包含尿素和不可消化寡糖的营养组合物

摘要

本发明涉及包含尿素和不可消化寡糖的组合物的配方物，其用于改善刺激婴儿或幼儿的肠道菌群中双歧杆菌的生长。

说明书

技术领域

本发明涉及用于改善肠道菌群的婴儿营养组合物，特别是包含不可消化寡糖、蛋白质和非蛋白氮源的婴儿配方物。

背景技术

人体肠道具有复杂的微生物生态系统——肠道菌群，其已被认为是人类生理学的必不可少的部分。在成年人中，肠道菌群被认为是稳定的生态系统，因此，生命早期的微生物定植过程——其与胃肠道本身的成熟密切相关——可被认为是健康发育的基本步骤。生命早期的营养是影响肠道菌群群落发育的主要因素，并且母乳喂养的婴儿具有由双歧杆菌属种主导的最佳肠道菌群。因此，母乳喂养已与许多健康益处相关，所述健康益处涉及例如感染、炎症、过敏、湿疹、腹泻、便秘等。

在某些情况下，由于医学原因或由于选择不进行母乳喂养，母乳喂养是不充分的或不成功的。对于这种情况，已经开发了婴儿配方物和后续配方物。现今通常使用市售婴儿配方物来提供生命早期的补充营养或唯一营养来源。这些配方物包含一系列营养物以满足成长中的婴儿的营养需求，并且通常包括脂肪、碳水化合物、蛋白质、维生素、矿物质和有助于婴儿最佳生长和发育的其他营养物。市售婴儿配方物被设计成尽可能接近地模仿人乳的组成，并且至少同样重要地尽可能好地模仿人乳的功能。

为了积极地影响肠道菌群，已经开发出这样的婴儿配方物，其包含益生菌(因此是双歧杆菌本身)或益生元，尤其是促进肠道菌群生长的不可消化寡糖，或包括两者，例如WO2005/110121中所公开的。

还提出了蛋白质和氨基酸补充剂以形成健康的菌群生态系统，例如在EP 1638418中所公开的。

婴儿配方物通常基于牛乳。与人乳相比，牛乳包含更多的蛋白质和更少的非蛋白氮(NPN)(例如尿素)。

为了解决这种差异，GB 993,719公开了一种制备婴儿乳的特定方法，其包括添加尿素以使其更接近于人乳。

DD 208 542涉及通过稀释基于牛乳的标准配方物以降低蛋白质含量并补充乳糖和尿素，从而提供基于牛乳的更类似母乳的双歧营养品。

WO 2013/153071是最近的文献，其旨在通过着重于保持低的蛋白质含量来更接近地模拟母乳的生长功能，而且还主张NPN水平应较低。

WO 2015/105616公开了儿科营养组合物，其包含蛋白质源，所述蛋白质源包含完整的乳蛋白和部分水解的乳蛋白，其中所述组合物的总氮含量的约5％至约25％为非蛋白氮。此处，NPN的关注点是小肽和氨基酸，而不是尿素。

发明内容

从一项临床试验中发现，与配方物喂养婴儿的菌群相比，人乳喂养婴儿的菌群中脲酶基因和双歧杆菌均较高，而且人乳喂养婴儿的菌群中的脲酶基因的含量与双歧杆菌的水平密切相关。通过分析，还发现目前市售的具有不可消化寡糖GOS/FOS的配方物的尿素浓度远低于人乳。随后，设计并进行了实验，观察到尿素和不可消化寡糖的组合物协同刺激了双歧杆菌的生长。对于脲酶阳性的双歧杆菌而言，降解时释放铵的尿素是氮的优良来源。此外，尿素除了作为氮源外，还是重要的CO

具体实施方式

因此，本发明涉及营养组合物，其包含可消化碳水化合物、蛋白质、脂质、尿素和不可消化寡糖，其中尿素的存在量为：

a.至少1.13重量％，优选1.13至5.6重量％，基于总蛋白计，

b.至少0.11重量％，优选0.11至0.55重量％，基于组合物的干重计，和/或

c.至少15mg，优选15至75mg/100ml，

以及不可消化寡糖的存在量为：

d.至少1.5重量％，优选1.5至15重量％，基于组合物的干重计，和/或

e.至少0.2g，优选0.2至2g/100ml。

蛋白质含量

本发明的营养组合物包含蛋白质。在本发明的上下文中，蛋白质定义为蛋白质、肽和游离蛋白源氨基酸的总和。本发明的蛋白质也可以称为蛋白质等同物。蛋白源氨基酸是20种不同的可作为真核蛋白质和肽的一部分的天然氨基酸。总蛋白水平由众所周知的克耶达(Kjeldahl)氮分析并乘以系数6.25获得。这给出了总蛋白水平，有时也称为粗蛋白水平。因此，总蛋白是本文定义的蛋白质等同物加上非蛋白氮(NPN)的总和。测定蛋白质和肽以及游离氨基酸的方法是本领域已知的。例如合适的方法是首先沉淀蛋白质和肽，然后进行常规蛋白质测定，并且可以通过用芴甲基-氯甲酸酯进行柱前衍生化的HPLC和UV以及荧光检测在未沉淀的级分中测定游离氨基酸。

