一种荧光标记CRISPR/SpCas9系统介导的基因替换体系及其在植物中的应用

摘要

本发明公开了一种重组载体、DNA分子、应用及植物中以RNA转录本为模板进行目的基因同源重组的方法。该重组载体包括表达盒甲、表达盒乙和表达盒丙；表达盒甲包括启动子甲、SpCas9‑T2A‑GFP和终止子；表达盒乙包括启动子乙和gRNA的编码基因，gRNA靶向的目标片段是植物基因组中将被替换的DNA片段；表达盒丙包括启动子丙、核酸酶甲的编码基因、模板区段、核酸酶乙的编码基因，模板区段包括目标片段的上游同源臂、供体片段和目标片段的下游同源臂；供体片段与目标片段具有如下差异：供体片段含有预期在目标片段中引入的差异核苷酸。本发明的重载载体利用CRISPR/SpCas9系统，以RNA作为同源重组修复模板，在水稻中实现目的基因的替换，扩展TT‑HDR对于CRISPR/SpCas9系统的应用范围。