公开/公告号CN112522284A
专利类型发明专利
公开/公告日2021-03-19
原文格式PDF
申请/专利号CN202011530546.X
申请日2020-12-22
分类号C12N15/29(20060101);C12N15/82(20060101);C07K14/415(20060101);A01H5/00(20180101);A01H6/46(20180101);
代理机构11002 北京路浩知识产权代理有限公司;
代理人黄爽
地址 430000 湖北省武汉市武昌区八一路299号
入库时间 2023-06-19 10:19:37
技术领域
本发明涉及植物基因工程技术领域,具体地说,涉及水稻抗褐飞虱基因Bph40及应用。
背景技术
水稻是一种重要的粮食作物,世界上有超过一半的人以其为主食。同时,它也遭到不同病菌和害虫的侵袭,使水稻生产受到严重威胁。褐飞虱是一种水稻专一性取食的昆虫,是影响水稻产量最严重的害虫之一。通过口针吸食水稻韧皮部汁液造成水稻的直接伤害,同时也可以传播水稻病毒,给水稻造成间接伤害。褐飞虱危害严重时,可以使水稻植株枯死,导致减产甚至绝收,给我国水稻生产造成了严重的威胁。长期以来,褐飞虱的防治主要依靠化学农药。但褐飞虱主要在水稻的茎基部取食,褐飞虱大爆发主要在水稻的灌浆期,此时水稻生长旺盛,将化学农药施加到水稻基部操作困难。由于长期大量使用农药,褐飞虱的抗药性成倍增加。同时,大量使用农药也会对环境造成严重污染。因此,使用化学农药控制褐飞虱会使水稻种植的成本增加,也会引起严重的环境和生态问题。
利用褐飞虱抗性基因培育抗性水稻品种来控制褐飞虱在众多防治策略中被认为是一种最经济节约、环境友好的方法。目前为止,至少34个褐飞虱抗性基因被报道,14个基因被克隆。最早的抗褐飞虱水稻品种IR26含有Bph1基因,在推广种植2-3年后抗性被新的生物型褐飞虱(biotype 2)克服。含有Bph2基因的水稻品种在推广种植后,抗性也迅速的被新的生物型褐飞虱(biotype 3)克服。因此,鉴定发掘新类型的抗性基因和种质资源对于抗褐飞虱水稻新品种选育至关重要。
发明内容
本发明的目的是提供水稻抗褐飞虱基因Bph40及应用。
本发明通过关键词搜索在日本晴基因组中筛选到26个Bph30-like genes,通过全基因组关联分析(GWAS)找到一个抗性关联位点与日本晴(Nipponbare)基因组中LOC_Os04g08390基因重叠。利用单倍型分析选择5份抗性材料,分离出LOC_Os04g08390的抗性等位基因Bph40。通过遗传转化Bph40基因,使感性水稻出现抗褐飞虱的表型,证实了该基因的功能。
第一方面,本发明提供水稻抗褐飞虱基因Bph40,其为编码如下蛋白质(a)或(b)的基因:
(a)由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成的蛋白质;
(b)SEQ ID NO:2所示序列经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等功能的由(a)衍生的蛋白质。
本发明提供水稻抗褐飞虱基因Bph40,所述基因的cDNA序列如SEQ ID NO:1所示,全长3384bp,ORF全长为3057bp,编码1018个氨基酸。
第二方面,本发明提供含有所述基因的生物材料,所述生物材料包括但不限于重组DNA、表达盒、转座子、质粒载体、病毒载体、工程菌或非可再生的植物部分。
第三方面,本发明提供所述基因或含有所述基因的生物材料在提高植物对褐飞虱抗性中的应用。
本发明中,所述植物为禾本科植物,优选水稻。
第四方面,本发明提供所述基因或含有所述基因的生物材料在植物育种中的应用,其中,所述育种的目的为提高植物对褐飞虱的抗性。
所述应用包括:
1)使植物包含基因Bph40;或
2)使植物表达基因Bph40编码的蛋白质;或
3)使植物过表达基因Bph40。
第五方面,本发明提供具有褐飞虱抗性的植物制备方法,包括:
1)用多核苷酸转化植物细胞;所述多核苷酸含有水稻抗褐飞虱基因Bph40;
2)将被转化的植物细胞再生为植物;
3)培养再生的植物并使上述多核苷酸得到表达;
第六方面,本发明提供按照上述方法获得的转基因植物在植物育种中的应用。
育种方法包括但不限于转基因、杂交、回交、自交或无性繁殖。
考虑到密码子的简并性,例如可在其编码区,在不改变氨基酸序列的条件下,或在其非编码区在不影响蛋白表达的条件下,对编码上述蛋白的多核苷酸序列进行修改。因此,本发明还包含对编码上述蛋白的多核苷酸序列进行的替换、添加和/或缺失一个或多个核苷酸,具有与上述编码具有相同功能蛋白的核苷酸序列。
本发明包括基于所述多核苷酸的正义序列或反义序列,包括含有所述多核苷酸序列或其片段的克隆载体或表达载体、含有所述载体的宿主细胞、含有所述核苷酸序列或其片段的转化的植物细胞和转基因植物。
