一种用于辅助治疗卵巢癌的景天扶正饮及其制备方法

摘要

一种用于辅助治疗卵巢癌的景天扶正饮及其制备方法，涉及一种用于治疗卵巢癌的中药及其制备方法。本发明是要解决现有的卵巢癌基于铂类化疗耐药和减轻卵巢癌患者化疗毒副反应的技术问题。本发明的用于辅助治疗卵巢癌的景天扶正饮的有效成分按质量份数是由20份的红景天、15份的党参、40份的黄芪、15份的麦冬和30份的白芍组成。纵观景天扶正饮全方，发挥“配伍艺术”和“精准药物”相结合的巨大潜力，辩证施治，遵循扶正固本、活血化瘀、清热解毒的中药抗肿瘤根本机制，使扶正与祛邪相结合，对OC患者起到活血化瘀、健脾理气、宜肺养阴、养血补虚等功效，配合化疗发挥减毒、增效、增敏的作用，使治疗事半功倍。

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于治疗卵巢癌的中药及其制备方法。

背景技术

卵巢癌(OC)在妇科恶性肿瘤中死亡率居于首位，虽然OC诊断和治疗取得了重大进展，其5年生存率并未显著提高。研究表明基于铂类化疗耐药是该病不良预后的关键因素，逆转OC铂耐药对治疗及预后起到决定性作用。然而，到目前为止，还未找到更为有效的治疗药物能够逆转OC耐药或特异性治疗靶点。

中药凭借多靶点、多机制、多环节、低毒性、低成本等特点在抗肿瘤方面发挥巨大优势，配伍化疗起到事半功倍的效果。中医将卵巢癌归属于癥瘕、肠蕈、腹痛等范畴，主因寒凝、气滞及血瘀所致。多数卵巢癌患者就诊时已是晚期，此时正气不足，邪毒蕴积，正虚邪实，久病气虚导致气血凝聚不畅，经脉瘀阻。手术使患者脏腑气血亏损，元气大伤；化疗药物其性峻猛，销蚀正气，耗伤阴血。晚期卵巢癌患者多属气虚血瘀型，常合并血津液亏虚，正气不固，导致疾病复发。

发明内容

本发明是要解决现有的卵巢癌基于铂类化疗耐药和减轻卵巢癌患者化疗毒副反应的技术问题，而提供一种用于辅助治疗卵巢癌的景天扶正饮及其制备方法。

本发明的用于辅助治疗卵巢癌的景天扶正饮的有效成分按质量份数是由20份～25份的红景天、15份～20份的党参、40份～45份的黄芪、15份～20份的麦冬和30份～35份的白芍组成。

本发明的用于辅助治疗卵巢癌的景天扶正饮的制备方法如下：

在瓷器中放入上述的有效成分，加常温水浸泡1h～1.2h，水位要高于有效成分2cm～3cm，打开火源，在大火烧开以后文火煮0.5h～0.6h，把煮取的汤汁倒出并进行第一次过滤，药渣加水，水位要高于药渣2cm～3cm，在大火烧开以后文火煮0.5h～0.6h，然后进行第二次过滤，把两次过滤得到的滤液等体积混合，得到用于辅助治疗卵巢癌的景天扶正饮。

本发明的用于辅助治疗卵巢癌的景天扶正饮每日2次，每次250mL，早餐和晚餐后半小时口服。

本发明的用于辅助治疗卵巢癌的景天扶正饮的药物有效成分为红景天、黄芪、党参、麦冬和白芍。

君药红景天能够健脾益气，活血化瘀、祛邪恶气，补诸不足。

黄芪健脾补中，升阳举陷，益卫固表，生津养血、行滞通痹，尤其对恶性肿瘤患者具有扶正固本、补气益气的功效。

党参补脾肺气，补血生津，能够提高机体免疫力，抑制肿瘤增殖和迁移。

麦冬养阴生津、润肺清心、兼清胃热，除烦安神，通过增强内皮系统吞噬作用，提高外周血白细胞水平，增强机体免疫力。

白芍具有养血敛阴，柔肝止痛，平抑肝阳的功效，能提高巨噬细胞吞噬作用，提高细胞免疫功能，消除炎症和镇痛。

经过前期临床治疗回顾性研究发现，本发明的用于辅助治疗卵巢癌的景天扶正饮使OC患者血清CA125值下降更理想和改善化疗副作用。进一步研究发现景天扶正饮对SKOV3细胞具有抑制增殖、促进凋亡的作用，并通过抑制自噬增强SKOV3/DDP对顺铂敏感性。利用液质分析和网络药理学对景天扶正饮含药血清成分筛选分析，发现其抗肿瘤有效成分作用于多个靶点和信号通路，通过SIRT1介导的RAS/MAPK/ERK信号通路调控SKOV3/DDP自噬从而逆转OC铂耐药。本发明的重要意义在于发现OC并探索治疗新靶点，发挥中西医结合治疗优势，提高OC患者生存质量和改善预后。

