宽胸气雾剂中檀香油掺伪的鉴别方法

摘要

本发明公开了一种宽胸气雾剂中檀香油掺伪的鉴别方法，该方法是采用GC‑MS/MS法或GC法对宽胸气雾剂中檀香油进行检测，得到檀香油的色谱图，并通过计算α‑檀香醇的峰面积与反式,反式‑金合欢醇的峰面积的比值或β‑檀香醇的峰面积与反式,反式‑金合欢醇的峰面积的比值，判断檀香油的真伪；又或者通过计算反式,反式‑金合欢醇在宽胸气雾剂中的含量，以反式,反式‑金合欢醇含量判断檀香油的真伪。采用本发明的鉴别方法对宽胸气雾剂中檀香油进行真伪鉴定，成本低、时间短、操作简便，且检测结果较为准确。通过本发明的鉴别方法对宽胸气雾剂中檀香油进行鉴定，可以有效保证宽胸气雾剂的疗效以及用药安全，为宽胸气雾剂的质量标准建立奠定了基础。

说明书

技术领域

本发明涉及中医药质量检测技术领域，具体是一种宽胸气雾剂中檀香油掺伪的鉴别方法。

背景技术

宽胸气雾剂由檀香油、高良姜油、细辛油、荜茇油、冰片5味药构成，具有辛温通阳、理气止痛等功效，用于阴寒阻滞、气机郁闭所致的胸痹。宽胸气雾剂是依据“以通为补、以通为主”的“芳香温通”理论研制的中药气雾剂，是治疗冠心病、心绞痛的速效止痛的有效方剂。宽胸气雾剂主要组分为挥发油，呈分子状态分布，能够快速被人体吸收入血，扩张冠脉血管，显著改善心肌缺血，快速缓解胸闷、胸痛、心悸、气短、乏力等心绞痛症状，同时无耐药性，不良反应少，安全性高。

宽胸气雾剂现行标准为《中国药典》2015年版第一增补本，在检验过程中本申请人发现檀香油的薄层鉴别主斑点有拖尾现象。李丽月采用2010年《中国药典》一部薄层色谱法（附录ⅥB）对32批多个地区市售的檀香药材挥发油进行薄层色谱鉴别，并与檀香油对照品薄层行为进行对比分析。结果所得薄层图谱图大部分较为模糊，近看斑点颜色有扩散现象。同时，由于檀香油中主成分的相对含量较大，斑点较大，易形成拖尾现象；但如果减少点样量，其他相对含量较低的成分则显示不出来，难以得到分离效果好，斑点清晰的薄层色谱图，难以对样品挥发油质量作出合理的判断。当中，涉及的影响因素较多，产地不同、生长年限不同、用药部位不同、批次不同抑或掺假掺伪等都可能导致檀香药材成分明显差异，使其难以在同一薄层条件下得到较好的分离效果，以致大部分斑点模糊不清，不利于进行批间对比和归类。由此可见，单凭现行标准的薄层色谱鉴别法用于檀香药材的鉴别缺乏准确、全面的信息，不能准确地评价檀香药材挥发油的质量，难以判断檀香药材的真伪。

