用于改善不孕不育症或妊娠状态的药物

摘要

提供用于抑制妊娠前的过度激活免疫或妊娠后的过度反应性免疫、并恢复正常的免疫状态的药物。一种用于抑制妊娠前的过度激活免疫或妊娠后的过度反应性免疫、并恢复正常的免疫状态的药物，其中，作为有效成分所述药物包含选自由(i)式(I)(式中，各符号如说明书记载所示)所示的化合物或其药学上可接受的盐、(ii)环孢霉素类、(iii)纳巴霉素或其衍生物组成的组中的化合物。

说明书

技术领域

本发明涉及用于改善母体与胎儿之间的免疫相互作用所影响的不孕不育症或妊娠状态的药物，所述药物包含特定的免疫抑制成分。特别是这样的药物的代表例中，可列举出：用于抑制妊娠前的过度激活免疫或妊娠后的过度反应性免疫，并恢复正常的免疫状态的药物。

背景技术

推测包括反复着床失败(RIF：Repeated implantation failure)、反复流产(RPL)在内的不孕不育症全世界约存在1亿9000万人，相当于有生殖能力的夫妇的8％～12％(参考文献1)。

不孕不育症的原因有很多，大致分为受精卵、胎儿的问题、母体的问题、与母体与胎儿的相互作用相关的问题等。

受精卵或胎儿或母体的问题可通过现有的治疗方法治疗，患者的80％～90％能够成功分娩。然而，其余的10％～20％包括与母体与胎儿的相互作用即母体与胎儿之间的免疫相关的异常所致的不孕不育症患者，难以通过现有的治疗方法得到治疗(参考文献2)。

造成这种困难的原因之一可认为是：针对与这些母体与胎儿之间的免疫相关的异常，新型治疗的开发出现了延迟。

候补地列举出一些免疫抑制剂或免疫调节剂，并针对该问题已研究了该治疗方法，但现阶段在临床使用方面几乎没有合适且有效的治疗方法(参考文献3)。

母体与胎儿之间良好的免疫相互作用主要是抑制对胎儿的排斥免疫并诱导免疫耐受。脏器移植(参考文献4-12)和癌症领域(参考文献13-18)的免疫学发展迅速，它们与妊娠之间存在很多共同的免疫机制(图1a)。

迅速去除侵入身体中的外来物质的天然免疫，以及基于被树突状细胞(Dendriticcell、DC)识别的信息诱导对外来抗原的攻击或免疫耐受的获得性免疫均是基本的免疫学机理，但在脏器移植、癌症或妊娠中有各自不同的特性。

移植时主要的免疫机理包括：基于T细胞抗原受体的、通过供体树突状细胞表面上表达的肽/同种异体HLA(Alo-HLA)复合体的直接识别和受体树突状细胞表面上表达的Alo-肽/自体HLA复合体的间接识别所诱导的T细胞的排斥反应(参考文献4-7)。

强烈的移植物反应被认为主要是由T细胞的直接识别所引起的，其伴随着由B细胞产生的抗Alo-HLA特异性抗体引起的慢性排斥。受体B细胞识别并结合供体树突状细胞的表面上表达的肽/同种异体HLA(Alo-HLA)复合体，通过Th2细胞间接识别该B细胞表面上的Alo-HLA来源肽/自体HLA类II复合体而分化诱导为浆细胞(参考文献8)。

在癌症免疫中阐明了2种避免机制。第一，由具有遗传异常的癌症细胞所产生的免疫抑制性细胞因子(TGF-β)诱导骨髄来源抑制细胞和调节性T细胞(Treg)(参考文献15-16)。

第二，由细胞毒性T淋巴细胞(CTL)产生的IFN-γ诱导癌症细胞的表面和肿瘤浸润巨噬细胞上程序性死亡配体(PD-L1)的表达。PD-1受体与PD-L1结合而可抑制CTL(参考文献15、17、18)。

绒毛滋养层(villous trophoblast)细胞的表面上的HLA-G表达是妊娠成功中的第一阶段，是实现避免天然免疫、诱导免疫耐受的关键(参考文献19-26)。然而，在母体-胎儿的界面的免疫不均衡和胎盘屏障的突破可能会与针对其它外来物质的应答同样地诱导现有的免疫应答，结果对胎盘构建、胎儿成长产生有害的影响，或引起母体并发症。通过胎盘的胎儿抗原或胎盘中的胎儿抗原的识别诱导在母体中产生针对胎儿细胞内靶蛋白的特异性抗体。

妊娠期间的免疫性反应与移植中所见的免疫应答相似。然而，不同之处在于，由于推测在妊娠初期的胎儿中并不存在足够的DC数，因此在妊娠期间肽/Alo-HLA复合体的直接识别也可能非常弱。进而，所呈递的抗原的抗原性由于胎儿有一半的同种异体抗原而较弱。抗体产生的过程与移植时相同。

因此，天然免疫是妊娠中重要的免疫性反应，之后的DC所致的T细胞激活可能比移植时弱。在恒河猴D(Rh-D)不合妊娠和胎儿血色病中考虑针对胎儿抗原的特异性抗体的产生。然而，包括Alo-HLA来源的肽的其它胎儿抗原也可能充当靶标，预测在有妊娠经验且Th2细胞比率高的患者中Th2激活而参与不孕不育症。

为了获得胎儿并成功地继续妊娠，需要对包括准备着床环境的同时接受受精卵、抑制对受精卵和胎儿的攻击以及免疫耐受在内的母体免疫系统进行一些应对(图1b)(参考文献19-43)。

这些机理的功能障碍导致对胎儿的免疫应答不受控制，引起不孕不育症。另外，这样的不孕不育症不仅可能发生在没有妊娠经验的女性、更换过伴侣的女性中，还有可能发生在流产或分娩后。

通常认为母体对相同的抗原的耐受性在成功妊娠和分娩后会增强，但即使着床障碍、流产和分娩也会增加母体识别胎儿抗原的机会，其结果，排斥反应的可能性增高。这些现象可能会增强对胎儿抗原的敏感性，促进排斥反应。利用现有的治疗方法可能无法使这些患者成功地妊娠。

尽管尚未完全阐明正常妊娠中发挥作用的详细的免疫机制，但包括以相同的伴侣经历了上次妊娠的母体，可以在着床前或着床后诱导诱导免疫耐受的机会。在每次妊娠中需要抑制由母体的天然免疫引起的排斥反应。

胎儿来源的绒毛外滋养层不表达组织相容性抗原HLA-A、-B或-D(参考文献44)，因此它不是CTL的靶标，但可以成为自然杀伤(NK)细胞的靶标。然而，滋养层表达HLA-C、E和G，而并非上述的HLA类型(参考文献19、20、45-49)。

胎儿母系HLA-C错配与母体T细胞激活相关，但在包括精液启动、充足的黄体酮的存在、HLA-G在内的几种条件下可以将免疫应答转换为免疫耐受(参考文献26、45-48)(图2a)。此反应促进DC由未成熟DC(imDC)分化为耐受性原性DC(tDC)，接着通过所指定的调节性T细胞诱导免疫耐受(参考文献50-53)。对于HMHAI、KIAA0020、BCL2A1和雄抗原(H-Y)之类的次要的组织相容性抗原也观察到同样的观察结果，这些在绒毛外滋养层细胞上被表达(参考文献54-57)。

HLA-E抑制蜕膜中的NK细胞的活性(参考文献49)，绒毛外滋养层细胞的表面上的HLA-G的表达诱导避免NK的攻击及抑制巨噬细胞的激活(参考文献21-24)。被抑制的NK/NKT细胞下调穿孔素和粒酶或颗粒溶素和1型细胞因子的产生。由巨噬细胞产生的1型细胞因子也受到抑制，有助于降低NK/NKT细胞活性(图2b)。

具有RIF或RPL的患者中的免疫性排斥反应的主要机制是Th1型免疫(参考文献58-64)，与外周血中的Th1、Th2、Th17、Treg、NK/NKT和DC重复但不相同(参考文献63)。在子宫内发生的免疫性变化尽管如上所述，但RIF患者的免疫性问题通常是由Th1型免疫的优势所引起的，从妊娠前开始Th1型免疫的活性持续上升。另一方面，在RPL患者中，有各种因素会激活对胎儿的免疫性排斥反应。

免疫反应在着床后开始，在妊娠中的母体-胎儿的界面可以通过以下的3种路径识别胎儿抗原：

-着床后的绒毛外滋养层、

-胎盘中的合胞体滋养细胞、以及

-胎盘完成后的母体的胎儿细胞或抗原的循环。

RIF与RPL之间免疫性变化不同这一假说是由不孕不育症患者的子宫中的NK细胞的亚群支持的。报告了：在RIF患者中，CD56

不同的NK细胞通过不同的机理攻击靶标细胞。CD56

基于这些见解，相对容易确定诊断参数，并选择适于免疫抑制剂治疗的RIF患者。然而在RPL患者中，妊娠时通过不同的路径且在不同的时期母体识别胎儿抗原的机会存在很多，因此适应性患者的选择更为复杂。