携带有所述目的基因的表达载体可通过使用Ti质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、微注射、电穿孔等常规生物技术方法导入植物细胞中(Weissbach,1998,Method forPlant Molecular Biology VIII,Academy Press,New York,第411-463页;Geiserson和Corey,1998,Plant Molecular Biology,2
借由上述技术方案,本发明至少具有下列优点及有益效果:
(一)本发明利用全基因组关联分析(GWAS)技术成功克隆得到一个新的抗褐飞虱基因Bph40。
(二)基因Bph40与前期克隆的抗性基因Bph30属于同一类型,为研究该种类型的抗性基因的抗性机制提供了宝贵的基因资源。
(三)通过遗传转化将Bph40应用于水稻育种中,可以改善水稻品种的褐飞虱抗性,从而减轻褐飞虱的为害,达到增产和稳产的目的。
(四)刺吸式昆虫是农业生产中的一大类虫害,Bph40基因克隆和抗褐飞虱功能证实,对于其他植物的抗刺吸式昆虫研究具有重要参考作用。
附图说明
图1为BPH30蛋白结构图;其中,a:BPH30蛋白结构示意图,数字代表氨基酸位置,LRD1、LRD2表示BPH30蛋白中第357-675个氨基酸和第823-1034个氨基酸区域中的两个LRD结构域。b:两个LRDs结构域中保守的氨基酸序列。c:BPH30蛋白氨基酸序列,红色字母表示两个LRDs结构域中的保守序列。
图2为本发明较佳实施例中全基因组关联分析(GWAS)结果;其中,a:GWAS结果显示一个抗性关联SNP(rs4_4486223)位于LOC_Os04g08390基因中。上方的横线及数字表示染色体上的物理位置,单位是Mb。下方的圆柱形表示染色体,Chr.4代表4号染色体,红线表示关联SNP的位置,黑线表示LOC_Os04g08390基因在染色体上的位置。b:1350份水稻材料中两种单倍型对三种生物型(biotype1、2、3)褐飞虱的抗性统计。WG表示褐飞虱取食水稻植株48h后体重增加量与于初始体重的比值,比值越大说明水稻植株的抗性越差,Hap.A、Hap.B分别表示haplotype A(Nipponbare type)and B(mutant type),n表示用于表型分析的水稻材料数量,每一个柱子中线表示中位数,柱子的范围表示上下四分位数,短线表示数据的分布范围,p值由单因素方差分析计算获得。
图3为本发明较佳实施例中5种抗性材料中LOC_Os04g08390等位基因编码的蛋白序列比对结果。根据蛋白序列N端差异,可以将5条序列分成两种单倍型,232和396。横线指示的是蛋白序列中保守的氨基酸序列,即L**L*L**C/T。
图4为本发明较佳实施例中232,396过表达转基因T
具体实施方式
本发明提供水稻抗褐飞虱主效基因Bph40。通过以LRR为关键词搜索和蛋白质结构预测在日本晴参考基因组中找出26个抗性候选基因,利用全基因组关联分析确定四号染色体上LOC_Os04g08390基因位点为一个抗性关联位点。从5份抗性水稻材料中分离到两种LOC_Os04g08390的候选抗性等位基因类型,分别为232和396。通过遗传转化证实232是一个新的抗褐飞虱基因,命名为Bph40。通过遗传转化,将Bph40基因转入普通水稻品种,能够提高水稻对褐飞虱的抗性,从而减轻褐飞虱产生的危害,达到增产和稳产的目的。
本发明通过如下步骤克隆得到Bph40基因:
1.Bph30同类型基因(Bph30-like genes)的搜索(基因Bph30在NCBI上的参考序列编号为MW176109)。以LRR(Leucine-Rich Repeat)作为关键词在Rice Genome AnnotationProject(http://rice.plantbiology.msu.edu/index.shtml)数据库中用putativefunction search tool搜索基因,并下载对应基因的蛋白质序列。在InterPro(http://www.ebi.ac.uk/interpro/)网站上预测蛋白结构,确定LRD的位置,去除包含有LRR,LRR-kinase,NB-LRR等结构域基因。得到日本晴基因组中Bph30-like genes。
2.抗性位点及抗性材料的确定。通过对1350份水稻材料的全基因组关联分析(GWAS)找到一个与Bph30-like genes重叠的抗性关联SNP。通过单倍型分析,选择5份抗性水稻材料作为抗性基因的供体。
3.全长cDNA的克隆。根据日本晴基因组中感性等位基因LOC_Os04g08390的cDNA序列设计引物(08390-F:5′-TGTCTAAGAATACTATGATA-3′,08390-R:5′-TCACGGTTGCATATGCTTGC-3′),从抗褐飞虱水稻材料的叶鞘总cDNA中扩得450bp片段,以该段序列设计引物(08390-5’:5′-GGTGCATAGCTTCTCACACCGTAGCA-3′,08390-3’:5′-CAGGGACTTCCTCCTTCGCTTGAATC-3′),通过RACE(cDNA末端快速扩增技术)得到了cDNA的3’端和5’端序列,最终获得Bph40的全长cDNA。
然而,本领域技术人员应当理解,根据本发明公开的Bph40的核苷酸序列,通过设计恰当的PCR引物,即可从抗褐飞虱水稻基因组中扩增得到Bph40基因。
