脂肪酸结合蛋白3)的至少一种另外的生物标志物的量，和

b) 将所述BMP10-型肽的量与所述BMP10-型肽的参考量进行比较，和任选地，将所述至少一种另外的生物标志物的量与所述至少一种另外的生物标志物的参考量进行比较，由此评价用于心房纤颤的疗法。

优选地，与前述区分、前述预测和用于心房纤颤的疗法的评价相关的受试者是患有心房纤颤的受试者，特别是已知患有心房纤颤(且因此具有心房纤颤的已知病史)的受试者。然而，关于前述预测方法，还设想受试者没有心房纤颤的已知病史。

在本发明的另一个优选实施方案中，心房纤颤的评价是鉴定应当经历心电描记术(ECG)的受试者。因此，鉴定是否应当经历心电描记术的受试者。

所述方法可以包括以下步骤：

a) 在来自受试者的至少一种样品中测定BMP10-型肽(骨形态发生蛋白10)的量，和任选地，选自利尿钠肽、ESM-1 (Endocan)、Ang2(血管生成素2)和FABP-3(脂肪酸结合蛋白3)的至少一种另外的生物标志物的量，和

b) 将所述BMP10-型肽的量与所述BMP10-型肽的参考量进行比较，和任选地，将所述至少一种另外的生物标志物的量与所述至少一种另外的生物标志物的参考量进行比较，由此鉴定应当进行心电描记术的受试者。

优选地，与前述鉴定应当经历心电描记术的受试者的方法相关的受试者是没有心房纤颤的已知病史的受试者。表述“没有心房纤颤史的已知病史”在本文别处定义。

在本发明的另一个优选实施方案中，心房纤颤的评价是受试者的抗凝疗法的效力的评价。因此，评价所述疗法的效力。

在本发明的另一个优选实施方案中，心房纤颤的评价是受试者中的中风的风险的预测。因此，预测本文所指的受试者是否处于中风的危险中。

在本发明的另一个优选实施方案中，心房纤颤的评价是鉴定有资格施用至少一种抗凝药物或有资格增加至少一种抗凝药物的剂量的受试者。因此，评价受试者是否有资格进行所述施用和/或所述剂量增加。

在本发明的另一个优选实施方案中，心房纤颤的评价是抗凝疗法的监测。因此，评价受试者是否对所述疗法响应。

术语“心房纤颤”(缩写为AF或AFib)是本领域众所周知的。如本文所用，该术语优选是指室上性心动过速，其特征在于不协调的心房激动，随后心房机械功能的恶化。具体而言，该术语是指特征在于快速和不规律跳动的异常心律。其涉及心脏的两个上腔室。在正常的心律中，由窦房结产生的脉冲通过心脏传播并引起心肌收缩和血液泵送。在心房纤颤中，窦房结的常规电脉冲被紊乱的快速电脉冲所替代，其导致不规律的心跳。心房纤颤的症状是心悸、昏厥、呼吸短促或胸痛。但是，大多数发作没有症状。在心电图上，心房纤颤的特征在于一致性的P波被在振幅、形状和时机上不同的快速振荡或颤动波所替代，当房室传导完好时，所述快速振荡或颤动波与不规律的、频繁快速的心室反应相关。

美国心脏病学会(ACC)、美国心脏协会(AHA)和欧洲心脏病学会(ESC)提出以下分类系统(参见Fuster V.等人, Circulation 2006;114 (7): e257–354，其在此以其整体通过引用并入，参见例如文件中的图3)：首次检测到的AF、阵发性AF、持续性AF和永久性AF。

所有具有AF的人最初在被称为首次检测到的AF的类别中。然而，所述受试者可能具有或可能没有先前未检测到的发作。如果AF已经持续超过一年，则受试者患有永久性AF，并且具体而言，不会发生转变回窦性心律(或仅在用医疗干预的情况下)。如果AF持续超过7天，则受试者患有持续性AF。受试者可能需要药物或电干预来终止心房纤颤。优选地，持续性AF在发作中发生，但心律失常不会自发地(即在没有医疗干预的情况下)转变回窦性心律。阵发性心房纤颤优选地是指心房纤颤的间歇性发作，其持续最长达7天。在阵发性AF的大多数情况下，发作持续少于24小时。心房纤颤的发作自发地(即在没有医疗干预的情况下)终止。因此，虽然阵发性心房纤颤的发作优选自发地终止，但持续性心房纤颤优选不会自发地终止。优选地，持续性心房纤颤需要电复律或药物复律用于终止，或需要其他程序，诸如消融术(Fuster V.等人, Circulation 2006;114 (7): e257–354)。持续性和阵发性AF可以是复发性的，由此通过ECG记录提供阵发性和持续性AF的区别：当患者具有2次或更多次发作时，AF被认为是复发性的。如果心律失常自发终止，则AF，特别是复发性AF，被指定为阵发性的。如果AF持续超过7天，则其被指定为持续性的。

在本发明的一个优选实施方案中，术语“阵发性心房纤颤”被定义为自发终止的AF发作，其中所述发作持续少于24小时。在一个替代实施方案中，自发终止的发作持续最长达七天。

如本文提及的“受试者”优选为哺乳动物。哺乳动物包括，但不限于，家养动物(例如，牛、绵羊、猫、狗和马)，灵长类动物(例如，人和非人灵长类动物诸如猴)，兔和啮齿类动物(例如，小鼠和大鼠)。优选地，所述受试者是人受试者。

优选地，待测试的受试者具有任何年龄，更优选地，待测试的受试者是50岁或更大，更优选60岁或更大，且最优选65岁或更大。进一步，设想待测试的受试者是70岁或更大。

此外，设想待测试的受试者是75岁或更大。此外，所述受试者可以在50和90岁之间。

在评价心房纤颤的方法的一个优选实施方案中，待测试的受试者应当患有心房纤颤。因此，所述受试者应当具有心房纤颤的已知病史。因此，所述受试者在获得测试样品之前应当已经历心房纤颤的发作，并且心房纤颤的先前发作中的至少一次应当例如通过ECG诊断到。例如，设想如果心房纤颤的评价是区分阵发性和持续性心房纤颤，或者如果心房纤颤的评价是预测与心房纤颤相关的不良事件的风险，或者如果心房纤颤的评价是评价心房纤颤的疗法，则所述受试者患有心房纤颤。

在评价心房纤颤的方法的另一个优选实施方案中，怀疑待测试的受试者患有心房纤颤，例如，如果心房纤颤的评价是诊断心房纤颤或鉴定应当经历心电描记术(ECG)的受试者。

优选地，怀疑患有心房纤颤的受试者是在实施用于评价心房纤颤的方法之前已经显示心房纤颤的至少一种症状的受试者。所述症状通常是短暂的并且可能在几秒钟内出现并且可能同样快速地消失。心房纤颤的症状包括头晕、昏厥、呼吸短促，且特别是心悸。优选地，所述受试者在获得样品之前的六个月内已显示心房纤颤的至少一种症状。

可替代地或另外地，怀疑患有心房纤颤的受试者应当为70岁或更大的受试者。

优选地，怀疑患有心房纤颤的受试者应当没有心房纤颤的已知病史。

根据本发明，没有心房纤颤的已知病史的受试者优选地是先前未被诊断患有心房纤颤的受试者，即在实施本发明的方法之前(具体而言在从受试者获得样品之前)。然而，所述受试者可能具有或可能没有先前未诊断的心房纤颤的发作。

优选地，术语“心房纤颤”是指所有类型的心房纤颤。因此，该术语优选地涵盖阵发性、持续性或永久性心房纤颤。

然而，在本发明的一个实施方案中，待测试的受试者不患有永久性心房纤颤。在该实施方案中，术语“心房纤颤”仅指阵发性和持续性心房纤颤。

然而，在本发明的另一个实施方案中，待测试的受试者不患有阵发性和永久性心房纤颤。在该实施方案中，术语“心房纤颤”仅指持续性心房纤颤。

当获得样品时，待测试的受试者可能会或可能不会经历心房纤颤的发作。因此，在评价心房纤颤(诸如诊断心房纤颤)的一个优选实施方案中，当获得样品时，所述受试者不经历心房纤颤的发作。在该实施方案中，当获得样品时，所述受试者应当具有正常窦性心律(且因此应当处于窦性心律)。因此，心房纤颤的诊断是可能的，甚至在(暂时)不存在心房纤颤的情况下。根据本发明的方法，在心房纤颤的发作之后应当保持如本文所提及的生物标志物的升高，因此，提供患有心房纤颤的受试者的诊断。优选地，在实施本发明的方法之后(或者更精确地说在已经获得样品之后)约三天内、约一个月内、约三个月内或约6个月内诊断AF。在一个优选实施方案中，在发作后约六个月内诊断心房纤颤是可行的。在一个优选实施方案中，在发作后约六个月内诊断心房纤颤是可行的。因此，如本文提及的心房纤颤的评价，特别是如本文提及的与心房纤颤的评价相关的诊断、风险预测或区分优选在心房纤颤的最后一次发作之后约三天之后、更优选约一个月之后、甚至更优选约三个月之后、且最优选约六个月之后实施。因此，设想待测试的样品优选在心房纤颤的最后一次发作之后约三天之后、更优选约一个月之后、甚至更优选约三个月之后且最优选约六个月之后获得。因此，心房纤颤的诊断优选还涵盖在获得样品之前优选约三天内、更优选约三个月内且最优选约六个月内发生的心房纤颤发作的诊断。

然而，还设想当获得样品时(例如关于中风的预测)，所述受试者经历心房纤颤的发作。

术语“样品”是指体液的样品、分离的细胞的样品或来自组织或器官的样品。体液的样品可以通过众所周知的技术获得，且包括血液、血浆、血清、尿液、淋巴液、痰液、腹水或任何其他身体分泌液或其衍生物的样品。组织或器官样品可以通过例如活检获得自任何组织或器官。分离的细胞可以通过分离技术诸如离心或细胞分选获得自体液或组织或器官。例如，细胞、组织或器官样品可以获得自表达或产生生物标志物的那些细胞、组织或器官。所述样品可以是冷冻的，新鲜的，固定的(例如福尔马林固定的)，离心的，和/或包埋的(例如石蜡包埋的)等。在评价样品中的生物标志物的量之前，当然可以对所述细胞样品实施各种众所周知的收集后制备和储存技术(例如，核酸和/或蛋白提取、固定、储存、冷冻、超滤、浓缩、蒸发、离心等)。

在本发明的一个优选实施方案中，所述样品是血液(即全血)、血清或血浆样品。血清是允许血液凝固后获得的全血的液体级分。为了获得血清，通过离心除去凝块并收集上清液。血浆是血液的无细胞流体部分。为了获得血浆样品，将全血收集在抗凝剂处理的管中(例如柠檬酸盐处理的管或EDTA处理的管)。通过离心从样品中除去细胞，并且得到上清液(即血浆样品)。

如上所示，所述受试者可以处于窦性心律，或者可以在获得样品时患有AF节律的发作。

BMP10-型肽是本领域中众所周知的。优选的BMP10-型肽例如公开于Susan-Resiga等人 (J Biol Chem. 2011 Jul 1;286(26):22785-94)，其在此通过引用以其整体并入(参见例如Susan-Resiga等人的图3A或US 2012/0213782)。

在一个实施方案中，所述BMP10-型肽是未加工的preproBMP10。在另一个实施方案中，所述BMP10-型肽是前肽proBMP10。该标志物包含N-末端前区段和BMP10。在另一个实施方案中，所述BMP10-型肽是BMP10的N-末端前区段(N-末端proBMP10)。在另一个实施方案中，所述BMP10-型肽是BMP10。

在一个实施方案中，所述BMP10-型肽是同二聚体或异二聚体复合物的一部分。

人preproBMP10(即未加工的preproBMP10)具有424个氨基酸的长度。人preproBMP10的氨基酸序列例如显示于SEQ ID NO:1或US 2012/0213782的图3中，其在此通过引用以其整体并入。此外，preproBMP10的氨基酸序列可以经由Uniprot(参见登录号O95393-1下的序列)进行评价。人preproBMP10包含短信号肽(氨基酸1至21)，其被酶促切割掉以释放proBMP10。。因此，人proBMP10包含(即具有SEQ ID NO 1中所示的序列的多肽的)人preproBMP10的氨基酸22至424。人proBMP10被进一步切割成BMP10和(非糖基化的)BMP10(其为活性形式)的N-末端前区段。BMP10的N-末端前区段包含具有(即人preproBMP10的)SEQ ID NO 1中所示的序列的多肽的氨基酸22至316。BMP10包含具有SEQ ID NO 1中所示的序列的多肽的氨基酸317至424。

