公开/公告号CN112823799A
专利类型发明专利
公开/公告日2021-05-21
原文格式PDF
申请/专利权人 安迪博斯生命医学研发(天津)有限公司;
申请/专利号CN201911129005.3
申请日2019-11-18
分类号A61K35/28(20150101);A61P29/00(20060101);A61P19/02(20060101);
代理机构
代理人
地址 300300 天津市东丽区东丽开发区五经路16号6号楼二层
入库时间 2023-06-19 11:03:41
技术领域
本发明涉及医药领域,尤其涉及一种治疗膝骨关节炎的药物组合物制备方法及其应用。
背景技术
膝骨关节炎(knee degenerative ostearthrosis,KOA)以骨刺形成及软骨退变为主,多见于中老年人,随年龄增长症状逐渐加重。膝骨关节炎常见的症状是疼痛及患肢功能障碍、肌力退变等。常规治疗方法主要是改善关节功能及缓解疼痛为主。但是常规治疗时患者往往症状反复发作。虽然应用非类固醇类消炎药能够缓解疼痛,但不能祛除病因,无法延缓或逆转关节软骨的退变,且停药后易复发和造成消化系统及肝肾功能损害。
膝骨关节炎最为常见的治疗方法主要是以药物为主的治疗方法,目前常用的治疗人膝骨关节炎的药物主要有对乙酰氨基酚、非甾体类消炎药、双瑞醋因等。对已酰氨基酚对人膝骨关节炎的治疗机制目前还不是十分清楚。但是它对老年人膝骨关节炎的病症有缓解疼痛的作用,而且服用对已酰氨基酚所产生的不良反应与布洛芬相比较为轻微,但是却没有明显的消除炎症的作用。非甾体类消炎药具有防止软骨被破坏的疗效,这主要是通过抑制前列腺素的合成而形成的治疗人膝骨关节炎的方法。但是,不是所有的非甾体类消炎药都可以进行人膝骨关节炎的治疗。许多老年人服用非甾体类消炎药会产生诸如溃疡、胃肠道不适和肾毒性等不良反应。双瑞醋因作为治疗人膝骨关节炎的慢性药物,主要产生于大黄提取物,通过抑制氧自由基的产生和释放来稳定溶酶体膜的同时导致金属蛋白酶的活性被抑制。这些机制共同运作导致关节软骨的抗炎性增强,使得关节软骨得到保护。
除了上述的药物治疗外,还可以通过手术的方式进行治疗,主要就是关节清理术和软骨下骨钻孔术。目前手术进行关节清理术仍然存在众多的争议,临床对比实验表明,关节清理术只适用于人膝骨关节炎早期。其次,软骨下骨钻孔手术可以伴随着关节清洁术同时进行。软骨下骨钻孔手术的机制是由于机械的原因使得关节软骨破裂,造成关节内部出现出血现象和纤维蛋白导致凝块。与此同时,关节腔内滞留的未分化的细胞经过分化形成了软骨细胞,形成一种与周围软骨组织不同的软骨组织。这种软骨组织无法起正常的软骨组织修复关节表面的作用。
发明内容
本发明旨在一定程度上解决上述相关技术中的技术问题之一。因此,本发明的目的在于提出一种治疗膝骨关节炎的药物组合物制备及其应用,具有膝关节疼痛减轻,痉挛缓解,改善膝关节功能的优点。
为解决上述问题,本发明采用的技术方案是:一种治疗膝骨关节炎的药物组合物制备方法包括:自体脂肪采集、自体脂肪微片段的获取、脂肪间充质干细胞的培养、配制制剂。
所述自体脂肪采集:制备柯氏液:生理盐水500ml、2%利多卡因50ml及0.1%肾上腺素1ml。术中患者在手术台上取仰卧位,充分暴露患者腹部,常规消毒后铺无菌洞巾。于两侧髂前上棘上方5cm处给予局部麻醉后使用麻醉穿刺针于每侧取脂肪部位使用120ml配制的柯氏液进行充分浸润麻醉,麻醉成功后等待5-10min后再行取脂操作,穿刺针获取的脂肪组织,静置3-5min后转移至盛有100ml保存液的脂肪采集瓶,所述脂肪保存液包含79%DMEM、20%人血白蛋白、0.5%青霉素、0.5%链霉素,采集瓶4℃保存。
所述自体脂肪微片段的获取:利用微片段分离装置分离采集的自体脂肪组织,获得脂肪微片段,取出一部分进行冻存,用于冻存的冻存液成分包括:自体血浆和透明质酸钠,获得的自体脂肪微片段与冻存液按照体积比1:1的比例进行冻存,冻存的自体脂肪微片段组织悬液按照如下特定的冻存程序保存。
S1:为将样本以每分钟降低1℃的速度降温至-9.5℃,
S2:步是设置箱体温度以每分钟降低2℃的速度降温至-22℃,
S3:是箱体温度以每分钟降低10℃的速度降低至-35℃,
S4:是样本以每分钟降低0.5℃的速度降低至-47℃,
S5:是样本以每分钟降低1℃的速度降温至-65℃,
S6:是样本以每分钟降低10℃的速度降低至-90℃。
所述脂肪间充质干细胞的培养:将自体脂肪微片段,联合二、四型胶原酶于37℃消化60min,间或摇晃,1000rpm/min,15min,吸弃上层脂肪后,混匀用200目筛网过滤。所获得的细胞悬液1200r/min,离心8min,细胞沉淀用PBS洗涤后,调细胞密度为8.0×10
所述配制制剂:脂肪间充质干细胞培养至P5代时,用胰酶消化后收集细胞,1200rpm/min,15min,弃上清,用含有自体10%PRP(自体血清)的生理盐水进行重悬,调整细胞浓度至1×10
