一种珍珠亮白肽的制备方法及在美白化妆品中的应用

摘要

本发明提供了一种贝类活性肽的制备方法，包括如下步骤：将贝壳去除角质层和棱柱层，得到珍珠母；用木瓜蛋白酶液处理珍珠母，干燥、粉碎，得到珍珠母粉；用中性蛋白酶或碱性蛋白酶将珍珠母粉和外套膜一起酶解，将酶解产物离心，去除沉淀，超滤，取过膜物，得到贝类活性肽。本发明还提供了一种组合物，包括：前述的贝类活性肽，脂质体形成材料和石榴籽精华、牛奶精华、甘油和维生素E。该贝类活性肽和组合物能够有效地抗氧化，清除DPPH，·OH和ABTS等自由基。

说明书

技术领域

本发明属于海洋生物资源利用领域，涉及贝类抗氧化肽的制备方法及其在美白类化妆品中的应用，特别是涉及一种具有抗氧化活性的小肽作为有效成分在制备药品、护肤品或/和化妆品中的应用。

背景技术

珍珠母通常被认为是生产过程中产生的副产物，缺乏有效的加工处理，产品附加值低，这样不但浪费资源又造成环境污染。因此，迫切需要开展对珍珠母的深加工利用研究。且作为天然的海洋生物资源，制备珍珠母活性小肽具有自身优良的生物相容性，因此，珍珠母成分的有效利用具有广泛地应用前景，且将进一步地产生巨大的商业价值。

有效清除人体过量自由基是解决目前人类衰老和患癌风险最迫切的科学问题，因此，抗氧化肽在护肤品中的应用也被认为是最有开拓希望的新领域，抗氧化肽具有俘获各种反应所产生的活性高的自由基，调节体内自由基的平衡，从而达到有效减慢皮肤衰老的过程。

中国专利CN104470489A申请公开了一种包括散射填料和珍珠母的化妆品组合物，本发明涉及一种用于护理和/或化妆角蛋白材料，特别地脸部皮肤的化妆品组合物，其包括在生理地可接受的介质中的下述组分：(a)至少一种散射填料，其颗粒尺寸小于35微米，优选2微米至35微米，更优选11微米至17微米，(b)至少红色或粉红色珍珠母，和(c)至少一种蓝色珍珠母。

中国专利CN102698053A申请公开了一种缓解抑郁症的珍珠母中药制剂，由以下重量份的中药原料制成：珍珠母200-400份、夜交藤100-300份、白芍40-200份、山茱萸40-200份、合欢皮40-200份、天冬50-250份、百合50-250份，诸药共奏滋阴清热安神之功，本发明的中药制剂对阴虚火旺型抑郁症患者有显著治疗效果，可迅速缓解眩晕，心悸，少寐，心烦易怒，或遗精腰酸的症状，本制剂无毒副作用，治疗效果显著，从根本上解除了患者的痛苦。

中国专利CN105821099A申请公开了一种发酵法制备马氏珠母贝抗氧化多肽的工艺。首先将马氏珠母贝预处理成干燥粉末状，再接种微生物菌株进行发酵培养，发酵液上清液经过浓缩和喷雾干燥，得到马氏珠母贝抗氧化肽产品。本发明采用微生物发酵法制备马氏珠母贝抗氧化多肽，克服了传统酶法成本高的问题，同时还具有制备条件易控、成本低、发酵产物风味好的特点。而且对马氏珠母贝进行深加工制备得到抗氧化多肽，对于水产行业发展和提高马氏珠母贝附加值具有重要的意义；同时得到的抗氧化多肽既营养又保健，对于促进社会居民的健康也会起到一定作用。

上述制备的活性肽的加工过程存在提取效率低、功能成分受到破坏、有机溶剂残留等弊端，且存在着原料不易获取、成本较高、制备工艺复杂等弊端，并未涉及实际的应用工艺技术和配方，且尚未有关于珍珠母抗氧化活性小肽在美白类化妆品中的应用报道。因此，目前的科研和实践中需要研发出一种新型的抗氧化活性珍珠亮白肽的制备方法，并将该活性提取物作为抗氧化成分用于护肤品或化妆品。

