蒙药白益母草提取物在制备预防和/或治疗炎症疾病药物中的应用

摘要

本发明公开了一种以蒙药白益母草(脓疮草)提取物在制备治疗和/或预防炎症疾病药物中的应用。本发明所述的蒙药白益母草(脓疮草)提取物对多种炎症模型小鼠系统性炎症(如脓毒症)和局部炎症(局部皮肤感染和无菌性炎症)病理损伤有逆转作用；可显著抑制模型小鼠血液和脏器中炎性细胞因子TNF‑α、IL‑6等的水平；显著抑制模型小鼠血液和脏器中白细胞总数、中性粒细胞和淋巴细胞的募集；具有显著改善模型小鼠的眼、肠道等脏器感染性炎症状态作用。

说明书

技术领域

本发明属于医药或食品技术领域，具体的说是一种蒙药白益母草(脓疮草)提取物，其制备方法，及其在制备用于预防和/或治疗炎症疾病药物或食物中的应用。

背景技术

炎症是机体最基本的抗损伤反应，任何能够引起组织损伤的因素均可成为炎症的原因。引起炎症的原因称为致炎因素。致炎因素分为生物性因素，如细菌、病毒、及其代谢产物等；物理性因素，如挤压、高温、低温、紫外线等；化学性因素，包括外源性和内源性化学物质；免疫反应状态异常时，可引起不适当或过度的免疫反应，造成组织损伤，形成炎症，如花粉过敏、自身免疫等。根据炎症病程长短的不同，临床上将炎症分为四类，即以反应剧烈，短期内可引起严重组织、器官损伤，甚至导致机体死亡的超急性炎症，多见于变态反应性炎症；以毛细血管扩张、通透性增高、渗出和水肿为特征的急性炎症；以血小板黏附及白细胞游走为特点的亚急性炎症；以淋巴细胞、巨噬细胞浸润、纤维组织增生、肉芽肿形成为特征的慢性炎症。炎症反应是多细胞因子通过调节促炎和抗炎系统之间的平衡而参与炎症发生、发展的过程，是集损伤、抗损伤、修复为一体的综合病理过程。炎症虽然可以促进伤口愈合、抵抗外来微生物入侵，同时也能给机体带来很多伤害。目前除糖皮质激素类药物具有显著的抗炎作用外，并没有真正意义上的抗炎药，非甾体类抗炎药(nonsteroidal anti-inflammatory drugs，NSAIDs)在抗炎方面效果有限，水杨酸类、吡唑酮类、吲哚乙酸类等，其抗炎机理为抑制花生四烯酸代谢过程中的主要反应酶——环加氧酶，减少前列腺素合成，发挥解热、镇痛和抗炎的作用。这类药物并不具备调节炎性细胞和抑制炎性因子产生的作用。且因其严重的肝肾和血液毒性，已经减少了在临床上的使用。

在炎症性疾病中，感染性炎症疾病较为复杂，急性期多种免疫细胞被激活，启动免疫防御系统，吞噬外来入侵者，释放大量炎性因子，这一阶段的炎症状态有效地发挥了抗微生物作用；但是大量的炎症因子对所感染的组织也会造成严重损伤，因此，一旦外来微生物被清除，中后期需要消退炎症，避免损伤组织器官。因此，调节免疫细胞和炎症因子是抗炎的关键。至今，探寻安全有效的新药用于炎症治疗始终是国内外抗炎和免疫调节类药物研究的热点。

无菌性炎症的急性炎症无需药物治疗，机体即可自行恢复，如烧烫伤、挫伤和创口伤。此类炎症主要是由血管通透性增加，导致血液成分渗出，同时，致痛物质前列腺素生成增加，致使创伤局部组织疼痛、肿胀、发热等不适症状。药物干预或是物理方法处置(冷热敷)可加快组织修复，减轻机体不适感。在临床上，针对不同原因的炎症采取不同的治疗药物。中草药在感染性和无菌性炎症上均具有良好的表现，如在新冠肺炎中发挥了良好预防和治疗作用的连花清瘟制剂、血必净等，对轻症患者治疗取得显著效果。提示中药多组分多靶点的调控模式在对抗复杂的免疫-炎症反应中，或可成为极具潜力治疗药物。