一种应用本发明所述的治疗膝骨关节炎的药物组合物的制备方法制备的制剂的应用,包括给药治疗:患者术中采取平卧位,接受治疗侧膝关节伸直,保持足中立位。穿刺部位充分消毒,关节积液较多的患者先尽量抽尽积液,使用关节镜清碎片。穿刺成功后保留针头注入制备好的制剂约5ml-15ml,注射后来回屈伸活动关节数次。
本发明的有益效果是:注射应用本发明制备的制剂后,膝关节疼痛减轻,痉挛缓解,改善膝关节功能。
附图说明
为了更清楚地说明本发明或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为应用本发明制备的制剂治疗6个月后,治疗前后MRI检查图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行具体描述。
自体脂肪采集:备500ml生理盐水、2%利多卡因50ml及0.1%肾上腺素1ml,术中制备成柯氏液,准备手术。术中患者在手术台上取仰卧位,充分暴露患者腹部,常规消毒后铺无菌洞巾。于两侧髂前上棘上方5cm处给予局部麻醉后使用麻醉穿刺针于每侧取脂肪部位使用120ml柯氏液进行充分浸润麻醉,麻醉成功后等待5-10min后再行取脂操作,穿刺针获取的脂肪组织,静置3-5min后转移至盛有100ml保存液,所述保存液包含79%的DMEM 79ml、20%的人血白蛋白20ml、0.5%的青霉素0.5ml、0.5%的链霉素0.5ml,采集瓶4℃保存。
自体脂肪微片段的获取:利用微片段分离装置分离采集的自体脂肪组织,获得脂肪微片段,取出一部分进行冻存,用于冻存的冻存液成分包括:自体血浆和透明质酸钠,获得的自体脂肪微片段与冻存液按照1:1的比例进行冻存,冻存的自体脂肪微片段组织悬液按照如下特定的冻存程序保存。
S1:为将样本以每分钟降低1℃的速度降温至-9.5℃,
S2:步是设置箱体温度以每分钟降低2℃的速度降温至-22℃,
S3:是箱体温度以每分钟降低10℃的速度降低至-35℃,
S4:是样本以每分钟降低0.5℃的速度降低至-47℃,
S5:是样本以每分钟降低1℃的速度降温至-65℃,
S6:是样本以每分钟降低10℃的速度降低至-90℃。
脂肪间充质干细胞的培养:将自体脂肪微片段,联合二、四型胶原酶于37℃消化60min,间或摇晃,1000rpm/min,15min,吸弃上层脂肪后,混匀用200目筛网过滤。所获得的细胞悬液1200r/min,离心8min,细胞沉淀用PBS洗涤后,调细胞密度为8.0×10
配制制剂:脂肪间充质干细胞培养至P5代时,用胰酶消化后收集细胞,120rpm/min,15min,弃上清,用含有自体10%PRP(自体血清)的生理盐水进行重悬,调整细胞浓度至1×10
给药治疗:患者术中采取平卧位,接受治疗侧膝关节伸直,保持足中立位。穿刺部位充分消毒,关节积液较多的患者先尽量抽尽积液,使用关节镜清碎片。穿刺成功后保留针头注入制备好的制剂约10ml,注射后来回屈伸活动关节数次。
患者A,男,57岁,右膝关节疼痛6年余,表现为局部关节疼痛,压痛,僵硬,关节肿胀,活动受限且关节发生畸形,注射应用本发明制备的制剂治疗6个月后,治疗前后MRI检查对比如图1所示,患者疼痛明显减缓,vas评分良好,HSS评分优良。
以上对本发明进行了详细介绍。本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述,以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出对本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以对本发明进行若干改进和修饰,这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。
机译: 化合物,其制备方法,药物组合物,抑制二肽基肽酶-iv的方法,用于治疗由抑制二肽基肽酶-iv介导的疾病,提高的胰岛新生,b细胞存活和胰岛素生物合成的疾病的患者治疗或控制糖尿病,高血糖,肥胖,胰岛素抵抗,一种或多种疾病,动脉粥样硬化,哺乳动物患者的一种或多种疾病,中性粒细胞减少和贫血的一种或多种疾病,以治疗或控制生长激素缺乏症和艾滋病毒感染在哺乳动物患者中,调节哺乳动物患者的免疫反应,减少精子运动,并产生药物组合物,以及药物组合
机译: 包合物,一种分离环糊精衍生物的方法,一种制备环糊精衍生物的方法,一种分离的环糊精单取代的方法。提高溶解度的方法,环糊精衍生物,药物组合物,一种治疗宿主动物的方法,组合物cromatografica,偶联的环糊精包合物的制备方法,提供环糊精包合物的药物稳定剂的过程。向宿主动物供应药物的方法,包合物的制备方法,直肠
机译: 式(i)的化合物,式(ii)的化合物,式(iii)的化合物,式(i)的化合物的制备方法,式(ii)的化合物的制备方法,式(iii)的化合物的制备方法,药物组合物,抑制细胞中一个或多个垫家族的方法,治疗由一个或多个垫介导的病症的方法,该化合物的用途,用于治疗和/或预防由一种或多种疾病介导的病症的方法垫家族,类风湿关节炎的治疗方法和癌症的治疗方法