4.遗传转化Bph40基因验证其功能。根据Bph40基因的cDNA序列,用PCR的方法扩增出Bph40基因的ORF,全长为3057bp,加A后连入经XcmI酶切的PCXUN载体内。测序验证无误后,所得载体即为Bph40基因过表达遗传转化载体。
将过表达载体导入正常粳稻品种Nipponbare(日本晴)中,最后获得Bph40过表达转基因阳性植株。用T1代的植株进行了抗性鉴定。采用苗期集团法鉴定,对照水稻Nipponbare(N)全部死亡,转基因阳性植株正常存活。
证实Bph40基因具有抗褐飞虱的功能。因此,抗褐飞虱基因Bph40可以在水稻中应用也可以在水稻种子中应用,培育具有抗褐飞虱性能的水稻品种。
以下实施例用于说明本发明,但不用来限制本发明的范围。若未特别指明,实施例均按照常规实验条件,如Sambrook等分子克隆实验手册(Sambrook J&Russell DW,Molecular Cloning:a Laboratory Manual,2001),或按照制造厂商说明书建议的条件。
实施例1Bph30-like genes的鉴定
1.Bph30基因是前期克隆的一个主效抗褐飞虱基因,编码1082个氨基酸。在InterPro(http://www.ebi.ac.uk/interpro/)网站上预测蛋白结构,结果显示,该蛋白不包含已知功能的结构域,在第357-675个氨基酸和第823-1034个氨基酸区域中包含两个LRDs(leucine-rich domain)(图1),两个LRDs分别包含6个和4个L**L*L**C/T重复。
2.根据上述蛋白预测结果,以LRR(Leucine-Rich Repeat)作为关键词在RiceGenome Annotation Project(http://rice.plantbiology.msu.edu/index.shtml)数据库中用putative function search tool搜索基因,并下载对应基因的蛋白质序列。在InterPro(http://www.ebi.ac.uk/interpro/)网站上预测蛋白结构,去除包含有LRR、LRR-kinase、NB-LRR等结构域基因,确定Bph30-like genes编码的蛋白中LRDs的位置。得到日本晴基因组中Bph30-like genes共26个(表1)。
表1日本晴基因组中Bph30-like genes汇总
注:日本晴基因组中共有26个Bph30-like genes。Gene ID表示基因名,ORF(bp)表示基因编码区长度,protein length表示基因编码的蛋白序列长度,LRDs NO.表示蛋白序列汇总LRD结构域的数量,Position of LRDs表示LRD结构域在蛋白中的位置。
实施例2Bph40基因的克隆
1.对1350份水稻材料进行全基因组关联分析(GWAS),结果如图2显示,一个抗性关联SNP(rs4_4486223)位于4号染色体Bph30-like gene LOC_Os04g08390的第三个外显子中。根据该SNP可以将1350份水稻材料分成两种单倍型,即haplotype A(Nipponbare type)and B(mutant type)。表型鉴定结果显示,褐飞虱取食含有haplotype B的水稻材料48h后的增重比(WG)显著低于取食含有haplotype A的水稻材料48h后的褐飞虱,说明LOC_Os04g08390是一个候选抗性基因位点。
2.以5份抗褐飞虱水稻材料(表2)叶鞘总RNA反转录产物为模板,根据日本晴基因组中LOC_Os04g08390基因序列设计引物,扩增出候选基因的一段cDNA序列。通过该序列设计引物,使用TaKaRa公司5’与3’Full RACE试剂盒,获得了候选抗性基因的5’末端及3’末端序列,确定了候选抗性基因的转录起始位点及终止位点,并拼接出该基因的全长cDNA序列。根据全长cDNA序列重新合成引物,扩增获得候选抗性基因的全长cDNA。通过蛋白序列比对,候选抗性基因可以分为两种单倍型(图3),haplotype 232序列可以从水稻材料SE232、SE67、C334中分离得到,haplotype 396序列可以从水稻材料SE396、C331中分离得到。
表2用于克隆Bph40基因的5份抗性材料
实施例3Bph40基因的功能验证和应用
1.遗传转化载体的构建
候选基因过表达载体的构建。所用载体为pCXUN(GenBank:FJ905215.1,由美国Ohio State University王国梁教授惠赠,参见Chen,S.,Songkumarn,P.,Liu,J.&Wang,G.Aversatile zero background T-vector system for gene cloning and functionalgenomics.Plant Physiol.150,1111–1121(2009)),采用XcmI酶切pCXUN载体,将外源DNA片段(SEQ ID NO:3)加A后可以直接连入。