蒙药白益母草(Panzerina lanata)是唇形科脓疮草属多年生草本植物脓疮草及其变种。是一味独特的蒙药。《中药辞海》中记载了其性味辛、苦。具有活血化瘀、解毒消肿的作用。主治：月经不调、产后腹痛、急性肾炎、急性乳腺炎、丹毒、疖疮、疥疮等症。在陕西、内蒙民间称其为“疮疾生药”。目前尚未见关于蒙药白益母草(脓疮草)提取物及有效部位用于治疗炎症的相关研究报道。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明解决的技术问题是提供一种蒙药白益母草提取物在制备抗炎药物中的应用。

为解决本发明的技术问题，本发明提供如下技术方案：

一种蒙药白益母草提取物制备预防和/或治疗炎症疾病的药物中的应用。

所述蒙药白益母草(脓疮草)提取物为以脓疮草地上部分为原料，水或C1～C5低级醇水溶液为溶剂进行提取，浓缩，即为蒙药白益母草(脓疮草)提取物。

所述提取为浸渍、渗漉、煎煮、加热回流或超声任意一种方式进行提取。

所述C1～C5低级醇水溶液的C1～C5低级醇体积浓度为0-95％。

优选所述提取溶剂为优选C1～C3低级醇水溶液，进一步优选为乙醇水溶液；

优选低级醇浓度为50-80％(体积/体积)，进一步优选为70％-80％(体积/体积)；

所述炎症疾病为感染性系统炎症、局部皮肤感染性炎症或无菌性炎症。

对1％-2％角叉菜胶诱导小鼠足肿胀、气囊炎症，1mg/kg脂多糖诱导脓毒症，采用上述获得蒙药白益母草(脓疮草)提取物以0.5～20g/kg生药剂量下灌胃给药，减轻了小鼠足趾肿胀程度；降低了气囊液的渗出体积和浊度，减轻了小鼠炎症症状表现，如眼不睁、稀便、怂毛、无光泽等。对小鼠外周血和气囊液中中性粒细胞和淋巴细胞具有调控作用。

一种预防和/或治疗炎症疾病的药物，药物活性成分含蒙药白益母草提取物。

所述药物为活性成分和药用可接受的载体或赋形剂，其中，活性成分含量占药物质量的0.1-99％。

所述蒙药白益母草(脓疮草)提取物为以脓疮草地上部分为原料，水或C1～C5低级醇水溶液为溶剂进行提取，浓缩，即为蒙药白益母草(脓疮草)提取物。

如果需要，可将活性成分与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为人药使用的适当施用形式或剂量形式。

本发明的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。

本发明的药物组合物的给药途径可为注射给药。注射包括静脉注射、肌肉注射、皮下注射、皮内注射和穴位注射等。给药剂型可以是液体剂型、固体剂型。如液体剂型可以是真溶液类、胶体类、微粒剂型、乳剂剂型、混悬剂型。其他剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、栓剂、冻干粉针剂等。

本发明的组合物可以制成普通制剂、也可以是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。

为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化纳、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素纳、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢纳与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，例如季铵盐、十二烷基硫酸纳等；润滑剂，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。

为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高岭土、滑石粉等；粘合剂，如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。

为了将给药单元制成栓剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高级醇、高级醇的酶、明胶、半合成甘油酶等。

为了将给药单元制成胶囊，将有效成分与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明胶胶囊或软胶囊中。也可将有效成分制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。

例如，将本发明的组合物制成注射用制剂，如溶液剂、混悬剂溶液剂、乳剂、冻干粉针剂，这种制剂可以是含水或非水的，可含一种和/或多种药效学上可接受的载体、稀释剂、粘合剂、润滑剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂。如稀释剂可选自水、乙醇、聚乙二醇、1，3一丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酶等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。这些辅料是本领域常用的。

此外如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。

本发明药用组合物的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重、性格及个体反应，给药途径、给药次数等，因此本发明的治疗剂量可以有大范围的变化。一般来讲，本发明中药学成分的使用剂量是本领域技术人员公知的。可以根据本发明药用组合物中最后的制剂中所含有的实际有效药物数量，加以适当的调整，以达到其治疗有效量的要求，完成本发明的治疗炎症的目的。通常对体重约75公斤患者，所给提取物的日剂量为0.001mg/kg体重～500mg/kg体重，优选3mg/kg体重～30mg/kg体重。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个，例如二、三或四个剂量形式给药，这受限于给药医生的临床经验以及给药方案。