发明内容

本发明为了解决现有技术中的问题，本发明提供了一种珍珠亮白肽的制备方法及在美白化妆品中的应用，具体提供一种具有优良抗氧化活性的贝类活性肽脂质体复合体的制备方法以及将其作为有效成分在制备化妆品中的应用。主要涉及以珍珠母为主要原料，采用定向酶水解技术，制备具有高抗氧化活性的珍珠母活性肽，并对其进行提纯浓缩，该制备方法具有成本低，副产物少，活性高和制备工艺简单等优点，并以体外DPPH，·OH和ABTS等自由基清除率和人体试验数据为评价指标，得到制备一种高活性的珍珠母抗氧化活性小肽的最佳工艺条件，所得产品可作为附加材料直接应用到美白类化妆品领域，为开发新型的抗氧化产品提供了新思路，同时对海洋生物质的增值化利用具有重要指导意义。

本发明第一方面提供了一种贝类活性肽的制备方法，所述贝类活性肽的制备方法包括如下步骤：

S1：将蛋白酶和珍珠母粉混合形成酶解反应体系并进行酶解，得到酶解珍珠母粉混合液；

S2：将所述酶解珍珠母粉混合液离心，去除沉淀，得到粗贝类活性肽溶液；

S3：将所述粗贝类活性肽溶液超滤，取过膜物，得到精贝类活性肽溶液。

在一些实施方式中，在步骤S1中，将蛋白酶、珍珠母粉和外套膜混合形成酶解反应体系并进行酶解，得到酶解珍珠母粉与外套膜混合液；在步骤S2中，将所述酶解珍珠母粉与外套膜混合液离心，去除沉淀，得到所述粗贝类活性肽溶液。

在一些实施方式中，所述珍珠母粉来自三角帆蚌、褶纹冠蚌、马氏珠母贝、企鹅贝、白蝶贝和黑蝶贝中的一种的贝壳或其组合。

在一些实施方式中，在步骤S1中，所述蛋白酶为中性蛋白酶或碱性蛋白酶。

在一些实施方式中，在步骤S1中，所述蛋白酶包括胃蛋白酶、胰蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶中的一种或几种组合。

在一些实施方式中，在步骤S1中，所述蛋白酶活力为5-30万U/g(比如，10万U/g、15万U/g、20万U/g、25万U/g)。

在一些实施方式中，在步骤S1中，所述蛋白酶活力为20万U/g。

在一些实施方式中，在步骤S1中，所述蛋白酶干重在所述酶解反应体系的质量百分比为1-5wt％(比如，2wt％、3wt％、4wt％)。

在一些实施方式中，在步骤S1中，珍珠母粉在所述酶解反应体系中的用量为15-60g/L(比如，20g/L、25g/L、30g/L、35g/L、40g/L、45g/L、50g/L、55g/L)。

在一些实施方式中，在步骤S1中，所述酶解总时间为0.5～7h(比如，1h、2h、3h、4h、5h、6h)。

在一些实施方式中，在步骤S1中，完成所述酶解后进行灭酶处理。

在一些实施方式中，在步骤S1中，所述灭酶处理是在85-95℃(比如，86℃、87℃、88℃、89℃、90℃、91℃、92℃、93℃、94℃)条件下进行的。

在一些实施方式中，在步骤S1中，所述灭酶处理时间为20-40min(比如，25min、30min、35min)。

在一些实施方式中，在步骤S2中，所述离心的条件为2000-5000rpm(比如，2500rpm、3000rpm、3500rpm、4000rpm、4500rpm)。

在一些实施方式中，在步骤S2中，所述离心的时间为5-15min(比如，7min、9min、11min、13min)。

在一些实施方式中，在步骤S3中，所述超滤的压力为0.02-0.25MPa(比如，0.04Pa、0.06Pa、0.08Pa、0.10Pa、0.12Pa、0.14Pa、0.16Pa、0.18Pa、0.20Pa、0.22Pa、0.24Pa)。