根据RACE的结果,采用PCR法分别从水稻材料SE232和SE396的叶鞘总cDNA中扩增候选基因232和396的ORF,经加A后连入载体。测序验证无误后,所得载体即为候选基因232、396的过表达载体。
2.遗传转化
采用农杆菌EHA105介导的遗传转化方法,将上述过表达载体分别导入褐飞虱感性的普通水稻品种Nipponbare。
3.Bph40基因转基因功能验证
候选基因232、396过表达转化载体分别获得阳性转基因T
虽然,上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述,但在本发明基础上,可以对之做一些修改或改进,这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此,在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进,均属于本发明要求保护的范围。
序列表
<110> 武汉大学 袁隆平农业高科技股份有限公司 武汉禾泰青生物科技有限公司
<120> 水稻抗褐飞虱基因Bph40及应用
<130> KHP201118549.1
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 3384
<212> DNA
<213> 水稻(Oryza sativa)
<400> 1
tgacgatcaa ttgttcatca ccatttttgc tttgcgacac cgtacgtcca tgttgcccca 60
aacaactccg cttaatttgc attgacgatc acttctgcca ccaggggaag tggagatcca 120
tctcgatcga tcgatagata tgggttagat ttgttttgtg gagcttcttt tacttgtcct 180
tggagataga caggaattca tcatgctttg ggagagcttt tatgcgacta gtgttgagga 240
ggcggtagaa gtactaatca cttacttgga ggataccagc agtgctgcac agaagtccat 300
ctacttggac ggatgggtag gactgggtgc ttctgcggtg ctcagagcga tagcagaaaa 360
tccagcacca tctctgagga agaaatttga caggattatc catgttgact gctcgagatg 420
gaagaaccca aggcaactgc aaagagcgat cgctgatcaa ctcaagcttc ctcagcatgt 480
aatggatttg tttgataggc aggatgagga ggatgatttc agcggggttg aagaaagctc 540
cagagcaggg gtaacagata tcggaaagga gatctatcaa accatcaagg acctcagttg 600
tttgttgatt tttcataatg ggagtgacga cacagttgat acaagcaaac ttggcttccc 660
cctatacgat tggtataatt ctaatgttaa taaagtgctt tggaccttca gagggaggct 720
aagactcaat ccaaaaattg cagataatgt ggacagttca caactcaata tttttagtcg 780
tcatatgcat ttttcaagtt atatttggaa ggattcatta tcaagagaag ctgaagaaat 840
cactcaatac tcaggtgagc tccaccttga tggcaccaaa gctgcagaat gttgcttgta 900
tctattgtct ctgaattata ggggtggcga catcatggac tacaactggg caacccatgc 960
ctgcaactat tgggtttgcg atggaataat aacagtacaa gaagaaaaag gaggaggtag 1020
cctacaggag gaccaagcat gggagcttgc atctgctctg catcaggaga tacgtctaga 1080
ggactactca tccaacagag tgcctccttt tggttatggt ttggatactc ccccaaatcg 1140
atgggttttg gtcacccagg agtctgacat gaaaaacaaa ccaactctag atacaacgtc 1200
cttgttcatt gcattccaaa gtgtggtatt gttaccggat gacatgttcc atcaagcaaa 1260
caaagtccaa gtactgagat tgtgcaactg tgccttcaac ttttcgtcac ctcctttcca 1320
ttgctgccac aacttaagat ttcttggcct ggataaatgc caagatcatc ggacacaaga 1380