专利申请CN 106226447 A公开了一种宽胸气雾剂的质量检测方法，为十六烷或萘作为参照物的气相色谱法。柱温的程序升温步骤：初始温度为110℃，以5℃/min的速率升温至160℃，以1℃/min的速率升温至166℃，保持5分钟，以0.5℃/min的速率升温至167℃，保持5分钟，以0.5℃/min的速率升温至168℃，保持2分钟，以10℃/min的速率升温至230℃，保持5分钟。气相色谱条件还包括：采用的载气选自氮气、氦气、二氧化碳或氢气；载气流速为每分钟0.4～0.8mL；载气采用恒流方式，分流比为20:1。通过气相色谱图中在相对保留时间为1.390和1.420的规定位置是否存在特征峰来判断所述宽胸气雾剂的质量；其中，所述的相对保留时间表示所述宽胸气雾剂的特征峰的保留时间与参照物的特征峰的保留时间之间的比值，所述规定位置存在±5％的偏差。该质量检测方法选择十六烷或萘作为参照物，特别是选择十六烷作为参照物，使得宽胸气雾剂中组分的特征峰的定位更容易。该质量检测方法重点突出了宽胸气雾剂特征图谱中檀香油中组分的特征峰，从而更有利于宽胸气雾剂的质量控制和临床疗效的控制。专利申请CN 106361785 A公开了一种檀香油提取物及其用途。该檀香油提取物的气相色谱包括在保留时间为19.434、24.179、25.197、27.762、29.531和29.902处具有特征峰；该保留时间的单位为分钟，其偏差为±5％。以上两个专利申请均公开了檀香油的特征图谱测定，能够很好地体现出檀香油成分。但是本申请人研究发现其得到的檀香油对照特征图谱，与檀香油国际标准（ISO 3518：2002）所附檀香油典型气相特征图谱存在明显差异，且其檀香油对照特征图谱主要色谱峰没有得到良好的分离。因此，本申请人认为其所介绍的质量检测方法并不能很好地鉴别檀香油的真伪，以达到保证檀香油及宽胸气雾剂用药安全的目的。

现有技术也公开了一些采用气相色谱-质谱联用仪分析檀香药材或檀香油的成分并检测其成分含量的方法，但是在通过现有技术得到的色谱图中，各成分的分离效果并不是非常好，若将其用于药材的质量标准检测，准确率较低。为了保证檀香油及宽胸气雾剂的用药安全，本申请人提出了一种宽胸气雾剂中檀香油掺伪的鉴别方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种宽胸气雾剂中檀香油掺伪的鉴别方法，该方法是采用GC-MS/MS法或GC法对宽胸气雾剂中檀香油进行检测，得到檀香油的色谱图，并通过计算α-檀香醇的峰面积与反式,反式-金合欢醇的峰面积的比值或β-檀香醇的峰面积与反式,反式-金合欢醇的峰面积的比值，判断檀香油的真伪，又或者通过计算反式,反式-金合欢醇在宽胸气雾剂中的含量，以反式,反式-金合欢醇含量判断檀香油的真伪。该方法为檀香油及宽胸气雾剂的质量标准建立奠定了基础。

本发明的技术方案如下：

1、一种宽胸气雾剂中檀香油掺伪的鉴别方法，以檀香油为对照，采用GC-MS/MS法对宽胸气雾剂中檀香油进行检测，得到檀香油的色谱图，并通过峰面积的比值判定檀香油的真伪，具体如下：

（1）色谱条件：色谱柱：DB-FFAP；进样口温度：230℃；柱流速：1mL/min；进样量：1μL，脉冲分流进样，分流比20:1；柱温的升温程序：初始温度40℃，保持5min；再以10℃/min升温至210℃，保持5min。

（2）质谱条件：离子源:EI；扫描类型：全扫描；质量范围10～550amu，离子源温度：230℃；四极杆温度：150 ℃；电子能量：70eV；淬灭气：2.25mL/min；碰撞气：1.5mL/min。

（3）供试品溶液的制备：取宽胸气雾剂样品，喷出适量，加无水乙醇制成每1mL含2μL宽胸气雾剂的溶液，作为供试品溶液。

（4）檀香油对照溶液的制备：取檀香油对照品适量，加无水乙醇制成每1mL含1μL檀香油的溶液，作为檀香油对照溶液。

（5）测定：分别精密吸取上述檀香油对照溶液和供试品溶液各1μL，注入气相色谱质谱联用仪，测定，即得。

（6）判定：供试品色谱中，应呈现与檀香油对照溶液2个主峰色谱保留时间一致的色谱峰（α-檀香醇和β-檀香醇）；且供试品色谱中，不得出现与反式,反式-金合欢醇对照品保留时间一致的色谱峰，或供试品色谱中，α-檀香醇的峰面积与反式,反式-金合欢醇的峰面积的比值不得小于20。