受精卵的着床及子宫内的蜕膜向绒毛的浸润、抗原从胎儿向母体的血液循环的转移在胎盘构建后随着时间经过而增加，在妊娠中期之后加速。免疫性反应的2个高峰理论上发生在母体-胎儿之间的界面，但针对这些胎儿的免疫反应的时机和强度各不相同。为了确保胎儿的安全性，抑制妊娠初期的同种异体免疫攻击及胎儿的完全免疫耐受是重要的关键所在。图3b示出子宫中的母体免疫反应的一些模式。

另一方面，根据辅助性T细胞的种类、作用的方式，将获得性免疫进一步分为“细胞免疫”和“体液免疫”。作为与母体和胎儿相关的免疫系统的疾病或症状，例如，对于“细胞免疫”，可列举出：由着床障碍所指的不孕症、由胎盘构建障碍所致的不育症、妊娠高血压症等，另一方面，对于与母体和胎儿相关的体液免疫，可列举出：血型不合妊娠或胎儿血色病。

对于免疫与妊娠的关系，例如专利文献1中，作为“细胞免疫”所引起的不孕不育症的治疗药，记载了将特定的免疫抑制剂作为有效成分的治疗药。

虽以避免母体与胎儿的血液的混合的方式构成了胎盘，但包含血细胞在内的少量的胎儿抗原会通过胎盘(胎儿母体间输血、FMT)进入母体循环。FMT最常在分娩中发生，但大多数病例中没有明确的临床意义(参考文献1a～3a)，也可以在包括导致诱发或自然流产的妊娠在内的任何妊娠期间发生。

在被识别为超出母体的免疫耐受能力的抗原性和外来抗原时，会在母体中产生针对胎儿抗原的抗体。所生成的病原性抗体与其它IgG抗体同样地通过胎盘移至循环系统中，攻击靶标胎儿细胞或抗原。

胎盘的构建完成后，从胎儿转移到母体中的抗原量会随着妊娠过程而增加。因此，母体针对胎儿的病原抗体产生量也增加，并观察到胎儿的状态的恶化与病原抗体产生量成比例，特别是在妊娠中期之后加速。

血型不合

例如母体为Rho(D)阴性而胎儿为Rho(D)阳性的妊娠被认为是血型不合妊娠。在构建胎盘后，虽为微量但包含血细胞成分的胎儿抗原通过胎盘从胎儿转移到母体。此时，针对已转移的胎儿抗原超过母体的免疫耐受能力的抗原或者不被耐受的抗原，由母体产生抗体，与其它抗体同样地通过胎盘转移到胎儿，靶向攻击胎儿的细胞。血型不合妊娠中，由母体产生的抗D抗体通过胎盘转移到胎儿，破坏胎血液中的红细胞，引起胎儿贫血、随后引起严重的胎儿水肿、宫内胎儿死亡(参考文献4a)。该病状在初次妊娠时并不明确显，随着致敏机会的增加，在第2次妊娠及之后变得严重。另外，在进行胎盘的构建后，转移抗原量随着妊娠进行而逐渐增加，因此病状会随着妊娠周数而发展。特别是在转移量增多的中期及之后大多数情况会迅速恶化。目前已知的治疗如下：为了去除由母体产生的抗D抗体进行血浆置换，对已经陷入贫血的胎儿进行胎儿输血，来促进低风险状态下的分娩。或者，为了防止对D抗原致敏，对于Rh不合的妊娠的女性，在妊娠中必须用Rh免疫球蛋白(Ig)进行治疗，在患者尚未致敏的情况下，则应在分娩或终止妊娠后进行治疗。这不仅对于RhD，对于其它血型，由于在母体胎儿之间不合，也有可能发生血型不合妊娠。

对于具有抗D抗体的母体，为了测定作为母体血液中抗体效价与妊娠中的胎儿性贫血的预测指标的胎儿大脑中动脉(MCA)的血流速度，需要基于多普勒超声检测进行管理(参考文献5a)。

另一方面，胎儿血色病是在胎儿期、新生儿期引起严重的肝功能衰竭的疾病，推测同种异体免疫胎儿肝损伤是该疾病的原因。成为病原的抗原尚未被鉴定，但在与胎儿的铁代谢相关的蛋白(酶等)与母体中的该蛋白(酶等)不同的情况下妊娠时会发病。

在妊娠后，胎盘构建结束后与胎儿的铁代谢相关的胎儿蛋白通过胎盘转移到母体，母体对该转移的胎儿蛋白抗原的免疫应答而在母体体内产生病原性抗体。基本病状是：在母体体内所产生的病原性抗体通过胎盘而转移到胎儿，由于该病原性抗体在胎儿体内攻击与铁代谢相关的胎儿蛋白而发病的胎儿铁代谢障碍。

来自相同母体的胎儿血色病的复发率为90％，对于治疗，自1990年左右以来，已经进行了使用铁螯合剂和抗氧化剂的内科治疗与肝移植的联合疗法，但婴儿的存活比率最高也为50％左右。在2009年，作为新的治疗法报道了基于出生后的胎儿的交换输血和大量γ球蛋白疗法的治疗法，婴儿的存活比率改善到75％。

目前的治疗方法如下通过在妊娠过程中对母体进行大量的γ球蛋白疗法来预防胎儿血色病的发病的方法。然而，由于需要大量的γ球蛋白，因此需要进一步的治疗方法。

妊娠高血压综合征

将在妊娠时发生高血压的情况称为妊娠高血压综合征(HDP)。将在从妊娠前开始观察到的高血压或在妊娠第20周观察到的高血压称为高血压合并妊娠(CH)，将妊娠第20周及之后仅发生高血压的情况分类为妊娠高血压症(GH)，将观察到高血压和蛋白尿的情况分类为子痫前期(PE)。从2018年开始，即使未观察到蛋白尿，但若肝功能不全、肾功能不全、神经病变、凝血障碍、胎儿的发育不良，则分类为子痫前期。妊娠高血压综合征变得严重时，有时发生HELLP综合征、子痫(eclampsia)、中枢神经病变等相关疾病。

HELLP综合征

HELLP综合征是表示在妊娠时或分娩时产生的危及母体、胎儿的生命的一系列的症状(溶血：H，肝功能不全：EL，血小板减少症：LP)的状态，是与妊娠高血压综合征有关的疾病。在观察到HELLP综合征时，必须紧急通过快速分娩或剖腹产来结束继续妊娠。

子痫

子痫是在围产期患者出现异常的高血压且发生了抽搐或意识丧失、视野受损的状态。也可能发生在分娩前、分娩中、产褥期。子痫是与高血压相关的脑组织的循环障碍和功能不全，它也是与妊娠高血压综合征有关的疾病。

妊娠高血压综合征、其相关疾病(HELLP综合征、子痫等)中，有时出现胎儿发育障碍、胎盘早剥、胎儿功能障碍、胎儿死亡等母体与胎儿均处于非常危险的状态，因此在妊娠中预防妊娠高血压综合征、其相关疾病(子痫、HELLP综合征等)发病或使发病延迟成为极其重要的课题。

尽管HELLP综合征、子痫的原因尚不清楚，但已知与妊娠高血压综合征有关(参考文献1b、2b)。若从妊娠高血压综合征的类别中除去作为母体的根本性问题的诱因的高血压、肾功能不全、年龄增加、肥胖，则其余的类别是胎盘的构建障碍，可认为这是由异常的母体-胎儿之间的免疫所引起的(参考文献3b～10b)。认为：异常的母体-胎儿之间的免疫归因于细胞免疫、T细胞介导的体液免疫所形成的攻击的抑制、胎儿抗原的免疫耐受不充分(参考文献11b)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开2016/068208号

发明内容

发明所要解决的问题

本发明的目的在于提供包含特定的免疫抑制成分的、用于改善母体与胎儿之间的免疫相互作用所影响的不孕不育症或妊娠状态的药物，尤其提供用于抑制妊娠前的过度激活免疫或妊娠后的过度反应性免疫，并恢复正常的免疫状态的药物。

同时，本发明的目的在于通过恢复正常的免疫状态来治疗或改善血型不合妊娠或胎儿血色病。

进而，本发明的目的在于通过抑制母体对胎儿的排斥免疫的激活及促进对胎儿的耐受性，从而预防或延迟妊娠高血压综合征和/或其相关疾病的发病。

用于解决问题的手段

即，为了解决上述的课题，本发明包括以下的实施方式。

(实施方式1)

一种用于抑制妊娠前的过度激活免疫或妊娠后的过度反应性免疫，并恢复正常的免疫状态的药物，其中，作为有效成分所述药物包含选自由如下成分组成的组中的化合物：

(i)式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐；

[化学式1]

(ii)环孢霉素类；及

(iii)纳巴霉素或其衍生物；

(式(I)中，R

(a)表示2个相邻的氢原子，或者R

(b)在键合的每个碳原子彼此之间可以形成另一个键；

R

R

R

X表示氧代基、(氢原子、羟基)、(氢原子、氢原子)或式-CH

Y表示氧代基、(氢原子、羟基)、(氢原子、氢原子)，或式N-NR

R

R

R

n表示1或2；

除了上述含义外，进而Y、R

(实施方式2)

一种用于通过甾体激素受体的激活和核内转移来诱导甾体激素的作用增强的药物，其中，作为有效成分选自由如下成分组成的组的化合物：

(i)式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐；

(ii)环孢霉素类；及

(iii)纳巴霉素或其衍生物。

此处，甾体激素包括糖皮质激素、盐皮质激素、雌激素、黄体酮、雄激素等。还能提供一种药物，其在妊娠中着床前的、主要通过黄体酮促进子宫内膜的分化及通过子宫内的免疫抑制，使用于接受受精卵或胎儿的子宫内环境变得良好。

