一种复方龙胆碳酸氢钠片中大黄蒽醌类UPLC测定

摘要

本发明涉及医药检测技术领域，尤其为一种复方龙胆碳酸氢钠片中大黄蒽醌类UPLC测定，其具体步骤如下：S1,对照品溶液制备取土大黄苷、大黄素、大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚六种对照品适量，加少量氯仿溶解后加甲醇稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液，作为对照品浓溶液，本发明通过设计将HPLC方法转换为UPLC方法，筛查复方龙胆碳酸氢钠片中土大黄苷的同时测定了大黄总蒽醌与游离蒽醌的量，能够有效准确的检测复方龙胆碳酸氢钠片中土大黄苷和大黄蒽醌类的含量，且本发明测定方法简单，操作方便，对复方龙胆碳酸氢钠片中含有的多种成分进行测定，从而能够满足不同的工作需求，使用性能更强，更适宜大范围推广使用。

说明书

技术领域

本发明涉及医药检测技术领域，具体为一种复方龙胆碳酸氢钠片中大黄蒽醌类UPLC测定。

背景技术

复方龙胆碳酸氢钠片是由碳酸氢钠、大黄膏(粉)、龙胆膏(粉)、丁香油、薄荷油和适宜的辅料组成的复方制剂。组方中的大黄应来源于蓼科植物掌叶大黄、唐古特大黄或药用大黄，不含土大黄苷成分，而藏边大黄、华北大黄和波叶大黄等伪品含有土大黄苷。正品大黄主要含蒽醌类衍生物，包括大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酸等游离蒽醌和番泻苷A、B等二蒽酮苷类结合型蒽醌，研究发现大黄提取物中的蒽醌类化合物可以起到调节肠道蠕动和导致腹泻的作用，目前测定的复方龙胆碳酸氢钠片HPLC方法，不能对复方龙胆碳酸氢钠片中土大黄苷、大黄总蒽醌与游离蒽醌的量同时进行测定，进而测定方法具有局限性，不能满足工作需求。

综上所述，本发明通过设计一种复方龙胆碳酸氢钠片中大黄蒽醌类UPLC测定来解决存在的问题

发明内容

本发明的目的在于提供一种复方龙胆碳酸氢钠片中大黄蒽醌类UPLC测定，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种复方龙胆碳酸氢钠片中大黄蒽醌类UPLC测定，其具体步骤如下：

S1,对照品溶液制备取土大黄苷、大黄素、大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚六种对照品适量，加少量氯仿溶解后加甲醇稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液，作为对照品浓溶液；

S2,供试品溶液制备测定大黄总蒽醌样品制备：取本品20片，称定重量，研细，取约相当于大黄原生药100mg的量，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理30分钟，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液15ml，置圆底烧瓶中，挥去甲醇，加2.5mol/L的硫酸溶液10ml，再加三氯甲烷10ml，加热回流1小时，冷却，移至分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷提取2次，每次约8ml，合并三氯甲烷液，以无水硫酸钠1g脱水，三氯甲烷液移入蒸发皿中，置75℃水浴上挥去三氯甲烷，残渣加甲醇适量使溶解并移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜过滤，取续滤液；

S3,测定大黄游离蒽醌样品制备：取本品20片，称定重量，研细，取约相当于大黄原生药100mg的量，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理60分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，即得；

S4,UPLC法测定结果：将对照品溶液及供试品溶液按UPLC色谱条件进行分析，对照品色谱图及光谱图；

优选的，所述S1中大黄素对照品为批号：110756-201512，纯度98.7％；大黄酸对照品为批号：110757-201607，纯度99.3％；大黄酚对照品为批号：110796-201621，纯度99.2％；芦荟大黄素对照品为批号：110795-201710，纯度98.3％；大黄素甲醚对照品为批号：110758-201616，纯度99.0％；土大黄苷对照品为批号：110794-201708。

优选的，所述S4中UPLC色谱条件为Agilent EclipsePlus C18柱(3.0mmx150mm,1.8μm)；以乙腈为流动相A，0.1％磷酸溶液为流动相B，流速0.3mL/min

优选的，所述S1、S2、S3和S4中所需的材料分别包括：Waters AcQuity UPLC-DAD型超高效液相色谱仪，SartoriusBS224S型万分之一电子天平；Sartorius CP225D型十万分之一电子天平，KQ-500DE型数控超声仪，水浴锅，电热套，乙腈、甲醇均为色谱纯，水为纯化水，其它试剂均为分析纯。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

1、本发明中，通过设计将HPLC方法转换为UPLC方法，筛查复方龙胆碳酸氢钠片中土大黄苷的同时测定了大黄总蒽醌与游离蒽醌的量，能够有效准确的检测复方龙胆碳酸氢钠片中土大黄苷和大黄蒽醌类的含量，且本发明测定方法简单，操作方便，对复方龙胆碳酸氢钠片中含有的多种成分进行测定，从而能够满足不同的工作需求，使用性能更强，更适宜大范围推广使用。

附图说明

图1为土大黄苷及大黄蒽醌类5种成分对照品色谱图；

图2为土大黄苷及大黄蒽醌类5种成分对照品光谱图(A土大黄苷、B芦荟大黄苷、C大黄酸、D大黄素、E大黄酚、F大黄素甲醚)；

图3为7家企业复方龙胆碳酸氢钠片中大黄游离蒽醌色谱图；

图4为7家企业复方龙胆碳酸氢钠片中大黄总蒽醌色谱图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例,基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