agctggagag gataagagca acactagttc agcactggag atttttcaga ggctatgggt 1440
attagacata tgctacatag attgggagct gcctttccct acagagagta caagagagca 1500
gcaaatggca atgaacatta gggaggtaca tataaacaag ggaaggattt ggcgcagaaa 1560
ttttgcatgg cggcgattga agaaccttcg aaagcttcga gtaattgagc ctacacaccc 1620
ttggggtaac aaaggggaaa tagatgagtt tgctgacatg ctgaagctgg agatccttga 1680
cctgtctaag aatactatga tacaagtttt gccaagccta tgtggtgcca gtagcctcaa 1740
aacactgatc ctagatgatt gtgttgtgct ggaacaagtt ggcccccagg gacttcctcc 1800
ttcgcttgaa tcattcagct ttgcttcaag agaaggaaac aaagctaaaa tctcatctat 1860
ctccttggct ggttgctcaa gcttggtgaa cttcacatta cgtgggccat tgcaaaacct 1920
taggggattg gacctctctg gcacaatgat aaaaatgctt gaccttcgag atgtacaaga 1980
ctcatgtatt ggacaaataa ttctgctacg gtgtgagaag ctatgcacca tattatggcc 2040
aggggaggga ttcccaaaac taagaatgct acacattgat tcattggttt gccatgtaga 2100
aacagagcac cagcaagcat atgcaaccgt gatggattta agatttgttc aatccttggt 2160
gttaagaagc aaatacaagt tctgttggaa ctacaataag acccatataa atatatgcat 2220
ctcttctacc ccaaaagatg caacaccaaa aaagaagaca atgagctatt acagcgctca 2280
aaaagtagtt ggctcacctc tacacatgcc aatagtcacc accattcaac ctgttgtttg 2340
ctacaaggat gtcaacttgg ccatgatatc tgctattgag ctggaaggca gcagtgcacc 2400
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tgtcagtgaa caagcatgga gtgcagtatc atttataatg aacgaggccg agtctttgca 2520
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atgggattgt ctaaagaggt gccacattga gagatgtcac aggttgaacc ctgtcttttt 2640
tatcgattat attggcacct ggtttgaaac actggaggca ttttcagcag ctgagctcat 2700
gatggcaaat tgtatttgga gcagaggaag gacattccct cgttcggaaa gtaatacgtt 2760
tgcaaaactg aggagtatac acttacacta ctgtccgagg ctcacgtttg tgcttccact 2820
atcatggcct acatcagact cacacttgcc cagcttggag actctccaca tcgtctactg 2880
cagtgaactc agacagatct tccccgtgga ggcagttgct ctaagggaac aaccaagagg 2940
tgtgctgaga ttcccaaagc tgaagcacat ccacctgtat gatgtcccca agctgcatca 3000
gatatgcgaa atcagcagga tggttgctcc tgtgctcgag acaatcaggg tgaggggatg 3060
ctgggctctc aagcgcatcc ccgccatcga cggcagcctc cgtggtcagg acagtcgccc 3120
aatcgtggac tgcgagaagg actggtggga gaagctggaa tgggagggga tgaatgttgg 3180
ccatgacccc tccctctttg agcctcgcca ctcgatgtac tacaagaagg ctctacccag 3240
