肿瘤内α粒子-发射体辐射和针对细胞内病原体的细胞质传感器的激活

摘要

一种治疗具有肿瘤的患者的方法，以及用于这样的治疗的试剂盒(200)。该方法包括向患者施用激活肿瘤中针对细胞内病原体的细胞质传感器的物质(204)，以及在施用激活肿瘤中针对细胞内病原体的细胞质传感器的物质的两周内用肿瘤内α粒子‑发射体放射疗法治疗肿瘤。

说明书

发明领域

本发明总体上涉及肿瘤疗法，并且特别地涉及组合的肿瘤内α粒子-发射体辐射和针对细胞内病原体的细胞质传感器的激活(在下文，“ACSIP”)。

发明背景

癌症是世界上许多国家的主要死亡原因。因此，大量的资源已经花费在癌症和其他肿瘤的治疗上，并且已经提出了各种各样的此类治疗方法。

一类肿瘤疗法是肿瘤消融以原位杀死肿瘤细胞。在一些情况下，除了原位杀死细胞外，消融还诱导抗肿瘤免疫应答，以消除残留的和远端的肿瘤细胞。这是由于死亡和/或垂死的肿瘤细胞释放的肿瘤抗原和危险信号的扩散而发生的。肿瘤抗原被抗原呈递细胞捕获，抗原呈递细胞又将这些肿瘤抗原呈递给T细胞，例如，经由如Nakayama,Masafumi."Antigen presentation by MHC-dressed cells."Frontiers in immunology 5(2015):672中描述的交叉呈递途径。

已经提出了多种消融方法，诸如热、微波、激光、电、光动力、化学(例如，使用活性氧类(ROS))和放射性消融，放射性消融可以在外部应用(例如，外射束治疗(external beamradiation therapy))或在内部应用(例如，近距离放射治疗)，并且可以包括不同类型的辐射，诸如α辐射、β辐射和γ辐射。对这些方法的讨论出现在，例如，Keisari,Yona."Tumorabolition and antitumor immunostimulation by physico-chemical tumorablation."Front Biosci 22(2017):310-347中。用于任何特定患者的消融方法通常根据肿瘤的类型、肿瘤的位置、阶段和/或肿瘤的其他参数来选择。

被称为免疫疗法的另一类肿瘤疗法涉及增强患者对肿瘤细胞的免疫应答。已经提出了许多免疫治疗方法，诸如：检查点抑制剂、Toll样受体(TLR)激动剂(例如CpG)、局部基因疗法、细胞因子疗法、针对某些蛋白质靶标的抗体、CAR-T细胞疗法、树突状细胞疫苗、肿瘤浸润淋巴细胞的过继转移和溶瘤病毒疗法。这些方法例如在Papaioannou,Nikos E.,等人."Harnessing the immune system to improve cancer therapy."Annalsoftranslational medicine 4.14(2016)中讨论。免疫疗法策略可以包括如在Aznar,M.Angela,等人."Intratumoral delivery of immunotherapy act locally,thinkglobally."The Journal of Immunology 198.1(2017):31-39中描述的局部疗法。通常，根据肿瘤的类型或其阶段选择用于每个患者的具体方法。在临床前和临床试验中对上文讨论的治疗类型的多种组合进行测试，如例如在上文提及的Aznar文章的表1中描述的。

Salazar的美国专利公布2009/0088401描述了一种自体疫苗接种方法，该方法包括在一个或更多个靶向肿瘤部位中诱导免疫原性细胞死亡，然后在同一肿瘤部位注射dsRNA。

发明概述

本发明的一些实施方案的方面涉及基于针对细胞内病原体的细胞质传感器的激活(ACSIP)和肿瘤内α粒子-发射体放射疗法之间的协同作用的肿瘤治疗。

根据本发明的实施方案，提供了一种治疗具有肿瘤的患者的方法，该方法包括向患者施用激活肿瘤中针对细胞内病原体的细胞质传感器的物质，以及在施用激活肿瘤中针对细胞内病原体的细胞质传感器的物质的两周内用肿瘤内α粒子-发射体放射疗法治疗肿瘤。

任选地，施用该物质包括施用以下剂，所述剂诱导细胞内产生刺激针对细胞内病原体的细胞质传感器的分子。任选地，该剂包括DNA甲基转移酶(DNMT)抑制剂，诸如地西他滨、氮杂胞苷和/或Guadecitabine。可选择地或另外地，施用该剂包括施用组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂，诸如恩替诺特(Entinostat)和/或伏立诺他(vorinostat)。任选地，施用该物质包括施用病原体模拟物以及适合于病原体模拟物的细胞质递送的递送剂。任选地，将病原体模拟物与递送剂一起施用包括在单个会话中施用一剂(dose)或两剂细胞内病原体模拟物。在一些实施方案中，将病原体模拟物与递送剂一起施用包括在各自单独的会话中施用至少三剂细胞内病原体模拟物。任选地，施用该物质包括施用该物质以及适合于靶向递送的递送剂。任选地，递送剂包括基于脂质的递送剂、基于聚合物的递送剂、阳离子聚合物复合物、阳离子脂质、脂质体(liposome)、脂质复合物(lipoplex)、聚合物胶束和/或树枝状聚合物。可选择地或另外地，递送剂包括固体纳米颗粒，诸如固体脂质纳米颗粒和/或固体聚合物纳米颗粒。此外，可选择地或另外地，递送剂包括基于金属的纳米颗粒系统。在一些实施方案中，递送剂包括聚乙烯亚胺(PEI)。

在一些实施方案中，施用病原体模拟物包括施用细菌模拟物和/或病毒模拟物。任选地，施用病毒模拟物包括施用双链RNA(dsRNA)。任选地，施用dsRNA包括施用polyIC。在一些实施方案中，polyIC与聚乙烯亚胺(PEI)一起被递送，例如通过施用BO-112。可选择地或另外地，dsRNA包括5’ppp-dsRNA、3p-hpRNA、Poly(dA:dT)、poly-ICLC、poly(A:U)和/或富含CpG的RNA。任选地，施用病原体模拟物包括施用被细胞内受体识别为非自身的病原体模拟物。任选地，施用激活针对细胞内病原体的细胞质传感器的物质包括施用激活针对细胞内病原体的细胞质传感器的多于一种不同的物质。