2、一种宽胸气雾剂中檀香油掺伪的鉴别方法，以反式,反式-金合欢醇为对照品，采用GC-MS/MS法对宽胸气雾剂中檀香油进行检测，得到檀香油中反式,反式-金合欢醇的含量，并通过反式,反式-金合欢醇的含量判定檀香油的真伪，具体如下：

（1）色谱条件：色谱柱：DB-FFAP；进样口温度：230℃；柱流速：1mL/min；进样量：1μL，脉冲分流进样，分流比20:1；柱温的升温程序：初始温度40℃，保持5min；再以10℃/min升温至210℃，保持5min。

（2）质谱条件：离子源:EI；扫描类型：全扫描；质量范围10～550amu，离子源温度：230℃；四极杆温度：150 ℃；电子能量：70eV；淬灭气：2.25mL/min；碰撞气：1.5mL/min。

（3）供试品溶液的制备：取宽胸气雾剂样品，喷出适量，加无水乙醇制成每1mL含2μL宽胸气雾剂的溶液，作为供试品溶液。

（4）对照品溶液的制备：精密称取反式,反式-金合欢醇对照品适量，加甲醇制成每1mL含400μg反式,反式-金合欢醇的溶液，即得。

（5）测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1μL，注入气相色谱质谱联用仪，测定，即得。

（6）判定：每1mL宽胸气雾剂样品中含反式,反式-金合欢醇（C

3、一种宽胸气雾剂中檀香油掺伪的鉴别方法，以檀香油为对照，采用GC法对宽胸气雾剂中檀香油进行检测，得到檀香油的色谱图，并通过峰面积的比值判定檀香油的真伪，具体如下：

（1）色谱条件：色谱柱：DB-FFAP；进样口温度：240℃；柱流速：2.0mL/min；进样量：1μL，分流进样，分流比2:1。柱温的升温程序：初始温度40℃，保持5min；再以1℃/min的升温速率升温至160℃，保持10min；随后以10℃/min的升温速率升温至210℃，保持5min。

（2）供试品溶液的制备：取宽胸气雾剂样品，喷出适量，加无水乙醇制成每1mL含20μL宽胸气雾剂的溶液，作为供试品溶液。

（3）檀香油对照溶液的制备：取檀香油对照品适量，加无水乙醇制成每1mL含10μL檀香油的溶液，作为檀香油对照溶液。

（4）测定：分别精密吸取檀香油对照溶液和供试品溶液各1μL，注入气相色谱仪，测定，即得。

（5）判定：供试品色谱中，应呈现与檀香油对照溶液2个主峰色谱保留时间一致的色谱峰（α-檀香醇和β-檀香醇）；且供试品色谱中，不得出现与反式,反式-金合欢醇对照品保留时间一致的色谱峰，或供试品色谱中，β-檀香醇的峰面积与反式,反式-金合欢醇的峰面积的比值不得小于20。

在判定前须先确定β-檀香醇和反式,反式-金合欢醇所对应的色谱峰，具体确定方式可以任选以下其中一种：

（1）增加β-檀香醇、反式,反式-金合欢醇的对照品溶液进样分析。

（2）采用GC-MS/MS法的色谱条件和质谱条件，将檀香油对照溶液注入气相色谱质谱联用仪进行测定分析，确定檀香油对照溶液色谱中α-檀香醇、β-檀香醇、反式,反式-金合欢醇各成分对应的色谱峰。

由于α-檀香醇和β-檀香醇对照品难以获得，因此优选以上方式（2）确定β-檀香醇和反式,反式-金合欢醇所对应的色谱峰。

4、一种宽胸气雾剂中檀香油掺伪的鉴别方法，以反式,反式-金合欢醇为对照品，采用GC法对宽胸气雾剂中檀香油进行检测，得到檀香油中反式,反式-金合欢醇的含量，并通过反式,反式-金合欢醇的含量判定檀香油的真伪，具体如下：

（1）色谱条件：DB-FFAP；进样口温度：240℃；柱流速：2.0mL/min；进样量：1μL，分流进样，分流比2:1。柱温的升温程序：初始温度40℃，保持5min；再以1℃/min的升温速率升温至160℃，保持10min；随后以10℃/min的升温速率升温至210℃，保持5min。