克耶达换算系数可因氮源而变化。就本发明的目的而言，通过使用克耶达换算系数6.25来计算总蛋白水平。

本发明的营养组合物中的总蛋白优选提供6.4％至15％的总热量。优选地，营养组合物包含的总蛋白提供7.2％至11％的总热量。更优选地，本发明的营养组合物包含1.6至3.5g总蛋白/100kcal，更优选1.8至2.5g/100kcal，甚至更优选1.8至2.4g/100kcal，甚至更优选1.8至2.1g/100kcal，最优选1.85至2.0g总蛋白/100kcal。优选地，组合物包含2.1g或更少的总蛋白/100kcal。低的总蛋白浓度有利地更接近人乳，因为基于总热量计，人乳比牛乳包含更少量的蛋白质。基于干重计，本发明的营养组合物优选包含7.8至17重量％的总蛋白，更优选8.7至12.2重量％，甚至更优选9.2至11.7重量％的总蛋白，基于干重计。基于即饮型液体产品计，营养组合物优选包含1.1至2.4g总蛋白/100ml，更优选1.2至1.7g/100ml，甚至更优选1.3至1.6g总蛋白/100ml。

本发明的营养组合物中的蛋白质等同物优选提供6至14.5％的总热量。优选地，营养组合物包含的蛋白质等同物提供6.8至10％的总热量。更优选地，本发明的营养组合物包含1.5至3.45g蛋白质等同物/100kcal，更优选1.7至2.5g/100kcal，甚至更优选1.8至2.4g/100kcal，甚至更优选1.8至2.0g蛋白质等同物/100kcal。基于干重计，本发明的营养组合物优选包含7.3至16.5重量％的蛋白质等同物，更优选8.3至12.1重量％，甚至更优选9.0至11.6重量％的蛋白质等同物，基于干重计。基于即饮型液体产品计，营养组合物优选包含1.0至2.35g蛋白质等同物/100ml，更优选1.1至1.65g，甚至更优选1.25至1.6g蛋白质等同物/100ml。

当提及的量为100ml时，这涉及包装的即饮型液体产品，以及还涉及根据说明书由粉末或浓缩物用水复原后的即饮型产品。

应以这样的方式选择蛋白质源，以满足必需氨基酸含量的最低需求，并确保令人满意的生长。因此，优选基于牛乳蛋白的蛋白质源，例如乳清、酪蛋白及其混合物，以及基于大豆、马铃薯或豌豆的蛋白。来自山羊乳或绵羊乳的蛋白质也适于提供最低需求的必需氨基酸含量，从而确保令人满意的生长。因此，优选基于牛乳蛋白、山羊乳蛋白或绵羊乳蛋白的蛋白质源，例如乳清、酪蛋白及其混合物。在使用乳清蛋白的情况下，蛋白质源优选基于酸乳清或甜乳清、乳清蛋白分离物或其混合物。优选地，营养组合物包含基于干重计至少3重量％的酪蛋白。优选酪蛋白是完整的和/或未水解的。优选地，营养组合物包含基于总蛋白计至少90重量％的牛乳蛋白。在一个实施方案中，优选地，营养组合物包含基于总蛋白计至少90重量％的绵羊乳蛋白。在一个实施方案中，优选地，营养组合物包含基于总蛋白计至少90重量％的山羊乳蛋白。

本发明的非蛋白氮(NPN)是指蛋白质等同物以外的其他成分，并且包含氮，例如尿素、核苷酸、多胺、某些磷脂、氨、铵盐、非蛋白源氨基酸等。人乳中最丰富的NPN为尿素。在人乳中，尿素的含量可为约总氮的10-13％，这使得其浓度约为15-35mg尿素/100ml，平均约为30-35mg/100ml。已证明婴儿可以将母乳中的尿素掺入血浆蛋白中。此外，牛乳中的尿素含量低于人乳中的尿素含量。测定NPN和尿素的方法是本领域已知的。

本发明的营养组合物包含尿素。尿素也称为碳酰胺，CO(NH

根据本发明，在一个实施方案中，营养组合物包含基于总蛋白计至少1.13重量％的尿素，优选基于总蛋白计1.13至5.6重量％的尿素，更优选1.45至3.7重量％，更优选基于总蛋白计1.5至2.6重量％的尿素。在本发明的一个替代实施方案中，营养组合物包含基于组合物的干重计至少0.11重量％的尿素，优选0.11至0.55重量％的尿素，更优选基于组合物的干重计0.15至0.37重量％的尿素。在本发明的另一个替代实施方案中，营养组合物包含至少15mg/100ml，更优选15至75mg尿素/100ml。优选地，根据本发明，营养组合物包含15至75mg尿素/100ml。更优选，尿素的量为20至60mg/100ml，甚至更优选20至50mg/100ml，最优选20至35mg尿素/100ml。优选地，尿素氮的量为3.2至16％的总氮。优选地，尿素氮的量为20至100重量％、更优选20至80重量％的总非蛋白氮。