在一些实施方式中，在步骤S3中，所述超滤的压力为0.12MPa。

在一些实施方式中，在步骤S3中，所述超滤处理采用分子截留量为3000Da以下(比如，2600Da、2700Da、2800Da、2900Da)的超滤膜。

在一些实施方式中，在步骤S3中，所述超滤处理采用分子截留量为2500-3000Da的超滤膜。

在一些实施方式中，所述贝类活性肽的制备方法还包括如下步骤：

S4：将所述精贝类活性肽溶液干燥，得到干燥的贝类活性肽粉。

在一些实施方式中，在步骤S4中，所述干燥为真空干燥。

在一些实施方式中，在步骤S4中，所述真空干燥在真空度80～90KPa(比如，82KPa、84KPa、86KPa、88KPa)下进行。

在一些实施方式中，在步骤S4中，所述真空干燥时间为10～15min比如，11min、12min、13min、14min)。

在一些实施方式中，所述珍珠母粉的制备包括如下步骤：

Sa：将贝类去除全脏器，洗净，得到贝壳；

Sb：去除角质层和棱柱层，得到珍珠母；

Sc：用木瓜蛋白酶液处理所述珍珠母，得到酶解的珍珠母；

Sd：将所述酶解的珍珠母干燥、粉碎，得到珍珠母粉。

在一些实施方式中，在步骤Sb中，打磨去除角质层和棱柱层，得到所述珍珠母。

在一些实施方式中，在步骤Sb中，所述珍珠母依次进行粗粉碎和微粉碎处理，终粒度为80-100目。

在一些实施方式中，在步骤Sc中，将木瓜蛋白酶液喷入珍珠母内层，处理时间为0.5-1.5h(比如，0.6h、0.8h、1.0h、1.2h、1.4h)。

在一些实施方式中，在步骤Sc中，配制所述木瓜蛋白酶液用的木瓜蛋白酶活性为3～18万单位/g(比如，5万U/g、7万U/g、9万U/g、11万U/g、13万U/g、15万U/g、17万U/g)，所述木瓜蛋白酶液的溶剂为浓度为10～60mg/mL(比如，15mg/mL、20mg/mL、25mg/mL、30mg/mL、35mg/mL、40mg/mL、45mg/mL、50mg/mL、55mg/mL)的乳酸液。

在一些实施方式中，木瓜蛋白酶在乳酸水溶液中的浓度为0.03-0.07mg/mL(比如，0.04mg/mL、0.05mg/mL、0.06mg/mL)。

在一些实施方式中，在步骤Sc中，所述木瓜蛋白酶干重与珍珠母质量比＝10

在一些实施方式中，在步骤Sd中，将所述珍珠母粉过60-100目筛，取筛下物备用。

本发明第二方面提供了一种贝类活性肽，所述贝类活性肽是根据本发明第一方面的制备方法制备得到的。

本发明第三方面提供了一种组合物，所述组合物的原料包括：

本发明第二方面所述的贝类活性肽，脂质体形成材料和营养物质。

在一些实施方式中，所述贝类活性肽，所述脂质体形成材料和所述营养物质的质量比为：(20-28)：(130-480)：(21-32)(比如，(22、24、26)：(150、200、250、300、350、400、450)：(23、25、27、29、31))。

在一些实施方式中，所述贝类活性肽在所述组合物的质量百分含量为5～15wt％(比如，7wt％、9wt％、11wt％、13wt％)。

在一些实施方式中，所述组合物的剂型为脂质体化妆品。

在一些实施方式中，所述脂质体形成材料包括：磷脂、固醇和表面活性剂。

在一些实施方式中，所述磷脂、所述固醇和所述表面活性剂的质量比为：(100-300)：(20-90)：(10-90)(比如，(150、200、250)：(30、40、50、60、70、80)：(20、30、40、50、60、70、80))。

在一些实施方式中，所述磷脂选自大豆卵磷脂。

在一些实施方式中，所述固醇选自胆固醇。

在一些实施方式中，所述表面活性剂选自聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯。

大豆卵磷脂、胆固醇和聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯是为了形成空的脂质体。

在一些实施方式中，所述营养物质包括：石榴籽精华、牛奶精华、甘油和维生素E任一种或其组合。

在一些实施方式中，所述石榴籽精华为石榴籽多酚含量为7.55-8.05wt％的石榴籽提取物。

在一些实施方式中，所述石榴籽精华、所述牛奶精华、所述甘油和所述维生素E的质量比为：(7-10)：(6-10)：(4-6)：(4-6)(比如，(8、9)：(7、8、9)：5：5)。