（2）对照品溶液的制备：精密称取反式,反式-金合欢醇对照品适量，加甲醇制成每1mL含400μg反式,反式-金合欢醇的溶液，即得。

（3）供试品溶液的制备：取宽胸气雾剂样品，喷出适量，加无水乙醇制成每1mL含20μL宽胸气雾剂的溶液，作为供试品溶液。

（4）测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1μL，注入气相色谱仪，测定，即得。

（5）判定：每1mL宽胸气雾剂样品中含反式,反式-金合欢醇（C

以上采用GC法或GC-MS/MS法鉴别宽胸气雾剂中檀香油真伪的方法还适用于对檀香或檀香油样品进行鉴别及反式,反式-金合欢醇含量检测。

本发明的有益效果是：

在本发明的鉴别方法中，采用GC-MS/MS法或GC法对宽胸气雾剂中檀香油进行检测，得到檀香油的色谱图，并通过计算α-檀香醇的峰面积与反式,反式-金合欢醇的峰面积的比值或β-檀香醇的峰面积与反式,反式-金合欢醇的峰面积的比值，判断檀香油的真伪。仅通过峰面积的比值即可判断出是否存在檀香油掺伪的现象，无需准确知道各成分的具体含量，操作简单，成本低。另外采用GC-MS/MS法进行鉴别，可以确定各成分所对应的特征峰，无需使用各成分的对照品，当对照品难以获得或者成本高时，该方法的可行性更高；而使用GC法进行鉴别，气相色谱仪的成本更低。在GC-MS/MS法鉴别中，由于α-檀香醇MS响应值比β-檀香醇MS响应值更大，且α-檀香醇分离效果好，所以选择α-檀香醇的峰面积与反式,反式-金合欢醇的峰面积的比值作为判断依据，判断结果更加准确。在GC法鉴别中，由于部分掺伪样品α-檀香醇有杂质峰干扰，难以有效分离，而β-檀香醇色谱分离好，所以选择β-檀香醇的峰面积与反式,反式-金合欢醇的峰面积的比值作为判断依据，判断结果更加准确。

由于α-檀香醇和β-檀香醇对照品难以获得，而反式,反式-金合欢醇相对更易得，综合现有学者研究发现檀香Santalum album L中反式,反式-金合欢醇含量很低而其他种檀香中反式,反式-金合欢醇含量高，澳洲檀香Santalum spicatum不是药典收载的檀香品种，是檀香掺伪品。本申请人研究了，以反式,反式-金合欢醇作为对照品，采用GC-MS/MS法或GC法对宽胸气雾剂中檀香油进行检测，通过计算反式,反式-金合欢醇在宽胸气雾剂中的含量，以反式,反式-金合欢醇含量判断檀香油真伪的方法。该方法仅需要少量反式,反式-金合欢醇作为对照品即可得到各待测物中反式,反式-金合欢醇的含量，通过将测得的反式,反式-金合欢醇含量与设定的反式,反式-金合欢醇限量进行对比，即可判断所测物中檀香油的真伪，成本低，操作简单，结果准确。本发明所介绍的四种鉴别方法中，采用任意一种进行鉴别即可判断所测物中檀香油的真伪，为檀香油及宽胸气雾剂的质量标准建立奠定了基础。