本发明的营养组合物包含不可消化寡糖。不可消化寡糖的存在量基于组合物的干重计为至少1.5重量％，更优选基于组合物的干重计为1.5至15重量％，更优选基于组合物的干重计为1.8至11重量％。另外地或替代地，不可消化寡糖的存在量为至少0.2g/100ml，优选0.2至2g/100ml，更优选0.25至1.5g/100ml。

本发明中使用的术语“不可消化寡糖”是指通过存在于人的上消化道(例如小肠和胃)中的酸或消化酶的作用而在肠中不被消化，但优选通过人肠道菌群发酵的寡糖。例如，蔗糖、乳糖、麦芽糖和麦芽糖糊精被认为是可消化的。在一个优选的实施方案中，不可消化寡糖能够刺激脲酶阳性双歧杆菌的生长。在一个优选的实施方案中，不可消化寡糖刺激脲酶阳性双歧杆菌的生长。在一个优选的实施方案中，不可消化寡糖能够作为脲酶阳性双歧杆菌生长的碳源。在一个优选的实施方案中，不可消化寡糖能够作为脲酶阳性双歧杆菌生长的碳源。不可消化寡糖对肠道菌群有刺激作用，尤其观察到尿素和不可消化寡糖的组合物协同刺激双歧杆菌的生长。尿素和不可消化寡糖的组合物的存在改善了菌群，使其与母乳喂养婴儿的菌群更类似。因此，尿素和不可消化的寡糖的组合物的存在协同且有利地使得总体菌群与主要或纯母乳喂养的婴儿的菌群更类似。

优选地，本发明的不可消化寡糖是可溶的。当提及多糖、纤维或寡糖时，本文所用的术语“可溶的”意指根据L.Prosky等人,J.Assoc.Off.Anal.Chem.71,1017-1023(1988)记载的方法，物质至少是可溶的。

优选地，本发明的营养组合物包含聚合度(DP)为2至250、更优选2至60的不可消化寡糖。不可消化的寡糖优选选自低聚果糖(fructo-oligosaccharide)、半乳寡糖(galacto-oligosaccharide)、阿拉伯糖寡糖(arabino-oligosaccharide)、阿拉伯半乳寡糖(arabinogalacto-oligosaccharide)、葡糖寡糖(gluco-oligosaccharide)、壳寡糖(chito-oligosaccharide)、葡甘露寡糖(glucomanno-oligosaccharide)、半乳甘露寡糖(galactomanno-oligosaccharide)、甘露聚糖(mannan-oligosaccharide)、岩藻寡糖(fuco-oligosaccharide)、唾液酸寡糖(sialyl-oligosaccharide)和N-乙酰氨基葡糖寡糖(Nacetylglucosamine oligosaccharide)。低聚果糖包括菊粉，半乳寡糖包括反式半乳寡糖或β-半乳寡糖。岩藻寡糖包括2′-岩藻糖基乳糖(2′FL)、3-岩藻糖基乳糖(3FL)和3,2′-二岩藻糖基乳糖(乳糖二岩藻四糖；LDFT)。唾液酸寡糖包括3-唾液乳糖(3′SL)和6-唾液乳糖(6’SL)。N-乙酰氨基葡糖寡糖包括乳糖-N-四糖(LNT)和乳糖-N-新四糖(LNnT)。

这种不可消化的寡糖具有许多生化特性，并具有类似的功能优势，包括改善菌群。然而，应理解，一些不可消化寡糖以及优选地某些混合物具有甚至进一步改善的效果。因此，更优选地，不可消化寡糖选自低聚果糖和半乳寡糖及其混合物。更优选地，不可消化寡糖选自低聚果糖、半乳寡糖及其混合物。甚至更优选地，不可消化寡糖选自菊粉和/或β-半乳寡糖，最优选不可消化寡糖包含β-半乳寡糖。

优选地，不可消化寡糖包含具有β(1,4)、β(1,3)和/或β(1,6)糖苷键的半乳寡糖，优选这种具有β(1,4)、β(1,3)和/或β(1,6)糖苷键的半乳寡糖包含末端葡萄糖。反式半乳寡糖例如可以商品名

优选地，本发明的营养组合物包含半乳寡糖和低聚果糖的混合物。在其他情况下，低聚果糖可以具有例如果糖多聚体(fructopolysaccharide)、低聚果糖(oligofructose)、多聚果糖(polyfructose)、聚果聚糖(polyfructan)、菊粉、果聚糖(levan)和聚果糖(fructan)的名称，并且可指包含β-连接的果糖单元的寡糖，其优选通过β(2,1)和/或β(2,6)糖苷键连接，并且优选的DP为2至200。优选地，低聚果糖含有末端β(2,1)糖苷键连接的葡萄糖。优选地，低聚果糖含有末端β(2,1)糖苷键连接的葡萄糖。优选地，低聚果糖含有至少7个β-连接的果糖单元。在另一个优选的实施方案中，本发明的营养组合物包含半乳寡糖和菊粉的混合物。菊粉是一种低聚果糖，其中至少75％的糖苷键为β(2,1)键。通常，菊粉的平均链长为8至60个单糖单元。适用于本发明的营养组合物的低聚果糖可以商品名