任选地，施用激活针对细胞内病原体的细胞质传感器的多于一种不同的物质包括施用第一剂(first agent)和第二剂(second agent)，所述第一剂诱导细胞内产生刺激针对细胞内病原体的细胞质传感器的分子，所述第二剂包含病原体模拟物以及适合于病原体模拟物的细胞质递送的递送剂。任选地，该方法包括向患者另外施用环磷酰胺的支持性治疗。任选地，用α粒子-发射体放射疗法治疗肿瘤包括将携带发射α粒子的放射性核素的近距离放射治疗源插入肿瘤中。任选地，近距离放射治疗源在被插入到肿瘤时，以每天小于源上的发射α粒子的放射性核素的25％的速率释放发射α粒子的放射性核素。任选地，近距离放射治疗源包括镭源。任选地，仅在完成物质的施用之后，进行用α粒子-发射体放射疗法治疗肿瘤。任选地，施用该物质包括用nanoghost施用，所述nanoghost将物质引导到肿瘤。任选地，施用该物质包括在彼此分开至少12小时的至少两个单独会话中施用一种或更多种物质。任选地，施用一种或更多种物质包括在彼此分开至少20小时的至少三个单独会话中施用。任选地，该方法包括识别患者中的原发性肿瘤，并且其中施用该物质包括将该物质施用至所识别的原发性肿瘤。任选地，用α粒子-发射体放射疗法治疗肿瘤包括在施用最后一剂该物质之后的不到80小时用α粒子-发射体放射疗法进行治疗。任选地，用α粒子-发射体放射疗法治疗肿瘤包括在施用最后一剂该物质之后的不到60小时用α粒子-发射体放射疗法进行治疗。任选地，用α粒子-发射体放射疗法治疗肿瘤包括在施用最后一剂该物质之后的至少12小时或24小时用α粒子-发射体放射疗法进行治疗。

任选地，该方法包括向患者另外施用对抗由α粒子-发射体放射疗法诱导的加速的组织修复的支持性治疗，诸如下调炎症的支持性治疗和/或下调检查点表达的支持性治疗。在一些实施方案中，支持性治疗包括环磷酰胺、泊马度胺(pomalidomide)和/或berzosertib。可选择地或另外地，支持性治疗包括检查点阻断剂。任选地，支持性治疗包括抗PD-1、抗PD-L1和/或抗CTLA4。在一些实施方案中，支持性治疗包括一种或更多种TLR激动剂、一种或更多种MSDC抑制剂、一种或更多种Treg抑制剂、一种或更多种DNA修复抑制剂和/或一种或更多种抗血管生成因子。在一些实施方案中，该方法包括在开始用α粒子-发射体放射疗法治疗肿瘤之后的至少一周进行手术以移除肿瘤。任选地，用肿瘤内α粒子-发射体放射疗法治疗肿瘤包括在施用激活肿瘤中针对细胞内病原体的细胞质传感器的物质之后不到一周用肿瘤内α粒子-发射体放射疗法治疗肿瘤。

根据本发明的实施方案，还提供了一种用于治疗患者的试剂盒，该试剂盒包括至少一种源，所述至少一种源用于至少部分地引入受试者的身体内，具有安装在其上的发射α粒子的原子；至少一种物质，所述至少一种物质激活针对细胞内病原体的细胞质传感器；和无菌包装，所述无菌包装容纳所述至少一种源和所述至少一种物质。

任选地，发射α粒子的原子以允许该发射α粒子的原子或其子放射性核素从源可控释放的方式安装在源上。任选地，发射α粒子的原子包括镭原子。任选地，至少一种物质包括DNA甲基转移酶(DNMT)抑制剂。任选地，DNA甲基转移酶(DNMT)抑制剂包括地西他滨。任选地，至少一种物质还包括病原体模拟物以及适合于病原体模拟物的细胞质递送的递送剂。任选地，至少一种物质包括病原体模拟物以及适合于病原体模拟物的细胞质递送的递送剂。任选地，该试剂盒包括在无菌包装中的支持性治疗药物，该支持性治疗药物对抗由α粒子-发射体放射疗法诱导的加速的组织修复。任选地，支持性治疗药物包括下调炎症的药物。

根据本发明的实施方案，还提供了polyIC

根据本发明的实施方案，还提供了DNA甲基转移酶(DNMT)抑制剂在制备用于施用至患者的肿瘤的药物中的用途，其中药物的施用模式包括施用治疗有效量的DNMT抑制剂。

上文列出的各种选项和替代方案可以在替代方案中使用，或者以任何合适的组合一起使用，除非这些选项明确矛盾。

附图简述

图1是根据本发明的实施方案的治疗方法的流程图；

图2是根据本发明的实施方案的用于组合的α粒子-发射体辐射和ACSIP的试剂盒的示意图；和

图3是示出测试根据本发明的实施方案的组合的α粒子-发射体辐射和ACSIP治疗对乳腺癌肿瘤发展的效果的实验结果的图。

实施方式详述

本发明的一些实施方案的方面涉及组合肿瘤治疗，包括患者的肿瘤中针对细胞内病原体的细胞质传感器的激活(ACSIP)，以及在诱导ACSIP的治疗之后的12小时-90小时向肿瘤施加α粒子-发射体辐射。申请人已经发现，诱导ACSIP的特异性免疫疗法、随后施加α粒子-发射体辐射的特异性肿瘤消融的组合比单独的每种治疗具有显著更大的治疗效果。