优选的BMP10-型肽是BMP10和N-末端proBMP10。在切割proBMP10后，BMP10和N-末端proBMP10保持结构邻近，形成BMP10的同二聚体或异二聚体，或与其他BMP-家族蛋白组合(Yadin等人, CYTOGFR 2016, 27 (2016) 13–34)。通过在两个结合配偶体的C-末端肽中形成Cys-Cys桥或强粘附来发生二聚化。因此，形成由两个亚单元组成的架构。

因为proBMP10被切割成等摩尔比例的BMP10和N-末端前区段，所以BMP10的量反映N-末端前区段的量。因此，可以通过测定N-末端前区段的量来确定BMP10的量，且反之亦然。

优选地，通过使用一种或多种特异性结合BMP10-型肽的抗体(或其抗原结合片段)来确定BMP10-型肽的量。

例如，可以使用一种或多种特异性结合BMP10的N-末端前区段的抗体。由于此类抗体(或片段)也将结合proBMP10和preproBMP10，因此在本发明的方法的步骤a)中测定BMP10的N-末端前区段、proBMP10和preproBMP10的量的总和。因此，表述“测定BMP10的N-末端前区段的量”也应意指“测定BMP10的N-末端前区段、proBMP10和preproBMP10的量的总和”。

基于来自作为例如BMP9的其他BMP-型蛋白的结构预测显示，BMP10与proBMP10保留在复合物中，因此N-末端前区段的检测也反映BMP10的量。

例如，可以使用一种或多种特异性结合BMP10的抗体。由于此类抗体(或片段)也将结合proBMP10和preproBMP10，所以在本发明的方法的步骤a)中测定BMP10、proBMP10和preproBMP10的量的总和。因此，表述“测定BMP10的量”也应意指“测定BMP10、proBMP10和preproBMP10的量的总和”。

基于来自作为例如BMP9的其他BMP-型蛋白的结构预测显示，BMP10与proBMP10保留在复合物中，因此BMP10的检测也反映N-末端前区段的检测。

此外，设想测定如上所述的所有四种BMP10-型肽(即BMP10、BMP10的N-末端前区段、proBMP10和preproBMP10)的量的总和。

因此，可以根据本发明测定以下BMP10-型肽的量：

•BMP10的量

•BMP10的N-末端前区段的量

•proBMP10的量

•preproBMP10的量

•BMP10、proBMP10和preproBMP10的量的总和

•BMP10的N-末端前区段、proBMP10和preproBMP10的量的总和，或

•BMP10、BMP10的N-末端前区段、proBMP10和preproBMP10的量的总和。

术语“利尿钠肽”包括心房利尿钠肽(ANP)型和脑利尿钠肽(BNP)型肽。因此，根据本发明的利尿钠肽包括ANP型和BNP型肽及其变体(参见，例如，Bonow RO. 等人,Circulation 1996;93: 1946-1950)。

ANP型肽包括pre-proANP、proANP、NT-proANP和ANP。

BNP型肽包括pre-proBNP、proBNP、NT-proBNP和BNP。

前肽原(pre-pro peptide)(在pre-proBNP的情况下为134个氨基酸)包含短信号肽，其被酶促切割以释放前肽(在proBNP的情况下为108个氨基酸)。前肽进一步切割为N末端前肽(NT-前肽，在NT-proBNP的情况下为76个氨基酸)和活性激素(在BNP的情况下为32个氨基酸，在ANP的情况下为28个氨基酸)。

根据本发明的优选的利尿钠肽是NT-proANP、ANP、NT-proBNP、BNP。ANP和BNP是活性激素，并且具有比它们各自的非活性对应物NT-proANP和NT-proBNP更短的半衰期。BNP在血液中代谢，而NT-proBNP作为完整分子在血液中循环，且因此在肾脏消除。

根据本发明的最优选的利尿钠肽是NT-proBNP和BNP，特别是NT-proBNP。如上面所简要讨论，如根据本发明所提及的人NT-proBNP是一种多肽，其优选包含76个氨基酸长度，其对应于人NT-proBNP分子的N-末端部分。人BNP和NT-proBNP的结构已经在现有技术中详细描述，例如，WO 02/089657、WO 02/083913和Bonow RO. 等人, New Insights into thecardiac natriuretic peptides. Circulation 1996;93: 1946-1950。优选地，如本文所用的人NT-proBNP是如EP 0 648 228 B1中所公开的人NT-proBNP。

如本文所用的术语“FABP-3”是指脂肪酸结合蛋白3。FABP-3也称为心脏脂肪酸结合蛋白或心脏型脂肪酸结合蛋白(缩写为H-FABP)。优选地，该术语还包括FABP-3的变体。如本文所用的FABP-3优选地涉及人FABP-3。编码人FABP-3多肽的多肽以及人FABP-3的蛋白序列的DNA序列是本领域中众所周知的，并且首先由Peeters等人 (Biochem. J. 276 (Pt1), 203-207 (1991))描述。此外，人H-FABP的序列可以优选地在Genbank条目U57623.1(cDNA序列)和AAB02555.1(蛋白序列)中找到。FABP的主要生理功能被认为是转运游离脂肪酸，参见例如，Storch等人, Biochem. Biophys. Acta. 1486 (2000), 28-44。FABP-3和H-FABP的其他名称是：FABP-11(脂肪酸结合蛋白11)，M-FABP(肌肉脂肪酸结合蛋白)，MDGI(乳腺来源的生长抑制剂)和O-FABP。

生物标志物内皮细胞特异性分子1(缩写为ESM-1)是本领域众所周知的。生物标志物通常也称为endocan。ESM-1是一种分泌蛋白，其主要在人肺和肾组织的内皮细胞中表达。公共领域数据表明，甲状腺、肺和肾中也表达，但在心脏组织中也表达，参见例如蛋白Atlas数据库中ESM-1的条目(Uhlén M.等人, Science 2015;347(6220): 1260419)。该基因的表达受细胞因子调节。ESM-1是由20 kDa成熟多肽和30kDa O-连接的聚糖链构成的蛋白聚糖(Bechard D等人, J Biol Chem 2001;276(51):48341-48349)。在本发明的一个优选实施方案中，在来自受试者的样品中测定人ESM-1多肽的量。人ESM-1多肽的序列是本领域众所周知的(参见例如Lassale P.等人, J. Biol. Chem. 1996;271:20458-20464并且可以例如经由Uniprot数据库评价，参见条目Q9NQ30 (ESM1_人)。通过选择性剪接产生ESM-1的两种同工型，同工型1(具有Uniprot标识符Q9NQ30-1)和同工型2(具有Uniprot标识符Q9NQ30-2)。同工型1具有184个氨基酸的长度。在同工型2中，同工型1的氨基酸101至150缺失。氨基酸1至19形成信号肽(其可能被切除)。

在一个优选实施方案中，测定ESM-1多肽的同工型1的量，即具有如UniProt登录号Q9NQ30-1下所示的序列的同工型1。

在另一个优选实施方案中，测定ESM-1多肽的同工型2的量，即具有如UniProt登录号Q9NQ30-2下所示的序列的同工型2。

在另一个优选实施方案中，测定ESM-1多肽的同工型-1和同工型2的量，即总ESM-1。

例如，ESM-1的量可以用针对ESM-1多肽的氨基酸85至184的单克隆抗体(诸如小鼠抗体)和/或用山羊多克隆抗体测定。

生物标志物血管生成素-2(缩写为“Ang-2”，通常也称为ANGPT2)是本领域众所周知的。其为Ang-1和TIE2两者的天然存在的拮抗剂(参见例如Maisonpierre等人, Science277 (1997) 55-60)。在ANG-1不存在的情况下，该蛋白可以诱导TEK/TIE2的酪氨酸磷酸化。在血管生成诱导物(诸如VEGF)不存在的情况下，ANG2介导的细胞-基质接触的松弛可以诱导内皮细胞凋亡与随后的血管退化。与VEGF一致，其可以促进内皮细胞迁移和增殖，因此充当容许性血管生成信号。人血管生成素的序列是本领域众所周知的。Uniprot列出血管生成素-2的三种同工型：同工型1(Uniprot标识符：O15123-1)、同工型2(标识符：O15123-2)和同工型3 (O15123-3)。在一个优选实施方案中，测定血管生成素-2的总量。总量优选为复合和游离血管生成素-2的量的总和。

术语“测定”如本文所提及的生物标志物(诸如BMP10-型肽或利尿钠肽)的量是指，采用本文别处所述的适当的检测方法，定量生物标志物，例如测量样品中的生物标志物的水平。术语“测量”和“测定”在本文中可互换使用。

在一个实施方案中，所述生物标志物的量通过以下测定：使样品与特异性结合生物标志物的试剂接触，由此形成试剂和所述生物标志物之间的复合物，检测形成的复合物的量，且由此测量所述生物标志物的量。

如本文所提及的生物标志物(诸如BMP10-型肽)可以使用本领域中通常已知的方法检测。检测的方法通常涵盖定量样品中的生物标志物的量的方法(定量方法)。技术人员通常已知以下方法中的何种适合于定性和/或定量检测生物标志物。可以方便地使用商业可得的Westerns和免疫测定，如ELISA、RIA、基于荧光和基于发光的免疫测定以及邻近延伸测定，测定样品的例如蛋白。检测生物标志物的进一步合适的方法包括测量对于肽或多肽特异性的物理或化学特性，诸如其精确分子量或NMR谱。所述方法包括例如生物传感器、与免疫测定偶联的光学装置、生物芯片、分析装置诸如质谱仪、NMR分析仪或层析装置。此外，方法包括基于微板ELISA的方法、完全自动化或机器人免疫测定(例如可在Elecsys

为了检测如本文提及的生物标志物蛋白，广泛范围的使用这样的测定形式的免疫测定技术是可用的，参见，例如，美国专利号4,016,043、4,424,279和4,018,653。这些包括非竞争性类型的单位点和双位点或“夹心”测定法，以及传统的竞争结合测定法。这些测定法也包括标记的抗体与目标生物标志物的直接结合。

采用电化学发光标记物的方法是众所周知的。这样的方法利用特定金属络合物的能力，即通过氧化的方式实现激发态，从所述激发态它们衰减至基态，发射电化学发光。关于综述，参见Richter, M.M., Chem. Rev. 2004;104: 3003-3036。

在一个实施方案中，待用于测量生物标志物的量的检测抗体(或其抗原结合片段)被钌化或铱化。因此，抗体(或其抗原结合片段)应当包含钌标记物。在一个实施方案中，所述钌标记物是联吡啶-钌(II)络合物。或者抗体(或其抗原结合片段)应当包含铱标记物。在一个实施方案中，所述铱标记物是WO2012/107419中公开的络合物。

在用于测定BMP10-型肽的夹心测定的一个实施方案中，该测定包括生物素化的特异性结合BMP10-型肽的第一单克隆抗体(作为捕获抗体)和钌化的特异性结合BMP10-型肽的第二单克隆抗体的F(ab`)2-片段(作为检测抗体)。两种抗体在样品中与BMP10-型肽形成夹心免疫测定复合物。

在用于测定利尿钠肽的夹心测定的一个实施方案中，该测定包括生物素化的特异性结合利尿钠肽的第一单克隆抗体(作为捕获抗体)和钌化的特异性结合利尿钠肽的第二单克隆抗体的F(ab`)2-片段(作为检测抗体)。两种抗体在样品中与利尿钠肽形成夹心免疫测定复合物。