本发明的优点在于：

(1)本发明属于中药制剂，以蒙药白益母草(脓疮草)提取物制备，成分纯天然，毒副作用低，给药剂量明显低于小鼠最大耐受剂量；(2)本发明提取物能有效防治炎症，对多种炎症模型小鼠系统性炎症和局部炎症病理损伤有逆转作用；可显著抑制模型小鼠血液和脏器中炎性细胞因子TNF-α、IL-6等的水平；显著抑制模型小鼠血液和脏器中白细胞总数、中性粒细胞和淋巴细胞的募集；具有显著改善模型小鼠的眼、肠道等脏器感染性炎症状态作用；(3)本发明制备工艺简单，易于规范化生产。

附图说明

图1为本发明实施例提的蒙药白益母草(脓疮草)提取物对小鼠脓毒症模型主要脏器组织中IL-6水平的影响(Mean±Sd,n＝6)效果图。

图2为本发明实施例提的蒙药白益母草(脓疮草)提取物对小鼠脓毒症模型肠组织中IL-10水平的影响(Mean±Sd,n＝6)效果图。

图3为本发明实施例提的蒙药白益母草对小鼠皮肤耐药金黄色葡萄球菌感染的保护作用效果图。

具体实施方式

以下实施例对本发明作进一步的说明，但本发明并不限于这些实施例。

实施例1：蒙药白益母草(脓疮草)提取物的制备

取干燥的蒙药白益母草(脓疮草)1kg，加入75％乙醇5升，100℃加热回流1.5小时，趁热过滤。滤渣以同样的方法再处理一次；合并两次所得滤液，减压回收乙醇，得浸膏100g，作为蒙药白益母草(脓疮草)提取物Ⅰ。

所述蒙药白益母草(脓疮草)(Panzerina lanata)是唇形科脓疮草属多年生草本植物脓疮草及其变种。

实施例2：剂型制备

下述各剂型的制备，按照现有技术制备即可，下述各制剂中的提取物即为上述实施例获得提取物Ⅰ，各剂型具体为：

胶囊：蒙药白益母草(脓疮草)提取物100g，加入糊精147.5g，硬脂酸镁2.5g，充分拌均匀后，按胶囊制备法制成1000粒，填装于250mg胶囊，每粒含蒙药白益母草(脓疮草)提取物100mg，其总量不低于50％。

片剂：取蒙药白益母草(脓疮草)提取物100g，加入淀粉100g，糊精80g，蔗糖15g，充分搅拌混匀，制成颗粒，在60℃以下干燥，加入适量硬脂酸镁、滑石粉，混匀，压制成1000片，包糖衣或薄膜衣，即得。

颗粒剂：取蒙药白益母草(脓疮草)提取物100g，加入适量蔗糖和糊精，按颗粒剂制法制成颗粒，干燥，制成1000g。

药理实验

实验例1：蒙药白益母草(脓疮草)提取物Ⅰ对角叉菜胶诱导小鼠足趾肿胀的抑制作用

方法：SPF级雄性ICR小鼠，18-20g，随机分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组(地塞米松，0.5mg/kg，灌胃给药)、药物处理组(上述提取获得脓疮草提取物Ⅰ经水稀释获得稀释液，而后按以每公斤小鼠灌胃含相当于0.25g脓疮草生药的提取物Ⅰ的稀释液，含相当于0.5g脓疮草生药提取物Ⅰ的稀释液，含相当于1g脓疮草生药的提取物Ⅰ的稀释液的剂量灌胃给药)，每组6只。各组动物灌胃给予药物，空白对照组给予等体积的纯净水；1小时后于足趾处注射20μL 1％角叉菜胶，空白对照组注射等量生理盐水；分别于注射后2小时、4小时和8小时测量足趾厚度和排水体积(参见表1)。肿胀率计算公式：肿胀率＝(肿胀后厚度-肿胀前)/肿胀前×100％。

表1药物处理后不同时间点足趾肿胀率(％)(Mean±Sd,n＝6)

备注：#p＜0.05，与空白对照组比较；*p＜0.05，与模型对照组比较。

由表1可见，蒙药白益母草(脓疮草)提取物减轻角叉菜胶诱导的小鼠足趾肿胀0.5g/kg给药剂量白益母草可以明显减轻小鼠足趾肿胀，与单纯角叉菜胶刺激组相比，2小时、4小时和8小时小鼠足趾肿胀率均有减轻，表明白益母草即可抑制炎症的激活，也可促进炎症的消退。