附图说明

图1是由中国食品药品检定研究院（简称中检院）提供的檀香油对照品1（批号：201906）的GCMS总离子流图，图中标识：1表示α-檀香醇、2表示β-檀香醇。

图2是由A公司提供的宽胸气雾剂样品（批号190202）的GCMS总离子流图，图中标识：1表示α-檀香醇、2表示β-檀香醇、3表示反式,反式-金合欢醇。

图3是反式,反式-金合欢醇对照品的GCMS总离子流图。

图4是由中国食品药品检定研究院（简称中检院）提供的檀香油对照品1（批号：201906）的GC图谱。

图5是由A公司提供的宽胸气雾剂样品（批号190202）的GC图谱。

图6是反式,反式-金合欢醇对照品的GC图谱。

图7是老山檀香（正品檀香）的GCMS总离子流图，图中标识：1表示α-檀香醇、2表示β-檀香醇。

图8是由A公司提供的檀香油（批号190414）的GCMS总离子流图，图中标识：1表示α-檀香醇、2表示β-檀香醇、3表示反式,反式-金合欢醇。

图9是西澳檀香1（檀香伪品）的GCMS总离子流图，图中标识：1表示α-檀香醇、2表示β-檀香醇、3表示反式,反式-金合欢醇。

图10是由A公司提供的檀香油（批号190414）的GC图谱。

图11是西澳檀香1（檀香伪品）的GC图谱。

图12是反式,反式-金合欢醇对照品、缺檀香油宽胸气雾剂阴性样品的GC图谱对比图。

图13是檀香油对照品1、A公司提供的檀香油（批号190414）、A公司提供的宽胸气雾剂样品（批号190202）、宽胸气雾剂模拟样品、缺檀香油宽胸气雾剂阴性样品、反式,反式-金合欢醇对照品的GCMS总离子流图对比图。

图14是反式,反式-金合欢醇的标准曲线图。

具体实施方式

为了更加详细的介绍本发明，下面结合实施例，对本发明做进一步说明。

实施例1

一种宽胸气雾剂中檀香油掺伪的鉴别方法，以檀香油为对照，采用GC-MS/MS法对宽胸气雾剂中檀香油进行检测，得到檀香油的色谱图，并通过峰面积的比值判定檀香油的真伪，具体如下：

仪器：安捷伦7000B GC-MS/MS气相色谱质谱联用仪

（1）色谱条件：色谱柱：DB-FFAP(30m×0.25mm×0.25μm)；进样口温度：230℃；柱流速：1mL/min；进样量：1μL，脉冲分流进样，分流比20:1；柱温的升温程序：初始温度40℃，保持5min；再以10℃/min升温至210℃，保持5min。

（2）质谱条件：离子源:EI；扫描类型：全扫描；质量范围10～550amu，离子源温度：230℃；四极杆温度：150 ℃；电子能量：70eV；淬灭气(氦气)：2.25mL/min；碰撞气(氮气)：1.5mL/min。

（3）供试品溶液的制备：取宽胸气雾剂样品，喷出适量，加无水乙醇制成每1mL含2μL宽胸气雾剂的溶液，作为供试品溶液。

（4）檀香油对照溶液的制备：取檀香油对照品适量，加无水乙醇制成每1mL含1μL檀香油的溶液，作为檀香油对照溶液。

（5）测定：分别精密吸取上述檀香油对照溶液和供试品溶液各1μL，注入气相色谱质谱联用仪，测定，即得。

（6）判定：供试品色谱中，应呈现与檀香油对照溶液2个主峰色谱保留时间一致的色谱峰（α-檀香醇和β-檀香醇）；且供试品色谱中，不得出现与反式,反式-金合欢醇对照品保留时间一致的色谱峰，或供试品色谱中，α-檀香醇的峰面积与反式,反式-金合欢醇的峰面积的比值不得小于20。

本申请人按照以上GC-MS/MS鉴别方法对收集到的7批宽胸气雾剂样品进行了检测，结果见下表1和图1～2，7批宽胸气雾剂样品的供试品色谱中，均呈现与对照提取物2个主峰色谱保留时间一致的色谱峰，经NIST图库检索，确认这2个峰分别为α-檀香醇、β-檀香醇。但供试品色谱中，均出现反式,反式-金合欢醇对照品保留时间一致的色谱峰，且供试品色谱中，α-檀香醇的峰面积与反式,反式-金合欢醇的峰面积的比值均小于20，因此，7批宽胸气雾剂样品均不符合规定。

实施例2

一种宽胸气雾剂中檀香油掺伪的鉴别方法，以反式,反式-金合欢醇为对照品，采用GC-MS/MS法对宽胸气雾剂中檀香油进行检测，得到檀香油中反式,反式-金合欢醇的含量，并通过反式,反式-金合欢醇的含量判定檀香油的真伪，具体如下：