(实施方式3)

一种用于抑制在子宫内作为可能被受精卵或胎儿成分激活的代表天然免疫的自然杀伤/自然杀伤T细胞或巨噬细胞的活性的药物，其中，作为有效成分选自由如下成分组成的组的化合物：

(i)式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐；

(ii)环孢霉素类；及

(iii)纳巴霉素或其衍生物。

(实施方式4)

一种用于抑制在子宫内可能通过获得性免疫直接或间接攻击受精卵或胎儿的、呈递受精卵或胎儿成分的抗原的抗原呈递细胞(树突状细胞、巨噬细胞等)、细胞障碍性T细胞或产生细胞间传递物质的T细胞的活性的药物，其中，作为有效成分选自由如下成分组成的组的化合物：

(i)式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐；

(ii)环孢霉素类；及

(iii)纳巴霉素或其衍生物。

(实施方式5)

一种用于诱导使受精卵或胎儿免疫耐受所需的抗原呈递细胞，或者用于诱导由未分化树突状细胞分化为耐受性型树突状细胞的药物，其中，作为有效成分选自由如下成分组成的组的化合物：

(i)式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐；

(ii)环孢霉素类；及

(iii)纳巴霉素或其衍生物。

(实施方式6)

一种用于抑制针对包括人白细胞抗原(HLA：Human Leukocyte Antigen)在内的胎儿成分的体液免疫应答，即抑制胎儿特异抗体的产生的药物，其中，作为有效成分选自由如下成分组成的组的化合物：

(i)式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐；

(ii)环孢霉素类；及

(iii)纳巴霉素或其衍生物。需要说明的是，作为由胎儿特异抗体的产生所引起的病状包括不孕症、不育症中的受精卵、胎儿的排斥反应、血型不合妊娠、新生儿血色病等。

(实施方式7)

一种用于抑制导致继续妊娠出现问题的在母体内产生病原抗体的药物，其中，作为有效成分选自由如下成分组成的组的化合物：

(i)式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐；

(ii)环孢霉素类；及

(iii)纳巴霉素或其衍生物。此处，作为该病原抗体包含以抗磷脂抗体综合征为代表的自体抗体等。

(实施方式8)

一种用于抑制母体对胎儿的排斥免疫的激活和/或促进对胎儿的耐受性的药物，其中，作为有效成分选自由如下成分组成的组的化合物：

(i)式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐；

(ii)环孢霉素类；及

(iii)纳巴霉素或其衍生物。

(实施方式9)

一种用于预防或延迟发生妊娠高血压综合征和/或与妊娠高血压综合征相关的疾病的药物，其中，作为有效成分选自由如下成分组成的组的化合物：

(i)式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐；

(ii)环孢霉素类；及

(iii)纳巴霉素或其衍生物。

(实施方式10)

根据实施方式9的药物，其中，妊娠高血压综合征相关的疾病为HELLP综合征。

(实施方式11)

根据实施方式9所述的药物，其中，妊娠高血压综合征相关的疾病为子痫。

(实施方式12)

根据实施方式1～11中任一项所述的药物，其中，有效成分为式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，式(I)的化合物为他克莫司或其药学上可接受的盐。

进而，本发明还包括以下的实施方式。

(实施方式13)

一种用于抑制妊娠前的过度激活免疫或妊娠后的反应免疫的药物，其中，作为有效成分选自由如下成分组成的组的化合物：

(i)式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐；

(ii)环孢霉素类；及

(iii)纳巴霉素或其衍生物。

(实施方式14)

根据实施方式13所述的药物，其包括向患者给予他克莫司或其药学上可接受的盐。

另外，本发明的化合物能成为用于抑制妊娠前的过度激活免疫或妊娠后的过度反应性免疫，并恢复正常的免疫状态的药物，因此使用本发明的化合物能够提供以下的治疗，同样地，本发明的化合物可成为用于以下治疗的药物。

(实施方式15)

一种母体与胎儿的关系中的体液免疫相关的疾病的治疗或用于治疗的药物。

(实施方式16)

根据实施方式15所述的治疗或用于治疗的药物，其中，母体与胎儿的关系中的体液免疫相关的疾病为血型不合妊娠。

(实施方式17)

根据实施方式15所述的治疗或用于治疗的药物，其中，母体与胎儿的关系中的体液免疫相关的疾病为胎儿血色病。

(实施方式18)

根据实施方式15所述的治疗或用于治疗的药物，其中，适用于第2胎及之后的妊娠。

(实施方式19)

根据实施方式15所述的治疗或用于治疗的药物，其中，从妊娠初期开始给药。

(实施方式20)

根据实施方式15所述的治疗或用于治疗的药物，其中，从妊娠初期开始以1～10mg/天的用量进行给药。

(实施方式21)

根据实施方式15所述的治疗或用于治疗的药物，其中，从妊娠初期开始以3～6mg/天的用量进行给药。

(实施方式22)

根据实施方式15所述的治疗或用于治疗的药物，其中，对可能有血型不合妊娠的患者从妊娠初期开始以1～10mg/天的给药量将式(I)的化合物给药。

进而，若考虑到本发明的化合物的作用机制，则本发明的化合物可以是用于以下的方法的药物。

(实施方式23)

通过高Th2细胞比率及其活性来抑制涉及对B细胞的作用的体液免疫。

发明的效果

根据本发明，抑制妊娠前的过度激活免疫或妊娠后的过度反应性免疫，并恢复正常的免疫状态，其结果，能够治疗或改善血型不合妊娠或胎儿血色病。

另外，根据本发明，抑制母体对胎儿的排斥免疫的激活和促进对胎儿的耐受性，其结果，能够预防或延迟发生妊娠高血压综合征和/或其相关疾病的发病。

附图说明

图1a是示出母性免疫与脏器移植和癌症具有大量共同免疫机制的图。

图1b是示出着床的容認、胎儿的攻击的抑制和胎儿的免疫耐受对于成功妊娠是重要的，这些中任意的功能障碍可能会导致不孕不育症的图。

图2a是示出胎儿-母性HLA-C错配与母体T细胞激活相关的图。免疫应答可以在各种条件下转换成免疫耐受的方向。

图2b是示出绒毛外滋养层(extravillous trophoblast)(EVT)不表达HLA-A、-B、-D，因此可能成为NK细胞(CD16+/CD56

图3a是示出反复着床失败(RIF)和反复流产(RPL)均与优势的Th1型免疫、相关的图。全身的持续性Th1型优势免疫有时反映出向RIF患者的着床前的子宫的状态，但是在向RPL患者的着床后，子宫的状态有时无法准确地反映出全身的状态。该理论可以由子宫内的NK细胞亚群推测出。

图3b是Th1型免疫的一些变动模式的推定图。激活的时机是：着床前且母体最初识别胎儿的刚妊娠后，以及胎儿抗原通过胎盘进入母体循环时的第2妊娠期。

图4是示出他克莫司的细胞内作用机制的图。他克莫司识别并与特定的受体结合，作用于一些细胞和分子路径。被激活的FKBP通过抑制钙调磷酸酶活性而对NFAT路径产生抑制作用，并与甾体激素伴侣复合体结合，由此诱导从复合体中释放激素受体和核内转移。GR表示糖皮质激素受体，NFAT表示激活T细胞的核因子，ER表示小胞体。

图5a是启示出不孕不育症患者中的能够通过他克莫司进行治疗的图。黄体酮受体的激活能够诱导着床中的子宫内膜的成熟。他克莫司的主要作用是被激活的NK/NKT细胞和激活Th1细胞的直接抑制。诱导imDC成熟为tDC，能够对针对胎儿的免疫耐受产生影响。

图5b是示出用于治疗不孕不育症的通过他克莫司的免疫性对照的图。他克莫司在脏器移植或胶原病中的用途不同，在不孕不育症中用于使已提高的免疫水平恢复至正常水平。因此，与用于治疗其它疾病的量相比，用于治疗不孕不育症的他克莫司的用量可以为低用量。

图6的上半部分是示出患者的Th1、Th2及其比的图。最初Th1/Th2的比高意味着由于免疫系统的异常所致的不孕症。下半部分是示出妊娠周中的孕妇的抗D抗体的效价的图。可知，由于从妊娠初期开始给药他克莫司而使抗体效价的上升缓慢，但在开始急速上升的妊娠28周增加给药量(5mg/天)，D抗体的效价稳定而不会进一步上升。

图7是示出妊娠周中的胎儿的体重和大脑中动脉的血流速度的图。即使在从妊娠初期起需要增加他克莫司的给药量(5mg/天)的28周及之后，体重也顺利地增加，作为胎儿贫血的尺度的血流速度与周数相当。

图8是示出CD4阳性细胞中的Th1和Th2细胞的比例及NK细胞活性的妊娠中的变化的图。CD4阳性细胞中的Th1和Th2细胞的比例持续性降低，而NK细胞活性在妊娠中期降低后，在妊娠32周的检测中显著上升。