申请人认为，增加肿瘤细胞上MHC1分子的表达的ACSIP也增加在由肿瘤内α粒子-发射体辐射诱导的细胞死亡之前肿瘤细胞呈递尚未被呈递的肿瘤抗原的可能性。在更广泛的肿瘤抗原呈递后，α粒子-发射体辐射诱导的肿瘤细胞死亡，继而将通过释放损伤相关分子模式(DAMP)信号来促进抗原呈递细胞的募集和激活。由于抗原呈递细胞激活特异性T细胞应答，更多的抗原特异性T细胞将被激活以识别更广泛的肿瘤抗原，导致针对更广泛的肿瘤抗原的更强和持久的全身性和特异性适应性免疫应答。此外，杀死含有诱导ACSIP的因子的肿瘤细胞也将导致释放病原体相关分子模式(PAMP)和细胞因子以增强免疫应答的募集和激活。总之，α粒子-发射体辐射和ACSIP诱导可以产生雪球效应，其增加对肿瘤细胞的杀伤，增加对肿瘤细胞的杀伤增加免疫应答，增加免疫应答又进一步增加对肿瘤细胞的杀伤，等等。α粒子-发射体放射疗法与ACSIP组合的积极结果可能是由于发射α粒子的原子的缓慢释放，这随着时间的推移分配放射疗法的效果，并且实现与ACSIP的协同作用。在放射疗法之前提供的ACSIP可以使肿瘤细胞的DNA去致密化，并且导致肿瘤细胞对放射疗法更敏感。因此，组合的α粒子-发射体辐射和ACSIP的诱导在最小的时间段导致显著的局部和全身肿瘤杀伤，具有最小的不良作用和增加的效率。

在一些实施方案中，通过使用适合于细胞质递送的递送剂将病原体模拟物施用至肿瘤细胞的细胞质中来进行ACSIP的诱导。作为病原体模拟物的细胞质施用的替代方案，ACSIP诱导通过刺激内源性细胞内病原体和/或通过激活肿瘤细胞的细胞质病原体传感器的启动子来实现，例如经由施用DNA甲基转移酶(DNMT)抑制剂，诸如地西他滨。

图1是根据本发明的实施方案的治疗方法100的流程图。关于识别(102)患者中的肿瘤，治疗方法100开始于在一个或更多个会话中在患者中诱导(104)ACSIP。在ACSIP诱导(104)之后的有限时间段(106)，启动(108)对肿瘤的α粒子-发射体辐射治疗(在本文中还被称为α粒子-发射体放射疗法)。

在一些实施方案中，在ACSIP诱导之前和/或在ACSIP诱导期间，在提供α粒子-发射体辐射治疗的同时和/或在完成α粒子-发射体辐射治疗之后，提供(114)一种或更多种支持性免疫调节治疗。在一些实施方案中，在完成α粒子-发射体辐射治疗之后，评估(110)治疗的效果。在一些实施方案中，在评估之后，采用手术(112)来移除残留的原发性肿瘤。在一些实施方案中，手术在放射治疗开始或完成之后至少一周或甚至至少14天进行。虽然移除癌性肿瘤的手术通常尽可能快地进行，但是申请人发现，在应用ACSIP和放射疗法的组合治疗之后，最好等待以允许治疗生效，并且然后才移除肿瘤。可选择地，当认为不必要或不可行时，在任何其他合适的时间进行手术或根本不进行手术。此外，可选择地或另外地，不执行评估。

治疗方法100可以用于治疗任何肿瘤类型，包括癌性肿瘤、良性赘生物、原位赘生物(癌前期)、恶性赘生物(癌症)和行为未定或未知的赘生物(neoplasms of uncertain orunknown behavior)。在一些实施方案中，图1的方法用于治疗相对实体瘤，诸如乳腺癌、肾癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、结肠癌、卵巢癌、膀胱癌和前列腺癌。在其他实施方案中，图1的方法用于治疗非实体瘤。图1的方法可以用于原发生长(primary growth)和次生生长(secondary growth)两者。