优选地，本发明的营养组合物包含短链低聚果糖和短链半乳寡糖的混合物。优选地，短链低聚果糖和短链半乳寡糖的混合物以1/99至99/1、更优选1/19至19/1、甚至更优选1/10至19/1、更优选1/5至15/1、更优选1/1至10/1的重量比存在。优选的是短链低聚果糖和平均DP低于10、优选低于6的半乳寡糖的混合物。

优选地，本发明的营养组合物包含短链低聚果糖和长链低聚果糖的混合物。优选地，短链低聚果糖和长链低聚果糖的混合物以1/99至99/1、更优选1/19至19/1、甚至更优选1/10至19/1、更优选1/5至15/1、更优选1/1至10/1的重量比存在。优选的是平均DP低于10、优选低于6的短链低聚果糖和平均DP高于7、优选高于11、甚至更优选高于20的低聚果糖的混合物。

在一个实施方案中，优选本发明的营养组合物包含2’-岩藻糖基乳糖。优选地，本发明的营养组合物包含2'-岩藻糖基乳糖和半乳寡糖的混合物。优选地，2'-岩藻糖基乳糖和半乳寡糖以1/99至99/1、更优选1/19至19/1、甚至更优选1/10至10/1的重量比存在。2'-岩藻糖基乳糖的存在进一步改善了菌群，并且当与半乳寡糖混合存在时，观察到对菌群组成和活性的进一步改善的效果。

不可消化寡糖对刺激菌群、特别是选择性地刺激双歧杆菌的生长具有改善的效果，并且优选地，不可消化寡糖选自β-半乳寡糖和低聚果糖中的一种或多种，其对于刺激菌群、特别是刺激双歧杆菌的生长具有最明显的改善效果，并且特别是在与尿素结合时，这些不可消化寡糖对于刺激菌群、特别是刺激双歧杆菌的生长具有协同效果。

不可消化寡糖对刺激菌群、特别是选择性刺激双歧杆菌的生长具有改善的效果，并且优选地，不可消化寡糖选自β-半乳寡糖、低聚果糖和2'-岩藻糖基乳糖中的一种或多种，或其混合物，其对于刺激菌群、特别是刺激双歧杆菌的生长具有最明显的改善效果，并且特别是在与尿素结合时，这些不可消化的寡糖对刺激菌群、特别是刺激双歧杆菌的生长具有协同效果。

本发明的营养组合物包含可消化碳水化合物。可消化碳水化合物优选提供营养组合物的30-80％的总热量。优选地，可消化碳水化合物提供40％至60％的总热量。基于热量计，营养组合物优选包含5至20g可消化碳水化合物/100kcal，更优选7.5至15g。当为液体形式时，例如作为即食型液体，营养组合物优选包含3.0至30g的可消化碳水化合物/100ml，更优选6.0至20g/100ml，甚至更优选7.0至10.0g/100ml。基于干重计，营养组合物优选包含20至80重量％、更优选40至65重量％的可消化碳水化合物。

优选的可消化碳水化合物源为乳糖、葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、麦芽糖、淀粉和麦芽糖糊精。乳糖是人乳中存在的主要可消化碳水化合物。乳糖有利地具有低血糖指数。营养组合物优选包含乳糖。营养组合物优选包含可消化碳水化合物，其中至少35重量％、更优选至少50重量％、更优选至少75重量％、甚至更优选至少90重量％、最优选至少95重量％的可消化碳水化合物为乳糖。基于干重计，营养组合物优选包含至少25重量％的乳糖，优选至少40重量％。

本发明的营养组合物包含脂质。本发明营养组合物的脂质优选为3至7g/100kcal的营养组合物，优选脂质为4至6g/100kcal。当为液体形式时，例如即食型液体，营养组合物优选包含2.1至6.5g脂质/100ml，更优选3.0至4.0g/100ml。基于干重计，本发明的营养组合物优选包含12.5至40重量％的脂质，更优选19至30重量％。优选地，脂质包含必须脂肪酸α-亚麻酸(ALA)和亚油酸(LA)。脂质可以以下形式提供：游离脂肪酸、甘油三酯、甘油二酯、甘油单酯、磷脂或上述一种以上的混合物。优选地，本发明的营养组合物包含至少一种、优选至少两种选自以下的脂质源：油菜籽油(例如菜籽油、低芥酸菜籽油和芥花油)、高油酸向日葵油、高油酸红花油、橄榄油、海洋油、微生物油、椰子油、棕榈仁油和乳脂。