具体实施方式

以下对本发明进行详细地说明。

即，本发明提供一种用于抑制妊娠前的过度激活免疫或妊娠后的过度反应性免疫，并恢复正常的免疫状态的药物，其中，作为有效成分所述药物包含选自由如下成分组成的组中的化合物：

(i)式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐；

[化学式2]

(ii)环孢霉素类；及

(iii)纳巴霉素或其衍生物；

(式(I)中，R

(a)表示2个相邻的氢原子，或者R

(b)在键合的每个碳原子彼此之间可以形成另一个键(即，形成双键)；

R

R

R

X表示氧代基、(氢原子、羟基)、(氢原子、氢原子)或式-CH

Y表示氧代基、(氢原子、羟基)、(氢原子、氢原子)，或式N-NR

R

R

R

n表示1或2；

除了上述含义外，进而Y、R

在式(I)的化合物中，R

(a)3,4-二氧代-环己基；

(b)3-R

此处，R

(c)环戊基，且该环戊基可以被甲氧基甲基、根据期望被保护的羟基甲基、酰氧基甲基(其中，酰基部分为可以根据期望被季铵化的二甲基氨基或可以被酯化的羧基)、1个以上可以被保护的氨基和/或羟基，或氨基草酰氧基甲基取代，优选的例子为2-甲酰基-环戊基。

以下详细地说明本说明书中使用的各定义及其具体例子以及其优选的实施方式。

“低级”只要没有特别声明，则是指具有1～6个碳原子的基团。

作为“烷基”和“烷基氧基”的烷基部分的优选的例子，可列举出：直链或者支链脂肪族烃残基，例如可列举出：甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、新戊基、己基等碳数1～6的低级烷基。

作为“烯基”的优选的例子，可列举出：具有1个双键的直链或者支链脂肪族烃残基，例如可列举出：乙烯基、丙烯基(烯丙基等)、丁烯基、甲基丙烯基、戊烯基、己烯基等低级烯基。

作为“芳基”的优选的例子，可列举出：苯基、甲苯基、二甲苯基、异丙苯基、菜基、萘基等。

作为“被保护的羟基”和“被保护的氨基”中的优选的保护基，例如可列举出：甲硫基甲基、乙硫基甲基、丙硫基甲基、异丙硫基甲基、丁硫基甲基、异丁硫基甲基、己硫基甲基等低级烷硫基甲基之类的1-(低级烷硫基)(低级)烷基，作为进一步优选的基团，可列举出：C

作为脂肪族酰基，例如可列举出：甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊酰基、异戊酰基、新戊酰基、己酰基、羧基乙酰基、羧基丙酰基、羧基丁酰基、羧基己酰基等可以具有1个以上羧基之类的适合的取代基的低级烷酰基；例如环丙基氧基乙酰基、环丁基氧基丙酰基、环庚基氧基丁酰基、薄荷基氧基乙酰基、薄荷基氧基丙酰基、薄荷基氧基丁酰基、薄荷基氧基戊酰基、薄荷基氧基己酰基等可以具有1个以上低级烷基之类的适合的取代基的环(低级)烷氧基(低级)烷酰基；樟脑磺酰基；例如羧基甲基氨基甲酰基、羧基乙基氨基甲酰基、羧基丙基氨基甲酰基、羧基丁基氨基甲酰基、羧基戊基氨基甲酰基、羧基己基氨基甲酰基等羧基(低级)烷基氨基甲酰基，或例如三甲基甲硅烷基甲氧基羰基乙基氨基甲酰基、三甲基甲硅烷基乙氧基羰基丙基氨基甲酰基、三乙基甲硅烷基乙氧基羰基丙基氨基甲酰基、叔丁基二甲基甲硅烷基乙氧基羰基丙基氨基甲酰基、三甲基甲硅烷基丙氧基羰基丁基氨基甲酰基等三(低级)烷基甲硅烷基(低级)烷氧基羰基(低级)烷基氨基甲酰基等具有1个以上羧基或者被保护的羧基之类的适合的取代基的低级烷基氨基甲酰基等。

作为芳香族酰基，例如可列举出：苯甲酰基、甲基苯甲酰基、茬甲酰基、萘甲酰基、硝基苯甲酰基、二硝基苯甲酰基、硝基萘甲酰基等可以具有1个以上硝基之类的适合的取代基的芳酰基；例如苯磺酰基、甲苯磺酰基、二甲胺磺酰基、萘磺酰基、氟苯磺酰基、氯苯磺酰基、溴苯磺酰基、碘苯磺酰基等可以具有1个以上卤素之类的适合的取代基的芳基磺酰基等。

作为被芳香族基取代的脂肪族酰基，例如可列举出：苯基乙酰基、苯基丙酰基、苯基丁酰基、2-三氟甲基-2-甲氧基-2-苯基乙酰基、2-乙基-2-三氟甲基-2-苯基乙酰基、2-三氟甲基-2-丙氧基-2-苯基乙酰基等可以具有1个以上低级烷氧基或三卤(低级)烷基之类的适合的取代基的芳基(低级)烷酰基等。

上述酰基中，作为进一步优选的酰基，可列举出：可以具有羧基的C

作为“5元～7元的碳环”，可例示出5元～7元的环烷基或环烯基，例如可列举出：环戊基、环己基、环庚基、环戊烯基、环己烯基或环庚烯基。

作为“饱和或者不饱和的5元或者6元环的、含有选自氮原子、硫原子和氧原子中的1个以上杂原子的杂环基团”的优选的例子，可列举出：吡咯基、四氢呋喃基等。

“可以具有适合的取代基的杂芳氧基”的中的“可以具有适合的取代基的杂芳基”部分可列举出：作为EP-A-532,088中的式所示的化合物的基团R

有效成分

本发明中，作为有效成分，可以使用(i)式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐、(ii)环孢霉素类或者(iii)纳巴霉素或其衍生物。需要说明的是，作为有效成分，也可以组合使用(i)式(I)所示的化合物、(ii)环孢霉素类或者(iii)纳巴霉素或其衍生物中的2种以上。以下对各自的有效成分进行说明。

(i)式(I)所示的化合物

本发明中可使用的式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐如上述说明所述，具体而言，例如记载于EP-A-184162、EP-A-323042、EP-A-423714、EP-A-427680、EP-A-465426、EP-A-480623、EP-A-532088、EP-A-532089、EP-A-569337、EP-A-626385、WO89/05303、WO93/05058、WO96/31514、WO91/13889、WO91/19495、WO93/5059等。

特别是，被称为FR900506(＝FK506、他克莫司)、FR900520(子囊霉素)、FR900523和FR900525的化合物是由链霉菌(Streptomyces)属，例如筑波链霉菌(Streptomycestsukubaensis)No.9993(保藏机构：日本茨城县筑波市东1丁目1-3，通商产业省工业技术院生命工学工业技术研究所(原名：通商产业省工业技术院微生物工业技术研究所)、保藏日：1984年10月5日、保藏编号：微工研条寄第927号)或者吸水链霉菌yakushimaensis亚种(Streptomyces hygroscopicussubsp.yakushimaensis)No.7238(保藏机构：日本茨城县筑波市东1丁目1-3，通商产业省工业技术院生命工学工业技术研究所、保藏日：1985年1月12日、保藏编号：微工研条寄第928号)(EP-A-0184162)产生的物质，特别是下述结构式所示的FK506(通用名：他克莫司)是代表性的化合物。

[化学式3]

化学名：17-烯丙基-1,14-二羟基-12-[2-(4-羟基-3-甲氧基环己基)-1-甲基乙烯基]-23,25-二甲氧基-13,19,21,27-四甲基-11,28-二氧杂-4-氮杂三环[22.3.1.04,9]二十八烷-18-烯-2,3,10,16-四酮。

作为特别是优选的实施方式，在式(I)所示的化合物中，R

R

R

R

X为(氢原子、氢原子)或氧代基，

Y为氧代基，

R

R

此处，R

R

作为另一优选的实施方式，作为式(I)所示的化合物，可列举出：他克莫司、子囊霉素或其衍生物。

进而，作为本发明的式(I)所示的化合物的优选的例子，还可列举出：EP0184162、EP323042、EP424714、EP427680、EP465426、EP474126、EP480623、EP484936、EP532088、EP532089、EP569337、EP626385、WO89/05303、WO93/05058、WO96/31514、WO91/13889、WO91/19495、WO93/5059、WO96/31514等中记载的化合物，引用其公开内容作为说明书记载的一部分。

式(I)所示的化合物的药学上可接受的盐

本发明的式(I)所示的化合物中“药学上可接受的盐”这一术语是指由药学上可接受的无毒碱或酸制备的盐。在本发明的式(I)的化合物为酸性时，其对应的盐可以由包括无机碱和有机碱在内的药学上可接受的无毒碱适合地制备。来自于这样的无机碱的盐包括：铝、铵、钙、铜(二价和一价)、三价铁、二价铁、锂、镁、锰(三价和二价)、钾、钠、锌等盐。优选铵、钙、镁、钾和钠的盐。由药学上可接受的无毒的有机碱制备的盐包括来自于天然起源和合成供给源这两者的伯胺、仲胺和叔胺的盐。药学上可接受的无毒的有机碱包括：例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N,N’-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺(Glucamine)、葡糖胺(Glucosamine)、组氨酸、海巴明青霉素(Hydrabamine)、异丙胺、二环己胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、多胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等。