测量多肽(诸如BMP10-型肽或利尿钠肽)的量可以优选包括步骤(a)使所述多肽与特异性结合所述多肽的试剂接触，(b)(任选地)除去未结合的试剂，(c)测量结合的结合剂(即，步骤(a)中形成的试剂的复合物)的量。根据一个优选的实施方案，所述接触、除去和测量的步骤可以由分析器单元实施。根据一些实施方案，所述步骤可以由所述系统的单个分析器单元或彼此可操作通信的多于一个分析器单元实施。例如，根据一个具体的实施方案，本文中公开的所述系统可以包括用于实施所述接触和除去步骤的第一分析器单元和通过运输单元(例如机械臂)可操作地连接至所述第一分析器单元的第二分析器单元，所述第二分析器单元实施所述测量步骤。

特异性结合生物标志物的试剂(本文也称为“结合剂”)可以共价或非共价偶联至标记物，从而允许检测和测量结合的试剂。标记可以通过直接或间接方法完成。直接标记涉及标记与结合剂直接(共价或非共价)偶联。间接标记涉及二级结合剂与第一结合剂的结合(共价或非共价地)。二级结合剂应特异性结合第一结合剂。所述二级结合剂可以与合适标记偶联和/或是结合二级结合剂的三级结合剂的目标(受体)。合适的二级和更高级别结合剂可以包括抗体、二级抗体和众所周知的链霉抗生物素蛋白-生物素系统(VectorLaboratories, Inc.)。结合剂或底物还可以用如本领域已知的一种或多种标签“标签化”。这样的标签随后可以是更高级别结合剂的目标。合适标签包括生物素、地高辛配基(digoxygenin)、His-标签、谷胱甘肽-S-转移酶、FLAG、GFP、myc-标签、甲型流感病毒血凝素(HA)、麦芽糖结合蛋白等。在肽或多肽的情况下，标签优选在N末端和/或C末端。合适标记物是可通过合适检测方法检测的任何标记物。典型标记物包括金颗粒、乳胶珠、吖啶(acridan)酯、鲁米诺、钌络合物、铱络合物、酶促活性标记物、放射性标记物、磁性标记物(“例如磁珠”包括顺磁和超顺磁标记物)、和荧光标记物。酶促活性标记物包括例如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、萤光素酶及其衍生物。用于检测的合适底物包括二氨基联苯胺(DAB)、3,3'-5,5'-四甲基联苯胺、NBT-BCIP (4-氯化硝基四氮唑蓝和5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸盐，可作为现成储存溶液从Roche Diagnostics获得)、CDP-Star™(Amersham Bio-sciences)、ECF™ (Amersham Biosciences)。合适的酶-底物组合可以导致有色反应产物、荧光或化学发光，其可以根据本领域已知的方法(例如使用感光胶片或合适的照相机系统)进行测定。关于测量酶促反应，类似地应用上文给出的标准。一般的荧光标记包括荧光蛋白(例如GFP及其衍生物)、Cy3、Cy5、Texas Red、荧光素和Alexa染料(例如Alexa 568)。进一步的荧光标记物例如可从Molecular Probes (Oregon)获得。还考虑使用量子点作为荧光标记物。放射性标记物可以通过已知和合适的任何方法进行检测，例如感光胶片或磷光体显像仪。

多肽的量还可以优选如下测定：(a)使包含如本文别处所述的多肽的结合剂的固体支持物与包含肽和多肽的样品接触，和(b)测量结合至支持物的肽或多肽的量。用于制造支持物的材料是本领域众所周知的，并且尤其包括商购可得的柱材料、聚苯乙烯珠、乳胶珠、磁珠、胶体金属颗粒、玻璃和/或硅片和表面、硝酸纤维素条、膜、片、duracytes、反应托盘的孔和壁、塑料管等。

在又一个方面，在测量结合剂和至少一种标志物之间形成的复合物的量之前，从所形成的复合物去除样品。因此，在一个方面，所述结合剂可以固定化在固体支持物上。在又一个方面，可通过施用洗涤溶液将样品从固体支持物上的形成的复合物去除。

“夹心测定”是最有用和常用的测定之一，包括夹心测定技术的许多变化。简而言之，在典型的测定中，未标记的(捕获)结合剂被固定或可被固定在固体基材上，并使待测试的样品与捕获结合剂接触。在适当的孵育期、持续足以允许形成结合剂-生物标志物复合物的一段时间后，然后添加用能够产生可检测信号的报告分子标记的第二(检测)结合剂并孵育，允许时间足以形成结合剂-生物标志物-标记的结合剂的另一复合物。可洗掉任何未反应的物质，并且通过观察由与检测结合剂结合的报道分子产生的信号来确定生物标志物的存在。结果可为通过简单观察可见信号而定性的，或可为通过与含有已知量的生物标志物的对照样品比较而定量的。

典型的夹心测定的孵育步骤可以根据需要适当地变化。此类变化包括例如同时孵育，其中共孵育两种或更多种结合剂和生物标志物。例如，将待分析样品和标记的结合剂二者同时加入固定的捕获结合剂。首先孵育待分析样品和标记的结合剂、然后加入结合固相或能够结合固相的抗体也是可以的。

在特定结合剂和生物标志物之间形成的复合物与样品中存在的生物标志物的量应成比例。应当理解，待应用的结合剂的特异性和/或灵敏度定义样品中包含的能够被特异性结合的至少一种标志物的比例程度。在本文中别处还发现关于可以如何实施测量的更详细的描述。所形成的复合物的量将被转化为生物标志物的量，其反映样品中实际存在的量。

术语“结合剂”、“特异性结合剂”、“分析物特异性结合剂”、“检测剂”和“特异性结合生物标志物的试剂”在本文中可互换使用。优选地，其涉及包含特异性结合相应生物标志物的结合部分的试剂。“结合剂”、“检测剂”、“试剂”的实例是核酸探针、核酸引物、DNA分子、RNA分子、适配子、抗体、抗体片段、肽、肽核酸(PNA)或化合物。优选的试剂是特异性结合待测定的生物标志物的抗体。本文中的术语“抗体”以最广泛意义使用，且涵盖各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和抗体片段，只要它们表现出期望的抗原结合活性(即其抗原结合片段)。优选地，所述抗体是多克隆抗体(或来自其的抗原结合片段)。更优选地，所述抗体是单克隆抗体(或来自其抗原结合片段)。此外，如本文别处所述，设想使用两种单克隆抗体，其在BMP10-型肽的不同位置处结合(在夹心免疫测定中)。因此，至少一种抗体用于测定BMP10-型肽的量。

在一个实施方案中，所述至少一种抗体是小鼠单克隆抗体。在另一个实施方案中，所述至少一种抗体是兔单克隆抗体。在一个进一步实施方案中，所述抗体是山羊多克隆抗体。在一个甚至进一步实施方案中，所述抗体是绵羊多克隆抗体。

术语“特异性结合”或“特异性地结合”是指结合反应，其中结合对分子在它们不显著结合其他分子的条件下表现出与彼此的结合。当将蛋白或肽称为生物标志物时，术语“特异性结合”或“特异性地结合”优选是指结合反应，其中结合剂以至少10

如本文所用的术语“量”涵盖如本文提及的生物标志物(诸如BMP10-型肽或利尿钠肽)的绝对量，所述生物标志物的相对量或浓度，以及与其相关或可以从其衍生的任何值或参数。此类值或参数包括通过直接测量的来自从所述肽获得的全部特定物理或化学特性的强度信号值，例如在质谱或NMR谱中的强度值。此外，涵盖了由本说明书中别处说明的间接测量获得的全部值或参数，例如，从生物学读出系统测定的对肽响应的响应量或从特异性结合的配体获得的信号强度。应理解的是与上文提及的量或参数相关的值还可以通过所有标准数学操作获得。

如本文所用的术语“比较”是指将来自受试者的样品中的生物标志物(诸如BMP10-型肽和利尿钠肽诸如NT-proBNP或BNP)的量与本说明书中别处说明的生物标志物的参考量进行比较。应当理解的是如本文所用的比较通常是指相应参数或值的比较，例如绝对量与绝对参考量比较，而浓度与参考浓度进行比较或从样品中的生物标志物获得的强度信号与从第一样品获得的相同类型的强度信号比较。所述比较可以人工地或计算机辅助执行。因此，比较可以通过计算装置进行实施。受试者样品中的生物标志物的测定或检测量的值和参考量可以例如彼此比较且所述比较可以通过执行用于比较的算法的计算机程序自动实施。实施所述评价的计算机程序将以合适的输出形式提供期望的评估。对于计算机辅助的比较，被测定的量的值可以与对应于合适参考的值比较，所述参考通过计算机程序储存于数据库中。计算机程序可以进一步评价比较结果，即以合适的输出形式自动提供期望的评估。对于计算机辅助的比较，被测定的量的值可以与对应于合适参考的值比较，所述参考通过计算机程序储存于数据库中。计算机程序可以进一步评价比较结果，即以合适的输出形式自动提供期望的评估。

根据本发明，BMP10-型肽的量和任选地至少一种另外的生物标志物(诸如利尿钠肽)的量应当与参考进行比较。该参考优选为参考量。术语“参考量”是技术人员充分理解的。应理解，参考量应当允许本文所述的心房纤颤的评价。例如，关于用于诊断心房纤颤的方法，参考量优选是指这样的量，其允许将受试者分配至(i)患有心房纤颤的受试者组或(ii)未患有心房纤颤的受试者组。可以从待与测试样品一起(即同时或随后)分析的第一样品测定合适的参考量。

应当理解，将BMP10-型肽的量与BMP10-型肽的参考量进行比较，而将至少一种另外的生物标志物(诸如利尿钠肽)的量与所述至少一种另外的生物标志物(诸如利尿钠肽)的参考量进行比较。如果测定两种或更多种标志物的量，则还设想基于两种或更多种标志物的量(诸如BMP10-型肽的量和利尿钠肽的量)计算组合评分。在随后的步骤中，将所述评分与参考评分进行比较。

原则上，对于如上文说明的受试者群组，可以通过应用标准统计学方法基于给定的生物标志物的平均值(average or mean values)计算参考量。具体而言，测试(诸如旨在诊断事件的方法)的准确性与否，最好通过其受试者工作特征(ROC)进行描述(特别参见Zweig MH.等人, Clin. Chem. 1993;39:561-577)。ROC图是由持续改变对于观察的数据的整体范围的判定阈值而产生的全部灵敏度相对于特异性配对的图。诊断方法的临床性能取决于其准确性，即，其正确分配受试者至某一预后或诊断的能力。ROC图通过将对适用于进行区分的阈值的完整范围的灵敏度相对于1-特异性进行作图，指出了两个分布之间的重叠。在y轴为灵敏度，或真阳性分数，其定义为真阳性测试结果数与真阳性测试结果数和假阴性测试结果数的乘积(product)的比率。其单独从受影响的亚组计算。在x轴为假阳性分数，或1-特异性，其定义为假阳性结果数与真阴性结果数和假阳性结果数的乘积的比率。其是特异性的指标且完全从未受影响的亚组计算。因为真阳性和假阳性分数完全分别地通过使用来自两个不同亚组的测试结果计算，所以ROC图独立于群组中事件的普遍率。ROC图中的每个点代表对应于特定决定阈值的灵敏度/1-特异性对。具有完美区分的测试(在两个分配结果中没有重叠)具有通过左上角的ROC图，其中真阳性分数为1.0，或100% (完美的灵敏度)，和假阳性分数为0 (完美的特异性)。不具有区分的测试的理论图(两个组的结果分布相同)是从左下角至右上角的45°对角线。大多数图落入这两种极端之间。如果ROC图完全落于45°对角线以下，其可以通过将“阳性”标准从“大于”逆转为“小于”而容易地补救，或反之亦然。定性上而言，图越接近左上角，测试的总体准确性越高。取决于期望的置信区间，阈值可以来源于ROC曲线，其允许分别使用灵敏度和特异性的合适的平衡诊断给定事件。因此，待用于本发明的方法的参考、即允许评价心房纤颤的阈值且可以优选地通过如上文所述对所述群组建立ROC且从中衍生阈值量而生成。取决于对诊断方法的期望的灵敏度和特异性，ROC图允许衍生合适的阈值。应当理解，对于例如排除患有心房纤颤的受试者(即排除)，期望最佳灵敏度，而对于待评价为患有心房纤颤的受试者(即纳入)，则考虑最佳特异性。在一个实施方案中，本发明的方法允许预测受试者处于与心房纤颤相关的不良事件(诸如心房纤颤的发生或复发和/或中风)的风险中。