本发明的营养组合物优选包含长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)。LC-PUFA为这样的脂肪酸，其中酰基链长为20至24个碳原子(优选20或22个碳原子)且其中酰基链包含至少两个位于所述酰基链中的碳原子之间的不饱和键。更优选地，本发明的组合物包含至少一个选自以下的LC-PUFA：二十碳五烯酸(EPA,20:5n3)、二十二碳六烯酸(DHA,22:6n3)、花生四烯酸(ARA,20:4n6)和二十二碳五烯酸(DPA,22:5n3)，优选DHA、EPA和/或ARA。这种LC-PUFA对改善肠道健康具有进一步的有益效果。

在本发明的营养组合物中，LC-PUFA的优选含量不超过总脂肪酸的15重量％，优选不超过10重量％，甚至更优选不超过5重量％。优选地，本发明的组合物包含总脂肪酸的至少0.2重量％、优选至少0.25重量％、更优选至少0.35重量％、甚至更优选至少0.5重量％的LC-PUFA，更优选DHA。本发明的组合物优选包含ARA和DHA，其中ARA/DHA的重量比优选大于0.25，优选大于0.5，更优选0.75-2，甚至更优选0.75-1.25。重量比优选低于20，更优选为0.5至5，甚至更优选低于2。DHA的含量优选高于0.2重量％，更优选高于0.3重量％，更优选至少0.35重量％，甚至更优选0.35至0.6重量％，基于总脂肪酸计。

在一个优选的实施方案中，本发明的营养组合物包含产乳酸菌。产乳酸菌通常是益生菌。术语益生菌在本领域中是已知的，并且是指当被宿主摄取或给予宿主时对该宿主具有有益效果的微生物，优选细菌。优选地，本发明的营养组合物包含乳酸杆菌属或双歧杆菌属或两者的产乳酸菌，更优选双歧杆菌。在一个优选的实施方案中，乳酸菌为选自以下的一种或多种：鼠李糖乳酸杆菌(L.rhamnosus)、干酪乳酸杆菌(L.casei)、副干酪乳杆菌(L.paracasei)、瑞士乳杆菌(L.helveticus)、德氏乳酸杆菌(L.delbrueckii)、罗伊氏乳杆菌(L.reuteri)、短乳杆菌(L.brevis)、卷曲乳杆菌(L.crispatus)、清酒乳杆菌(L.sakei)、詹氏乳杆菌(L.jensenii)、旧金山乳杆菌(L.sanfransiscensis)、食果糖乳杆菌(L.fructivorans)、高加索酸奶乳杆菌(L.kefiri)、弯曲乳杆菌(L.curvatus)、类植物乳杆菌(L.paraplantarum)、高加索酸奶粒乳杆菌(L.kefirgranum)、类高加索酸奶粒乳杆菌(L.parakefir)、发酵乳杆菌(L.fermentum)、植物乳杆菌(L.plantarum)、嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)、约氏乳杆菌(L.johnsonii)、格氏乳杆菌(L.gasseri)、木糖乳杆菌(L.xylosus)、唾液乳杆菌(L.salivarius)等。优选的物种为鼠李糖乳酸杆菌(L.rhamnosus)、干酪乳酸杆菌(L.casei)、副干酪乳杆菌(L.paracasei)、罗伊氏乳杆菌(L.reuteri)、卷曲乳杆菌(L.crispatus)、发酵乳杆菌(L.fermentum)、植物乳杆菌(L.plantarum)、嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)、约氏乳杆菌(L.johnsonii)、格氏乳杆菌(L.gasseri)和唾液乳杆菌(L.salivarius)，更优选选自以下的一种或多种：植物乳杆菌(L.plantarum)、干酪乳酸杆菌(L.casei)和鼠李糖乳酸杆菌(L.rhamnosus)，更优选益生菌包含属于物种干酪乳酸杆菌(L.casei)的菌株。在一个优选的实施方案中，双歧杆菌为选自以下的一种或多种：长双歧杆菌(B.longum)、短双岐杆菌(B.breve)、动物双岐杆菌(B.animalis)、婴儿长双歧杆菌(B.longum spp infantis)、两歧双歧杆菌(B.bifidum)、青春双歧杆菌(B.adolescentis)、假长双岐杆菌(B.pseudolongum)、链状双歧杆菌(B.catenulatum)、假链状双歧杆菌(B.pseudocatenulatum)、角双岐杆菌(B.angulatum)。

在一个实施方案中，本发明的具有尿素和不可消化寡糖的营养组合物优选包含脲酶阳性双歧杆菌，更优选本发明的营养组合物包含婴儿长双歧杆菌。

在一个实施方案中，本发明的营养组合物优选包含脲酶阴性双歧杆菌，更优选本发明的营养组合物包含短双岐杆菌。由于尿素和不可消化寡糖的组合物会直接刺激脲酶阳性双歧杆菌的生长，因此添加脲酶阴性细菌是有利的。这将有利地增加双歧杆菌的生物多样性。