在本发明的式(I)所示的化合物为碱性的情况下，其对应的盐可以由药学上可接受的无毒的无机酸和有机酸适合地制备。这样的酸包括：例如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙烷磺酸、富马酸、葡糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲烷磺酸、粘酸、硝酸、扑酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸等。优选柠檬酸、氢溴酸、盐酸、马来酸、磷酸、硫酸和酒石酸。

式(I)所示的化合物的溶剂化物或水合物

本发明的式(I)所示的化合物也能够形成溶剂化物，该情况也包括在本发明的保护范围内。作为优选的溶剂化物，可列举出：水合物和乙醇化物。

式(I)所示的化合物的晶型

本发明的式(I)所示的化合物可以以非晶质形态和/或1个以上结晶质形态存在，式(I)所示的化合物的所有这样的非晶质形态和结晶质形态以及它们的混合物旨在包括在本发明的范围内。进而，对于式(I)所示的化合物的晶型，也可以形成与水的溶剂化物(即，水合物)或与通常的有机溶剂的溶剂化物。对于式(I)所示的化合物的晶型的溶剂化物和水合物，特别是药学上可以接受的溶剂化物和水合物，同样地包括在由式(I)定义的化合物及其药学上可以接受的盐的范围内。

式(I)所示的化合物的异构体

本发明的式(I)所示的化合物中，有时存在起因于构象异构体或不对称碳原子和双键的光学异构体和几何异构体之类的1对以上的立体异构体，这样的构象异构体或异构体也包括在本发明的化合物的范围内。

式(I)的化合物的制备方法

本发明的式(I)的化合物为文献公知物质，其制法方法公开于例如EP-A-184162、EP-A-323042、EP-A-423714、EP-A-427680、EP-A-465426、EP-A-480623、EP-A-532088、EP-A-532089、EP-A-569337、EP-A-626385、WO89/05303、WO93/05058、WO96/31514、WO91/13889、WO91/19495、WO93/5059等。或者，他克莫司由Astellas Pharma Inc.以Prograf(注册商标)的售卖名称市售。

(ii)环孢霉素类

作为环孢霉素类，可列举出：例如环孢霉素A、B、D等，这些记载于默克索引(MerckIndex)(12版)No.2821。需要说明的是，环孢霉素例如以Sandimmune这一售卖名称由Novartis Pharma K.K.市售。

(iii)纳巴霉素或其衍生物

作为纳巴霉素(也称为西罗莫司)，记载于默克索引(12版)No.8288，也可以使用其衍生物。作为纳巴霉素衍生物的优选的例子，可列举出：WO95/16691的第1页的式(A)的40位的羟基被-OR

[化学式4]

本发明的式(I)所示的化合物、环孢霉素类，纳巴霉素及其衍生物具有类似的基本骨架，即三环大环内酯骨架，具有至少一个类似的生物学特性(例如，免疫抑制作用)。

其它任意的成分

本发明的药物除了上述的有效成分之外，只要没有抑制有效成分的活性的可能性且对给药对象(以下也称为患者)而言无害，就可以包含1种以上对其它病患、疾病和症状具有治疗作用的治疗活性物质。

作为这样的治疗活性物质，例如可列举出：包括雌酮、雌二醇、雌三醇在内的雌激素、黄体酮、泼尼松等。

本发明的药物

本发明的药物作为有效成分包含选自由(i)式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、(ii)环孢霉素类、(iii)纳巴霉素或其衍生物组成的组中的化合物，进而，还可以包含对给药对象物无害的药学上可接受载体。可以使用的载体可以是固体、半固体或液体型中的任意一者，例如可列举出：选自水、电解质液及糖液等中的任意一者，但不限定于这些。进而，本发明的药物还可以包含助剂。作为助剂，可列举出：润滑剂、稳定剂、防腐剂、乳化剂、增粘剂(粘稠剂)、着色剂、香料(着香剂)、赋形剂、保存剂、缓冲剂、矫味剂、悬浮剂、乳化剂、助溶剂等。

剂型

包含本发明的有效成分的药物可以以各种剂型来提供，作为其剂型，可列举出：片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、散剂、浆液剂、栓剂、锭剂、粒料、乳液、悬浮液及公知的其它形态。这些当中，例如，作为经口给药制剂，优选为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、散剂、液剂、浆液剂及啫喱剂中的任意一者，更优选为片剂、胶囊剂及颗粒剂中的任意一者，进一步优选为片剂。需要说明的是，如后所述，例如，还可以制成注射剂、栓剂及经皮吸收型制剂之类的非经口给药制剂。

药物的制造方法

本发明的药物可以利用公知的制造方法而制造。作为一例，可通过如下方式制造：可按成分每次分别制造有效成分和任意的其它成分后，将各自的成分以成为期望的含量的方式混合，从而制造。

药物的给药对象

作为本发明的药物的给药对象，可列举出：哺乳动物。作为哺乳类，可列举出：人以及作为除人以外的动物的牛、马、猪和羊等之类的家畜、猴子、黑猩猩、以及犬、猫、大鼠和兔子等之类的宠物动物，优选列举出人。

给药路径

本发明的药物的给药方法(给药路径)可以根据给药对象的年龄、状态及治疗期间等进行适宜确定。具体而言，可以是经口给药或非经口给药中的任意一者，但优选为经口给药(实施例为经口给药)。作为非经口给药，可列举出：注射给药、作为栓剂的给药、作为经皮吸收型制剂的给药等方法。作为注射给药的种类，例如可列举出：肌肉内、腹腔内、皮下、静脉内及局部注射。另外，本发明的药物可以通过经皮、经鼻、经阴道及经由直肠等各种路径进行给药。

给药量

药物的给药量根据接受药物给药的患者的病患、疾病或症状的种类、严重程度、各种检测结果和药物的有效成分的种类等而不同。进而，药物的给药量还取决于要治疗的患者的年龄、基于本发明的治疗方法的治疗的实施次数及各种检测结果等而不同。作为一例，从药物中包含的有效成分的含量的观点出发，以成为低于在生物体移植和免疫系统疾病等治疗中用作免疫抑制剂时的给药量的低用量的用量将本发明的药物进行给药。例如，药物的给药对象为人的情况，没有特别限定，但根据患者的症状，作为每一天的有效成分的量，优选给予0.5～10mg或1～10mg的范围内，更优选给予0.5～6mg或3～6mg的范围内的量。需要说明的是，以下只要没有特别声明，关于药物的给药量的记载适用于人为对象的情况，给药量表示为有效成分的量。

另外，基于经口的给药的情况，每一天的给药次数优选为1～4次、更优选为1～3次、进一步优选为1～2次，没有特别限定。

包含本发明的有效成分的药物可以阶段性地给药或与其它治疗药组合使用来给药。与其它治疗药组合使用来给药的情况，可以将本发明的药物和其它治疗药分别制成制剂同时或按不同的给药间隔进行给药。

在将包含本发明的有效成分的药物阶段性地给药或与其它治疗药组合使用来给药的情况下，通常可以使用相同的给药剂型。在将这些药物物理组合进行给药的情况下，给药剂型和给药路径应根据所组合的药物的适应性进行选择。因此，同时给药这一术语可理解为包括两种药物的同时或连续给药，或者作为两种活性成分的固定用量的组合的给药。

作为前述的其它治疗药，例如可列举出：包括雌酮、雌二醇、雌三醇在内的雌激素、黄体酮、泼尼松等。进而，例如可列举出：抗D免疫球蛋白等免疫球蛋白类。

进而，本发明的药物也可以与血浆置换疗法、胎儿输血等物理疗法组合。

用于抑制妊娠前的过度激活免疫或妊娠后的过度反应性免疫，并恢复正常的免疫状态的药物

他克莫司是从日本的土壌放线菌中分离出的相关物质(他克莫司、纳巴霉素、子囊霉素、美利达霉素)之一。其是具有23元环大环内酯结构的大环内酯衍生物抗生物质(参考文献73)。他克莫司是与FK506结合蛋白(FKBP)受体结合而抑制钙调磷酸酶的活性的钙/钙调蛋白依赖性脱磷酸酶(参考文献74-78)。该钙调磷酸酶抑制剂(CNI)在通过T细胞受体(图4)而被刺激的细胞中，抑制发挥将激活T细胞的核因子(NFAT)移至核中的作用的钙依赖性信号(参考文献79-83)。基于将他克莫司成功地用于移植和自体免疫疾病的领域，从而阐明了细胞中的信号传递的详细的机理(参考文献84、85)。

报道了：他克莫司不仅作用于T细胞的CN-NFAT路径，还作用于包括自然杀伤(NK)/自然杀伤T(NKT)细胞、巨噬细胞、B细胞和树突状细胞(DC细胞)在内的其它细胞型中(参考文献86-92)。直接抑制发生在T细胞、NK/NKT细胞和巨噬细胞中。有一些研究中报道了他克莫司对tDC成熟产生负面影响(参考文献88、89)，但另外也示出了诱导未成熟DC细胞(imDC)成熟至耐受性原性DC细胞(tDC细胞)的他克莫司的正面作用(参考文献26、90、91)。