在一个优选实施方案中，本文的术语“参考量”是指预定值。所述预定值应当允许评价心房纤颤，且因此允许诊断心房纤颤，区分阵发性和持续性心房纤颤，预测与心房纤颤相关的不良事件的风险，鉴定应当经历心电描记术(ECG)的受试者，或评价用于心房纤颤的疗法。应理解，参考量可以基于评价的类型而不同。例如，用于区分AF的BMP10-型肽的参考量通常高于用于诊断AF的参考量。然而，技术人员将考虑这一点。

如上所示，术语“评价心房纤颤”优选是指诊断心房纤颤，区分阵发性和持续性心房纤颤，预测与心房纤颤相关的不良事件的风险，鉴定应当经历心电描记术(ECG)的受试者，或评价用于心房纤颤的疗法。在下文中，将更详细地描述本发明的方法的这些实施方案。上述定义因此适用。

如本文所用的术语“诊断”意指评价如根据本发明的方法所提及的受试者是否患有心房纤颤(AF)。在一个优选实施方案中，诊断出受试者患有阵发性AF。在一个替代实施方案中，诊断出受试者不患有AF。

根据本发明，可以诊断所有类型的AF。因此，所述心房纤颤可以是阵发性、持续性或永久性AF。优选地，诊断阵发性或持续性心房纤颤，特别是在未患有永久性AF的受试者中。

受试者是否患有AF的实际诊断可以包括另外的步骤，诸如诊断的证实(例如通过ECG，诸如Holter-ECG)。因此，本发明允许评价患者患有心房纤颤的可能性。具有高于参考量的BMP10量的受试者可能患有心房纤颤，而具有低于参考量的BMP10量的受试者不太可能患有心房纤颤。因此，在本发明的上下文中的术语“诊断”也涵盖辅助医师评价受试者是否患有心房纤颤。

优选地，来自测试受试者的样品中BMP10-型肽的量(和任选地至少一种另外的生物标志物诸如ESM-1、Ang-2、FABP-3和/或利尿钠肽的量)与一种参考量(或与多种参考量)相比增加指示受试者患有心房纤颤，和/或来自受试者的样品中BMP10-型肽的量(和任选地至少一种另外的生物标志物诸如ESM-1、Ang-2、FABP-3和/或利尿钠肽的量)与一种参考量(或多种参考量)相比减少指示受试者未患有心房纤颤。

在一个优选实施方案中，参考量，即BMP10-型肽的参考量，和如果测定，则至少一种另外的生物标志物的参考量，应当允许区分患有心房纤颤的受试者和未患有心房纤颤的受试者。优选地，所述参考量是预定值。

在一个实施方案中，本发明的方法允许诊断患有心房纤颤的受试者。优选地，如果BMP10-型肽的量(和任选地至少一种另外的生物标志物诸如ESM-1、Ang-2、FABP-3和/或利尿钠肽的量)高于参考量，则受试者患有AF。在一个实施方案中，如果BMP10-型肽的量高于参考量的特定百分位数(例如，第99百分位数)上限参考限值(URL)，则受试者患有AF。

在诊断心房纤颤的方法的一个实施方案中，所述方法进一步包括基于诊断的结果推荐和/或起始心房纤颤的疗法的步骤。优选地，如果诊断受试者患有AF，则推荐或起始疗法。用于心房纤颤的优选疗法(诸如抗凝疗法)在本文别处公开。

如本文所用的术语“区分”是指区分受试者中的阵发性和持续性心房纤颤。如本文所用的术语优选地包括差异地诊断受试者中的阵发性和持续性心房纤颤。因此，本发明的方法允许评价具有心房纤颤的受试者是否患有阵发性心房纤颤或持续性心房纤颤。实际区分可以包括进一步的步骤，诸如证实区分。因此，在本发明的上下文中的术语“区分”还涵盖辅助医师区分阵发性和持续性AF。

优选地，来自受试者的样品中BMP10-型肽的量(和任选地至少一种另外的生物标志物诸如ESM-1、Ang-2、FABP-3和/或利尿钠肽的量)与一种参考量(或与多种参考量)相比增加指示受试者患有持续性心房纤颤，和/或来自受试者的样品中BMP10-型肽的量(和任选地至少一种另外的生物标志物诸如ESM-1、Ang-2、FABP-3和/或利尿钠肽的量)与一种参考量(或与多种参考量)相比减少指示受试者患有阵发性心房纤颤。在两种AF类型(阵发性和持续性)中，BMP10-型肽的量与非AF受试者的参考量相比增加。

在一个优选实施方案中，参考量应当允许区分患有阵发性心房纤颤的受试者和患有持续性心房纤颤的受试者。优选地，所述参考量是预定值。

在上述区分阵发性和持续性心房纤颤的方法的一个实施方案中，所述受试者未患有永久性心房纤颤。

本发明的方法还考虑用于预测不良事件的风险的方法。

在一个实施方案中，如本文所述的不良事件的风险可以是预测与心房纤颤相关的任何不良事件。优选地，所述不良事件选自心房纤颤的复发(诸如心脏复律后心房纤颤的复发)和中风。因此，应当预测受试者(其患有心房纤颤)将来患有不良事件(诸如中风或心房纤颤的复发)的风险。

进一步，设想所述与心房纤颤相关的不良事件是没有心房纤颤的已知病史的受试者中的心房纤颤的发生率。

在一个特别优选的实施方案中，预测中风的风险。

因此，本发明提供了用于预测受试者中中风的风险的方法，其包括以下步骤：

a)测定来自所述受试者的样品中的BMP10-型肽的量，和

b)将BMP10-型肽的量与参考量进行比较，由此预测中风的风险。

具体而言，本发明涉及用于预测受试者中的中风的风险的方法，其包括以下步骤：

(a)在来自受试者的至少一种样品中测定BMP10-型肽(骨形态发生蛋白10)的量，和任选地，选自利尿钠肽、ESM-1 (Endocan)、Ang2(血管生成素2)和FABP-3(脂肪酸结合蛋白3)的至少一种另外的生物标志物的量，和

(b)将所述BMP10-型肽的量与所述BMP10-型肽的参考量进行比较，和任选地，将所述至少一种另外的生物标志物的量与所述至少一种另外的生物标志物的参考量进行比较，由此预测中风的风险。

优选地，如本文所用的术语“预测风险”是指评价受试者将患有如本文所提及的不良事件(例如，中风)的概率。通常，预测受试者是否处于患有所述不良事件的风险中(并且因此风险升高)或者不处于患有所述不良事件的风险中(并且因此风险降低)。因此，本发明的方法允许区分处于患有所述不良事件的风险中的受试者和不处于患有所述不良事件的风险中的受试者。进一步，设想本发明的方法允许区分具有降低、平均或升高风险的受试者。

如上所述，应当预测在特定时间窗口内患有所述不良事件的风险(和概率)。在本发明的一个优选实施方案中，所述预测窗口是约三个月、约六个月或尤其约一年的时段。因此，预测短期风险。

在另一个优选实施方案中，预测窗口是约五年的时段(例如，用于预测中风)。进一步，预测窗口可能是约六年的时段(例如，用于预测中风)。或者，预测窗口可以是约10年。而且，设想预测窗口是1至3年的时段。因此，预测在1至3年内患有中风的风险。此外，设想预测窗口为1至10年的时段。因此，预测在1至10年内患有中风的风险。

优选地，从完成本发明的方法起计算所述预测窗口。更优选地，从已经获得待测试的样品的时间点计算所述预测窗口。如本领域技术人员将理解，风险的预测通常不意在对100%的受试者是正确的。然而，该术语要求可以以适当和正确的方式预测统计学显著部分的受试者。一部分是否是统计学显著的可以通过本领域技术人员使用各种众所周知的统计评估工具例如置信区间的确定、p-值确定、Student氏t-检验、Mann-Whitney检验等来确定而无需费力。详述可见Dowdy和Wearden, Statistics for Research, John Wiley &Sons, New York 1983。优选的置信区间是至少90%、至少95%、至少97%、至少98%或至少99%。优选地，p-值是0.1、0.05、0.01、0.005或0.0001。

在一个优选实施方案中，表述“预测患有所述不良事件的风险”意味着将待通过本发明的方法分析的受试者分配至处于患有所述不良事件的风险中的受试者组中，或者分配至不处于患有所述不良事件(诸如中风)的风险中的受试者组中。因此，预测受试者处于患有所述不良事件的风险中或不处于患有所述不良事件的风险中。如本文所用，“处于患有所述不良事件的风险中的受试者”，优选具有升高的患有所述不良事件的风险(优选在预测窗口内)。优选地，与受试者的群组中的平均风险相比，所述风险升高。如本文所用，“不处于患有所述不良事件的风险中的受试者”，优选具有降低的患有所述不良事件的风险(优选在预测窗口内)。优选地，与受试者的群组中的平均风险相比，所述风险降低。处于患有所述不良事件的风险中的受试者优选具有至少20%或更优选至少30%的患有所述不良事件(诸如心房纤颤的复发或发生)的风险，优选地，在约一年的预测窗口内。不处于患有所述不良事件的风险中的受试者优选具有低于12%、更优选低于10%的患有所述不良事件的风险，优选地在一年的预测窗口内。

关于中风的预测，处于患有所述不良事件的风险中的受试者优选地在约五年或特别是约六年的预测窗口内优选地具有至少10%或更优选至少13%的患有所述不良事件的风险。不处于患有所述不良事件的风险中的受试者优选地在约五年或特别是约六年的预测窗口内优选地具有低于10%、更优选低于8%、或最优选低于5%的患有所述不良事件的风险。如果受试者未接受抗凝疗法，则风险可能更高。技术人员将考虑这一点。

优选地，来自受试者的样品中BMP10-型肽的量(和任选地至少一种另外的生物标志物诸如ESM-1、Ang-2、FABP-3和/或利尿钠肽的量)与一种参考量(或与多种参考量)相比增加指示受试者处于与心房纤颤相关的不良事件的风险中，和/或来自受试者的样品中BMP10-型肽的量(和任选地至少一种另外的生物标志物诸如ESM-1、Ang-2、FABP-3和/或利尿钠肽的量)与一种参考量(或与多种参考量)相比减少指示受试者不处于与心房纤颤相关的不良事件的风险中。

在一个优选实施方案中，所述一种参考量(或多种参考量)应当允许区分处于如本文所提及的不良事件的风险中的受试者和不处于所述不良事件的风险中的受试者。优选地，所述参考量是预定值。

待预测的不利事件优选为中风。术语“中风”是本领域中众所周知的。如本文所用，该术语优选地是指缺血性中风，尤其是脑缺血性中风。通过本发明的方法预测的中风应当由流向大脑或其部分的血液流量减少(其导致氧向脑细胞的供应不足)引起。具体而言，由于脑细胞死亡，中风导致不可逆的组织损伤。中风的症状是本领域中众所周知的。例如，中风症状包括面部、手臂或腿部(尤其是在身体的一侧)的突然麻木或虚弱；突然的困惑，说话或理解困难，一只或两只眼睛突然无法看到，和突然的行走困难，头晕，失去平衡或协调。缺血性中风可能由主要脑动脉的动脉粥样硬化血栓形成或栓塞、由凝血障碍或非动脉粥样化血管疾病或由心脏缺血(其导致总血液流量减少)引起。缺血性中风优选选自动脉粥样硬化血栓形成性中风、心脏栓塞性中风和腔隙性中风。优选地，待预测的中风是急性缺血性中风，尤其是心脏栓塞性中风。心脏栓塞性中风(通常也称为栓塞性或血栓栓塞性中风)可以由心房纤颤引起。

优选地，所述中风应当与心房纤颤相关。更优选地，中风应当由心房纤颤引起。然而，还设想受试者没有心房纤颤的病史。

优选地，如果在中风和心房纤颤的发作之间存在时间关系，则中风与心房纤颤相关。更优选地，如果中风由心房纤颤引起，则中风与心房纤颤相关。最优选地，如果中风可以由心房纤颤引起，则中风与心房纤颤相关。例如，心源性中风(通常也称为栓塞性或血栓栓塞性中风)可以由心房纤颤引起。优选地，与AF相关的中风可以通过口服抗凝剂来预防。还优选地，如果待测试的受试者患有心房纤颤和/或具有其已知病史，则认为中风与心房纤颤相关。此外，在一个实施方案中，如果怀疑受试者患有心房纤颤，则可以认为中风与心房纤颤相关。