在一个实施方案中，本发明的营养组合物包含脲酶阳性和脲酶阴性双歧杆菌，优选短双岐杆菌作为脲酶阴性细菌，因为该物种在人乳喂养的婴儿的菌群中是非常普遍的，以及婴儿长双歧杆菌作为脲酶阳性双歧杆菌，因为该物种也存在于人乳喂养的婴儿的菌群中，并且在使用不可消化的碳水化合物作为碳源和能量源时具有很高的通用性。短双岐杆菌和婴儿长双歧杆菌菌株为市售可得的，例如短双岐杆菌Bb-03(Rhodia/Danisco)、短双岐杆菌M-16V(Morinaga)、短双岐杆菌R0070(Institute Rosell,Lallemand)、短双歧杆菌BR03(Probiotical)、短双岐杆菌BR92(Cell Biotech)、DSM 20091、LMG11613、YIT4065、FERM BP-6223和CNCM I-2219。婴儿长双歧杆菌菌株为市售可得的，例如Bi-26(DuPont)、M-63(Morinaga)、R-0033(Lallemand)。或者，可从例如ATCC或DSM的培养物保藏所中获得短双歧杆菌或婴儿长双歧杆菌菌株，或可从健康的母乳喂养婴儿的粪便中分离。脲酶阳性双歧杆菌将从尿素中释放CO

本发明的营养组合物优选包含10

本发明的营养组合物优选用于给予婴儿和幼儿。本发明的营养组合物不是人乳。本发明的营养组合物也不是天然牛乳或来自另一种哺乳动物的天然乳。术语“婴儿配方物”或“后续配方物”或“幼儿配方物”或“成长乳”表示它涉及一种人工制备的组合物，或换言之，它是合成的。因此，在一个实施方案中，所给予的营养组合物是人工婴儿配方物或人工后续配方物或人工幼儿配方物或人工成长乳或合成婴儿配方物或合成后续配方物或合成幼儿配方物或合成成长乳。

在本文中，婴儿配方物是指人工制备的营养组合物，旨在用于0至约4至6月龄的婴儿，并且旨在作为人乳的替代物。通常，婴儿配方物适合用作唯一的营养来源。这样的配方物也称为1段配方物(starter formula)。4-6月龄至12月龄的婴儿配方物旨在用作开始断奶食用其他食物的婴儿的喂养补充剂。这样的配方物也称为后续配方物。婴儿配方物和后续配方物均遵循例如欧盟委员会指令2006/141/EC的严格规定。在本文中，幼儿配方物或成长乳是指旨在用于12至36个月婴儿的人工制成的营养组合物，其旨在作为幼儿的喂养补充剂。

本发明的营养组合物优选是婴儿配方物或后续配方物或幼儿配方物，更优选营养组合物是婴儿配方物或后续配方物，甚至更优选婴儿配方物。

营养组合物优选为婴儿配方物或后续配方物，并且优选包含3至7g脂质/100kcal，优选4至6g脂质/100kcal，更优选4.5至5.5g脂质/100kcal，优选包含1.6至3.5g总蛋白/100kcal，优选1.8至2.4g蛋白质/100kcal，更优选1.85至2.0g蛋白质/100kcal，更优选1.8至2.0g蛋白质/100kcal，优选包含5至20g可消化碳水化合物/100kcal，优选7.5至15g可消化碳水化合物/100kcal。

优选地，营养组合物为婴儿配方物或后续配方物，并且作为即饮型时，具有60kcal至75kcal/100ml的能量密度，更优选60至70kcal/100ml。该密度确保了水合和热量摄入之间的最佳平衡。

在一个实施方案中，营养组合物为粉末。适当地，营养组合物为粉末形式，其可以用水或其他食品级水性液体复原形成即饮型液体，或者为液态浓缩物形式，其应用水稀释成即饮型液体。

根据本发明，在喂食包含尿素和不可消化的寡糖的配方物时，观察到对脲酶阳性双歧杆菌的生长的刺激和/或协同效果，并且通过释放氮源和CO

因此，在一个实施方案中，本发明的营养组合物用于改善婴儿或幼儿、优选婴儿的肠道菌群，优选通过促进双歧杆菌的生长或通过增加双歧杆菌的水平来改善婴儿或幼儿的肠道菌群。

本发明也可表述为一种改善婴儿或幼儿、优选婴儿的肠道菌群，优选通过促进双歧杆菌的生长或通过增加双歧杆菌的水平来改善婴儿或幼儿的肠道菌群的方法，该方法包括向所述婴儿或幼儿给予本发明的营养组合物。