B细胞(活性、抗体产生和类别转换)被T滤泡辅助细胞88抑制(参考文献87)。这些见解启示出：他克莫司通过抑制被激活的NK/NKT细胞和巨噬细胞而抑制拒绝，能够诱导对胎儿的耐受性，另外，能够诱导imDC分化为tDC。

图5a示出通过他克莫司的抑制被激活的自然杀伤/自然杀伤T细胞或巨噬细胞的机理，以及诱导未成熟树突状细胞分化为耐受性原性树突状细胞的机理。

由此，能够抑制妊娠前的过度激活免疫或妊娠后的过度反应性免疫，并恢复正常的免疫状态，而且能够治疗或改善血型不合妊娠或胎儿血色病。

详细而言，他克莫司通过与黄体酮受体的伴侣复合体中的FKBP52结合，然后从复合体中释放出而被激活(参考文献33、112、113)。

接着，被激活的黄体酮受体在黄体酮的存在下诱导子宫内膜上皮细胞的成熟。由这些细胞产生半乳凝素1，在成熟的子宫内膜上皮细胞中诱导Th1凋亡、tDC和子宫NK(参考文献30、31、34、35)。

第二，他克莫司通过CN-NFAT路径直接抑制第1型细胞、NK/NKT细胞和巨噬细胞的活性(参考文献86、87)。

第三，通过CN-NFAT路径诱导imDC与tDC的分化，其结果，辅助Treg细胞的诱导(参考文献26、51、90、91)。

tDC的诱导还通过例如免疫抑制药(环孢霉素、纳巴霉素、脱氧精胍菌素、霉酚酸酯、Sanglifehrin A)、抗炎药(皮质类固醇、阿司匹林)、1α25-二羟基维生素D3、N-乙酰-L-半胱氨酸、环状AMP诱导物质(PGE2、组胺、β2激动剂、神经肽)、葡糖胺和原卟啉钴等其它药理学介质而进行(参考文献26)。

需要说明的是，使用用于不孕不育症的他克莫司的免疫抑制的水平与移植中的其使用不同。后者使用他克莫司，以比通常的免疫更低的水平抑制持续性的免疫，前者需要抑制妊娠前的过度激活免疫或妊娠后的过度反应性免疫，并恢复正常的免疫状态(图5b)。

血型不合妊娠

血型不合妊娠是在以下那样的状态下产生的障碍。

(i)母体的红细胞膜上没有的抗原存在于胎儿的红细胞膜上。

(ii)胎血通过胎盘而流入母体后，在母体体内产生对胎儿红细胞膜上的抗原的病原性抗体(病原性抗体、例如抗D抗体效价、抗红细胞抗体等上升)。

(iii)病原性抗体通过胎盘转移到胎儿而攻击胎儿红细胞。

(iv)胎儿的红细胞发生溶血，导致胎儿贫血。

因此，通过自(ii)中的病原性抗体效价上升之前起，例如自刚妊娠后起对孕妇给予本发明的药物(例如他克莫司)，可抑制病原性体效价的上升(抑制抗体的产生)，抑制起因于血型不合妊娠的症状，因此能够治疗或改善血型不合妊娠。

对于给药量，作为有效成分可例示出1mg/天～10mg/天。给药量优选为3～6mg/天。

此外，(iii)中的通过胎盘的病原性抗体对胎儿红细胞的攻击在女性中一旦(由于上次的妊娠或者流产等)被识别为胎儿红细胞膜状的抗原，残留有用于产生病原性抗体的记忆，因此自第1胎的妊娠起在第2胎及之后的妊娠时变得容易发生血型不合妊娠。

需要说明的是，在女性患有不孕不育症且使用例如本发明的药物(作为有效成分1～4mg/天)确立了妊娠的情况下，持续地给药，在确认出例如病原体效价的上升时可以进一步增加本发明的药物(例如作为有效成分5～10mg/天)给药。

进而，即使在女性患有不孕不育症而利用除例如本发明的药物以外的方法确立了妊娠的情况下，也可以使用本发明的药物进行血型不合妊娠的治疗，例如可以从妊娠初期开始给予本发明的药物(例如作为有效成分1～10mg/天)。

胎儿血色病

胎儿血色病是在以下那样的状态下产生的症状。

(i)与胎儿的铁代谢相关的酶与母体中的该酶不同。

(ii)胎血通过胎盘而流入母体后，在母体体内产生针对该酶的病原性抗体。

(iii)病原性抗体通过胎盘转移到胎儿而攻击胎儿的铁代谢酶。

(iv)胎儿的铁代谢停止，铁沉积于肝脏内而导致肝硬化。

因此，通过自(ii)中的病原性抗体效价的上升之前起，例如自刚妊娠后起对孕妇给予本发明的药物(例如他克莫司)，从而可抑制病原性抗体效价的上升(抑制抗体的产生)，抑制起因于病原性抗体的症状，由此，能够治疗或改善胎儿血色病。

对于作为此时的本发明的有效成分的化合物的给药量，优选1～10mg/天，更优选为3～6mg/天。

妊娠高血压综合征及其相关疾病(HELLP综合征、子痫等)

在妊娠高血压综合征及其相关疾病(HELLP综合征、子痫等)中，有时发生胎儿发育障碍、胎盘早剥、胎儿功能障碍、胎儿死亡等母体与胎儿同时处于非常危险的状态。该状态是由异常的母体-胎儿之间的免疫所引起的，该异常的母体-胎儿之间的免疫归因于细胞免疫、T细胞介导的体液免疫所形成的对包括胎盘在内的胎儿成分(抗原)的攻击的抑制或促进免疫耐受不充分。

因此，例如，通过向患者给药本发明的药物(例如他克莫司)，从而能够抑制母体对胎儿的排斥免疫的激活及促进对胎儿的耐受性，可实现更好的胎盘构建及其功能，能够预防和延迟妊娠中的妊娠高血压综合征、其相关疾病的发病。

特别是，在患有妊娠高血压综合征、其相关的疾病的病史的患者中，通常初次妊娠之后对胎儿抗原的识别增强，因此在第2次及之后的妊娠中，优选更早期地对患者给药本发明的药物(例如他克莫司)。

作为有效成分，给药量可示例出1mg/天～10mg/天。例如，自流入母体的胎儿抗原增多的时期开始母体对胎儿的免疫强烈激活，因此在妊娠后期，优选适宜增加给药量。

实施例

以下列举出具体的实施方式来说明本发明，但本发明不限定于该实施方式，可理解的是本领域技术人员可以在不脱离所附权利要求书中限定的本发明的范围或主旨的情况下实施这些中的各种变更和改变。

抗D抗体效价的测定

通过间接库姆斯试验来进行。间接库姆斯试验是指检测在将患者的血清和健康的人的血液混合而成的物质中加入抗免疫球蛋白抗体是否引发红细胞凝集反应的试验(检测存在于血清中的不规则抗体)(对于库姆斯试验，参照日产妇志59卷10号、N-617～N-623)。

Th1/Th2细胞比率

近些年，在全世界体外授精(IVF)和胚胎移植(ET)的发生率日益增高。伴随与此，包括反复着床失败(Repeated implantation failure)在内的经历多次IVF失败的女性数量日益增加。在进行IVF/ET时，在受精后2～5天的期间，将胚胎移植到子宫腔。可以说，半同种异体移植片(semi-allograft)的胚胎，伴随着母体一方的免疫耐受的确立，成功地着床于母体的脱落膜上，从而可确立妊娠(参考文献7a)。着床时的适合的免疫应答的确立的关键在于成功的着床。因此，可认为免疫上的病因学在IVF/ET后的RIF中发挥了重要的作用。

T辅助性(Th)1、Th2、Th17、Treg细胞发挥例如免疫排斥、免疫耐受等免疫应答中重要的作用(参考文献8a)。普遍认可妊娠时的免疫状态与Th2优势相关，Th1免疫应答与胚胎的排斥相关(参考文献6a、9a)。可认为胚胎排斥的根本性机理与同种异体移植中的排斥反应类似(参考文献10a)。在IVF/ET之间被移植的胚胎由于与同种异体移植的排斥反应同样的免疫应答而可能使着床失败。

Th1细胞和Th2细胞的分析

出于评价Th1/Th2细胞比率的基线值的目的，采集全部10ml的静脉血。Th1细胞和Th2细胞通过检测细胞内干扰素(IFN)-γ和IL-4的产生而确定。

淋巴细胞的特异性染色通过将全血与抗-CD4-PC5或抗-CD8-PC5-共轭单克隆抗体(mAbs)(Beckman Coulter,Fullerton,Ca,USA)一起进行孵育而进行。通过溶血而去除红细胞(RBCs)(使用FACS Lysing solution；Becton Dickinson，BD 134Biosciences，FranklinLake.NJ，USA)，使用流式细胞仪(FACSCalibur；Becton Dickinson)对淋巴细胞进行分析。使用抗-CD4-PC5-缀合物mAbs将经激活的全血样品表面染色后，依据制造商的使用说明书，依次进行了RBC的溶血及使用FastImmune(商标)IFN-γ-FITC/IL-4-PE(BectonDickinson)进行特异性细胞内染色。Th1细胞被指定为伴随细胞内IFN-γ但不伴随细胞内IL-4的CD4