可以通过图1的方法治疗的示例性肿瘤包括胃肠道肿瘤(结肠上皮癌、直肠上皮癌、结肠直肠上皮癌(colorectal carcinoma)、结肠直肠癌(colorectal cancer)、结肠直肠腺瘤、1型遗传性非息肉病、2型遗传性非息肉病、3型遗传性非息肉病、6型遗传性非息肉病；结肠直肠癌、7型遗传性非息肉病、小肠上皮癌和/或大肠上皮癌、食道上皮癌(esophageal carcinoma)、伴有食道癌(esophageal cancer)的胼胝症、胃上皮癌、胰腺上皮癌、胰腺内分泌肿瘤)、子宫内膜癌、隆突性皮肤纤维肉瘤(dermatofibrosarcomaprotuberan)、胆囊癌、胆道肿瘤、前列腺癌、前列腺腺癌(prostate adenocarcinoma)、肾癌(例如2型或1型肾母细胞瘤)、肝癌(例如肝母细胞瘤、肝细胞上皮癌(hepatocellularcarcinoma)、肝细胞癌(hepatocellular cancer))、膀胱癌、胚胎横纹肌肉瘤、生殖细胞肿瘤、滋养细胞肿瘤、睾丸生殖细胞肿瘤、卵巢未成熟畸胎瘤、子宫肿瘤、上皮性卵巢肿瘤、骶尾部肿瘤、绒毛膜上皮癌、胎盘部位滋养细胞肿瘤、上皮成人肿瘤、卵巢上皮癌、浆液性卵巢癌、卵巢性索肿瘤、宫颈癌、子宫颈癌、小细胞肺癌和非小细胞肺癌、鼻咽癌、乳腺上皮癌(例如导管乳腺癌、浸润性导管内乳腺癌；乳腺癌、乳腺癌易感性、4型乳腺癌、乳腺癌-1、乳腺癌-3；乳腺-卵巢癌)、鳞状细胞癌(例如，在头部和颈部)、神经源性肿瘤、星形细胞瘤、成神经节细胞瘤(ganglioblastoma)、神经母细胞瘤、胶质瘤、腺癌、肾上腺肿瘤、遗传性肾上腺皮质癌、脑恶性肿瘤(肿瘤)、多种其他癌症(例如，支气管大细胞癌、导管癌、Ehrlich-Lettre腹水、表皮样癌、大细胞癌、Lewis肺癌、髓样癌、粘液表皮样癌、燕麦细胞癌、小细胞癌、梭形细胞癌、棘细胞癌、移行细胞癌、未分化癌、癌肉瘤、绒毛膜癌、囊腺癌)、室管膜母细胞瘤(ependymoblastoma)、上皮瘤、红白血病(erythroleukemia)(例如，Friend、淋巴母细胞)、纤维肉瘤、巨细胞瘤、胶质肿瘤、胶质母细胞瘤(例如，多形性胶质母细胞瘤、星形细胞瘤)、胶质瘤、肝细胞瘤(hepatoma)、异质杂交瘤(heterohybridoma)、异质骨髓瘤(heteromyeloma)、组织细胞瘤、杂交瘤(例如，B细胞)、肾上腺样瘤(hypernephroma)、胰岛素瘤(insulinoma)、胰岛肿瘤(islet tumor)、角质瘤、成平滑肌瘤、平滑肌肉瘤、淋巴肉瘤、黑素瘤、乳腺肿瘤、肥大细胞瘤、髓母细胞瘤、间皮瘤、转移性肿瘤、单核细胞瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、骨髓瘤、肾胚细胞瘤、神经组织胶质肿瘤、神经组织神经元肿瘤、神经鞘瘤、成神经细胞瘤、少突神经胶质瘤、骨软骨瘤、osteomyeloma、骨肉瘤(例如尤因肉瘤)、乳头状瘤、移行细胞癌、嗜铬细胞瘤、垂体肿瘤(浸润性)、浆细胞瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肉瘤(例如，尤因肉瘤、组织细胞肉瘤、Jensen肉瘤、骨原性肉瘤(osteogenic)、网织细胞肉瘤)、神经鞘瘤、皮下肿瘤、畸胎癌(例如，多能的)、畸胎瘤、睾丸肿瘤、胸腺瘤和毛发上皮瘤、胃癌、纤维肉瘤、多形性胶质母细胞瘤、多发性血管球瘤、Li-Fraumeni综合征、脂肪肉瘤、林奇癌症家族综合征II、男性生殖细胞肿瘤、甲状腺髓样癌、多发性脑膜瘤、内分泌瘤、粘液肉瘤、副神经节瘤、家族性非嗜铬细胞瘤(familial nonchromaffin)、毛母质瘤、乳头状瘤、家族性和散发性横纹肌样倾向综合症(rhabdoid predisposition syndrome)、家族性横纹肌样肿瘤、软组织肉瘤和伴有胶质母细胞瘤的Turcot综合征。

在一些实施方案中，图1的方法被应用于已知受其自身上的α粒子-发射体辐射实质影响的肿瘤。在其他实施方案中，图1的方法被应用于基本上不受其自身上的α粒子-发射体辐射影响的肿瘤类型，例如尺寸根本不减小或尺寸减小不超过5％或10％的肿瘤类型。由申请人进行的实验指示，当根据图1的方法通过ACSIP和α粒子-发射体辐射的组合来靶向时，即使是基本上不受其自身上的α粒子-发射体辐射或ACSIP影响的肿瘤，其尺寸也会显著减小。

在一些实施方案中，通过将病原体模拟物递送至肿瘤细胞来进行ACSIP的诱导(104)。在一些实施方案中，递送的病原体模拟物包括病毒模拟物。在其他实施方案中，代替病毒模拟物或除了病毒模拟物之外，细胞内细菌模拟物被递送至肿瘤细胞中。在一些实施方案中，病原体模拟物包括被细胞内受体识别为非自身的细胞内病原体模拟物。

在病原体模拟物包括病毒模拟物的实施方案中，病毒模拟物可以包括DNA病毒模拟物或RNA病毒模拟物，诸如ssRNA病毒模拟物或dsRNA病毒模拟物。dsRNA任选地包括RIG-I-样受体(RLR)激动剂，诸如聚肌胞苷酸(polyIC)分子，例如如标题为：“NovelPharmaceutical Composition Comprising Particles Comprising A Complex Of ADouble-Stranded Polyribonucleotide And A Polyalkyleneimine”的PCT公布WO 2017/085228中描述的。

在一些实施方案中，polyIC具有高分子量(HMW)，例如高于1.2kb、高于1.5kb、高于2.5kb或甚至高于4kb的分子量。然而，注意到，polyIC病毒模拟物还可以包括分子量低于1kb或甚至低于0.8kb的低分子量(LMW)polyIC。任选地，根据肿瘤的类型来选择polyIC的分子量。

可选择地，可以使用在PCT公布WO 2017/085228中描述的任何其他病毒模拟物，该PCT公布通过引用并入本文。在其他实施方案中，递送的病毒模拟物包括任何其他合适的病毒模拟物，诸如5’三磷酸双链RNA(5’ppp-dsRNA)、5’三磷酸发夹RNA(3p-hpRNA)和/或Poly(dA:dT)、poly-ICLC、poly(A:U)和/或富含CpG的RNA中的一种或更多种。

在其他实施方案中，使用包含CDS或STING配体的DNA病毒模拟物，例如在https://www.invivogen.com/dsdna和/或https://www.invivogen.com/cyclic-dinucleotide中列出的任何DNA病毒模拟物，它们通过引用并入本文。在一种实施方案中，使用CpG ODN病毒模拟物。

使用RNA模拟物具有的优点是使ACSIP诱导(104)通过与α粒子-发射体放射疗法不同的途径运行，α粒子-发射体放射疗法通常靶向细胞的DNA。

作为使用病原体模拟物来诱导ACSIP的替代方案或除了使用病原体模拟物来诱导ACSIP之外，溶瘤病毒被用于ACSIP诱导。

在一些实施方案中，肿瘤的识别(102)包括识别一个或更多个原发性肿瘤，例如原发性癌性肿瘤和/或一个或更多个继发性肿瘤和/或转移瘤(metastases)。递送(104)通过对一个或更多个识别的肿瘤进行直接肿瘤内注射来在原位进行。