在一个实施方案中，改善婴儿或幼儿的肠道菌群被认为是非治疗性的。因此，在一个实施方案中，本发明涉及一种改善婴儿或幼儿、优选婴儿的肠道菌群，优选通过促进双歧杆菌的生长或通过增加双歧杆菌的水平来改善婴儿或幼儿的肠道菌群的非治疗性方法，所述非治疗性方法包括向所述婴儿或幼儿给予本发明的营养组合物。同样，本发明还可表述为本发明的营养组合物用于改善婴儿或幼儿、优选婴儿的肠道菌群，优选通过促进双歧杆菌的生长或通过增加双歧杆菌的水平来改善婴儿或幼儿的肠道菌群的用途。

在一个实施方案中，改善婴儿或幼儿的肠道菌群或通过促进双歧杆菌的生长来改善婴儿或幼儿的肠道菌群可被认为是治疗性的，特别是在婴儿或幼儿需要具有改善的肠道菌群的情况下，例如具有肠道菌群受损的风险或肠道菌群受损的婴儿。因此，在一个实施方案中，本发明的营养组合物用于有肠道菌群受损的风险或肠道菌群受损的婴儿。这样的婴儿例如是通过剖腹产出生的婴儿、患有过敏的婴儿或具有过敏风险的婴儿、早产婴儿、接受抗生素的婴儿、患有或曾经患有感染、特别是肠道感染的婴儿。因此，在一个实施方案中，本发明的营养组合物用于改善以下婴儿中的肠道菌群：通过剖腹产出生的婴儿、患有过敏的婴儿、具有过敏风险的婴儿、早产婴儿、接受抗生素的婴儿，患有或曾经患有感染、特别是肠道感染的婴儿。

本发明还可表述为一种改善具有肠道菌群受损的风险的婴儿或肠道菌群受损的婴儿的肠道菌群的方法，所述方法包括向所述婴儿给予本发明的营养组合物。本发明还可表述为一种改善以下婴儿中的肠道菌群的方法：通过剖腹产出生的婴儿、患有过敏的婴儿、具有过敏风险的婴儿、早产婴儿、接受抗生素的婴儿、患有或曾经患有感染、特别是肠道感染的婴儿，所述方法包括向所述婴儿给予本发明的营养组合物。

在一个实施方案中，本发明的营养组合物用于预防或治疗婴儿或幼儿、优选婴儿的肠道菌群失调。

本发明还可表述为一种预防或治疗婴儿或幼儿、优选婴儿的肠道菌群失调的方法，该方法包括向所述婴儿或幼儿给予本发明的营养组合物。

在一个实施方案中，本发明的营养组合物用于预防和/或治疗婴儿或幼儿、优选婴儿中与肠道菌群受损有关的病症。在一个实施方案中，本发明的营养组合物用于预防和/或治疗婴儿或幼儿、优选婴儿中的以下病症：腹泻、便秘、肠道炎症、肠道感染和过敏症。

本发明还可表述为一种预防和/或治疗婴儿或幼儿、优选婴儿中的与肠道菌群受损有关的病症的方法，所述方法包括向所述婴儿或幼儿给予本发明的营养组合物。在一个实施方案中，本发明涉及一种预防和/或治疗婴儿或幼儿、优选婴儿中的以下病症：腹泻、便秘、肠道炎症、肠道感染和过敏症，所述方法包括向所述婴儿或幼儿给予本发明的营养组合物。

实施例

进行一项双盲对照和随机研究，研究在健康足月出生的婴儿的生命的第一年期间，补充有不可消化寡糖的混合物的部分水解的配方物喂养(婴儿配方物和后续配方物，取决于婴儿的年龄)的效果，并与对照配方物进行比较。在该试验中，还存在母乳喂养的参考组。在这项研究中，采集并分析1月龄婴儿的粪便样品。

使用具有简并的婴儿双歧杆菌UreC引物和双歧杆菌16S引物的qPCR测定脲酶的量。收集了64个样品，其中25个来自纯母乳喂养的婴儿，13个来自纯配方物喂养的婴儿。其余部分为部分母乳喂养的婴儿(15个主要为母乳喂养，11个主要为配方物喂养)。

使用Student's T检验，纯母乳喂养婴儿的粪便DNA中脲酶基因的丰度(p＝0.0285)明显高于纯配方物喂养的婴儿。

使用Student's T检验，使用双歧杆菌16S引物，可以推断出，纯母乳喂养婴儿的粪便中双歧杆菌的统计学丰度显著高于纯配方物喂养的婴儿(p＝0.0008)。

基于双歧杆菌总数的脲酶基因的比例在这两组之间没有差异(p＝0.9，Student'sT检验)。这表明脲酶基因和双歧杆菌的量之间存在相关性。这表明尿素在增加双歧杆菌水平中起作用。

在制备配方物时，婴儿配方物制造商使用通过电渗析、超滤或离子交换色谱法制备的酪蛋白和乳清蛋白源，而不是全脂牛乳。因此，用于制备(改性)牛乳基配方物的蛋白质源中的氮成分可能会大不相同，并且NPN(尤其是尿素)的比例也会显著不同，并且可预期低于天然牛乳，更不用说人乳。