（1）色谱条件：色谱柱：DB-FFAP(30m×0.25mm×0.25μm)；进样口温度：230℃；柱流速：1mL/min；进样量：1μL，脉冲分流进样，分流比20:1；柱温的升温程序：初始温度40℃，保持5min；再以10℃/min升温至210℃，保持5min。

（2）质谱条件：离子源:EI；扫描类型：全扫描；质量范围10～550amu，离子源温度：230℃；四极杆温度：150 ℃；电子能量：70eV；淬灭气(氦气)：2.25mL/min；碰撞气(氮气)：1.5mL/min。

（3）供试品溶液的制备：取宽胸气雾剂样品，喷出适量，加无水乙醇制成每1mL含2μL宽胸气雾剂的溶液，作为供试品溶液。

（4）对照品溶液的制备：精密称取反式,反式-金合欢醇对照品适量，加甲醇制成每1mL含400μg反式,反式-金合欢醇的溶液，即得。

（5）测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1μL，注入气相色谱质谱联用仪，测定，即得。反式,反式-金合欢醇的GCMS总离子流图见图3。

（6）判定：每1mL宽胸气雾剂样品中含反式,反式-金合欢醇（C

实施例3

一种宽胸气雾剂中檀香油掺伪的鉴别方法，以檀香油为对照，采用GC法对宽胸气雾剂中檀香油进行检测，得到檀香油的色谱图，并通过峰面积的比值判定檀香油的真伪，具体如下：

仪器：安捷伦7890气相色谱仪，FID检测器。

（1）色谱条件：色谱柱：DB-FFAP(30m×0.32mm×0.25μm)；进样口温度：240℃；柱流速：2.0mL/min；进样量：1μL，分流进样，分流比2:1。柱温的升温程序：初始温度40℃，保持5min；再以1℃/min的升温速率升温至160℃，保持10min；随后以10℃/min的升温速率升温至210℃，保持5min。

（2）供试品溶液的制备：取宽胸气雾剂样品，喷出适量，加无水乙醇制成每1mL含20μL宽胸气雾剂的溶液，作为供试品溶液。

（3）檀香油对照溶液的制备：取檀香油对照品适量，加无水乙醇制成每1mL含10μL檀香油的溶液，作为檀香油对照溶液。

（4）测定：分别精密吸取檀香油对照溶液和供试品溶液各1μL，注入气相色谱仪，测定，即得。

（5）采用实施例1的GC-MS/MS鉴别方法确定α-檀香醇、β-檀香醇和反式,反式-金合欢醇所对应的特征峰。

（6）判定：供试品色谱中，应呈现与檀香油对照溶液2个主峰色谱保留时间一致的色谱峰（α-檀香醇和β-檀香醇）；且供试品色谱中，不得出现与反式,反式-金合欢醇对照品保留时间一致的色谱峰，或供试品色谱中，β-檀香醇的峰面积与反式,反式-金合欢醇的峰面积的比值不得小于20。

本申请人按照以上GC鉴别方法对收集到的7批宽胸气雾剂样品进行了检测，结果见表2和图4～5，7批宽胸气雾剂样品的供试品色谱中，均呈现与对照提取物2个主峰色谱保留时间一致的色谱峰，但供试品色谱中，均出现反式,反式-金合欢醇对照品保留时间一致的色谱峰，且供试品色谱中，β-檀香醇的峰面积与反式,反式-金合欢醇的峰面积的比值均小于20，因此，7批宽胸气雾剂样品均不符合规定。

实施例4

一种宽胸气雾剂中檀香油掺伪的鉴别方法，以反式,反式-金合欢醇为对照品，采用GC法对宽胸气雾剂中檀香油进行检测，得到檀香油中反式,反式-金合欢醇的含量，并通过反式,反式-金合欢醇的含量判定檀香油的真伪，具体如下：

