一种肝素类药物组合物、喷鼻剂及其制备方法及应用

摘要

本发明公开了一种肝素类药物组合物、喷鼻剂及其制备方法及应用。该肝素类药物组合物包括肝素钠和阿比朵尔。本发明中的肝素类药物组合物首次采用肝素钠和阿比朵尔联合使用，普通肝素钠联合1μM/L以上的阿比朵尔病毒抑制效率显著高于单独普通肝素钠或单独阿比多尔组（p<0.05）。

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种肝素类药物组合物、喷鼻剂及其制备方法及应用。

背景技术

2019年12月，严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2（SARS-CoV-2）引起的新型冠状病毒疾病（COVID-19）疫情迅速发展，目前已在全球范围内流行，造成全球巨大经济损失。COVID-19传染性强，早期症状不典型，且目前尚无用于治疗的特效药物。目前认为病毒的传播途径是呼吸道飞沫以及密切接触传播，在相对封闭的环境中长时间暴露于高浓度气溶胶情况下存在经气溶胶传播的可能，传染源主要是感染新型冠状病毒的患者。国家卫生健康委员会发布的《预防新型冠状病毒感染的肺炎口罩使用指南》指出，口罩是预防呼吸道传染病的重要防线，可以降低新型冠状病毒感染风险。口罩不仅可以防止病人喷射飞沫，降低飞沫量和喷射速度，还可以阻挡含病毒的飞沫核，防止佩戴者吸入。然而，由于市面上口罩种类繁多，普通老百姓难以区分，口罩的过滤效果也并不能完全阻隔病毒进入呼吸道，同时佩戴口罩给日常生活特别是工作带来了不便，因此开发新型预防新冠病毒感染的方法，公共卫生意义重大。

在国际权威期刊《细胞》上发表的一项重大科学研究中，北卡罗来纳大学医学院和北卡罗来纳大学吉林斯全球公共卫生学院的科学家对SARS-CoV-2（引起COVID-19的冠状病毒）感染的具体方式进行了表征。新冠病毒在很大程度上感染鼻腔，在此复制特定的细胞类型，并在呼吸道下端的细胞（包括肺部）中，感染和复制的能力越来越差。

肝素和依诺肝素衍生物可以有效抑制SARS-CoV-2的附着和进入细胞，为治疗和预防性药物开发提供了新机会。虽然普通肝素（UFH）和依诺肝素这两种药物已经广泛用于抗凝治疗，但是这两种药物都有严重的副作用，包括出血。依诺肝素作为COVID-19抗病毒治疗剂或预防剂，具有潜在的危险副作用，并且有可能在COVID-19抗凝治疗中引起严重的并发症。因此开发一种非系统全身性使用UFH或依诺肝素作为抗病毒治疗或预防的方法，意义重大。与此同时，基于健康志愿者的研究发现，即使吸入非常大剂量的UFH和依诺肝素，血清生物利用度也非常低。

阿比朵尔（Arbidol）是一种抗病毒药，我国和俄罗斯已经应用于预防或治疗流感。阿比朵尔可以通过与流感中的血凝素结合而阻止病毒进入细胞并与其融合。

然而，现有技术中并没有公开报导过肝素钠和阿比朵尔联合用药的方式及其药效，因此，为了进一步发现具有优异抗病毒作用（尤其是抗COVID-19）的药物制剂，证实不同药物联合用药后的抗病毒药效本领域亟待解决的技术问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于克服现有技术中预防新冠病毒感染的方法较为单一且预防效果不佳的缺陷，而提供了一种肝素类药物组合物、喷鼻剂及其制备方法及应用。

本发明提供了一种肝素类药物组合物，其包括肝素钠和阿比朵尔。

本发明中，所述肝素是硫酸乙酰肝素（HS）糖胺聚糖的异质混合物，是一种广泛使用的抗凝剂。每条HS链均由N-乙酰基葡萄糖胺（GlcNAc）和葡萄糖醛酸（GlcA）或艾杜糖醛酸（IdoA）的重复二糖单元组成。GlcNAc可以在三个不同的位点（-6S，-NS和-3S）硫酸化，而IdoA可以在一个位点（-2S）硫酸化。普通肝素由长度为30个糖的HS链组成，而低分子量肝素组成的HS链为22个糖或更少。HS蛋白聚糖在维持和调节各种功能（包括凝血活性，炎症反应和病毒进入靶细胞）中起着至关重要的作用。