石榴籽精华的主要作用是抗氧化。

牛奶精华的主要作用是美白。

甘油的主要作用是保湿。

维生素E的主要作用是美白，抗氧化。

本发明第四方面提供了一种组合物的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：

Si：将所述脂质体形成材料制备成空白脂质体溶液；

Sii：将所述贝类活性肽和所述营养物质加入所述空白脂质体溶液，得到混合物a；

Siii：超声处理所述混合物a，得到所述组合物。

在一些实施方式中，在步骤Si中，将所述脂质体形成材料制备成空白脂质体溶液的步骤为：

将所述脂质体形成材料混合后加入有机溶剂中，得到混合物b；

对所述混合物b减压旋转蒸发掉有机溶剂，得到混合物c；

将所述混合物c加入柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，得到混合物d；

对所述混合物d旋转蒸发水分后得到所述空白脂质体溶液。

在一些实施方式中，所述脂质体形成材料与所述有机溶剂的质量体积比g/ml为：2：1到5：1(比如，3：1、4：1)。即：所述脂质体形成材料质量的单位是g，所述有机溶剂的体积为ml。

在一些实施方式中，所述柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液为0.2-0.4mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。

在一些实施方式中，所述柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液pH为1-4(比如，2、3)。

在一些实施方式中，所述有机溶剂与所述柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液的用量体积比为1:1到5:1(比如，2:1、3:1、4:1)。

在一些实施方式中，所述有机溶剂与所述柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液的用量体积比为2:1。

在一些实施方式中，所述有机溶剂为乙醚。

在一些实施方式中，将所述混合物d的pH调节到pH1-4后再进行旋转蒸发水分。

在一些实施方式中，所述减压旋转蒸发是在45-55℃(比如，46℃、47℃、48℃、49℃、50℃、51℃、52℃、53℃、54℃)条件下进行的。

在一些实施方式中，将所述空白脂质体溶液用于步骤Sii之前采用0.45微米滤膜过滤，取滤液备用。

在一些实施方式中，在步骤Sii中，使用饱和Na

在一些实施方式中，在步骤Siii中，所述超声处理的功率为：4000-8000W(比如，4500W、5000W、5500W、6000W、6500W、7000W、7500W)。

在一些实施方式中，在步骤Siii中，所述超声处理的时间为：5-10min(比如，6min、7min、8min、9min)。

本发明第五方面提供了本发明第一方面所述的制备方法，本发明第二方面所述的贝类活性肽，本发明第三方面所述的组合物或本发明第四方面所述的制备方法在制备单独使用或与其他制剂联合使用以用于活体预防氧化损伤、治疗氧化损伤、减缓氧化损伤和/或控制氧化损伤进程的制剂中的用途。

在一些实施方式中，所述制剂为护肤品或化妆品。

在一些实施方式中，所述制剂的剂型选自：脂质体化妆品、膏霜、水剂、乳液、粉剂、凝胶、喷雾和面膜。

本发明的产品具备以下一些优点：

(1)原料采用具有良好抗氧化活性的贝类活性小肽；

(2)将贝类活性小肽和营养物质包封于脂质体里；

(3)工艺过程和制备技术优势；

(4)配方的合理性和组合物的性能优异性。

附图说明

图1为贝类活性肽脂质体复合体对小鼠心肌细胞MDA含量的影响柱状图。

图2为贝类活性肽脂质体复合体对小鼠心肌细胞SOD活性的影响柱状图。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明实施方式作进一步地详细描述。

材料

石榴籽精华：主要活性成分为石榴籽多酚，含量8wt％。购买自陕西昊辰生物科技有限公司。

牛奶精华为产自Symrise的

实施例1

预处理步骤：将新鲜贝类(三角帆蚌)去除全脏器，经冰水洗净，清除杂质部分并去除内脏团，得到贝壳和外套膜。

将净选后的贝壳加入砂轮除尘机中，磨去珍珠母外部表面的角质层和中间的棱柱层，得到珍珠母。将珍珠母依次进行粗粉碎和微粉碎处理，终粒度约为80-100目。

并用酶解液对经粗粉碎和微粉碎的珍珠母进行初步的壳质酶解，具体为珍珠母内层喷入酶解液，酶解液中使用的木瓜蛋白酶活性为10万单位/g，溶剂为浓度为40mg/mL的乳酸水溶液，木瓜蛋白酶在乳酸水溶液中的浓度为0.05mg/mL，蛋白酶干重与珍珠母质量比＝10

