高特异性Taq DNA聚合酶变体及其在基因组编辑和基因突变检测中的应用

摘要

本发明提供高特异性Taq DNA聚合酶变体及其在基因组编辑和基因突变检测中的应用，属于生物技术领域。本发明通过对野生型全长Taq DNA聚合酶进行了半理性的定向分子进化来提高其特异性。选取Taq酶上与引物/模板复合物有直接相互作用的全部极性氨基酸进行逐个突变，获得40个Taq变体，然后在这些变体及野生型序列的基础上进行广泛的随机诱变，生成Taq突变体文库。在我们的qPCR筛选系统上，以基因组编辑indels质粒为模板，筛选出一系列具有高特异性的Taq突变体，在CRISPR/Cas9编辑效率评估和单细胞克隆基因分型中展现出了极大的优势，因此具有良好的实际应用之价值。