术语“中风”优选地不包括出血性中风。

在前述预测不良事件(诸如中风)的方法的一个优选实施方案中，待测试的受试者患有心房纤颤。更优选地，所述受试者具有心房纤颤的已知病史。根据用于预测不良事件的方法，所述受试者优选地患有永久性心房纤颤，更优选地患有持续性心房纤颤，且最优选地患有阵发性心房纤颤。

在预测不良事件的方法的一个实施方案中，当获得样品时，患有心房纤颤的受试者经历心房纤颤的发作。在预测不良事件的方法的另一个实施方案中，当获得样品时，患有心房纤颤的受试者未经历心房纤颤的发作(且因此应当具有正常的窦性心律)。进一步，待预测其风险的受试者可以进行抗凝疗法。

在预测不良事件的方法的另一个实施方案中，待测试的受试者没有心房纤颤的已知病史。具体而言，设想所述受试者不患有心房纤颤。

本发明的方法可以辅助个性化医学。在一个优选实施方案中，用于预测受试者中风的风险的方法进一步包括：i)推荐抗凝疗法的步骤，或ii)如果已鉴定所述受试者处于患有中风的风险中，则推荐加强抗凝疗法的步骤。在一个优选实施方案中，用于预测受试者中风的风险的方法进一步包括：i)开始抗凝疗法的步骤，或ii)如果(通过本发明的方法)已鉴定所述受试者处于患有中风的风险中，则加强抗凝疗法的步骤。

如果测试受试者正在进行抗凝疗法，并且如果(通过本发明的方法)已鉴定受试者没有处于患有中风的风险，则可以减少抗凝疗法的剂量。因此，可以推荐减少剂量。通过减少剂量，可以降低患有副作用(诸如出血)的风险。

如本文所用的术语“推荐”意指建立可以应用于受试者的疗法的提议。然而，应当理解，该术语不包括应用任何实际疗法。待推荐的疗法取决于通过本发明的方法提供的结果。

具体而言，以下情况适用：

如果待测试的受试者未接受抗凝疗法，如果已鉴定受试者处于患有中风的风险中，则推荐开始抗凝疗法。因此，应当开始抗凝疗法。

如果待测试的受试者已经接受抗凝疗法，如果已鉴定受试者处于患有中风的风险中，则推荐加强抗凝。

在一个优选实施方案中，通过增加抗凝剂的剂量，即当前施用的促凝剂的剂量来加强抗凝疗法。

在一个特别优选的实施方案中，通过增加用更有效的抗凝剂替换当前施用的抗凝剂来加强抗凝疗法。因此，推荐替换抗凝剂。

已经描述了，与维生素K拮抗剂华法林相比，用口服抗凝剂阿哌沙班实现了在高危患者中的更好预防，如Hijazi等人, The Lancet 2016 387, 2302-2311 (图4)中所示。

因此，设想待测试的受试者是用维生素K拮抗剂、诸如华法林或双香豆素治疗的受试者。如果(通过本发明的方法)已鉴定受试者处于患有中风的风险中，则推荐用口服抗凝剂、尤其是达比加群、利伐沙班或阿哌沙班替换维生素K拮抗剂。停止用维生素K拮抗剂的疗法，并开始用口服抗凝剂的疗法。

根据本发明的方法的该实施方案，应当评价待用生物标志物测试的受试者是否应当经历心电描记术(ECG)，即心电描记术评价。应当实施所述评价用于诊断，即检测所述受试者中AF的存在或不存在。

如本文所用的术语“鉴定受试者”优选地是指使用涉及受试者的样品中的BMP10-型肽的量(和任选地至少一种另外的生物标志物的量)所生成的信息或数据来鉴定受试者应当经历ECG。被鉴定的受试者具有增加的患有AF的可能性。ECG评价被用作证实。

心电描记术(缩写为ECG)是通过合适的ECG记录心脏的电活动的过程。ECG设备记录由心脏产生的电信号，所述电信号通过身体散布至皮肤。通过使测试受试者的皮肤与由ECG装置包含的电极接触来实现电信号的记录。获得记录的过程是非侵入性且无风险的。实施ECG用于诊断心房纤颤，即用于评价测试受试者中心房纤颤的存在或不存在。在本发明的方法的实施方案中，ECG装置是单导线装置(诸如单导线手持ECG装置)。在另一个优选实施方案中，所述ECG装置是12导线ECG装置，诸如Holter监视器。

优选地，来自测试受试者的样品中BMP10-型肽的量(和任选地至少一种另外的生物标志物诸如ESM-1、Ang-2、FABP-3和/或利尿钠肽的量)与一种参考量(或与多种参考量)相比增加指示受试者应当经历ECG，和/或来自受试者的样品中BMP10-型肽的量(和任选地至少一种另外的生物标志物诸如ESM-1、Ang-2、FABP-3和/或利尿钠肽的量)与一种参考量(或与多种参考量)相比减少指示受试者不应当经历ECG。

在一个优选实施方案中，所述参考量应当允许区分应当经历ECG的受试者和不应当经历ECG的受试者。优选地，所述参考量是预定值。

如本文所用，术语“评价用于心房纤颤的疗法”优选地是指评价旨在治疗心房纤颤的疗法。具体而言，应当评价疗法的效力。

待评价的疗法可以是旨在治疗心房纤颤的任何疗法。优选地，所述疗法选自施用至少一种抗凝剂、节律控制、速率控制、心率转变和消融术。所述疗法是本领域众所周知的并且例如综述于Fuster V等人 Circulation 2011;123:e269-e367，其在此以其整体通过引用并入。

在一个实施方案中，所述疗法是施用至少一种抗凝剂，即抗凝疗法。抗凝疗法优选是旨在降低所述受试者中的抗凝的风险的疗法。至少一种抗凝剂的施用应当旨在减少或防止血液凝结和相关中风。在一个优选实施方案中，至少一种抗凝剂选自肝素，香豆素衍生物(即维生素K拮抗剂)，尤其是华法林或双香豆素，口服抗凝剂，尤其是达比加群，利伐沙班或阿哌沙班，组织因子途径抑制剂(TFPI)，抗凝血酶III，因子IXa抑制剂，因子Xa抑制剂，因子Va和VIIIa的抑制剂和凝血酶抑制剂(抗IIa型)。因此，设想受试者服用上面提及的药物中的至少一种。

在一个优选实施方案中，所述抗凝剂是维生素K拮抗剂，诸如华法林或双香豆素。维生素K拮抗剂(诸如华法林或双香豆素)不太昂贵，但由于治疗不便、麻烦和经常不可靠且在治疗范围内时间波动，因此需要更好的患者依从性。NOAC(新型口服抗凝剂)包括直接因子Xa抑制剂(阿哌沙班、利伐沙班、达雷沙班、依多沙班)，直接凝血酶抑制剂(达比加群)和PAR-1拮抗剂(伏拉帕沙、阿托泊沙)。

在另一个优选实施方案中，所述抗凝剂和口服抗凝剂，尤其是阿哌沙班、利伐沙班、达雷沙班、依多沙班、达比加群、伏拉帕沙或阿托泊沙。

因此，在测试时(即，在接收样品时)，待测试的受试者可以正在用口服抗凝剂或维生素K拮抗剂治疗。

在一个优选实施方案中，用于心房纤颤的疗法的评价是所述疗法的监测。在该实施方案中，所述参考量优选地是先前获得的样品中(即，在步骤a中的测试样品之前获得的样品中)的BMP10的量。

任选地，除了BMP10-型肽的量以外，还测定如本文所提及的至少一种另外的生物标志物的量。

因此，本发明涉及用于监测用于受试者中的心房纤颤的疗法的方法，所述受试者优选地患有心房纤颤，其中所述方法包括以下步骤

(a) 在来自受试者的第一样品中测定BMP10-型肽(骨形态发生蛋白10-型肽)的量，和任选地，选自利尿钠肽、ESM-1 (Endocan)、Ang2(血管生成素2)和FABP-3(脂肪酸结合蛋白3)的至少一种另外的生物标志物的量，

(b) 在来自受试者的第二样品中测定BMP10-型肽的量，和任选地，选自利尿钠肽、ESM-1 (Endocan)、Ang2(血管生成素2)和FABP-3(脂肪酸结合蛋白3)的至少一种另外的生物标志物的量，其中所述第二样品在所述第一样品之后获得，

(c) 将所述第一样品中的BMP10-型肽的量与所述第二样品中的BMP10-型肽的量进行比较，和任选地将所述第一样品中的所述至少一种另外的生物标志物的量与所述第二样品中的所述至少一种另外的生物标志物的量进行比较，由此监测抗凝疗法。

如本文所用的术语“监测”优选地涉及评价如本文别处提及的疗法的效果。因此，监测疗法(诸如抗凝疗法)的效力。

前述方法可以包括基于步骤c)中实施的比较步骤的结果监测疗法的进一步步骤。如本领域技术人员将理解，风险的预测通常不意在对100%的受试者是正确的。然而，该术语要求可以以适当和正确的方式预测统计学显著部分的受试者。因此，实际监测可以包括另外的步骤，诸如证实。

优选地，通过实施本发明的方法，可以评价受试者是否对所述疗法响应。如果受试者的病况在获得第一和第二样品之间改善，则受试者对疗法响应。优选地，如果病况在获得第一和第二样品之间恶化，则受试者未对疗法响应。

优选地，在起始所述疗法前获得第一样品。更优选地，样品在起始所述疗法前一周内、特别是两周内获得。然而，还考虑第一样品可以在起始所述疗法之后(但在获得第二样品之前)获得。在这种情况下，监测正在进行的疗法。

因此，应当在第一样品之后获得第二样品。应当理解，第二样品应当在起始所述疗法之后获得。

此外，特别考虑在获得第一样品后的合理时间段之后获得第二样品。应当理解，本文提及的生物标志物的量不会立即改变(例如在1分钟或1小时内)。因此，在该上下文中的“合理的”是指在获得第一和第二样品之间的间隔，所述间隔允许生物标志物进行调整。因此，优选地，在所述第一样品之后至少一个月，在所述第一样品之后至少三个月，或特别是至少六个月，获得第二样品。

优选地，第二样品中生物标志物(即BMP10-型肽和任选地利尿钠肽)的量与第一样品中生物标志物的量相比降低，且更优选地，显著降低，且最优选地，统计学显著降低，表明受试者对疗法响应。因此，所述疗法是有效的。还优选地，BMP10-型肽的浓度不变或第二样品中生物标志物的量与第一样品中生物标志物的量相比增加，更优选地，显著增加，最优选地，统计学显著增加，表明受试者对疗法未响应。因此，所述疗法不是有效的。

术语“显著的”和“统计学显著的”是本领域技术人员已知的。因此，本领域技术人员可以使用各种众所周知的统计学评估工具不必再费周折地确定增加或降低是否是显著的或统计学显著的。例如，显著的增加或降低是增加或降低至少10%，特别是至少20%。

如果疗法降低受试者心房纤颤复发的风险，则受试者被认为对疗法响应。如果疗法未降低受试者心房纤颤复发的风险，则受试者被认为对疗法未响应。

在一个实施方案中，如果受试者对疗法未响应，则增加疗法的强度。此外，设想如果受试者对疗法响应，则降低疗法的强度。例如，可以通过增加施用的药物的剂量来增加疗法的强度。例如，可以通过降低施用的药物的剂量来降低疗法的强度。由此，可能避免不想要的不良副作用，诸如出血。

在另一个优选实施方案中，用于心房纤颤的疗法的评价是用于心房纤颤的疗法的指导。如本文所用的术语“指导”优选地涉及在疗法期间基于生物标志物(即BMP10-型肽)的测定来调节疗法的强度，诸如增加或减少口服抗凝剂的剂量。