请参阅图1-4，本发明提供一种技术方案：

一种复方龙胆碳酸氢钠片中大黄蒽醌类UPLC测定，其具体步骤如下：

S1,对照品溶液制备取土大黄苷、大黄素、大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚六种对照品适量，加少量氯仿溶解后加甲醇稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液，作为对照品浓溶液；

S2,供试品溶液制备测定大黄总蒽醌样品制备：取本品20片，称定重量，研细，取约相当于大黄原生药100mg的量，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理30分钟，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液15ml，置圆底烧瓶中，挥去甲醇，加2.5mol/L的硫酸溶液10ml，再加三氯甲烷10ml，加热回流1小时，冷却，移至分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷提取2次，每次约8ml，合并三氯甲烷液，以无水硫酸钠1g脱水，三氯甲烷液移入蒸发皿中，置75℃水浴上挥去三氯甲烷，残渣加甲醇适量使溶解并移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜过滤，取续滤液；

S3,测定大黄游离蒽醌样品制备：取本品20片，称定重量，研细，取约相当于大黄原生药100mg的量，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理60分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，即得；

S4,UPLC法测定结果：将对照品溶液及供试品溶液按UPLC色谱条件进行分析，对照品色谱图及光谱图；

进一步的，所述S1中大黄素对照品为批号：110756-201512，纯度98.7％；大黄酸对照品为批号：110757-201607，纯度99.3％；大黄酚对照品为批号：110796-201621，纯度99.2％；芦荟大黄素对照品为批号：110795-201710，纯度98.3％；大黄素甲醚对照品为批号：110758-201616，纯度99.0％；土大黄苷对照品为批号：110794-201708。

进一步的，所述S4中UPLC色谱条件为Agilent EclipsePlus C18柱(3.0mmx150mm,1.8μm)；以乙腈为流动相A，0.1％磷酸溶液为流动相B，流速0.3mL/min-1，柱温30℃；二极管阵列检测器，选择检测波长：254nm和328nm；进样量5μL，记录时间20分钟。

进一步的，所述S1、S2、S3和S4中所需的材料分别包括：Waters AcQuity UPLC-DAD型超高效液相色谱仪，SartoriusBS224S型万分之一电子天平；Sartorius CP225D型十万分之一电子天平，KQ-500DE型数控超声仪，水浴锅，电热套，乙腈、甲醇均为色谱纯，水为纯化水，其它试剂均为分析纯。。

具体实施案例：

步骤1，材料及对照品的选取：

1.1)Waters AcQuity UPLC-DAD型超高效液相色谱仪，Sartorius BS224S型万分之一电子天平；Sartorius CP225D型十万分之一电子天平，KQ-500DE型数控超声仪，水浴锅，电热套；

1.2)大黄素对照品(批号：110756-201512，纯度98.7％)，大黄酸对照品(批号：110757-201607，纯度99.3％)，大黄酚对照品(批号：110796-201621，纯度99.2％)，芦荟大黄素对照品(批号：110795-201710，纯度98.3％)，大黄素甲醚对照品(批号：110758-201616，纯度99.0％)，土大黄苷对照品(批号：110794-201708，供检查用)，上述对照品均购自中国食品药品检定研究院；乙腈、甲醇均为色谱纯，水为纯化水，其它试剂均为分析纯；

步骤2，方法与结果：

2.1)对照品溶液制备取土大黄苷、大黄素、大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚六种对照品适量，加少量氯仿溶解后加甲醇稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液，作为对照品浓溶液；

2.2)供试品溶液制备测定大黄总蒽醌样品制备：取本品20片，称定重量，研细，取约相当于大黄原生药100mg的量，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理30分钟，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液15ml，置圆底烧瓶中，挥去甲醇，加2.5mol/L的硫酸溶液10ml，再加三氯甲烷10ml，加热回流1小时，冷却，移至分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷提取2次，每次约8ml，合并三氯甲烷液，以无水硫酸钠1g脱水，三氯甲烷液移入蒸发皿中，置75℃水浴上挥去三氯甲烷，残渣加甲醇适量使溶解并移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜过滤，取续滤液。测定大黄游离蒽醌样品制备：取本品20片，称定重量，研细，取约相当于大黄原生药100mg的量，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理60分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，即得；

2.3)UPLC色谱条件色谱柱：Agilent EclipsePlusC18柱(3.0mm x150mm,1.8μm)；以乙腈为流动相A，0.1％磷酸溶液为流动相B，流速0.3mL/min-

按下表1梯度洗脱表条件进行梯度洗脱，柱温30℃；二极管阵列检测器，选择检测波长：254nm和328nm进样量5μL，记录时间20分钟；

表1梯度洗脱表

步骤3，结果与分析：UPLC法测定结果将对照品溶液及供试品溶液按“2.3”UPLC色谱条件进行分析，对照品色谱图及光谱图，见图1～图2，①供试品中大黄游离蒽醌测定色谱图见图3，7家生产企业结果分析见表2；②供试品中大黄总蒽醌测定色谱图见图4，7家生产企业结果分析见表3；

其中A～G复方龙胆碳酸氢钠片样品分别来源于：A朝阳龙城(批号：20171008)B吉林鹿王(批号：170203)C福和华星(批号：171213)D吉林国文(批号：20161020)E吉林华侨(批号：20170301)F延边朝药(批号：20180301)G皇象铁力(批号：20170717)；

表2 7家企业复方龙胆碳酸氢钠片中大黄游离蒽醌结果比较

结果7家企业供试品游离蒽醌国文药业样品含量最高，朝阳龙城药业样品含量最低。

表3 7家企业复方龙胆碳酸氢钠片中大黄总蒽醌结果比较

结果7家企业供试品总蒽醌国文药业样品含量最高，朝阳龙城药业样品含量最低。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。