（1）色谱条件：DB-FFAP(30m×0.32mm×0.25μm)；进样口温度：240℃；柱流速：2.0mL/min；进样量：1μL，分流进样，分流比2:1。理论板数按反式，反式-金合欢醇峰计算应不低于100000。柱温的升温程序：初始温度40℃，保持5min；再以1℃/min的升温速率升温至160℃，保持10min；随后以10℃/min的升温速率升温至210℃，保持5min。

（2）对照品溶液的制备：精密称取反式,反式-金合欢醇对照品适量，加甲醇制成每1mL含400μg反式,反式-金合欢醇的溶液，即得。

（3）供试品溶液的制备：取宽胸气雾剂样品，喷出适量，加无水乙醇制成每1mL含20μL宽胸气雾剂的溶液，作为供试品溶液。

（4）测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1μL，注入气相色谱仪，测定，即得。

（5）判定：每1mL宽胸气雾剂样品中含反式,反式-金合欢醇（C

本申请人按照以上GC鉴别方法对收集到的7批宽胸气雾剂样品进行了检测，结果见表3和图2～3，7批宽胸气雾剂样品的反式,反式-金合欢醇含量均远大于1.0mg/mL，因此，7批宽胸气雾剂样品均不符合规定。

实施例1-4分别采用4种方法对7批宽胸气雾剂进行鉴别，结果均表明该7批宽胸气雾剂样品均不符合规定，可见，4种方法都是可行的且检测结果较为准确。

其中，以上实施例1-4采用GC法或GC-MS/MS法鉴别宽胸气雾剂中檀香油真伪的方法还适用于对檀香或檀香油样品进行鉴别及反式,反式-金合欢醇含量检测。

本申请人共收集了23批檀香油或檀香样品，详细见表4。

将收集到的不同产地来源的檀香分别粉碎，同一样品混匀，取约80g，加水250mL，照挥发油测定法（《中国药典》2015年版通则2204）试验。自测定器上端加水使充满刻度部分并溢流入烧瓶时为止，连接回流冷凝管，加热至沸并保持微沸5小时，放冷，分取测定器中的挥发油置离心管中，加适量无水硫酸钠脱水，离心10分钟（5000转/分钟），分取挥发油，得到檀香油。

精密吸取檀香油100μL置50mL量瓶中，加乙醇定容至刻度，摇匀，作为GC法鉴别的供试品溶液，吸取各供试品溶液各1μL，注入气相色谱仪进行测定，计算β-檀香醇的峰面积与反式,反式-金合欢醇的峰面积的比值。

精密吸取檀香油10μL置50mL量瓶中，加乙醇定容至刻度，摇匀，作为GC-MS/MS法鉴别的供试品溶液，吸取各供试品溶液各1μL，注入气相色谱质谱联用仪进行测定，计算α-檀香醇的峰面积与反式,反式-金合欢醇的峰面积的比值。

按以上GC法测定不同产地来源的23批檀香油中反式,反式-金合欢醇的含量，并将不同产地来源的檀香油按宽胸气雾剂处方中檀香油的用量折算，计算用其入药时宽胸气雾剂样品中反式,反式-金合欢醇的含量。结果见表4和图7～11。

表4 23批檀香或檀香油测定结果

判定方法：1、当檀香油中反式,反式-金合欢醇折算入药含量大于1.0mg/mL时，所对应的檀香/檀香油为伪品；2、当β-檀香醇的峰面积与反式,反式-金合欢醇的峰面积的比值小于20时，所对应的檀香/檀香油为伪品；3、当α-檀香醇的峰面积与反式,反式-金合欢醇的峰面积的比值小于20，所对应的檀香/檀香油为伪品。

从表4可以看出，无论是以哪种判定方法进行判定，其结果都是一样的。而且以上23批檀香或檀香油中，编号为3、4、5的檀香药材经广西壮族自治区食品药品检验所黄清泉药师鉴定为正品檀香，编号7-23共17批檀香药材经广西壮族自治区食品药品检验所黄清泉药师鉴定为檀香伪品。而通过本发明的鉴别方法鉴定的结果与广西壮族自治区食品药品检验所黄清泉药师鉴定的结果完全一致，说明本发明的鉴定方法用于檀香或檀香油的真伪鉴定是可行的。