在其他实施方案中，通过使用任何合适的靶向递送方法，例如使用通过nanoghost的递送的全身施用，来进行向肿瘤和/或转移瘤的递送，诸如在Machluf等人的标题为：“Liposomal Compositions and uses of same”的美国专利公布2017/0224618中描述的，该美国专利公布通过引用并入本文。任选地，病原体模拟物与靶向肿瘤的特定肿瘤标志物一起递送，使得肿瘤标志物与模拟物一起附着于肿瘤细胞。例如如在标题为：“ChimericProteins for targeting DSRNA”的美国专利公布2018/0346596中或在AlexanderLevitzki,“Targeting The Immune System To Fight Cancer Using Chemical ReceptorHoming Vectors Carrying Polyinosine/Cytosine(PolyIC)”,frontiers in Oncology,2012中描述的进行靶向，这些文献的公开内容通过引用并入本文。

任选地，在向患者施用病原体模拟物之前，评估肿瘤(肿瘤和/或转移瘤)的尺寸，并且相应地选择待施用的病原体模拟物的量。

在一些实施方案中，病原体模拟物与将病原体模拟物导入肿瘤细胞的递送剂(例如，试剂)一起被施用至患者。任选地，递送剂是能够绕过膜受体和/或内体受体诸如内体/TL3受体的递送剂。任选地，病原体模拟物和递送剂以单一剂被一起施用。任选地，递送剂包封病原体模拟物和/或与病原体模拟物复合。例如，在一种具体实施方案中，高分子量polyIC病原体模拟物与聚乙烯亚胺(PEI)以在6和8之间的核酸/聚合物的比率孵育，以形成复合物，在下文中被称为polyIC

任选地，递送剂包括聚乙烯亚胺(PEI)。可选择地，递送剂是基于脂质的、基于聚合物的或基于任何其他合适的纳米颗粒，例如如在Lee,Hung-Yen,Kamal A.Mohammed,和Najmunnisa Nasreen."Nanoparticle-based targeted gene therapy for lungcancer."American journal of cancer research 6.5(2016):1118中描述的，该文献的公开内容通过引用并入本文。在一些实施方案中，递送剂包含阳离子聚合物复合物或阳离子脂质。可选择地或另外地，递送剂包括脂质体、脂质复合物、树枝状聚合物或聚合物胶束。此外，可选择地或另外地，递送剂包括固体纳米颗粒，诸如固体脂质纳米颗粒或固体聚合物纳米颗粒。在一些实施方案中，递送剂包括基于金属的纳米颗粒系统。

使用本领域已知的任何合适的方法进行递送，所述方法诸如在Langut,Yael等人"PSMA-homing dsRNA chimeric protein vector kills prostate cancer cells andactivates anti-tumor bystander responses."Oncotarget 8.15(2017):24046和/或在Duewell,P.,等人"RIG-I-like helicases induce immunogenic cell death ofpancreatic cancer cells and sensitize tumors toward killing by CD8+T cells."Cell death and differentiation 21.12(2014):1825中描述的任何方法，这些文献的公开内容通过引用并入本文。

在一些实施方案中，通过在肿瘤细胞中刺激表观遗传变化，例如通过刺激内源性病原体，诸如内源性逆转录病毒和/或通过经由表观遗传变化刺激细胞质病原体传感器的激活(这激活了这些传感器的启动子)来诱导ACSIP(104)。表观遗传变化是由表观遗传剂(epigenetic agent)诱导的。在一些实施方案中，表观遗传剂包括DNA甲基转移酶(DNMT)抑制剂，诸如地西他滨、氮杂胞苷和/或Guadecitabine。使用本领域已知的任何合适的方法进行刺激，所述方法诸如在Chiappinelli等人,“Inhibiting DNA Methylation Causes anInterferon Response in Cancer via dsRNA Including Endogenous Retroviruses”,Cell,第162卷,第5期,2015年8月27日中描述的任何方法，该文献可从https://www.cell.com/cell/fulltext/S0092-8674(15)00848-X获得，该文献的公开内容通过引用以其整体并入本文。在其他实施方案中，表观遗传剂包括组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂，诸如恩替诺特或伏立诺他。

任选地，表观遗传剂被全身施用。在其他实施方案中，表观遗传剂使用靶向递送，例如使用nanoghost来施用，nanoghost将表观遗传剂引导到肿瘤并且可能也引导到转移瘤。此外，可选择地，表观遗传剂通过直接注射到靶向肿瘤中被局部递送。

在一些实施方案中，在单个会话中，在α粒子-发射体放射疗法之前进行一次ACSIP诱导(104)。可选择地，ACSIP诱导(104)在间隔至少24小时的多于一个(multiple)会话中进行，可能至少两个会话、至少三个会话或甚至至少四个会话。根据该替代方案，从最后一次ACSIP诱导会话，计算ACSIP诱导(104)之后的有限时间段(106)。多于一个会话任选地使用相同的ACSIP诱导方法。可选择地，不同的会话使用不同的ACSIP诱导方法。在还其他实施方案中，两个或更多个ACSIP诱导在同一会话中同时进行或在彼此不到一小时内进行。

发现提供特别有希望的结果的一种实施方案包括第一ACSIP诱导会话、24小时后的第二会话、在在第二会话之后24小时的第三会话和在第三个会话之后24小时的第四会话，第一ACSIP诱导会话刺激肿瘤细胞中的表观遗传变化，第二会话既刺激肿瘤细胞中的表观遗传变化又递送病原体模拟物，第三会话包括刺激肿瘤细胞中的表观遗传变化，第四会话既刺激肿瘤细胞中的表观遗传变化又递送病原体模拟物。

在该实施方案的一个特定的实施方式中，ACSIP诱导(104)包括在α粒子-发射体辐射之前每24小时基于地西他滨的4个会话，与在α粒子-发射体辐射之前72小时和24小时有或没有PEI的2剂PolyIC和上文列出的递送剂中的一种的组合。α粒子-发射体辐射任选地在最后一个会话之后1天被激活。

