基于CRISPR/Cas9构建Fzd6-Q152E定点突变小鼠模型的方法及应用

摘要

本发明公开了基于CRISPR/Cas9构建Fzd6‑Q152E定点突变小鼠模型的方法及应用，通过比对发现不同物种中rs61753730所在的位置有一定的保守性，因此，在小鼠中靶向rs61753730所在的位置，即Q152E，设计并合成sgRNA、对应的引物以及Donor序列，构建sgRNA/Cas9表达载体，并将其线性化和纯化后进行体外转录，然后将sgRNA、Cas9mRNA以及Donor混合，一起显微注射到小鼠受精卵中，再将存活的受精卵移植到假孕母鼠子宫中，出生的小鼠为被编辑的F0代小鼠。经PCR和Sanger测序鉴定，将阳性的小鼠与野生型小鼠进行交配，获得F1代小鼠，最后将经鉴定为阳性的F1代杂合子小鼠进行交配，繁育所得后代即可获得纯合的Fzd6‑Q152E突变型和野生型的小鼠。该模型小鼠可用于研究rs61753730的生物学功能。