为了验证以上GC-MS/MS法和GC法的专属性，本申请人还对两种方法进行了阴性干扰试验：

（1）取缺檀香油的宽胸气雾剂阴性样品，加无水乙醇制成每1mL含20μL宽胸气雾剂阴性样品的溶液，作为阴性对照溶液，注入气相色谱仪进行测定。结果在反式,反式-金合欢醇峰相应的保留时间无色谱峰，表明处方中其它成分对测定无影响（见图12）。

（2）取缺檀香油的宽胸气雾剂阴性样品，加无水乙醇制成每1mL含2μL宽胸气雾剂阴性样品的溶液，作为阴性对照溶液，注入气相色谱质谱联用仪进行测定。结果在反式,反式-金合欢醇峰相应的保留时间无色谱峰，表明处方中其它成分对测定无影响（见图13）。由于本申请人收集到的宽胸气雾剂样品均为不合格样品，为了获得合格的宽胸气雾剂样品，本申请人还依据宽胸气雾剂的制备工艺用正品檀香油制备出宽胸气雾剂模拟样品，并采用GC-MS/MS法对其进行分析，结果，在宽胸气雾剂模拟样品的图谱上仅有α-檀香醇、β-檀香醇的色谱峰，并未出现反式,反式-金合欢醇的色谱峰。

本申请人还对采用GC法鉴别宽胸气雾剂中檀香油真伪的方法进行了方法学考察，具体如下：

1、被测溶液的稳定性试验：对同一份（宽胸气雾剂批号：190202）供试品溶液，每隔一定时间测定一次，共测定7次，结果7次测定的反式,反式-金合欢醇峰面积的RSD为2.44%（n=7），详见表5。试验表明，在24小时内，被测溶液稳定性好。

2、加样回收率试验：精密称取已知含量的宽胸气雾剂样品（批号：190202，反式,反式-金合欢醇含量：17.7mg/mL）0.5mL共9份，置50mL量瓶中，精密加入反式,反式-金合欢醇溶液（精密称取反式,反式-金合欢醇对照品96.25mg，置100mL量瓶中，加乙醇使溶解并稀释至刻度,摇匀）各5、10、15mL，每个水平的对照品溶液各加3份，摇匀，测定，计算回收率，结果平均回收率为102.45%，RSD =2.0%（n=9），符合定量分析的要求，详见表6。

3、精密度试验：对同一份（宽胸气雾剂批号：190202）供试品溶液，连续测定6次，结果反式,反式-金合欢醇峰面积RSD为2.10%（n=6），详见表7。试验表明，本发明采用GC法鉴别宽胸气雾剂中檀香油真伪的方法仪器精密度较好。

4、重现性试验：对同一批宽胸气雾剂样品（批号：190202），平行取样6份，加无水乙醇制成每1mL含20μL宽胸气雾剂的溶液，作为供试品溶液，进样测定，结果见表8。6份样品中反式,反式-金合欢醇测定结果的平均值为17.721 mg/mL，RSD =1.3%（n=6）。结果表明，本发明采用GC法鉴别宽胸气雾剂中檀香油真伪的方法的重现性较好。

5、线性关系考察：精密称取反式,反式-金合欢醇对照品19.44mg，置10mL量瓶中，加乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取0.5、1.0、1.5、2.5mL，分别置5ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，分别精密量取浓度为1000μg/mL的反式,反式-金合欢醇溶液0.2、0.4、0.6、1mL，分别置10ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，分别精密量取浓度为100μg/mL的反式,反式-金合欢醇溶液0.5、1.0mL，分别置10mL量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，进样测定。以对照品进样量为横坐标（X），峰面积积分值为纵坐标（Y）绘制标准曲线见图14，回归方程为：

Y=1481.47X+4.585313 r=0.99997

结果表明：反式,反式-金合欢醇在进样量0.06091～1.218μg范围内时，进样量与反式,反式-金合欢醇峰面积呈良好的线性关系。