α粒子-发射体辐射治疗任选地包括近距离放射治疗，通过将携带发射α粒子的原子诸如镭-224或镭-223的籽源(seed)插入到肿瘤中。任选地，发射α粒子的原子以这样的方式附着于籽源：原子不离开籽源，但是在放射性核素衰变时，产生的子放射性核素离开籽源。近距离放射治疗籽源任选地以每24小时最初使用时与籽源耦合的放射性核素原子的数目的至少0.1％、0.5％或甚至至少1％的速率发射子放射性核素原子。在一些实施方案中，子放射性核素原子以每24小时少于25％、少于10％、少于5％或甚至少于3％的与籽源耦合的放射性核素原子的速率从籽源中缓慢释放。

作为以原子不离开籽源方式将发射α粒子的原子附着于籽源的没有放射性核素衰变的替代方案，在放射性核素衰变以外的方法中，发射α粒子的原子以原子以每24小时至少0.1％的速率可控地离开籽源的方式附着于籽源，如例如在标题为“controlled releaseof radionuclides”的PCT公布WO2019/193464中描述的，该PCT公布通过引用并入本文。

在一些实施方案中，α粒子-发射体辐射包括扩散α粒子-发射体辐射治疗(DaRT)。α粒子-发射体放射疗法任选地使用在美国专利8,834,837、美国专利公布2009/0136422、2019年10月10日提交的美国临时申请62/913,184和/或PCT公布WO 2018/207105中描述的任何方法和/或装置来进行，这些专利通过引用并入本文。

α粒子-发射体辐射治疗任选地通过将一个或更多个近距离放射治疗籽源插入肿瘤中来启动(108)，所述近距离放射治疗籽源在籽源的外表面上包含发射α粒子的原子。可选择地，α粒子-发射体放射疗法通过激活先前插入的携带发射α粒子的原子的籽源来启动。任选地，根据该替代方案，将具有生物可吸收涂层的籽源插入患者中，该生物可吸收涂层防止α辐射和/或子放射性核素离开籽源。生物可吸收涂层任选地包括被定制为实现期望的涂层再吸收速率的聚丙交酯(PLA)、聚乙交酯(PGA)或PLA和PGA的共聚物。可选择地或另外地，涂层包括共聚乳酸/乙醇酸(PLGA)。涂层的聚合物任选地具有在从5,000至100,000的范围内的分子量。涂层的材料通过本领域已知的任何方法在患者中溶解，所述方法诸如超声能量、与体温的反应和/或与体液的反应中的一种或更多种。在美国专利8,821,364和美国专利公布2002/0055667中描述了根据本发明的实施方案在调节所需的再吸收速率之后可以使用的生物可吸收聚合物的另外的讨论，这些专利通过引用并入本文。在一些实施方案中，启动(108)包括施加溶解涂层的刺激，并且因此允许α辐射和/或子放射性核素离开籽源。在其他实施方案中，由于与肿瘤的组织的接触，通过涂层的溶解来实现启动(108)，而无需另外的医师的启动。

α粒子-发射体放射疗法任选地被应用于患者持续至少24小时、至少5天或甚至至少10天。在一些实施方案中，近距离放射治疗籽源在指定的治疗持续时间之后从患者中移除。例如，在移除肿瘤的手术期间，籽源任选地被移除。可选择地，籽源不被移除。在一些实施方案中，籽源包括生物可降解材料。

α粒子-发射体放射疗法任选地仅在诱导ACSIP完成之后启动。在α粒子-发射体放射疗法的操作期间，任选地不向患者提供诱导ACSIP的物质。在一些实施方案中，在α粒子-发射体放射疗法完成之后，例如在移除所使用的一个或更多个近距离放射治疗源之后的至少24小时或甚至至少一周，不向患者提供诱导ACSIP的物质。在其他实施方案中，在进行α粒子发射体放射疗法的同时，提供一种或更多种诱导ACSIP的物质。

ACSIP诱导(104)和启动(108)α粒子-发射体放射疗法之间的有限时间段(106)被选择为允许ACSIP诱导生效。例如，当ACSIP由细胞内病毒模拟物诱导时，选择有限的时间段(106)用作适合于允许由于病原体模拟上调肿瘤细胞膜上的MHC1表达的缓冲期。可选择地或另外地，时间段(106)的长度被选择为足以允许肿瘤细胞有时间响应于递送的模拟物。

时间段(106)任选地为至少6小时、至少9小时、至少12小时、至少24小时或甚至至少36小时，使得细胞内病原体识别的激活在应用α粒子-发射体放射疗法之前开始生效。任选地，有限的时间段(106)短于两周、短于10天、短于一周、短于120小时、短于96小时、短于72小时或甚至短于48小时，使得当应用α粒子-发射体放射疗法时，细胞内病原体识别的激活的效果仍然有效。在一些实施方案中，有限的时间段(106)短于30小时或甚至短于20小时，例如在具有大量血管的肿瘤中或者以其他方式对ACSIP反应更快的肿瘤中。当在多于一个单独的会话中提供ACSIP时，任选地选择时间段(106)以允许在放射治疗期间ACSIP治疗对患者的最大效果。任选地，ACSIP治疗的时间跨度小于10天、小于一周或甚至不多于5天，使得从第一ACSIP治疗会话开始的时间跨度不长于第一ACSIP治疗会话和放射治疗之间的期望的最大等待时间(例如，10天)，并且最后一个ACSIP治疗会话和放射治疗之间的时间不短于期望的最小等待时间(例如，12小时)。

虽然上文的描述涉及在ACSIP治疗之后应用α粒子-发射体放射疗法，但是在本发明的一些实施方案中，α粒子-发射体放射疗法基本上与ACSIP治疗同时提供，或甚至在ACSIP治疗之前提供。α粒子-发射体放射疗法在ACSIP治疗之前或在ACSIP治疗之后的给定时间(例如，两周)内被提供给患者，其中给定时间根据治疗效果的预期时间范围选择。

