一种硼砂硼酸缓冲液及其在电泳中的应用

摘要

本发明涉及一种硼砂硼酸缓冲液及其在电泳中的应用，属于生物技术领域。硼砂硼酸缓冲液的pH＝8.6，离子强度为0.05、0.06或0.075，所述硼砂硼酸缓冲液在电泳中的应用。优点是硼砂硼酸缓冲液使用硼砂和硼酸两种化学药品进行配制，这两种化学药品容易购买，价格便宜。缓冲液的pH容易调整，离子强度容易进行计算，适合开展血清醋酸纤维薄膜电泳和血清脂蛋白电泳实验，另外，硼砂硼酸缓冲液根据需要还可以使用在其它不同pH及不同离子强度的生命科学实验研究中。使用硼砂硼酸缓冲液效果非常好，血清醋酸纤维薄膜电泳区分出正确的蛋白质条带，而血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳也区分出脂蛋白条带，条带清晰，明确和完整，为正常开展实验研究和实验教学提供了支持。

说明书

技术领域

本发明属于属于生物技术领域，用于电泳的缓冲液，尤其涉及硼砂硼酸缓冲液及其在血清醋酸纤维薄膜和脂蛋白琼脂糖凝胶电泳中的应用。

背景技术

血清醋酸纤维薄膜电泳使用pH为8.6，离子强度为0.06的巴比妥钠/巴比妥缓冲液，血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳所用pH为8.6，离子强度分别为0.05和0.075巴比妥钠/巴比妥缓冲液。血清醋酸纤维薄膜电泳实验在医学院生物化学实验教学中非常重要，可以将血浆蛋白分为：清蛋白、α

发明内容

本发明提供一种硼砂硼酸缓冲液及其在电泳中的应用，目的是使用硼砂、硼酸建立合适的pH及离子强度用于替代巴比妥钠/巴比妥缓冲液，使用在血清醋酸纤维薄膜和血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳中。

本发明采取的技术方案是：

一种硼砂硼酸缓冲液的pH＝8.6，离子强度为0.05、0.06或0.075。

一种硼砂硼酸缓冲液的配制方法，配制pH＝8.6，离子强度为0.06的硼砂硼酸缓冲液步骤是：取硼砂7.63克，硼酸3.30克，加蒸馏水溶解，终体积到1升。

一种硼砂硼酸缓冲液的配制方法，配制pH＝8.6，离子强度为0.05的硼砂硼酸缓冲液步骤是：取硼砂6.36克，硼酸2.75克，加蒸馏水溶解，终体积到1升。

一种硼砂硼酸缓冲液的配制方法，配制pH＝8.6，离子强度为0.075的硼砂硼酸缓冲液步骤是：取硼砂9.536克，硼酸4.123克，加蒸馏水溶解，终体积到1升。

本发明所述硼砂硼酸缓冲液在电泳中的应用。

本发明将醋酸纤维薄膜浸泡到pH＝8.6，离子强度为0.06的硼砂硼酸缓冲液中10-20分钟。

本发明使用pH＝8.6，离子强度为0.05硼砂硼酸缓冲液配制0.035％琼脂糖凝胶步骤是：称取琼脂糖0.035g，加入该硼砂硼酸缓冲液100ml，置微波炉中溶解，分装于三角烧瓶中，冰箱保存。

本发明使用pH＝8.6，离子强度为0.075硼砂硼酸缓冲液作为血清琼脂糖凝胶电泳槽内的缓冲液。

本发明的优点是：硼砂硼酸缓冲液使用硼砂和硼酸两种化学药品进行配制，这两种化学药品容易购买，价格便宜。缓冲液的pH容易调整，离子强度容易进行计算，适合开展血清醋酸纤维薄膜电泳和血清脂蛋白电泳实验，其中配制0.06离子强度和pH 8.6的硼砂硼酸缓冲液，可以用于血清醋酸纤维薄膜电泳实验，配制的0.05和0.075离子强度及pH 8.6的硼砂硼酸缓冲液，用于血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳，完全可以替代巴比妥缓冲液。另外，硼砂硼酸缓冲液根据需要还可以使用在其它不同pH及不同离子强度的生命科学实验研究中。使用硼砂硼酸缓冲液效果非常好，血清醋酸纤维薄膜电泳区分出正确的蛋白质条带，而血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳也区分出脂蛋白条带。条带清晰，明确和完整，达到了预期的实验效果，为正常开展实验研究和实验教学提供了支持。