使用购自muva Kempten，Germany的MUVA-MET 128Boehringer/R-Biopharm Kit10 542946035分析市售婴儿配方物的尿素含量。从包装读取蛋白质水平，并通过克耶达(换算系数6.25)进行测定。AR1配方物不包含GOS/lcFOS。其他配方物包含重量比为9:1、含量为0.8g/100ml的scGOS/lcFOS。

结果示于表1。

从表1中可以得出，配方物中的尿素含量很低，并且低于人乳中通常发现的含量。与蛋白质源无关，以及与乳清蛋白/酪蛋白(W/C)的比例无关，基于牛乳蛋白的各种配方物都属于这种情况。

使用以下菌株：短双歧杆菌DSM20213，其是短双歧杆菌的模式菌株并且是脲酶阴性的。使用预测为脲酶阳性的长双歧杆菌婴儿亚种菌株的混合物，以增加具有脲酶活性的机会。为了支持本发明，使用哪种特定菌株并不重要，只要它们具有脲酶活性。所用的菌株为婴儿长双歧杆菌DSM20088(模式菌株)、婴儿双歧杆菌M-63(Morinaga)、长双歧杆菌婴儿亚种ATCC 17930、从奶瓶喂养婴儿的粪便中分离的长双歧杆菌婴儿亚种DN_163_0041、婴儿双歧杆菌DN_163_0046和婴儿长双歧杆菌R-0033(Lallemand)以及双歧双歧杆菌ATCC29521(模式菌株)的混合物。确实证实了三种公众可获得的单一菌株(婴儿长双歧杆菌M-63、长双歧杆菌婴儿亚种ATCC 17930和婴儿长双歧杆菌R-0033)单独在尿素和碳源的存在下且没有CO

为了证明尿素作为碳源和氮源的利用率，使用了具有以下最终组成的TOS-丙酸琼脂基发酵液：

1g/l酵母提取物、0.75g/l胰蛋白胨、3g/l KH

对发酵罐进行灭菌，其包含80ml的去离子水和20ml 20重量％的重量/重量比为9:1的scGOS/lcFOS溶液。使用VivinalGOS(DOMO,Friesland Campina)作为scGOS源，并使用RaftilinHP(Orafti)作为lcFOS源。灭菌后，添加100ml灭菌的2倍浓缩的BASE培养基。scGOS/lcFOS的最终浓度为2重量％，基于体积计，并将其作为碳源。加入胰蛋白胨(3.0g/l)作为氮源，或者0、10、50或100mM尿素(最终浓度)，对应于0、0.6g/l、3g/l和6g/l。在无氧气体气氛(90％N

在OD600为0.05下，用短双歧杆菌的预培养物接种主发酵罐。对于长双歧杆菌婴儿亚种和双歧杆菌混合物，首先将各个预培养物以基于OD600的等量混合，以及随后以0.05的起始OD600接种。通过磁力搅拌棒以360rpm搅拌培养基。通过添加5M NaOH将pH控制在6.2。所有生长(预培养物、主发酵罐、琼脂板)实验均在37℃下进行。通过离线OD600测量实时监测生长。在适当的时候在测量之前将样品稀释。

结果示于表2。

在不存在CO

进行第二个实验。此处，使用不同浓度的尿素作为氮(和CO

结果示于表3。

可以推断出，在尿素和CO

在不存在CO

由于有限存在的碳源和能量源，没有GOS/FOS和乳糖的对照未显示出生长，并且所有细菌菌株均是这种情况(数据未显示)。在对照实验中，脲酶阴性细菌在CO

结果表明，只有在作为碳源的不可消化寡糖和同时作为氮源和CO

这也表明了交叉喂食的效果，这种效果超出了仅对脲酶阳性菌株的效果，其中脲酶阳性双歧杆菌的存在通过产生生长因子CO

在该实验中，使用脲酶阳性菌株长双歧杆菌婴儿亚种ATCC17930。

使用与实施例3中描述的第二个实验中相同的生长培养基和实验设置，不同之处在于，使用2’-岩藻糖基乳糖(Jennewein Biotechnologie GmbH)替代scGOS/lcFOS作为碳源和能量源。作为氮源，添加胰蛋白胨(3.0g/l)，或无尿素或10mM尿素(最终浓度)，对应于0或0.6g/l尿素。

生长实验的结果示于表4。

在没有CO

婴儿配方物每100ml包含(用90ml水复原13.6克粉末)：

-66kcal

-1.345g总蛋白(基于总N*6.25计)，重量比为6/4的乳清蛋白/酪蛋白，并包括25mg尿素

-6.9g乳糖

-3.36g脂肪(植物油、鱼油的混合物，包含LA、ALA、DHA和ARA)

-0.8g不可消化寡糖(scGOS/lcFOS，比例为9:1)

-矿物质、微量元素、维生素和本领域已知的其他微量营养物，并符合婴儿配方物的国际准则；其他含有NPN的营养物为2.2mg核苷酸、1.6mg肉碱、12mg胆碱和5.3mg牛磺酸。