实施例1

通过抑制妊娠前的过度激活免疫或妊娠后的过度反应性免疫并恢复正常的免疫状态的基于他克莫司的血型不合妊娠的治疗

患者为血型A的35岁的女性。对母体Rho(D)阴性、胎儿Rho(D)阳性的血型不合妊娠的患者进行了下述的治疗。即，在初次妊娠时，在妊娠过程中未给予抗D免疫球蛋白，在分娩前确立致敏，分娩时的抗D抗体效价为8倍。在39周由于胎盘早剥(Placental abruption)而通过紧急剖腹产进行了分娩。在分娩5个月后，抗体效价显示出最高值64倍。

2年后希望有第2胎，但患有不孕症并进行了通过体外受精的不孕治疗，但在5次胚胎移植中未成功，因此进行了免疫系统的精密检查。此时，确认出Th1/Th2(Th132.4、Th21.3)比显著上升(24.9)，判断为原因在于免疫系统的异常的不孕症，选择了他克莫司治疗。通过用他克莫司4mg/天的治疗(经口给药：早2mg、晚2mg)，以1次胚胎移植而确立了妊娠。

刚确立妊娠后的抗D抗体效价为4倍，但24周时到达16倍，26周时到达32倍(图6的上半部分)。此后，假设通过胎盘而向母体转移的胎儿抗原进一步增加，以备急速的抗体效价的上升，开始血浆置换、胎儿输血的准备。另外，同时也考虑到28周的Th1再次显示出上升倾向的情况，他克莫司增量至5mg/天(经口给药：早3mg、晚2mg)。

之后，完全没有出现预测到的抗D抗体效价的上升，且也未观察到胎儿贫血(大脑中动脉的血流速度上升)，一直维持在32倍，胎儿的生长也没有问题(图7)，在37周第2天分娩了2834g健康男婴。需要说明的是，大脑中动脉的血流速度和胎儿的推测体重通过胎儿超声波检测进行了测定。

图7是示出妊娠周中的胎儿的体重变化的图。体重经时地增加，显示出胎儿与妊娠周数相当地生长。与此同时，图7中也示出大脑中动脉的血流速度，示出了全部妊娠过程中未发生胎儿贫血。

通过化学发光免疫测定法(ECLIA)，脐带血他克莫司的浓度为检测界限值以下，抗D抗体效价为2倍。胎儿的血型为A型Rho(D)阳性，出生时的Hb(血红蛋白)值为13.6的轻度低值，没有外表畸形、内脏畸形且身体功能也没有问题。

解析

胎血红蛋白可以自妊娠初期起存在于母体血液中。在妊娠初期检测出母体血液中的HbF，通常自妊娠9周左右起可观察到胎血液中的HbF向母体血液中转移(参考文献4a、11a、12a)。这些见解启示出：对于胎儿抗原的母体的免疫应答可能在胎儿抗原开始流入母体的妊娠初期开始发生。另一方面，自胎盘构建完成后开始进行向胎儿转移抗D抗体。

对于这次的患者，由于在初次妊娠时未对母体给予具有中和活性的抗D免疫球蛋白，因此可认为由于胎盘早剥而在分娩时有大量胎血流入母体内的可能性，较强地确立了对胎儿抗原的致敏。此外，通过通常的不孕治疗未确立妊娠，由于反复失败而进一步助长致敏的可能性高。可认为，由于这些情况而母体强烈识别出包含血细胞成分的胎儿抗原，不仅代表抗D抗体的体液免疫，而且由于Th1细胞比率显著上升而导致的对其它胎儿成分的细胞性免疫应答所引起的排斥自第2次妊娠活动开始可能引发不孕症。

体液免疫和细胞免疫分别诱导上升的抗D抗体效价和增加的Th1细胞比率。这些是对外来抗原和胎儿抗原的常见免疫应答。

发明人等为了抑制妊娠前的过度激活免疫或妊娠后的过度反应性免疫并恢复正常的免疫状态，而使用他克莫司对患者进行治疗，能够对不孕症抑制细胞免疫。之前记载了详细的机理和与Th1细胞相关的结果(参考文献13a～15a)。基于该结果，作为不孕症治疗自妊娠前起开始给予他克莫司，在确立妊娠后由于也未观察到Th1细胞比率降低倾向而继续给药，在妊娠28周由于Th1细胞比率增加，因此增量至5mg/天。母体和胎儿状态没有并发症且稳定，妊娠进展顺利而患者实现了安全的分娩。

在妊娠24周及之后，由于大量的胎儿红细胞的侵入而抗D抗体效价可能急剧上升，但结果也抑制抗D抗体的产生，直至分娩为止无需进行母体和胎儿的重症监护。

尽管该效果是意料之外的，但机理通过通过如下能够说明，通过抑制钙调磷酸酶/NFAT途径而下调T细胞功能，接下来抑制B细胞激活并抑制抗体产生，从而抑制抗原的识别和抗病原体抗体的产生。也可以认为，这是因为通过具有免疫抑制效果的高剂量的静脉内免疫球蛋白进行了连续治疗(参考文献16a～19a)。

作为结论，该治疗提供以下优点，即，不进行血浆置换疗法、大量γ球蛋白疗法、高剂量甾体治疗之类的强力的治疗，就可以对促进抗体产生进行缓和。发明人认为，使用了他克莫司的治疗对于同种异体免疫妊娠是有益的。

通过给予他克莫司的免疫抑制可以容易地确立妊娠，进而可认为，针对排斥免疫的亢进在妊娠过程中增加他克莫司，可持续稳定的妊娠且抑制抗D抗体的产生，能够避免胎儿贫血的发病。推测出这是由他克莫司抑制了细胞免疫和体液免疫这两者所带来的效果。

实施例2

针对在使用了形态和发育优质的胚的体外受精/胚移植后具有连续5以上的RIF的病例，且在血清学检测中未观察到不孕不育症相关的异常观察结果的42位患者，从胚移植2天前至妊娠试验日为止使用或未使用他克莫司地进行了治疗。他克莫司的1天用量依据Th1/Th2细胞比来确定。与未治疗组的0％(0/17)相比，接受了治疗的患者的临床妊娠率为64.0％(16/25)(参考文献114)。对于胚移植前的Th1/Th2细胞比，可知能够预测出他克莫司治疗和未治疗患者中的辅助生殖技术的结果，Th1细胞水平与妊娠结果(n＝124)负相关(参考文献115)。

关于RPL，让具有在妊娠5～8周连续11次流产经历的1例患者依次进行低用量的阿司匹林、肝素、泼尼松(5mg/天)、大量γ球蛋白疗法(3天1g/kg)的治疗，但未成功(参考文献116)。然而，通过在妊娠中持续地用他克莫司(2mg/天)进行治疗，在没有其它治疗的情况下获得了良好的妊娠过程。此外，关于使用了他克莫司的B细胞的免疫抑制，在RhD不合妊娠中未使用血浆置换，得到良好的妊娠过程而成功分娩(未示出数据)。他克莫司的机理主要依赖于细胞免疫的抑制，但也通过T细胞抑制体液免疫。

他克莫司还可以对由母体-胎儿之间的免疫的异常所引起的其它疾病、以及胎盘的构建和功能产生影响，另外，能够预防妊娠中的胎儿发育延迟和母体的妊娠高血压症。

从抑制体液免疫的观点出发，不需要妊娠中的血浆置换疗法、大量丙种球蛋白疗法等强力的治疗，他克莫司能够成为新生儿血色病(其起因于针对RhD非相容性妊娠之类的胎儿抗原的体液免疫反应)和抗磷脂综合征的治疗的候补药。

然而，在妊娠后由现有抗体引起的病状的情况，他克莫司仅抑制B细胞的分化，因此为了迅速去除现有的病原性抗体的活性，需要与这些较强的治疗的组合使用疗法。

他克莫司治疗在妊娠的初期阶段、即自妊娠5～6周起用于具有以前的反复流产或反复化学流产的病史的患者是特别有利的。

在进行免疫抑制水平的量的糖皮质激素、大量γ球蛋白疗法等强力的治疗时，难以确定最适时机。他克莫司也容易用于这样的情况。

进而，在关于Th1优势免疫的说明中，难以阐明具有高Th2细胞比率的不孕不育症患者中的排斥反应的机理，但若假设排斥反应依赖于针对胎儿性HLA的抗体，则他克莫司在这些情况下也是有效的。

实施例3

新生儿血色素沉着病(Hemochromatosis)的治疗

本治疗法的主要目的在于抑制母体体内的胎儿抗原的识别，降低病原性抗体产生能力。

虽然在胎儿中发生的疾病不同，但与血型不合妊娠同样地，在胎盘构建完成后胎儿抗原自胎儿流入母体中，在母体中被识别，产生针对该抗原的病原性抗体，其中的IgG通过胎盘转移到胎儿从而在胎儿中发生疾病。对于该疾病，大多数情况下该病原性抗体抑制与胎儿的铁代谢相关的蛋白，铁沉积于肝脏，导致肝功能衰竭而致使宫内胎儿死亡、出生后死亡或者需要进行肝移植程度的严重情况。

本治疗的机理可以通过如下方式进行说明：通过抑制钙调磷酸酶/NFAT途径来抑制T细胞功能及通过基于此抑制B细胞激活和抑制抗体产生，从而抑制胎儿抗原的识别和抗病原体抗体的产生。