在一些实施方案中，在细胞内病原体识别的激活之后，监测肿瘤的一个或更多个参数，以便确定最适合于应用α粒子-发射体放射疗法的时间点。监测任选地包括使用合适的方式(例如，X射线、超声、PET-CT、MRI、CT)对肿瘤进行成像，以识别肿瘤何时由于细胞内病原体识别的激活而开始改变。可选择地，监测包括执行血液测试以识别属性的级别。然而，注意到，在一些实施方案中，DaRT辐射在可检测到ACSIP的影响之前被施加。

在一些实施方案中，提供(114)支持性治疗包括提供一种或更多种对抗放射治疗和/或ACSIP诱导(104)的不期望的副作用的治疗。任选地，支持性治疗包括一种或更多种对抗由α粒子-发射体放射疗法诱导的加速的组织修复的治疗，因为这样的加速的组织修复将支持残留的肿瘤细胞并促进肿瘤复发。可选择地或另外地，支持性治疗包括一种或更多种抗炎治疗，所述抗炎治疗下调由放射治疗和/或ACSIP引起的组织损伤后的炎症。此外，可选择地或另外地，支持性治疗包括一种或更多种下调由放射治疗和/或ACSIP引起的检查点表达(例如，PD-L1表达)的治疗。在一些实施方案中，支持性治疗包括一种或更多种阻止DNA修复，以便干扰患者的身体修复被放射治疗损伤的肿瘤细胞的DNA的尝试的治疗。在其他实施方案中，支持性治疗包括一种或更多种刺激ACSIP的病毒攻击的治疗。

在一些实施方案中，支持性治疗包括具有上文列出的两种或甚至三种效果的治疗。例如，提供施用泊马度胺的支持性治疗，具有对抗组织修复、下调炎症和下调PD-L1表达的作用。berzosertib是可以用于既阻止DNA修复又下调PD-L1表达的药物的另一个实例。

在其他实施方案中，支持性治疗包括多于一种不同的治疗，例如检查点阻断剂(例如，抗PD-1和/或抗CTLA4)以及TLR3激动剂，其从肿瘤细胞的外部刺激ACSIP。

在一些实施方案中，支持性治疗包括支持性免疫调节，例如本领域已知的用于抑制免疫抑制细胞诸如髓源性抑制细胞(MDSC)的任何治疗和/或Treg抑制剂(例如环磷酰胺)和/或TLR途径的激活(TLR激动剂)。MDSC抑制剂包括，例如，吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)抑制剂，诸如Epacadostat；TGFb抑制剂，诸如Galunisertib；PDE5抑制剂，诸如西地那非和/或Cox 2抑制剂，诸如依托度酸。

可选择地或另外地，提供(114)另外的治疗包括提供免疫疗法治疗。免疫疗法治疗任选地包括施用检查点阻断剂，诸如抗PD-1、抗PD-L1、抗CTLA4、抗TIGIT、抗LAG-3、抗TIM-3、抗CD134和/或抗CD137中的一种或更多种。可选择地或另外地，免疫疗法治疗包括施用一种或更多种模式识别受体和/或激动剂，诸如TLR7,8(例如，MEDI9197、咪喹莫特)、TLR9(例如，MGN1703、SD-101、TLR4、GSK1795091、G100、GLA-SE)、TLR3(例如，Poly-ICLC)和/或STING(例如，MIW815)。

可选择地或另外地，另外的治疗包括施用被发现增加、不影响或仅最小地阻碍由α粒子-发射体放射疗法诱导的免疫应答的类型的DNA修复抑制剂。在一些实施方案中，施用的DNA修复抑制剂包括ATR抑制剂，例如berzosertib、AZD6738和/或NU6027。可选择地或另外地，DNA修复抑制剂包括ATM/ATR抑制剂，诸如KU-55933、KU-60019和/或EPT-46464、DNA-PK抑制剂(例如，6-硝基藜芦醛、NU7441)、Wee1抑制剂(例如，adavosertib)、Hsp90抑制剂(例如，坦螺旋霉素(Tanespimycin))和/或PARP抑制剂(例如，奥拉帕尼、他拉唑帕尼)。

可选择地或另外地，另外的治疗包括被发现增加、不影响或仅最小地阻碍由α粒子-发射体放射疗法和/或ACSIP诱导的免疫应答的类型的抗血管生成因子。在一些实施方案中，另外的治疗包括iMiD，例如泊马度胺、沙利度胺、来那度胺和/或阿普斯特。

此外，可选择地或另外地，另外的治疗包括局部或全身化学疗法治疗，其类型被发现不干扰α辐射和/或对ACSIP的免疫应答和/或DaRT辐射。任选地，化学疗法治疗包括环磷酰胺(CP)、多柔比星、米托蒽醌、吉西他滨、奥沙利铂和/或顺铂中的一种或更多种。

在一些实施方案中，另外的治疗包括通过一种或更多种下调检查点分子的表达的剂或药物，例如泊马度胺(IMiD)和/或berzosertib(ATR抑制剂)的检查点抑制。

在一些实施方案中，另外的治疗可选择地或另外地包括抗炎药物，诸如NSAID，例如Cox2抑制剂。

此外，可选择地或另外地，另外的治疗包括施用一种或更多种表观遗传药物，诸如DNMT抑制剂(例如，地西他滨、氮杂胞苷、Guadecitabine)和/或HDAC抑制剂(例如，恩替诺特、伏立诺他)。

在一些实施方案中，在提供α粒子-发射体辐射的同时，提供另外的治疗(114)。在其他实施方案中，在α粒子-发射体放射疗法完成之后，例如在近距离放射治疗籽源中的大部分放射性核素经历核反应之后，和/或在近距离放射治疗籽源从患者中移除之后，提供另外的治疗(114)。在仍其他实施方案中，在α粒子-发射体放射疗法之前提供另外的治疗(114)。