水解酶(木瓜蛋白酶)在活化液(浓度为1～6％的乳酸液)的作用下珍珠母内层未剥落的杂色物质充分反应，使珍珠母内层未剥落的杂色物质与珍珠母内层彻底剥落脱离。

用清水把酶解的珍珠母和外套膜一并清洗干净，沥干后于烘箱中烘干，得到干燥的珍珠母和外套膜混合物。

用捣碎机把干燥的珍珠母和外套膜混合物制备成粉末，粉末过60目筛，取筛下物，得到珍珠母和外套膜混合物干粉，备用。

定向酶解步骤：将珍珠母和外套膜混合物干粉进行定向蛋白酶酶解处理，蛋白酶为20万U/g的胃蛋白酶，酶干重与酶解反应体系(酶、缓冲液以及珍珠母和外套膜混合物)中的质量百分比为3％，缓冲液为25mM的碳酸氢铵缓冲液，珍珠母和外套膜混合物干粉在反应体系中的用量为20g/L，处理时间为4h，90℃灭酶处理30min，3000rpm条件下离心处理10min，去除沉淀，得到珍珠母酶解液，并将其进行超滤处理，选用分子截留量为3000Da的超滤膜，超滤压力为0.12MPa，得到过滤后的珍珠母超滤液，干燥滤液后得到贝类活性肽粉(其中包含珍珠母内层蛋白酶解物和外套膜蛋白酶解物)。干燥的步骤为：在真空度80～90KPa下，将超滤液通过雾化器，聚化成10～200目的雾状微粒，雾状颗粒与热空气直接接触进行热交换，短时间完成干燥，干燥时间为10～15min。

脂质体制备过程：取大豆卵磷脂200g、胆固醇55g和聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯50g溶解于100ml乙醚溶剂中，恒温50℃减压旋转蒸发掉有机溶剂乙醚，使大豆卵磷脂在蒸发溶器底形成一层薄膜后，加入前述乙醚体积1/3的0.3mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(pH2.5)，用盐酸调节到pH2.5，继续旋转蒸发水分30分钟，用0.45微米滤膜过滤后得到空白脂质体溶液。

脂质体包裹过程：在前述空白脂质体溶液中加入24g的贝类活性肽粉，并辅以8.5g石榴籽精华、8g牛奶精华、5ml食用甘油和5g维生素E，混合均匀，使用饱和Na

实施例2

预处理步骤：将新鲜贝类(三角帆蚌)去除全脏器，经冰水洗净，清除杂质部分并去除内脏团，得到贝壳和外套膜。

将净选后的贝壳加入砂轮除尘机中，磨去珍珠母外部表面的角质层和中间的棱柱层，得到珍珠母。将珍珠母依次进行粗粉碎和微粉碎处理，终粒度约为80-100目。

并用酶解液对经粗粉碎和微粉碎的珍珠母进行初步的壳质酶解，具体为珍珠母内层喷入酶解液，酶解液中使用木瓜蛋白酶活性为10万单位/g，溶剂为浓度为40mg/mL的乳酸水溶液，木瓜蛋白酶在乳酸水溶液中的浓度为0.05mg/mL，蛋白酶干重与珍珠母质量比＝10

水解酶(木瓜蛋白酶)在活化液(浓度为1～6％的乳酸液)的作用下珍珠母内层未剥落的杂色物质充分反应，使珍珠母内层未剥落的杂色物质与珍珠母内层彻底剥落脱离。

用清水把酶解的珍珠母和外套膜一并清洗干净，沥干后于烘箱中烘干，得到干燥的珍珠母和外套膜混合物。

用捣碎机把干燥的珍珠母和外套膜混合物制备成粉末，粉末过100目筛，取筛下物，得到珍珠母和外套膜混合物干粉，备用。

定向酶解步骤：将珍珠母和外套膜混合物干粉进行定向蛋白酶酶解处理，蛋白酶为20万U/g的胰蛋白酶，酶干重在酶解反应体系(酶、缓冲液以及珍珠母和外套膜混合物)中的质量百分比为3％，酶反缓冲液为25mM的碳酸氢铵缓冲液，珍珠母和外套膜混合物干粉在反应体系中的用量为50g/L，处理时间为4h，90℃灭酶处理30min，3000rpm条件下离心处理10min，去除沉淀，得到珍珠母酶解液，并将其进行超滤处理，选用分子截留量为3000Da的超滤膜，超滤压力为0.12MPa，得到过滤后的珍珠母超滤液，干燥滤液后得到贝类活性肽粉(其中包含珍珠母内层蛋白酶解物和外套膜蛋白酶解物)。干燥的步骤为：在真空度80～90KPa下，将超滤液通过雾化器，聚化成10～200目的雾状微粒，雾状颗粒与热空气直接接触进行热交换，短时间完成干燥，干燥时间为10～15min。