尚未鉴定出引起该疾病的病原的胎儿抗原。若考虑到在胎盘构建完成后由胎儿引起的抗原流入母体的情况，则考虑自妊娠12周左右起开始治疗，但胎盘构建存在个体差异，胎儿抗原的转移时期也并不明确，因此为了进行更有效的治疗，优选从妊娠初期就开始治疗。

在现有唯一的预防方法即向母体进行的大量γ球蛋白疗法的情况下，需要自18周起开始持续给药直至分娩为止，医疗费用(60万日元/周)非常昂贵，但本治疗法以其10分之1以下的医疗费用能够进行妊娠全部过程中的治疗，且也容易适宜变更其给药量，因此也有可能能够进一步节约医疗费用。

对于现有唯一的预防方法即向母体进行的大量γ球蛋白疗法，由于是由大量收集并汇集的血液中精制的，因此存在暴露于血液中可能包含的感染症的危险性，特别是引起胎儿贫血的细小病毒的感染成为问题，但本治疗法中完全没有包括其它病毒在内的感染的危险性。

在胎儿血色病中，妊娠过程中观察到流产、早产、宫内发育不全、羊水过少、胎动功能不全、胎盘浮肿中任意的情况较多，出生后确认出自刚出生后的全身状态不良(呼吸/循环功能不全等)、胎儿发育延迟、胎儿水肿、肝功能衰竭迹象等。在新生儿血液观察结果中，可见凝固障碍、胆汁淤积、转氨酶异常值等。不是由败血症引起的弥散性血管内凝固综合征、铁蛋白高值α甲胎蛋白高值、转铁蛋白饱和率显示出高值，图像检测观察结果中，MRI T2加权图像中观察到除肝脏以外的脏器提示铁沉积的低信号。通过该治疗，而使这些妊娠中的胎儿和出生后的新生儿的观察结果得到改善，由此可以进行评价。

基于来自母体的外周血的信息难以确定子宫内的免疫性状态。在一些研究中，评价了外周血和蜕膜中的NK细胞水平的相关性，也有相反的意见(参考文献117、118)。若RIF患者的子宫的免疫状态反映出全身的正常免疫状态，则也许与RPL患者相比判定RIF患者的子宫免疫状态更为简单。对照地，有时RPL患者的母体外周血直至反映出子宫的状态为止花费时间，早期RPL患者中，母体外周血的免疫状态可能没有变化或变化非常弱。根据情况，有时在流产后表现出变化。这些患者的他克莫司治疗的问题在于，在他克莫司治疗后，外周血不表现出细胞比率的变化，活性可能在子宫内受到抑制。

在母体血液中评价了一些免疫性参数。然而，这些参数并不直接反映出胎儿的状态，而是指能够仅对母体的免疫性状态和针对胎儿抗原的其反应性进行分析。为了支持免疫抑制剂的准确且适合的使用方法，还为了更详细地提供关于胎儿的信息，需要进一步的研究。

不孕症与不育症的病状不同，推测出：对于不孕症，通常的母体免疫状态反映在子宫内，但对于不育症，子宫内的免疫反应不会迅速地传递至全身，在涉及到全身变化之前妊娠大多会中断。因此，需要新型生物标记物。

实施例4

妊娠高血压综合征和与其相关的疾病(HELLP综合征和子痫)的发病预防或发病延迟

本治疗方法的主要目的在于抑制母体对胎儿的排斥免疫的激活和促进对胎儿的耐受性。

患者为38岁女性，且有子痫前期和HELLP综合征的病史。在32岁初次妊娠时，从妊娠初期开始诉说身体不适，自妊娠15周开始下观察到腿浮肿、体重增加、血压上升的倾向，自妊娠18周开始剧烈的浮肿增强、出现蛋白尿、高血压，诊断为妊娠高血压综合征(HDP)的中的子痫前期(PE)。在妊娠20周出现HELLP综合征和子痫发作，进行了紧急剖腹产，死胎。分娩后观察到作为重症并发症的肺水肿、播种性血管内凝固(DIC)、腹腔内出血，进行了基于人工呼吸器的管理、白蛋白的补充、成分输血等的治疗。

这次，在妊娠前的血液学的检测观察结果中，肝功能、肾功能、凝固功能均未见异常，在抗磷脂抗体综合征(抗CL-IgG抗体、抗CL-IgM抗体、抗PS/PT抗体、抗CL-β2GP1抗体、LAC、抗PE-IgG抗体、抗PE-IgM抗体)、自体免疫疾病(抗DNA抗体、抗核抗体)、凝固功能异常等关于不育症的检测项目中也未见异常观察结果。

表1记载了初次妊娠和本次妊娠的状况。

(表1)

AST：天冬氨酸氨基转氨酶

ALT：丙氨酸氨基转移酶

LDH：乳酸脱氢酶

Cr：肌酸酐

WBC：白细胞数

Hb：血红蛋白

Plt：血小板数

CD4阳性细胞中的Th1(CD4g

妊娠过程顺利，直至妊娠32周为止未观察到蛋白尿、浮肿、高血压，胎儿的成长也良好，但在下一周观察到蛋白尿、血压上升的倾向，在之后约3天迅速变为HELLP综合征，在妊娠33周3天通过剖腹产分娩了1490g的男婴。

在妊娠过程中的免疫性观察结果中，CD4阳性细胞中的Th1和Th2细胞的比例持续降低，而NK细胞活性(正常值：18-40％)在中期降低后，在妊娠32周显著上升(图8)。

在该病例中，从妊娠初期开始通过他克莫司1mg/天进行单独治疗，未进行出于通过改善血流来预防HDP的目的的小剂量阿司匹林(LDA：low dose aspirin)的组合使用治疗(参考文献13b)。对于妊娠过程，在上次出现HELLP综合征的妊娠中期完全没有问题，直至妊娠后期为止，过程顺利，但在妊娠33周之后与上次同样地迅速变为HELLP综合征。

在免疫性检测观察结果中，CD4阳性细胞中的Th1和Th2细胞的比例、NK细胞活性均在中期降低，通过他克莫司观察到充足的免疫抑制，但在妊娠32周NK细胞活性上升。

作为一种可能性，启示出：自胎儿抗原流入母体增多的时期开始，母体对胎儿的免疫强烈激活，在妊娠后期，基于他克莫司1mg/天的免疫抑制作用变得不充分。另外，也考虑出除Treg以外的T细胞在其细胞比例未发生变化的状态下同时被激活的可能性。

虽然同一患者出现2次HELLP综合征，但可容易地推测其发病机理是同样的。作为HDP的重症并发症，可列举出：HELLP综合征和子痫，该患者在上次妊娠时，由于未治疗而在妊娠早期出现两种疾病，而死胎。今次变为HELLP综合征，通过单独给药他克莫司而避免早期的发病，与上次相比延迟约13周发病，成功地获得了婴儿。

在免疫异常相关的不孕不育症患者中，通常初次妊娠之后的针对胎儿抗原的识别有可能增强。因此，在下一次的妊娠中推测会更早期地出现伴有妊娠高血压症恶化的HELLP综合征、子痫发作。与其相反地，通过他克莫司治疗而成功地使发病时期比上次延迟，明确了该效果并非由于组合使用药的存在。可认为：通过抑制母体对胎儿的排斥免疫的激活及促进对胎儿的耐受性，从而可实现更好的胎盘构建及其功能，实现预防妊娠中的高血压、胎儿发育障碍。然而，若考虑到未能继续妊娠至足月的情况、出生时的胎儿的成长也较迟缓的情况，可认为需要对该病例给予更多的给药量。

在该病例中，我们通过CD4阳性细胞中的Th1和Th2细胞的比例和NK细胞活性讨论了患者的病状，通过其中之一的NK细胞活性启示出母体-胎儿之间出现异常的免疫，但为了评价妊娠高血压症，存在母体对胎儿抗原的免疫耐受的异常及排斥免疫的增强，以及接踵而来的将炎症作为生物标记物的Treg细胞、Tfh细胞、Th17细胞、细胞因子、趋化因子等许多参数(参考文献3b～10b)。

基于更多参数的评价对于知晓详细的母体状态是有用的，期待评价母体-胎儿之间的免疫状态的新参数的发现，用于评价对妊娠高血压症综合征、其相关的疾病的治疗效果的被试者的增加。

产业上的可利用性

妊娠前后的母体免疫的变动假想为：(1)比妊娠前得到激活的状态，(2)在妊娠初期首次识别胎儿抗原而激活的状态，(3)在妊娠中期之后胎儿抗原增加而激活的状态。根据本发明，能够抑制妊娠前的过度激活免疫或妊娠后的过度反应性免疫，并恢复正常的免疫状态，其结果，不仅能够治疗或改善在母体与胎儿的关系中的细胞免疫(天然免疫、获得性免疫)相关的不孕不育症，而且能够治疗或改善体液免疫相关的不孕不育症、包括抗磷脂抗体综合征在内的自体免疫疾病、血型不合妊娠或胎儿血色病等，能够继续妊娠以及分娩健康的婴儿。进而，通过良好地保持这些母体-胎儿之间的免疫状态，从而能够良好地实现胎盘的构建，也能够避免母体并发症(妊娠高血压综合征、作为其相关的疾病的HELLP综合征、子痫等)。

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