实验例2：蒙药白益母草(脓疮草)提取物对角叉菜胶诱导小鼠气囊炎症的抑制作用

方法：SPF级雄性ICR小鼠，18-20g，2％戊巴比妥钠5mg/kg腹腔注射麻醉后，于背部皮下注入6mL无菌空气，3日后再次注射，随机分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组(地塞米松，0.5mg/kg，灌胃给药)、药物处理组(脓疮草提取物Ⅰ经水稀释获得稀释液，而后按以每公斤小鼠灌胃含相当于0.25g脓疮草生药的提取物Ⅰ的稀释液，含相当于0.5g脓疮草生药的提取物Ⅰ的稀释液，含相当于1g脓疮草生药的提取物Ⅰ的稀释液的剂量灌胃给药)，每组6只。各组动物灌胃给予药物，空白对照组给予等体积的纯净水；1小时后于气囊内注射1m L1％角叉菜胶，空白对照组注射等量生理盐水；分别于注射后4小时、12小时和24小时采集外周血，采用流式细胞仪分析淋巴细胞、中性粒细胞的绝对值和占比。24小时收集气囊液，分析气囊中粒细胞数量。

①蒙药白益母草(脓疮草)提取物对小鼠气囊炎症外周血免疫细胞的调控作用

角叉菜胶作为致炎剂可引起气囊内炎性细胞聚集。身体局部炎性细胞的变化可由外周血免疫细胞数量和占比变化反映出来。本实验目的在于考察蒙药白益母草(脓疮草)提取物对小鼠气囊炎症中免疫细胞调控的影响，结果见表2。

表2蒙药白益母草(脓疮草)提取物对小鼠气囊炎症模型中粒细胞和淋巴细胞数量和占比的影响(Mean±Sd，n＝6)

备注：#p＜0.05，与空白对照组比较；*p＜0.05，与模型对照组比较

由表2可见蒙药白益母草(脓疮草)提取物在剂量0.25g/kg、0.50g/kg、1g/kg给药剂量对气囊炎症模型小鼠灌胃给药，在4小时和12小时可显著抑制角叉菜胶诱导的外周血中性粒细胞升高，使其占比减少；显著减少了4小时的淋巴细胞数量，对12小时和24小时影响较小，淋巴细胞占比变化主要因中性粒细胞数量变化而变化。

②蒙药白益母草(脓疮草)提取物对小鼠气囊炎症模型气囊液中炎性细胞总数的影响

角叉菜胶在气囊内引起局部组织化学趋化因子释放，将炎性细胞募集到气囊组织，并释放到气囊液中。通过检测气囊液中炎性细胞数量，可知炎症程度。结果见表3。

表3蒙药白益母草(脓疮草)提取物对小鼠气囊炎症模型气囊液中炎性细胞总数的影响(Mean±Sd,n＝6)

备注：#p＜0.05，与空白对照组比较；*p＜0.05，与模型对照组比较

由表3可见，蒙药白益母草(脓疮草)提取物在剂量0.25g/kg、0.5g/kg、1g/kg剂量下灌胃给予气囊炎症模型小鼠，可显著降低小鼠气囊液中炎性细胞总数。

实验例3：蒙药白益母草(脓疮草)提取物对脂多糖(LPS)诱导小鼠脓毒症模型的保护作用

方法：SPF级雄性ICR小鼠，18-20g，随机分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组(地塞米松，0.5mg/kg，灌胃给药)、药物处理组(脓疮草提取物Ⅰ经水稀释获得稀释液，而后按以每公斤小鼠灌胃含相当于0.25g脓疮草生药的提取物Ⅰ的稀释液，含相当于0.5g脓疮草生药的提取物Ⅰ的稀释液，含相当于1g脓疮草提取物Ⅰ的稀释液的剂量灌胃给药)，每组6只。各组动物灌胃给予药物，空白对照组给予等体积的纯净水；1小时后小鼠腹腔注射10mg/kgLPS，空白对照组注射等量生理盐水；分别于注射后4小时、12小时和24小时采集外周血，采用流式细胞仪分析中性粒细胞、淋巴细胞的绝对值和占比。24小时收集脏器，分析炎性因子水平。