纵观景天扶正饮全方，发挥“配伍艺术”和“精准药物”相结合的巨大潜力，辩证施治，遵循扶正固本、活血化瘀、清热解毒的中药抗肿瘤根本机制，使扶正与祛邪相结合，对OC患者起到活血化瘀、健脾理气、宜肺养阴、养血补虚等功效，配合化疗发挥减毒、增效、增敏的作用，使治疗事半功倍。

附图说明

图1为试验一的部分含药血清成分和药物成分-靶标网络图；

图2为试验一的DisGeNET数据库收集上皮性OC靶标和韦恩图分析药物图；

图3为试验一的KEGG信号通路图；

图4为试验一的RAS Signaling Pathway PPI网络图；

图5为试验一景天扶正饮与顺铂联合作用于SKOV3细胞后的克隆能力照片；

图6为试验一的AO/EB荧光染色检测法景天扶正饮与顺铂联合治疗SKOV3细胞的凋亡比例照片；

图7为试验一的Western blot法景天扶正饮与顺铂联合治疗Bad、Bax、caspase–3表达图；

图8为试验一中SKOV3/DDP细胞的LC3-II/LC3-I与SKOV3细胞相比的实物图；

图9为试验一中SKOV3/DDP细胞的LC3-II/LC3-I与SKOV3细胞相比的柱状图；

图10为试验一的顺铂和景天扶正饮配伍治疗阻断LC3-I向LC3-II的转化的实物图；

图11为试验一的顺铂和景天扶正饮配伍治疗阻断LC3-I向LC3-II的转化的柱状图；

图12为试验一的顺铂和景天扶正饮配伍治疗SQSTM1/p62的蛋白质水平；

图13为试验一的免疫荧光法的联合治疗组中肿瘤细胞自噬检测图。

具体实施方式

具体实施方式一：本实施方式为一种用于辅助治疗卵巢癌的景天扶正饮的有效成分，其按质量份数是由20份～25份的红景天、15份～20份的党参、40份～45份的黄芪、15份～20份的麦冬和30份～35份的白芍组成。

具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是：所述的用于辅助治疗卵巢癌的景天扶正饮的有效成分，其按质量份数是由20份的红景天、15份的党参、40份的黄芪、15份的麦冬和30份的白芍组成。其他与具体实施方式一相同。

具体实施方式三：本实施方式为具体实施方式一中用于辅助治疗卵巢癌的景天扶正饮的制备方法，具体过程如下：

在瓷器中放入上述的有效成分，加常温水浸泡1h～1.2h，水位要高于有效成分2cm～3cm，打开火源，在大火烧开以后文火煮0.5h～0.6h，把煮取的汤汁倒出并进行第一次过滤，药渣加水，水位要高于药渣2cm～3cm，在大火烧开以后文火煮0.5h～0.6h，然后进行第二次过滤，把两次过滤得到的滤液等体积混合，得到用于辅助治疗卵巢癌的景天扶正饮。

具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式三不同的是：在瓷器中放入上述的有效成分，加常温水浸泡1h，水位要高于有效成分3cm，打开火源，在大火烧开以后文火煮0.5h。其他与具体实施方式三相同。

具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式三不同的是：药渣加水，水位要高于药渣3cm，在大火烧开以后文火煮0.5h。其他与具体实施方式三相同。

用以下试验对本发明进行验证：

试验一：本试验为一种用于辅助治疗卵巢癌的景天扶正饮的制备方法，过程如下：

按照下述组成称量原料：用于辅助治疗卵巢癌的景天扶正饮的有效成分按质量份数是由20份的红景天、15份的党参、40份的黄芪、15份的麦冬和30份的白芍组成；

在瓷器中放入上述称量的有效成分，加常温水浸泡1h，水位要高于有效成分3cm，打开火源，在大火烧开以后文火煮0.5h，把煮取的汤汁倒出并进行第一次过滤，药渣加水，水位要高于药渣3cm，在大火烧开以后文火煮0.5h，然后进行第二次过滤，把两次过滤得到的滤液等体积混合，得到用于辅助治疗卵巢癌的景天扶正饮。

一、临床试验如下：

中晚期卵巢癌患者术后14天开始给予TP(紫杉醇+奈达铂)方案化疗，每28天一疗程。化疗过程中，对照组第一天给予紫杉醇静脉注射+第二天奈达铂静脉注射；实验组给予第一天紫杉醇静脉注射+第二天奈达铂静脉注射+第一天至第七天景天扶正饮口服，景天扶正饮每日2次，每次250mL，早晚餐后半小时口服。每28天检测一次CA125值，见表1。化疗过程中第一天至第七天里，患者毒副反应见表2。