其中，所述低分子量肝素（LMWHs）是通过普通肝素（UFH）的酶促或化学解聚产生的天然肝素的片段。目前美国FDA批准上市的LMWH主要有3种：硝酸解聚法生产的低分子肝素钠即达肝素(delteparin，法安明)、苯甲基酯进行碱基解聚获得的依诺肝素(enoxapacin，克塞)和通过肝素酶进行酶的解聚制成的低分子肝素钙即那屈肝素(nadroparin，速碧林)”。低分子肝素钠的平均分子质量最大为6000道尔顿，低分子肝素钙的分子质量较小为4500道尔顿，而依诺肝素的分子质量最小仅为4200道尔顿。

本发明中，所述肝素钠可为普通肝素钠或依诺肝素钠。

其中，所述普通肝素钠一般系自猪的肠粘膜或牛肺中提取，也可购自罗恩。

其中，所述普通肝素钠可为185 USP units/mg的普通肝素钠。

本发明中，优选地，所述肝素钠在所述肝素类药物组合物中的浓度为0.6mg/L-400g/L或1.5-6 μg/L，例如6μg/L、3μg/L、1.5μg/L。

本发明中，当所述肝素类药物组合物包括阿比朵尔时，优选地，所述阿比朵尔的浓度≥1μM/L；更优选地，所述阿比朵尔在所述肝素类药物组合物中的浓度为1-4 μM/L，例如4μM/L、2μM/L、1μM/L。

在本发明一优选实施方式中，所述肝素类药物组合物包括下述组分：

普通肝素钠6μg/L和阿比朵尔4μM/L；

或者，普通肝素钠3μg/L和阿比朵尔4μM/L；

或者，普通肝素钠1.5μg/L和阿比朵尔4μM/L；

或者，普通肝素钠6μg/L和阿比朵尔2μM/L；

或者，普通肝素钠3μg/L和阿比朵尔2μM/L；

或者，普通肝素钠1.5μg/L和阿比朵尔2μM/L；

或者，普通肝素钠6μg/L和阿比朵尔1μM/L；

或者，普通肝素钠3μg/L和阿比朵尔1μM/L；

或者，普通肝素钠1.5μg/L和阿比朵尔1μM/L。

本发明还提供了一种所述肝素类药物组合物的制备方法，其包括下述步骤，将所述肝素钠和阿比朵尔混合，即可。

本发明还提供了一种肝素类喷鼻剂，其包括如前所述的肝素类药物组合物、渗透压调节剂和水。

其中，所述渗透压调节剂可为本领域常规的渗透压调节剂，例如氯化钠。

其中，所述渗透压调节剂的用量可根据其种类进行选择，例如当所述渗透压调节剂为氯化钠时，所述渗透压调节剂在所述肝素类药物组合物中的质量浓度为0.9%。

本发明还提供了一种所述肝素类喷鼻剂的制备方法，其包括下述步骤，将所述的肝素类药物组合物、所述渗透压调节剂和水混合，即可。

本发明还提供了一种所述的肝素类药物组合物或所述肝素类喷鼻剂在制备预防和/或治疗病毒感染的药物中的应用。

其中，所述病毒可为SARS-COV-2。

本发明的积极进步效果在于：

（1）本发明中的肝素类药物组合物首次采用肝素钠和阿比朵尔联合使用，普通肝素钠联合1μM/L以上的阿比朵尔病毒（例如SARS-COV-2）抑制效率显著高于单独普通肝素钠或单独阿比多尔组（

（2）本发明中的喷鼻剂的应用场景可为：每次进入人群聚集场所之前或必要场合喷用以预防新冠病毒感染，甚至也可能对流感病毒感染有潜在预防作用，该喷鼻剂可以联合口罩使用增强保护能力，甚至可以替代口罩。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。

实施例1

1、材料

普通肝素钠购自罗恩（185 USP units/mg）、阿比朵尔（纯度98%，购自阿拉丁）

过表达ACE2的293T细胞和SARS-Cov-2 S蛋白的假病毒购买自长沙君意华湘生物科技有限公司。

本实施例设置联合用药浓度梯度如下：

普通肝素钠：6μg/L、3μg/L、1.5μg/L；

阿比朵尔：4μM/L、2μM/L、1μM/L

本实施例共配置如表1所示浓度的配方。

表1

2、实验方法

将表达SARS-CoV-2 S蛋白的假病毒200个TCID50与一系列不同浓度的药物组合进行混合，总体积100μl；加入到96孔细胞培养板，37℃孵育1h，加入100μl含20000个过表达ACE2的293T细胞；阴性对照组不加入药物；等量假病毒与过表达ACE2的293T混合；本底等量假病毒与293T细胞混合；37℃，5%的CO

抑制效率=（实验组-本底）/（对照-本底）*100%。

3、结果

试验结果如下表2所示。

表2

结果表明，普通肝素钠、阿比朵尔对新冠病毒有显著抑制作用，普通肝素钠联合1μM/L以上的阿比朵尔SARS-CoV-2抑制效率显著高于单独普通肝素钠或单独阿比多尔组（