在一些实施方案中，支持性治疗在距ACSIP会话和/或放射疗法治疗中的一种不到72小时、不到48小时或甚至不到32小时内提供。

根据另外的治疗的具体类型，任选地选择提供另外的治疗的时间。例如，当提供检查点抑制剂时，检查点抑制剂在α粒子-发射体放射疗法期间或在α粒子-发射体放射疗法之后，可能在开始α粒子-发射体放射疗法之后甚至3天或甚至1周和/或在α粒子-发射体放射疗法完成之后被施用。

任选地，响应于肿瘤类型提供另外的治疗(114)。

图2是用于根据图1的方法治疗患者的试剂盒200的示意图。试剂盒200包括无菌包装202，该无菌包装202包括用于插入肿瘤的一个或更多个α粒子-发射体放射疗法籽源204，以及一剂或更多剂(one or more doses)216的用于ACSIP诱导(204)的剂(agent)。

任选地，籽源204被提供在小瓶或其他包装物(casing)206内，这防止辐射离开包装物。在一些实施方案中，包装物填充有粘性液体，诸如甘油，其防止辐射从包装物206逸出，诸如在标题为“Radiotherapy Seeds and Applicators”的PCT申请PCT/IB2019/051834中描述的，该PCT申请的公开内容通过引用并入本文。在一些实施方案中，试剂盒200还包括籽源施加器208，其用于将籽源204引入到患者中，如在PCT申请PCT/IB2019/051834中描述的。任选地，提供了其中预装载有一种或更多种籽源204的施加器208。根据该选择，对于需要多于预装载的籽源数量的情况，提供在包装物206中的单独籽源204。可选择地，包装物206中的籽源204不被提供在试剂盒200中，并且仅施加器208内的籽源被包含在试剂盒200中。

如所示的，提供了预装载在一个或更多个针210中的ACSIP的剂216。在其他实施方案中，剂216被提供在一个或更多个容器或小瓶中，并且针被单独地提供在无菌包装202中，或者根本不被提供在试剂盒200中。

在一些实施方案中，试剂盒200还包括支持性免疫调节治疗(114)所需的一种或更多种药物220。

在一些实施方案中，试剂盒200包括多于一个单独的隔室，隔室由合适的保温材料(insulation)隔开，用于需要在不同温度储存的物质。例如，第一隔室可以包括干冰，干冰将第一隔室中的物质保持在约-20℃，而第二隔室包括冰，冰将第二隔室中的物质保持在约4℃

图3示出了申请人为测试图1的方法而进行的实验的结果。在实验中，高分子量(HMW)PolyIC dsRNA病毒模拟物(20μg/40μl)使用递送剂PEI原位递送至小鼠的原发性肿瘤细胞的细胞质中，该小鼠携带具有～40mm

图3在y轴上示出了治疗开始后29天小鼠的平均肿瘤体积随着X轴上治疗后的天数的变化。如图3中可以看到的，细胞内病毒模拟物递送将肿瘤尺寸减小了高达约20％。α粒子-发射体辐射治疗自身将肿瘤尺寸减小了高达约34％。α粒子-发射体治疗与未提供有递送试剂的裸露的病毒模拟物的组合将肿瘤尺寸减小高达约64％。α粒子-发射体放射疗法和细胞内病毒模拟物递送的组合将肿瘤尺寸减小了82％以上，这显著超过了对于每种单独治疗所预期的。

下表示出了使用两种成像方法，图1的方法对携带肺转移的小鼠的百分比的影响。

该表总结了在第一次病毒模拟物递送之后29天，如通过CT或M-Cherry荧光成像测量的参与图3中描述的实验的小鼠的结果。表格中的数字表示肺转移阳性的小鼠的百分比。相对于接受单独治疗或没有PEI的PolyIC与DaRT组合的小鼠，在接受组合的α粒子-发射体辐射和细胞内病毒模拟物递送治疗的组中，显著更大量的小鼠是肺转移阴性的(77％无转移)。

进行另一个实验来测试图1的方法对长期免疫应答的效果。将携带4T1肿瘤(30mm

在另外的实验中，申请人通过使用低剂量环磷酰胺(100mg/kg，在治疗开始即第一次polyIC

此外，申请人进行实验，以通过经由使用低剂量地西他滨刺激内源性病原体诱导ACSIP来测试图1的方法，并且比较这种治疗对肿瘤发展的效果与病毒模拟物递送polyIC

申请人进行了另外两个实验，通过经由在4T1乳腺癌小鼠模型(大肿瘤)中使用低剂量地西他滨刺激内源性病原体诱导ACSIP来测试图1的方法。用75kBq DaRT籽源和在DaRT之前72小时用30μg/60μl polyIC

最后，申请人在小鼠胰腺肿瘤模型Panc02中进行了测试图1的方法的实验。此外，在该模型中测试了治疗与iMiD药物泊马度胺(POM)的组合。

在接种后11天，具有22mm

与polyIC

将理解，上文描述的方法和装置应被解释为包括用于进行该方法的装置和使用该装置的方法。应当理解，关于一种实施方案描述的特征和/或步骤有时可以与其他实施方案一起使用，并且不是本发明的所有实施方案都具有特定附图中示出的或关于特定实施方案中的一种实施方案描述的所有特征和/或步骤。任务不一定按所描述的确切顺序执行。

注意到，上文描述的实施方案中的一些可以包括结构、动作或结构和动作的细节，它们对于本发明可能不是必需的，并且被描述为实例。如本领域已知的，本文描述的结构和动作可由执行相同功能的等效物替换，即使结构或动作不同。上文描述的实施方案通过实例的方式列举，并且本发明不限于在上文中特别示出和描述的内容。而是，本发明的范围包括在上文中描述的多种特征的组合与子组合两种，以及在阅读前述描述时本领域技术人员将想到的且不在现有技术中公开的本发明的变型和修改。因此，本发明的范围仅限于如在权利要求中使用的要素和限制，其中术语“包括(comprise)”、“包含(include)”、“具有”及其同源词当在权利要求中使用时应该意味着“包括但不一定限于”。