在一个进一步优选的实施方案中，用于心房纤颤的疗法的评价是用于心房纤颤的疗法的分层。因此，应当鉴定有资格接受用于心房纤颤的特定疗法的受试者。如本文所用的术语“分层”优选地涉及基于特定药物或程序的特定风险、鉴定的分子途径和/或预期效力来选择适当的疗法。根据检测的风险，具体地与心律失常相关的症状最小或没有症状的患者将变得有资格控制心室率、心脏复律或消融，其否则仅接受抗血栓疗法。

上文给出的定义和解释加上必要的变更适用于以下内容(除非另有指明)，

本发明进一步涉及辅助评价心房纤颤的方法，所述方法包括以下步骤：

a)提供来自受试者的至少一种样品，

b)在步骤a)中提供的至少一种样品中测定BMP10-型肽的量，和任选地，选自利尿钠肽、ESM-1 (Endocan)、Ang2和FABP-3(脂肪酸结合蛋白3)的至少一种另外的生物标志物的量，和

c)向医师提供关于所述BMP10-型肽的测定量和任选地所述至少一种另外的生物标志物的测定量的信息，由此辅助评价心房纤颤。

所述医师应当是主治医师，即要求测定生物标志物的医师。前述方法应当辅助主治医师评价心房纤颤。因此，所述方法不涵盖如上文关于评价心房纤颤的方法所提及的诊断、预测、监测、区分、鉴定。

前述获得样品的方法的步骤a)不涵盖从受试者抽取样品。优选地，通过从所述受试者接收样品来获得样品。因此，样品可以已经递送。

在一个实施方案中，上述方法是辅助预测中风的方法，所述方法包括以下步骤：

a) 提供来自如本文关于评价心房纤颤的方法、特别是关于预测心房纤颤的方法提及的受试者的至少一种样品，

b)测定BMP10-型肽的量和选自利尿钠肽、ESM-1 (Endocan)、Ang2和FABP-3(脂肪酸结合蛋白3)的至少一种另外的生物标志物的量，和

c)向医师提供关于BMP10-型肽的测定量和任选地至少一种另外的生物标志物的测定量的信息，由此辅助预测中风。

本发明进一步涉及方法，其包括：

a)提供用于BMP10-型肽的测定，和任选地用于选自利尿钠肽、ESM-1 (Endocan)、Ang2和FABP-3(脂肪酸结合蛋白3)的另外的生物标志物的至少一种另外的测定，和

b)提供用于在评价心房纤颤中使用通过所述测定获得或可获得的测定结果的说明书。

优选地，前述方法的目的是辅助评价心房纤颤。

说明书应当含有用于实施如上所述的评价心房纤颤的方法的方案。进一步，说明书应当含有BMP10-型肽的参考量的至少一个值和任选地利尿钠肽的参考量的至少一个值。

“测定”优选为适于测定生物标志物的量的试剂盒。术语“试剂盒”在下文中解释。例如，所述试剂盒应当包含至少一种BMP10-型肽的检测剂，以及任选至少一种选自以下的另外的试剂：特异性结合利尿钠肽的试剂，特异性结合ESM-1的试剂，特异性结合Ang2的药物和特异性结合FABP-3的药物。因此，可以存在一种至四种检测剂。一种至四种生物标志物的检测剂可以在单个试剂盒中或在分开的试剂盒中提供。

通过所述测试获得或可获得的测试结果是生物标志物的量的值。

在一个实施方案中，步骤b)包括提供用于在预测中风(如本文别处所述)中使用通过所述测试获得或可获得的测试结果的说明书。

本发明进一步涉及用于评价心房纤颤的计算机执行的方法，其包括

a)在处理单元处接收BMP10-型肽的量的值，和任选地选自利尿钠肽、ESM-1(Endocan)、Ang2和FABP-3(脂肪酸结合蛋白3)的至少一种另外的生物标志物的量的至少一种另外的值，其中已经在来自受试者的样品中测定所述BMP10-型肽的量和任选地至少一种另外的生物标志物的量，

b)通过所述处理单元将步骤(a)中接收的一个或多个值与一个或多个参考进行比较，和

c)基于比较步骤b)评价心房纤颤。

上面提及的方法是计算机执行的方法。优选地，所述计算机执行的方法的所有步骤都由计算机(或计算机网络)的一个或多个处理单元执行。因此，步骤(c)中的评价由处理单元执行。优选地，所述评价基于步骤(b)的结果。

步骤(a)中接收的一个或多个值应当衍生自如本文别处所述的测定来自受试者的生物标志物的量。优选地，该值是生物标志物的浓度的值。该值通常将由处理单元通过将该值上载或发送至处理单元来接收。或者，该值可以由处理单元通过经由用户界面输入值来接收。

在前面提及的方法的一个实施方案中，从存储器建立步骤(b)中所述的一个或多个参考。优选地，从存储器建立用于参考的值。

在前面提及的本发明的计算机执行的方法的一个实施方案中，步骤c)中进行的评价的结果经由被配置为呈现结果的显示器提供。

在前面提及的本发明的计算机执行的方法的一个实施方案中，所述方法可以包括以下进一步步骤：将关于在步骤c)中进行的评价的信息传输至受试者的医疗记录。

进一步，在本发明的研究中已经显示，来自受试者的样品中BMP10-型肽的量的测定允许诊断心力衰竭。因此，本发明还考虑基于BMP10-型肽(且任选地进一步基于利尿钠肽、ESM-1、Ang2和/或FABP3)诊断心力衰竭的方法。

上文关于心房纤颤的评价给出的定义加上必要的变更适用于以下内容(除非另有指明)。

因此，本发明进一步涉及用于诊断受试者中的心力衰竭的方法，所述方法包括以下步骤：

a) 测定来自所述受试者的样品中的BMP10-型肽的量，和

b) 将BMP10-型肽的量与参考量进行比较，由此诊断心力衰竭。

用于诊断心力衰竭的方法可以进一步包括：测定选自利尿钠肽、ESM-1(Endocan)、Ang2 (血管生成素2)和FABP-3(脂肪酸结合蛋白3)的至少一种另外的标志物的量，和与合适的参考量进行比较。

因此，用于诊断心力衰竭的方法可以包括以下步骤：

a)在来自受试者的至少一种样品中测定BMP10-型肽(骨形态发生蛋白10-型肽)的量，和任选地，选自利尿钠肽、ESM-1 (Endocan)、Ang2(血管生成素2)和FABP-3(脂肪酸结合蛋白3)的至少一种另外的生物标志物的量，和

b)将所述BMP10-型肽的量与所述BMP10-型肽的参考量进行比较，和任选地，将所述至少一种另外的生物标志物的量与所述至少一种另外的生物标志物的参考量进行比较，由此诊断心力衰竭。

如本文所用的术语“诊断”意指评价如根据本发明的方法所提及的受试者是否患有心力衰竭。受试者是否患有心力衰竭的实际诊断可以包括进一步步骤，诸如诊断的证实。因此，心力衰竭的诊断被理解为辅助诊断心力衰竭。因此，在本发明的上下文中的术语“诊断”也涵盖辅助医师评价受试者是否患有心力衰竭。

术语“心力衰竭”(缩写为“HF”)是技术人员众所周知的。如本文所用，该术语优选涉及心脏的收缩和/或舒张功能受损，其伴随有本领域技术人员已知的心力衰竭的明显体征。优选地，本文所提及的心力衰竭也是慢性心力衰竭。根据本发明的心力衰竭包括明显和/或晚期心力衰竭。在明显心力衰竭中，受试者显示如本领域技术人员已知的心力衰竭的症状。

在本发明的一个实施方案中，术语“心力衰竭”是指具有降低的左心室射血分数(HFrEF)的心力衰竭。在本发明的另一个实施方案中，术语“心力衰竭”是指具有保留的左心室射血分数(HFpEF)的心力衰竭。

HF可以被分为各种程度的严重程度。根据NYHA(纽约心脏协会)分类，心力衰竭患者被分类为属于NYHA I、II、III和IV类。具有心力衰竭的患者已经经历他的心包膜、心肌、冠状动脉循环或心脏瓣膜的结构和功能改变。他将不能完全恢复他的健康，并且需要治疗。NYHA I类的患者没有明显的心血管疾病的症状，但已经具有功能损害的客观证据。NYHA II类的患者具有身体活动的轻微限制。NYHA III类的患者显示身体活动的明显限制。NYHA IV类的患者不能在没有不适的情况下实施任何身体活动。他们在休息时显示心功能不全的症状。

该功能分类由美国心脏病学会和美国心脏协会的最新分类补充(参见J. Am.Coll. Cardiol. 2001; 38; 2101-2113，在2005年更新，参见J. Am. Coll. Cardiol.2005; 46; e1-e82)。定义了4个阶段A、B、C和D。阶段A和B不是HF，但被认为辅助在发展“真正的”HF之前早期鉴定患者。阶段A和B患者被最好地定义为具有发展HF的风险因素的那些。例如，尚未表现出受损的左心室(LV)功能、肥大或几何腔室变形的具有冠状动脉疾病、高血压或糖尿病的患者将被视为阶段A，而无症状、但表现出LV肥大和/或受损的LV功能的患者则将被指定为阶段B。然后阶段C表示具有与潜在结构性心脏病相关的HF的目前或过去症状的患者(大部分具有HF的患者)，并且阶段D指具有真正难治性HF的患者。

如本文所用，术语“心力衰竭”优选地包括上文提及的ACC/AHA分类的阶段A、B、C和D。此外，该术语包括NYHA I、II、III和IV类。因此，受试者可能显示或可能不显示心力衰竭的典型症状。

在一个优选实施方案中，术语“心力衰竭”是指根据上文提及的ACC/AHA分类的心力衰竭阶段A或特别是心力衰竭阶段B。这些早期阶段、特别是阶段A的鉴定是有利的，因为可以在不可逆损坏发生之前开始治疗。

待根据诊断心力衰竭的方法测试的受试者优选未患有心房纤颤。然而，还设想受试者患有心房纤颤。术语“心房纤颤”与评价心力衰竭的方法相关地定义。

优选地，待根据诊断心力衰竭的方法测试的受试者被怀疑患有心力衰竭。

术语“参考量”与评价心房纤颤的方法相关地定义。原则上，可以如上所述测定在用于诊断心力衰竭的方法中应用的参考量。

优选地，来自受试者的样品中的BMP10-型肽的量(和任选地至少一种另外的生物标志物(诸如ESM-1、Ang-2、FABP-3和/或利尿钠肽)的量)与参考量相比增加指示受试者患有心力衰竭，和/或其中来自受试者的样品中的BMP10-型肽的量(和任选地至少一种另外的生物标志物(诸如ESM-1、Ang-2、FABP-3和/或利尿钠肽)的量)与参考量相比减少指示受试者未患有心力衰竭。

在诊断心力衰竭的方法的一个实施方案中，所述方法进一步包括基于诊断的结果推荐和/或起始用于心力衰竭的疗法的步骤。优选地，如果诊断所述受试者患有心力衰竭，则推荐或起始疗法。优选地，所述心力衰竭疗法包括施用至少一种选自以下的药物：血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂、血管紧张素II受体阻滞剂、β受体阻滞剂和醛固酮拮抗剂。血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂、血管紧张素II受体阻滞剂、β受体阻滞剂和醛固酮拮抗剂的实例在下一部分中描述。

已知一些受试者更快速地进展为心力衰竭，且因此处于由于心力衰竭而住院的升高风险中。重要的是尽可能早地鉴定这些受试者，因为这将允许预防或延迟进展为心力衰竭的治疗措施。

有利地，已经在作为本发明基础的研究中发现，受试者的样品中的BMP10-型的量允许鉴定处于心力衰竭住院的风险中的受试者。例如，与第一四分位数中的受试者相比，在分析的群组的BMP10的第四四分位数(实施例4)中的受试者在三年的时段内具有约四倍的心力衰竭住院风险。

因此，本发明进一步涉及用于预测受试者由于心力衰竭而住院的风险的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)在来自受试者的至少一种样品中测定BMP10-型肽(骨形态发生蛋白10-型肽)的量，和任选地，选自利尿钠肽、ESM-1 (Endocan)、Ang2(血管生成素2)和FABP-3(脂肪酸结合蛋白3)的至少一种另外的生物标志物的量，和