脂质体制备过程：取大豆卵磷脂200g、胆固醇55g和聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯50g溶解于100ml乙醚溶剂中，恒温50℃减压旋转蒸发掉有机溶剂乙醚，使大豆卵磷脂在蒸发溶器底形成一层薄膜后，加入前述乙醚体积1/3的0.3mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(pH2.5)，用盐酸调节到pH2.5，继续旋转蒸发水分30分钟，用0.45微米滤膜过滤后得到空白脂质体溶液。

脂质体包裹过程：在前述空白脂质体溶液中加入24g的贝类活性肽粉，并辅以8.5g石榴籽精华、8g牛奶精华、5ml食用甘油和5g维生素E，混合均匀，使用饱和Na

实施例3

预处理步骤：将新鲜贝类(三角帆蚌)去除全脏器，经冰水洗净，清除杂质部分并去除内脏团，得到贝壳和外套膜。

将净选后的贝壳加入砂轮除尘机中，磨去珍珠母外部表面的角质层和中间的棱柱层，得到珍珠母。将珍珠母依次进行粗粉碎和微粉碎处理，终粒度约为80-100目。

并用酶解液对经粗粉碎和微粉碎的珍珠母进行初步的壳质酶解，具体为珍珠母内层喷入酶解液，酶解液中木瓜蛋白酶活性为10万单位/g，溶剂为浓度为40mg/mL的乳酸水溶液，木瓜蛋白酶在乳酸水溶液中的浓度为0.05mg/mL，蛋白酶干重与珍珠母质量比＝10

水解酶(木瓜蛋白酶)在活化液(浓度为1～6％的乳酸液)的作用下珍珠母内层未剥落的杂色物质充分反应，使珍珠母内层未剥落的杂色物质与珍珠母内层彻底剥落脱离。

用清水把酶解的珍珠母和外套膜一并清洗干净，沥干后于烘箱中烘干，得到干燥的珍珠母和外套膜混合物。

用捣碎机把干燥的珍珠母和外套膜混合物制备成粉末，粉末过60目筛，取筛下物，得到珍珠母和外套膜混合物干粉，备用。

定向酶解步骤：将珍珠母和外套膜混合物干粉进行定向蛋白酶酶解处理，蛋白酶为20万U/g的枯草杆菌蛋白酶，酶干重与酶解反应体系(酶、缓冲液以及珍珠母和外套膜混合物)中的质量比为3％，酶反应液为0.02mol/L，pH7.5磷酸缓冲液，珍珠母和外套膜混合物干粉在反应体系中的用量为20g/L，处理时间为4h，90℃灭酶处理30min，3000rpm条件下离心处理10min，去除沉淀，得到珍珠母酶解液，并将其进行超滤处理，选用分子截留量为3000Da的超滤膜，超滤压力为0.12MPa，得到过滤后的珍珠母超滤液，干燥滤液后得到贝类活性肽粉(其中包含珍珠母内层蛋白酶解物和外套膜蛋白酶解物)。干燥的步骤为：在真空度80～90KPa下，将超滤液通过雾化器，聚化成10～200目的雾状微粒，雾状颗粒与热空气直接接触进行热交换，短时间完成干燥，干燥时间为10～15min。

脂质体制备过程：取大豆卵磷脂200g、胆固醇55g和聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯50g溶解于100ml乙醚溶剂中，恒温50℃减压旋转蒸发掉有机溶剂乙醚，使大豆卵磷脂在蒸发溶器底形成一层薄膜后，加入前述乙醚体积1/3的0.3mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(pH2.5)，用盐酸调节到pH2.5，继续旋转蒸发水分30分钟，用0.45微米滤膜过滤后得到空白脂质体溶液。