表1景天扶正饮对卵巢癌患者CA125值的影响

表2卵巢癌患者毒副反应表

二、景天扶正饮药物有效成分鉴定：

1、运用网络药理学“药物-成分-靶标”相互作用的建立。

实验选择雄性SD大鼠，体重350g，将试验一制备的景天扶正饮给大鼠灌胃口服，每日早晚各次，每次4mL，连续14天。于末次给药后1h于腹部主动脉采血，离心、除菌、灭活血清，置于-80℃保存。

通过安捷伦6550液质分析仪器对景天扶正饮含药血清成分进行分析，得到40种入血成分(红景天3个、黄芪10个、党参8个、麦冬8个、白芍11个)，其中33个成分能预测到靶标。利用PubChem、SwissTarget数据库对这33个有效成分进行预测，见图1，共计获得到875不重复靶标。利用String数据库统一命名，用于后续分析。借助Cytoscape软件得到了一个包含907个节点，3254条边的中药复方成分-靶标网络。

2、疾病基因来源和靶标富集分析：

借助DisGeNET数据库收集上皮性卵巢癌基因，通过String数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络的构建和评估：

通过Cytoscape软件绘制药物成分-靶标-疾病网络，以及评估药物靶点的重要性。通过Metascape和DAVID数据库对基因GO(Gene oncology)和KEGG(Kyoto Encyclopedia ofGenes and Genomes)信号通路进行富集分析，评估基因的生物过程、分子功能、细胞成分、KEGG信号通路，KEGG信号通路见图3，左边的文字从上之下和右边的图中的点的位置一一对应，横坐标RichFactor指差异表达的转录本中位于该GO条目的转录本数目与所有有注释转录本中位于该GO条目的转录本总数的比值，RichFactor越大，表示富集的程度越大；Top ofGo Enrichment为GO统计学方法排前15位统计结果。

借助DisGeNET数据库收集上皮性OC靶标1224个(见图2的区域B)，韦恩图分析药物(区域A)和上皮性OC交集178个靶标。通过STRING数据库构建枢纽靶标蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络，包含179个节点、2813条边，PPI富集P值为1.0×10

三、景天扶正饮对OC肿瘤细胞具有抑制作用。

实验方法均为常规的方法，具体如下：

Western blot法：用BCA蛋白浓度测定试剂盒检测各组肿瘤细胞的蛋白浓度。分别配制分离胶、浓缩胶，按比例稀释，先后加入一抗和二抗。使用ECL超敏发光液检测蛋白表达量。

免疫荧光：取生长状态良好的肿瘤细胞，经过处理后甲醛固定，相继按配比浓度给予一抗、二抗，DAPI染核，激光共聚焦显微镜下60倍拍照。

克隆实验：克隆前1天制备饲养细胞层，将要克隆的肿瘤细胞从培养孔内轻轻吹干，计数。调整细胞为3～10个细胞/ml。取头天准备的饲养细胞层的细胞培养板稀释后，孵育于37℃、5％CO

AO/EB实验方法：制备染色缓冲液后，收集样本细胞，细胞数量在10×10

1、景天扶正饮对SKOV3细胞具有抑制作用。

实验方法：实验分为四组，分别为PBS对照组；顺铂组Cisplatin(10ug/mL)；景天扶正饮组JTFZY(每次250mL，每日早晚各1次，口服)；景天扶正饮(每次250mL，每日早晚各1次，口服)+顺铂组(10ug/mL)Cisplatin+JTFZY。

克隆分析表明，景天扶正饮与顺铂联合作用使SKOV3细胞克隆能力下降(图5)。AO/EB荧光染色检测法显示联合治疗使SKOV3细胞的凋亡比例明显增加(图6)。Western结果表明联合治疗使Bad、Bax、caspase–3表达上调(图7)。以上实验结果表明联合治疗组作用效果均优于单一用药组，这提示相比顺铂单药，景天扶正饮配伍顺铂治疗对SKOV3细胞抑制作用更强。

2、景天扶正饮抑制SKOV3/DDP细胞自噬。

研究结果提示与SKOV3细胞相比，SKOV3/DDP细胞中LC3-II/LC3-I比值明显增加，这表明耐药株中细胞自噬水平更高(图8和图9)。

实验分为四组，分别为PBS对照组；顺铂组(10ug/mL)；景天扶正饮组(有效组分5.32g/kg)；景天扶正饮(有效组分5.32g/kg)+顺铂组(10ug/mL)。顺铂和景天扶正饮配伍治疗能够阻断LC3-I向LC3-II的转化(图10和图11)，减弱细胞自噬水平。同时，SQSTM1/p62的蛋白质水平显示相同的改变模式(图12)。免疫荧光提示联合治疗组中肿瘤细胞自噬水平更低(图13)。