(b)将所述BMP10-型肽的量与所述BMP10-型肽的参考量进行比较，和任选地，将所述至少一种另外的生物标志物的量与所述至少一种另外的生物标志物的参考量进行比较。

结合评价心房纤颤的方法和诊断心力衰竭的方法所作的定义和解释优选地适用于预测受试者的由于心力衰竭而住院的风险的方法。

上述方法可以进一步包括预测受试者由于心力衰竭而住院的风险的步骤(c)。因此，步骤(a)、(b)、(c)优选如下：

(a)在来自受试者的至少一种样品中测定BMP10-型肽(骨形态发生蛋白10-型肽)的量，和任选地，选自利尿钠肽、ESM-1 (Endocan)、Ang2(血管生成素2)和FABP-3(脂肪酸结合蛋白3)的至少一种另外的生物标志物的量，和

(b)将所述BMP10-型肽的量与参考量进行比较，和任选地，将所述至少一种另外的生物标志物的量与所述至少一种另外的生物标志物的参考量进行比较，和

(c)预测受试者由于心力衰竭而住院的风险。

优选地，该预测基于步骤(b)中的比较的结果。

表述“住院”是技术人员众所周知的，并且优选地意指受试者尤其是在住院的基础上进入医院。住院应当是由于心力衰竭。因此，心力衰竭应当是住院的原因。优选地，住院是由于急性或慢性心力衰竭而住院。因此，心力衰竭包括急性和慢性心力衰竭。更优选地，住院是由于急性心力衰竭而住院。因此，预测受试者由于心力衰竭而住院的风险。

上面已经定义了术语“心力衰竭”。该定义相应地适用。在一些实施方案中，由于根据ACC/AHA分类而分类为C或D期的心力衰竭而住院。ACC/AHA分类是本领域中众所周知的，并且例如描述于Hunt等人 (Journal of the American College of Cardiology, Volume46, Issue 6, 20 September 2005, 第e1-e82页, ACC/AHA Practice Guidelines)，其在此通过引用以其整体并入。

根据前面提及的方法，应当预测受试者由于心力衰竭而住院的风险。因此，可以鉴定处于由于心力衰竭而住院的风险中或未处于由于心力衰竭而住院的风险中的受试者。因此，如本文根据前面提及的方法使用的术语“预测风险”优选地是指评价由于心力衰竭而住院的可能性。在一些实施方案中，本发明的上述方法允许在处于由于心力衰竭而住院的风险中的受试者和未处于由于心力衰竭而住院的风险中的受试者之间进行区分。

根据本发明，术语“预测风险”应理解为辅助预测由于心力衰竭而住院的风险。原则上，最终预测将由医生实施，并且可能包括进一步的诊断结果。

如本领域技术人员将理解，风险的预测通常不意在对100%的受试者是正确的。优选地，该术语意指可以以适当和正确的方式预测统计学显著部分的受试者。一部分是否是统计学显著的可以通过本领域技术人员使用各种众所周知的统计评估工具例如置信区间的确定、p-值确定、Student氏t-检验、Mann-Whitney检验等来确定而无需费力。详述可见Dowdy和Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983。优选的置信区间是至少90%、至少95%、至少97%、至少98%或至少99%。优选地，p-值是0.1、0.05、0.01、0.005或0.0001。

优选地，预测在特定时间窗口内的风险/概率。在一些实施方案中，从完成本发明的方法起计算所述预测窗口。具体而言，从已经获得待测试的样品的时间点起计算所述预测窗口。

在本发明的一个优选实施方案中，所述预测窗口优选为至少1年、至少2年、至少3年、至少4年、至少5年或至少10年或任何间歇时间范围的间隔。在本发明的另一个优选实施例中，所述预测窗口优选为最长达5年、更优选最长达4年者最优选地最长达3年的时段。因此，预测在最长达三年、最长达四年或最长达五年的时段内的风险。此外，设想预测窗口为1至5年的时段。或者，所述预测窗口可以是1至3年的时段。

在一个优选实施方案中，预测三年内由于心力衰竭而住院的风险。

优选地，将待通过本发明的上述方法分析的受试者分类为处于由于心力衰竭而住院的风险中的受试者组，或分类为未处于由于心脏病而住院的风险中的受试者组。处于风险中的受试者优选为处于由于心力衰竭而住院的升高风险中的受试者(尤其是在预测窗口内)。优选地，与受试者的群组(即一组受试者)中的风险相比，所述风险升高。未处于风险中的受试者优选为处于由于心力衰竭而住院的降低风险中的受试者(尤其是在预测窗口内)。优选地，与受试者的群组(即一组受试者)中的平均风险相比，所述风险降低。因此，本发明的方法允许区分升高风险和降低风险。处于风险中的受试者优选在3年的预测窗口内具有的由于心力衰竭而住院的风险优选为12%或更大，或更优选为15%或更大，或最优选为20%或更大。未处于风险中的受试者优选在3年的预测窗口内具有的由于心力衰竭而住院的风险优选为低于10%，更优选为低于8%，或最优选为低于7%。

术语“参考量”已经在本文别处定义。所述定义相应地适用。待在上述方法中应用的参考量应当允许预测由于心力衰竭而住院的风险。在一些实施方案中，所述参考量应当允许区分处于由于心力衰竭而住院的风险中的受试者和未处于由于心力衰竭而住院的风险中的受试者。在一些实施方案中，所述参考量是预定值。

优选地，来自受试者的样品中的BMP10-型肽的量与参考量相比增加指示受试者处于由于心力衰竭而住院的风险中。还优选地，来自受试者的样品中的BMP10-型肽的量与参考量相比减少指示受试者未处于由于心力衰竭而住院的风险中。

如果测定多于一种生物标志物，则以下适用：

优选地，来自受试者的样品中的BMP10-型肽的量和至少一种另外的生物标志物的一种或多种量与相应的参考量相比增加指示受试者处于由于心力衰竭而住院的风险中。还优选地，来自受试者的样品中的BMP10-型肽的量和至少一种另外的生物标志物的一种或多种量与相应的参考量相比减少指示受试者未处于由于心力衰竭而住院的风险中。

术语“样品”已经在本文别处定义。所述定义相应地适用。在一些实施方案中，所述样品是血液、血清或血浆样品。

术语“受试者”已经在本文别处定义。所述定义相应地适用。在一些实施方案中，所述受试者是人受试者。优选地，待测试的受试者是50岁或更大，更优选60岁或更大，且最优选65岁或更大。进一步，设想待测试的受试者是70岁或更大。此外，设想待测试的受试者是75岁或更大。此外，所述受试者可以在50和90岁之间。

在一个实施方案中，待测试的受试者具有心力衰竭史。在另一个实施方案中，待测试的受试者没有心力衰竭史。

本发明的方法可以辅助个性化医学。在一个优选实施方案中，上述用于预测受试者由于心力衰竭而住院的风险的方法进一步包括以下步骤：如果预测所述受试者处于由于心力衰竭而住院的风险中，则推荐和/或起始至少一种合适的疗法。因此，本发明还涉及治疗的方法。

优选地，在用于预测受试者由于心力衰竭而住院的风险的方法的上下文中使用的术语“疗法”涵盖生活方式改变、饮食方案、对身体的干预以及药物治疗，即用一种或多种药物治疗。优选地，所述疗法旨在降低由于心力衰竭而住院的风险。在一个实施方案中，所述疗法是施用一种或多种药物。优选地，所述药物选自血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂、血管紧张素受体拮抗剂(ARB)、醛固酮拮抗剂和β受体阻滞剂。

在一些实施方案中，所述药物是β-受体阻滞剂，诸如普萘洛尔、美托洛尔、比索洛尔、卡维地洛、布新洛尔和奈比洛尔。在一些实施方案中，所述药物是ACE抑制剂，诸如依那普利、卡托普利、雷米普利和群多普利。在一些实施方案中，所述药物是血管紧张素II受体阻滞剂，诸如氯沙坦、缬沙坦、厄贝沙坦、坎地沙坦、替米沙坦和依普罗坦。在一些实施方案中，所述药物是醛固酮拮抗剂，诸如Eplerone、螺内酯、烯睾丙内酯、Mexrenone和Prorenone。

生活方式改变包括戒烟、适度饮酒、增加体力活动、体重减轻、钠(盐)限制、重量管理和健康饮食、每日鱼油、盐限制。

此外，本发明涉及以下物质用于a)评价心房纤颤、b)预测受试者中的中风的风险和/或c)诊断心力衰竭的用途(尤其是体外用途，例如在来自受试者的样品中)：

i) BMP10-型肽，和任选地选自利尿钠肽、ESM-1 (Endocan)、Ang2和FABP-3(脂肪酸结合蛋白3)的至少一种另外的生物标志物，和/或

ii)至少一种特异性结合BMP10-型肽的试剂，和任选地，选自以下的至少一种另外的试剂：特异性结合利尿钠肽的试剂，特异性结合ESM-1的试剂，特异性结合Ang2的试剂和特异性结合FABP-3的试剂。

关于前述用途提及的术语，诸如“样品”、“受试者”、“检测剂”、“特异性结合”、“心房纤颤”和“评价心房纤颤”已经关于用于评价心房纤颤的方法进行定义。所述定义和解释因此适用。

本发明进一步涉及BMP10-型肽和/或至少一种特异性结合BMP10-型肽的试剂用于预测由于心力衰竭而住院的风险的用途(尤其是体外用途，例如在来自受试者的样品中)。

优选地，前述用途是体外用途。此外，所述检测剂优选地是抗体，诸如单克隆抗体(或其抗原结合片段)。

本发明还涉及试剂盒。在一个实施方案中，本发明的试剂盒包含特异性结合BMP10-型肽的试剂，和选自以下的至少一种另外的试剂：特异性结合利尿钠肽的试剂，特异性结合ESM-1的试剂，特异性结合Ang2的试剂和特异性结合FABP-3的试剂。

优选地，所述试剂盒适于实施本发明的方法，即用于评价心房纤颤的方法，或诊断心力衰竭的方法，或预测受试者由于心力衰竭而住院的风险的方法。任选地，所述试剂盒包含用于实施所述方法的说明书。

如本文所用的术语“试剂盒”是指前述组分的集合，优选地，所述前述组分分开提供或在单个容器内提供。所述容器还包含用于实施本发明的方法的说明书。这些说明书可以呈手册的形式，或者可以由计算机程序代码提供，所述计算机程序代码能够实施本发明的方法中提及的计算和比较，并且当在计算机或数据处理装置上执行时相应地建立评价或诊断。计算机程序代码可以提供在数据存储介质或装置，诸如光学存储介质(例如，光盘)上，或者直接提供在计算机或数据处理装置上。此外，所述试剂盒可以优选地包含用于校准目的的标准量的BMP10-型肽。在一个优选实施方案中，所述试剂盒还包含用于校准目的的标准量的如本文所提及的至少一种另外的生物标志物(诸如利尿钠肽或ESM-1)。

在一个实施方案中，所述试剂盒用于体外评价心房纤颤。在一个替代实施方案中，所述试剂盒用于体外诊断心力衰竭。在一个替代实施方案中，所述试剂盒用于体外预测由于心力衰竭而住院的风险。

附图显示：

图1：在三个患者组(阵发性心房纤颤、持续性心房纤颤和窦性心律的患者)中的BMP10 ELISA的测量

图2：阵发性Afib中的BMP10的ROC曲线；AUC = 0.68

图3：持续性Afib中的BMP10的ROC曲线；AUC = 0.90(探索性AFib组：具有心房纤颤的病史的患者，其涵盖14例阵发性AFib，16例持续性Afib和30例对照)

图4：BMP10用于区分具有心力衰竭的患者和没有心力衰竭的患者[单位：ng/ml]