①蒙药白益母草(脓疮草)提取物对脂多糖诱导小鼠脓毒症模型外周血免疫细胞的调控作用

脂多糖(LPS)为革兰氏阴性细胞壁中的一种成分。细菌溶解后释放出来，由特异多糖、核心多糖和脂质A构成。其毒性成分主要为脂质A。脂质A可以与宿主体内的LPS结合蛋白结合，可以介导LPS与细胞膜受体CD14及TLR4的结合。与细胞膜受体结合后，LPS的直接效应体现为活化吞噬细胞与激活血浆蛋白。两者都是机体应对感染与炎症所作出的正常应激生理活动。这些活动使机体进入了炎症状态。本实验目的在于考察蒙药白益母草(脓疮草)提取物对小鼠脓毒症模型中吞噬细胞的影响，结果见表4。

表4蒙药白益母草(脓疮草)提取物对小鼠脓毒症模型外周血中性粒细胞占比的影响(Mean±Sd,n＝6)

备注：#p＜0.05，##p＜0.01，与空白对照组比较；*p＜0.05，***p＜0.001，与模型对照组比较

由表4可见，蒙药白益母草(脓疮草)提取物在剂量0.25g/kg、0.5g/kg、1g/kg剂量下灌胃给予脓毒症模型小鼠，可引起中性粒细胞增多，导致中性粒细胞和淋巴细胞比值升高，说明白益母草提取物具有增强急性期吞噬细胞能力的作用。

②蒙药白益母草(脓疮草)提取物对小鼠脓毒症模型小肠炎性因子IL-6和IL-10水平的影响

白细胞介素6(IL-6)是白细胞介素的一种，具有多效性，其生成水平持续失调会与各种自身免疫性和慢性炎性疾病的发生和发展密切相关。IL-6是发热和炎症急性期反应的重要媒介。白细胞介素10(Interleukin 10,IL-10)又称细胞素合成抑制因子，主要由活化的T细胞产生，其他如活化的B细胞、单核-巨噬细胞、kupffer细胞、角化细胞等也可产生。IL-10是具有多向性生物学活性的强免疫抑制因子，IL-10不仅能阻止细胞因子产生，也能阻止化学因子、共刺激分子(CD80、CD86和MHC II)的表达。IL-10能结合IL-10Rα和IL-10Rβ，而这两种受体在大部分免疫细胞表达，因此，IL-10可以不同的方式调控不同的先天性免疫和适应性免疫细胞来避免免疫失调。如诱导Treg and Tr1细胞或是表现出自分泌靶向巨噬细胞和树突细胞的抑制剂(参见图1和2)。

由图1可见蒙药白益母草提取物可降低脓毒症小鼠脾、肝、肺、肠和肾的IL-6水平，以肠道最为明显。同时在图2中可见，白益母草提取物对肠道IL-10的水平影响不明显，这有可能是炎症因子存在动态变化，所以后续还应连续动态监测炎性因子的变化。结合外周血白细胞比例的变化，可以肯定蒙药白益母草通过调节免疫细胞和炎性因子发挥抗炎作用。

实验例4：蒙药白益母草(脓疮草)提取物对小鼠皮肤感染耐药金黄色葡萄球菌的保护作用

方法：SPF级雄性ICR小鼠，18-20g，随机分为正常对照组、模型对照组、药物处理组(脓疮草提取物Ⅰ1g/kg剂量)，每组6只。各组动物在后颈部手术剪除相同面积皮肤，涂以耐药金黄色葡萄球菌，每日灌胃给予药物连续9日，空白对照组给予等体积的纯净水。每日以游标卡尺测量创面直径，计算创面面积(参见图3)。

由图3可见，相比，小鼠皮肤创面接种耐药金黄色葡萄球菌后，在给予蒙药白益母草的第3天即可见创口明显缩小，第4天创面毛发出现再生，相比较单纯耐药金黄色葡萄球菌感染组，在第5天创面才减小，第6天才出现毛发再生。在仅开创无感染的情况下，给予蒙药白益母草组皮肤愈合速度略快于空白对照组约1天时间。细菌感染组整体快于未感染组，推测主要因为细菌培养液中蛋白胨加快了创口愈合。由此可见蒙药白益母草提取物通过抗感染可明显加快皮肤创面愈合。