脂质体包裹过程：在前述空白脂质体溶液中加入24g的贝类活性肽粉，并辅以8.5g石榴籽精华、8g牛奶精华、5ml食用甘油和5g维生素E，混合均匀，使用饱和Na

对比例1：

其他条件和操作与实施例2相同，在预处理步骤中省略了酶解步骤，得到产品B1。

由于无法使珍珠内层蛋白充分暴露，珍珠母活性小肽量较少，B1的抗氧化能力明显低于A2。

对比例2：

其他条件和操作与实施例2相同，省略了定向酶解步骤，直接采用珍珠母干粉制备脂质体，得到产品B2。

由于珍珠蛋白无法分解成小肽，B2的抗氧化能力明显低于A2。

对比例3：

其他条件和操作与实施例2相同，在脂质体处理步骤中省略了材料食用甘油，得到产品B3。

B3美白、保湿效果明显低于A2。

对比例4：

其他条件和操作与实施例2相同，在脂质体处理步骤中省略了材料维生素E，得到产品B4。

B4抗氧化能力明显低于A2。

测试例1：贝类活性肽脂质体复合体的体外抗氧化作用实验

(1)DPPH·自由基清除率的测定：

按照文献《鸡源胶原蛋白肽的酶法提取工艺及其自由基清除能力的研究》(胡薇薇等人，食品工业，2014年第35卷第2期，144-119页)所记载的方法，取0.3g贝类活性肽脂质体复合体A2，置于50ml无水乙醇中，室温搅拌12h,得到样品溶液。

分别取2ml的样品溶液和DPPH溶液为Ai(样品抑制吸收值)；样品溶液和无水乙醇为Ac(样品对照)；DPPH溶液和无水乙醇为Aj(无抑制吸收值)；无水乙醇为无抑制吸收值对照。分别充分振荡混匀,室温静止30min后用1cm比色皿在517nm波长处测定吸收值(每个值同时测定两管)。

按照前述文献记载的方法，按照下述公式，计算得到DPPH·自由基清除率，结果参见表1。

其中，A

②羟自由基清除率：

按照文献《分光光度法测定中药对羟自由基的清除率》(陈冠华等人，光谱学与光谱分析，2002,22(4)，634-636页)所记载的方法，分别将前述样品水溶液分别配制一定质量浓度的溶液(浓度分别为：6mg/mL)，各取1.0mL，在一系列10mL带盖比色管中分别加入1.4mL结晶紫溶液(2×10

按照前述文献记载的方法，通过下述公式，计算得到羟自由基清除率，结果参见表1。代表：

D＝[(A

D代表：羟自由基清除率。

A

A代表：未加Fenton试剂和贝类活性肽脂质体复合体的体系吸光度；

A

③超氧阴离子自由基(ABTS

按照文献《鸡源胶原蛋白肽的酶法提取工艺及其自由基清除能力的研究》(胡薇薇等人，食品工业，2014年第35卷第2期，144-119页)所记载的方法，超氧阴离子自由基清除率的测定采用邻苯三酚法。在325nm波长下测定相应吸光度，结果以VC作阳性对照。

按照前述文献记载的方法，计算得到超氧阴离子自由基清除率，结果参见表1。

表1活性珍珠亮白肽对自由基的清除能力

由此可见，A2对前述三种自由基的清楚能力较强。

测试例2：贝类活性肽脂质体复合体抗氧化和清除自由基活性的体内测试

选取体重20-22g健康成年雄性昆明鼠，随机分为贝类活性肽脂质体复合体A2组(positive)及自来水对照组(black)。按照50mg/kg小鼠体重的剂量，每天干预一次，连续灌胃7天，测定血清中SOD活性及MDA含量的变化。

测定血清中SOD活性的方法为：采用北京百奥莱博科技有限公司的试剂盒进行测试。

测定血清中MDA含量的方法为：采用北京百奥莱博科技有限公司的试剂盒进行测试。

贝类活性肽脂质体复合体对小鼠心肌细胞MDA含量的影响参见图1。

贝类活性肽脂质体复合体对小鼠心肌细胞SOD活性的影响参见图2。

从图1中可见，A2能够显著降低小鼠心肌细胞MDA含量，因此能够缓解或修复氧化损伤。纵坐标为MDA数值，单位为nmol/mg。

从图2中可见，A2能够显著提高小鼠心肌细胞SOD活性，因此能够降低体内氧自由基等氧化性损伤物质。纵坐标为SOD数值，单位为U/mg。

综上所述，本发明采用珍珠母作为主要原料，通过优化酶解工艺，制备具有较强抗氧化活性的定向酶解产物，进一步分离纯化得到活性最强的抗氧化组分，得到抗氧化小肽产品，且上述珍珠抗氧化活性亮白肽作为有效成分应用到美白类化妆品的制备中具有广泛地应用前景和巨大的商业价值。

由技术常识可知，本发明可以通过其它的不脱离其精神实质或必要特征的实施方案来实现。因此，上述公开的实施方案，就各方面而言，都只是举例说明，并不是仅有的。所有在本发明范围内或在等同于本发明的范围内的改变均被本发明包含。