附图说明

图1是使用本发明0.06离子强度和pH 8.6的硼砂硼酸缓冲液的血清醋酸纤维薄膜电泳图；

图2是使用本发明0.05和0.075离子强度及pH 8.6的硼砂硼酸缓冲液的血清琼脂糖凝胶电泳图。

具体实施方式

硼砂Na

实施例1、配制pH＝8.6，离子强度为0.06的硼砂硼酸缓冲液：

取硼砂7.63克，硼酸3.30克，加蒸馏水溶解，终体积到1升，此时的硼砂的浓度为0.02M，硼酸的浓度为0.0534M；

离子强度＝1/2×(2×0.02×1

实施例2、配制pH＝8.6，离子强度为0.05的硼砂硼酸缓冲液

取硼砂6.36克，硼酸2.75克，加蒸馏水溶解，终体积到1升，此时的硼砂的浓度为0.0167M，硼酸的浓度为0.0445M；

离子强度＝1/2×(2×0.0167×1

实施例3、配制pH＝8.6，离子强度为0.075的硼砂硼酸缓冲液

取硼砂9.536克，硼酸4.123克，加蒸馏水溶解，终体积到1升，此时的硼砂的浓度为0.025M，硼酸的浓度为0.0667M；

离子强度＝1/2×(2×0.025×1

实施例4、血清醋酸纤维薄膜电泳

试剂和仪器：

1、醋酸纤维素薄膜2cm×8cm或1.5cm×8cm；

2、硼砂硼酸缓冲液，pH＝8.6，离子强度0.06；

3、染色液：氨基黑10B称取0.5g溶于50ml甲醇中，再加入冰醋酸10ml及蒸馏水40ml；

4、漂洗液：95％乙醇45ml，加冰醋酸5ml及蒸馏水50ml混匀；

5、电泳仪和电泳槽；

实验操作：

1、醋酸纤维薄膜处理：将醋酸纤维薄膜浸泡到硼砂硼酸缓冲液10-20分钟，将醋酸纤维薄膜取出，用滤纸轻轻吸去多余的缓冲液；

2、点样：吸取一滴血清于玻璃板上，用点样刀蘸取血清，然后将钢口平直印于醋酸纤维薄膜的一端2厘米处，然后将点样端放到电泳槽的阴极端用4层滤纸搭桥；

3、通电；电压110伏，通电45分钟，断电后，将薄膜从电泳槽取出，使用滤纸轻轻吸去多余的水份；

4、染色和洗脱：电泳好的醋酸纤维薄膜浸泡于染色液中5分钟，使用漂洗液洗数次，可以看到清晰的5条色带，分别为清蛋白、α

实施例5、血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳

试剂和仪器

1、硼砂硼酸缓冲液pH＝8.6:用于电泳时的离子强度为0.075，配制琼脂糖凝胶时的离子强度为0.05；

2、琼脂糖凝胶：称取琼脂糖0.035g，加入硼砂硼酸缓冲液pH＝8.6、离子强度0.05，100ml，置沸水浴中溶解，分装于试管中，冰箱保存；

3、染色液：苏丹黑0.1g，溶干异丙醇10m1中；

4、电泳仪和电泳槽。

实验操作

1、琼脂糖凝胶：称取琼脂糖0.035g，加入硼砂硼酸缓冲液pH＝8.6、离子强度0.05，100ml，置微波炉中溶解，分装于三角烧瓶中，冰箱保存；

2、预染血清：血清0.2m1加苏丹黑染色液0.02ml于小试管中混和后置37℃水浴染色30分钟，然后离心5分钟，2000rpm，取上清液备用；

3、制备琼脂糖凝胶板：已配制的琼脂糖凝胶于微波炉中加热融化，在距凝胶板一端约2cm处放入一根小铁棒，用吸管吸取凝胶溶液浇注载玻片，每个载玻片约用2.5ml，均匀浇到载玻片上，静置约20分钟后凝固；

4、点加预染血清：待凝胶板凝固后，用磁铁吸出小铁棒，留出的小槽用滤纸小心吸于水分，用微量加样器吸取经预染的血清约12μ1，注入凝胶板的小槽内；

5、电泳：将加过血清的凝胶板平行放入电泳槽内，样品端放置于阴极，两块三层纱布于pH＝8.6、离子强度0.075的硼砂硼酸缓冲液中浸湿，轻轻贴在凝胶板两端，纱布的下端浸入电泳槽内的离子强度0.075的硼砂硼酸缓冲液中，接通电源，电压110伏，时间45分钟，断电后可见分离的区带，分别为α-脂蛋白、前β-脂蛋白、β-脂蛋白和留在点样孔的乳糜微粒，见图2。