图5：BMP10用于区分心力衰竭；BMP10的ROC曲线；AUC = 0.76

图6：Kaplan-Meier曲线，其显示在具有先前心力衰竭史的患者中，通过BMP-10的四分位数的HF住院的风险。

图7：Kaplan-Meier曲线，其显示在没有先前心力衰竭史的患者中，通过BMP-10的四分位数的HF住院的风险。

图8：Kaplan-Meier曲线，其显示通过(在中值)二分化的BMP-10的中风风险。

实施例

本发明将仅通过以下实施例说明。然而，所述实施例无论如何不应以限制本发明范围的方式解释。

实施例1：映射试验 - 基于其不同的循环BMP10水平比较患者，诊断具有心房纤颤的患者

映射(MAPPING)研究涉及经历开胸手术的患者。在麻醉和手术之前获得样品。使用具有多电极阵列的高密度心外膜映射(高密度映射)对患者进行电生理学表征。该试验包含14个具有阵发性心房纤颤的患者，10个具有持续性心房纤颤的患者和28个对照，其(关于年龄、性别、合并症)尽可能匹配。在映射研究的血清样品中测定BMP10。在具有心房纤颤的患者中观察到BMP10水平相比于对照升高。在具有阵发性心房纤颤的患者中相比于匹配的对照，以及在具有持续性心房纤颤的患者中相比于对照，BMP10水平升高。

此外，在来自映射群组的样品中测定生物标志物ESM-1。有趣的是，显示BMP10与ESM-1的组合测定允许AUC增加至0.92，用于区分持续性AF与SR(窦性心律)。

此外，在来自映射群组的样品中测定生物标志物FABP-3。有趣的是，显示BMP10与FABP-3的组合测定允许AUC增加至0.73，用于区分阵发性AF与SR(窦性心律)。

实施例2：心力衰竭组

心力衰竭组包括60个具有慢性心力衰竭的患者。根据ESC指南标准，在休息时具有典型体征和症状和心脏的结构或功能异常的客观证据的患者中诊断出心力衰竭。具有缺血性或扩张性心肌病或显著瓣膜病并且能够签署同意书的18至80岁的患者被纳入研究。排除在最近6个月内具有急性心肌梗塞、肺栓塞或中风、进一步具有严重肺高血压和终末期肾病的患者。患者主要患有心力衰竭阶段NYHA II-IV。

健康对照群组包括33个受试者。通过评价ECG的状况和超声心动图结果验证健康状况。排除具有任何异常的参与者。

在具有心力衰竭的患者的血清样品中相比于对照观察到BMP10水平升高。

实施例3：生物标志物测量

在骨形态发生蛋白10 (BMP10)的研究级ECLIA测定(来自Roche Diagnostics, 德国的ECLIA测定)中测量BMP10。

为了检测人血清和血浆样品中的BMP10，使用特异性结合BMP10的N末端前区段的抗体夹心法。此类抗体也结合proBMP10和preproBMP10。因此，测定BMP10的N末端前区段、proBMP10和preproBMP10的量的总和。基于作为例如BMP9的其他BMP-型蛋白的发现的结构预测显示BMP10与proBMP10保持在复合物中，因此N-末端前区段的检测也反映BMP10的量。而且，可以检测BMP10的同二聚体形式，以及异二聚体结构，作为例如与BMP9或其他BMP-型蛋白的组合。

实施例4：SWISS AF研究- 心力衰竭住院的风险预测

来自SWISS-AF研究的数据包括2387个患者，其中617个具有心力衰竭(HF)的病史。在这些患者中测量BMP-10，以评价其预测由于心力衰竭而住院的风险的能力。

由于具有心力衰竭的病史的患者中和没有已知心力衰竭病史的患者中可能发生心力衰竭住院，因此在这些组中独立地评价预测未来心力衰竭住院的能力。对于总共233个患者，在随访期间记录由于HF而住院。233例住院中的125例发生在具有先前已知的HF的患者中。

表1显示包括具有已知HF病史的患者中的cox比例危险模型的结果。因变量是直至HF住院的时间，且自变量是log-2转换的BMP-10值。

如通过危险比和低p-值可见，BMP-10能够显著预测具有已知HF病史的患者中的HF住院的风险。由于BMP-10值是在它们进入模型之前进行log-2转换的，因此危险比可以解释为对于患者如果BMP-10的值加倍，则风险增加3.43倍。

表1：BMP-10 (log-2转换的)的cox比例危险模型的概述，其预测具有已知HF病史的患者中的HF住院的风险。

图6显示Kaplan-Meier曲线，其展示通过BMP-10的四分位数HF住院的风险。可见，风险随着BMP-10值增加而不断增加，并且对于具有最高四分位数内的BMP-10水平的患者中观察到最高风险。

表2显示包括没有已知HF病史的患者中的cox比例危险模型的结果。因变量是直至HF住院的时间，且自变量是log-2转换的BMP-10值。

如通过危险比和低p-值可见，BMP-10能够显著预测没有已知HF病史的患者中的HF住院的风险。由于BMP-10值是在它们进入模型之前进行log-2转换的，因此危险比可以解释为对于患者如果BMP-10的值加倍，则风险增加3.43倍。

表2：BMP-10 (log-2转换的)的cox比例危险模型的概述，其预测没有已知HF病史的患者中的HF住院的风险。

图7显示Kaplan-Meier曲线，其展示通过BMP-10的四分位数HF住院的风险。可见，风险随着BMP-10值增加而增加，并且对于具有两个最高四分位数内的BMP-10水平的患者的风险是最高的。

实施例5：SWISS AF研究- 中风的风险预测

在具有记录的心房纤颤的患者的前瞻性、多中心登记中验证(参考实施例3)循环BMP10预测中风发生的风险的能力(Conen D., Swiss Med Wkly. 2017 Jul 10;147:w14467)。

对于65个具有事件的患者和2269个没有事件的患者可获得BMP10结果。

为了定量BMP10的单变量预后值，比例危险模型与结果中风一起使用。

BMP10的单变量预后表现通过由BMP10给出的两种不同的预后信息并入进行评价。

第一个比例危险模型包括以中值(2.2 ng/mL)二分化的BMP10，且因此比较具有低于或等于中值的BMP10的患者相比于具有高于中值的BMP10的患者的风险。

第二个比例危险模型包括原始的BMP10水平，但转换至log2标度。进行log2转换以便实现更好的模型校准。

为了基于二分化的基线BMP10测量值(<=2.2 ng/mL vs > 2.2 ng/mL)得到两组中的绝对存活率的估计值，产生Kaplan-Meier图。

为了评价BMP10的预后值是否独立于已知的临床和人口统计学风险因素，计算加权比例cox模型，其此外包括变量年龄和中风/TIA/血栓栓塞病史。这些是整个群组(包括所有对照)上唯一显著的临床风险预测因素。

为了评价BMP10改进用于中风的预后的现有风险评分的能力，通过BMP10 (log2转换的)扩展CHADS

将CHADS

结果

表1显示两个单变量加权的比例危险模型(包括二分化或log2转换的BMP10)的结果。在使用log2-转换的BMP10作为风险预测因素的模型中，经历中风的风险与BMP10的基线值之间的相关性不显著，但接近0.05的显著性水平。

对于使用二分化BMP10的模型，p-值略高。然而，可以争论的是，如果事件数更多，则影响可以是统计学显著的。

相比于具有基线BMP10 <= 2.2 ng/mL的患者组，在具有基线BMP10 > 2.2 ng/mL的患者组中，二分化的BMP10的危险比意味着1.5倍更高的中风风险。这也可以在显示两组的Kaplan Meier曲线的图8中看到。

包括BMP10作为log2转换的线性风险预测因素的比例危险模型的结果表明log2转换的值BMP10与经历中风的风险成正比。2.038的危险比可以以BMP10的2倍降低与中风风险的2.038倍增加相关的方式解释。

表1：单变量加权的比例风险模型(包括二分化和log2转换的BMP10)的结果

表2显示比例危险模型的结果，所述模型包括BMP10 (log2转换的)与临床和人口统计学变量的组合。可以看出，BMP10的预后价值在一定程度上降低，但这可以通过模型的低统计功效来部分解释。

表2：多变量比例危险模型，其包括BMP10和相关的临床和人口统计学变量

表3显示组合CHADS

表3：组合CHADS

表4显示组合CHA

表4：组合CHA

表5显示组合ABC评分与BMP10 (log2转换的)的加权比例危险模型的结果。在该模型中，估计的危险比降低，并且BMP-10可能无法增加任何预后表现。

表5：组合ABC评分与BMP10 (log2转换的)的加权比例危险模型

表6显示对于病例群组选择，单独的BMP10、CHADS

CHADS

表6：BMP10、CHA

序列表

<110> Roche Diagnostics GmbH, F. Hoffmann-La Roche AG,

Maastricht University Medical Center

<120> 心房纤颤的评价中的循环BMP10 (骨形态发生蛋白10)

<130> RD34961PC

<150> EP18189551.7

<151> 2018-08-17

<160> 1

<170> BiSSAP 1.3.6

<210> 1

<211> 424

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> 未加工的preproBMP10

<400> 1

Met Gly Ser Leu Val Leu Thr Leu Cys Ala Leu Phe Cys Leu Ala Ala

1 5 10 15

Tyr Leu Val Ser Gly Ser Pro Ile Met Asn Leu Glu Gln Ser Pro Leu

20 25 30

Glu Glu Asp Met Ser Leu Phe Gly Asp Val Phe Ser Glu Gln Asp Gly

35 40 45

Val Asp Phe Asn Thr Leu Leu Gln Ser Met Lys Asp Glu Phe Leu Lys

50 55 60

Thr Leu Asn Leu Ser Asp Ile Pro Thr Gln Asp Ser Ala Lys Val Asp

65 70 75 80

Pro Pro Glu Tyr Met Leu Glu Leu Tyr Asn Lys Phe Ala Thr Asp Arg

85 90 95

Thr Ser Met Pro Ser Ala Asn Ile Ile Arg Ser Phe Lys Asn Glu Asp

100 105 110

Leu Phe Ser Gln Pro Val Ser Phe Asn Gly Leu Arg Lys Tyr Pro Leu

115 120 125

Leu Phe Asn Val Ser Ile Pro His His Glu Glu Val Ile Met Ala Glu

130 135 140

Leu Arg Leu Tyr Thr Leu Val Gln Arg Asp Arg Met Ile Tyr Asp Gly

145 150 155 160

Val Asp Arg Lys Ile Thr Ile Phe Glu Val Leu Glu Ser Lys Gly Asp

165 170 175

Asn Glu Gly Glu Arg Asn Met Leu Val Leu Val Ser Gly Glu Ile Tyr

180 185 190

Gly Thr Asn Ser Glu Trp Glu Thr Phe Asp Val Thr Asp Ala Ile Arg

195 200 205

Arg Trp Gln Lys Ser Gly Ser Ser Thr His Gln Leu Glu Val His Ile

210 215 220

Glu Ser Lys His Asp Glu Ala Glu Asp Ala Ser Ser Gly Arg Leu Glu

225 230 235 240

Ile Asp Thr Ser Ala Gln Asn Lys His Asn Pro Leu Leu Ile Val Phe

245 250 255

Ser Asp Asp Gln Ser Ser Asp Lys Glu Arg Lys Glu Glu Leu Asn Glu

260 265 270

Met Ile Ser His Glu Gln Leu Pro Glu Leu Asp Asn Leu Gly Leu Asp

275 280 285

Ser Phe Ser Ser Gly Pro Gly Glu Glu Ala Leu Leu Gln Met Arg Ser

290 295 300

Asn Ile Ile Tyr Asp Ser Thr Ala Arg Ile Arg Arg Asn Ala Lys Gly

305 310 315 320

Asn Tyr Cys Lys Arg Thr Pro Leu Tyr Ile Asp Phe Lys Glu Ile Gly

325 330 335

Trp Asp Ser Trp Ile Ile Ala Pro Pro Gly Tyr Glu Ala Tyr Glu Cys

340 345 350

Arg Gly Val Cys Asn Tyr Pro Leu Ala Glu His Leu Thr Pro Thr Lys

355 360 365

His Ala Ile Ile Gln Ala Leu Val His Leu Lys Asn Ser Gln Lys Ala

370 375 380

Ser Lys Ala Cys Cys Val Pro Thr Lys Leu Glu Pro Ile Ser Ile Leu

385 390 395 400

Tyr Leu Asp Lys Gly Val Val Thr Tyr Lys Phe Lys Tyr Glu Gly Met

405 410 415

Ala Val Ser Glu Cys Gly Cys Arg

420