atgctctctt ctctggtgag gcgacatgca gacgctgtat caactgctgc tcacttgtta 3300
agatttactg atggatcaac caaggtgtct gcctgctttc ttccgtctcg ctgcagtggg 3360
tttcgagtgt ttgctttgtt ttct 3384
<210> 2
<211> 1018
<212> PRT
<213> 水稻(Oryza sativa)
<400> 2
Met Leu Trp Glu Ser Phe Tyr Ala Thr Ser Val Glu Glu Ala Val Glu
1 5 10 15
Val Leu Ile Thr Tyr Leu Glu Asp Thr Ser Ser Ala Ala Gln Lys Ser
20 25 30
Ile Tyr Leu Asp Gly Trp Val Gly Leu Gly Ala Ser Ala Val Leu Arg
35 40 45
Ala Ile Ala Glu Asn Pro Ala Pro Ser Leu Arg Lys Lys Phe Asp Arg
50 55 60
Ile Ile His Val Asp Cys Ser Arg Trp Lys Asn Pro Arg Gln Leu Gln
65 70 75 80
Arg Ala Ile Ala Asp Gln Leu Lys Leu Pro Gln His Val Met Asp Leu
85 90 95
Phe Asp Arg Gln Asp Glu Glu Asp Asp Phe Ser Gly Val Glu Glu Ser
100 105 110
Ser Arg Ala Gly Val Thr Asp Ile Gly Lys Glu Ile Tyr Gln Thr Ile
115 120 125
Lys Asp Leu Ser Cys Leu Leu Ile Phe His Asn Gly Ser Asp Asp Thr
130 135 140
Val Asp Thr Ser Lys Leu Gly Phe Pro Leu Tyr Asp Trp Tyr Asn Ser
145 150 155 160
Asn Val Asn Lys Val Leu Trp Thr Phe Arg Gly Arg Leu Arg Leu Asn
165 170 175
Pro Lys Ile Ala Asp Asn Val Asp Ser Ser Gln Leu Asn Ile Phe Ser
180 185 190
Arg His Met His Phe Ser Ser Tyr Ile Trp Lys Asp Ser Leu Ser Arg
195 200 205
Glu Ala Glu Glu Ile Thr Gln Tyr Ser Gly Glu Leu His Leu Asp Gly
210 215 220
Thr Lys Ala Ala Glu Cys Cys Leu Tyr Leu Leu Ser Leu Asn Tyr Arg
225 230 235 240
Gly Gly Asp Ile Met Asp Tyr Asn Trp Ala Thr His Ala Cys Asn Tyr
245 250 255
Trp Val Cys Asp Gly Ile Ile Thr Val Gln Glu Glu Lys Gly Gly Gly
260 265 270
Ser Leu Gln Glu Asp Gln Ala Trp Glu Leu Ala Ser Ala Leu His Gln
275 280 285
Glu Ile Arg Leu Glu Asp Tyr Ser Ser Asn Arg Val Pro Pro Phe Gly
290 295 300
Tyr Gly Leu Asp Thr Pro Pro Asn Arg Trp Val Leu Val Thr Gln Glu
305 310 315 320
Ser Asp Met Lys Asn Lys Pro Thr Leu Asp Thr Thr Ser Leu Phe Ile
325 330 335
Ala Phe Gln Ser Val Val Leu Leu Pro Asp Asp Met Phe His Gln Ala
340 345 350
Asn Lys Val Gln Val Leu Arg Leu Cys Asn Cys Ala Phe Asn Phe Ser
355 360 365
Ser Pro Pro Phe His Cys Cys His Asn Leu Arg Phe Leu Gly Leu Asp
370 375 380
Lys Cys Gln Asp His Arg Thr Gln Glu Ala Gly Glu Asp Lys Ser Asn
385 390 395 400
Thr Ser Ser Ala Leu Glu Ile Phe Gln Arg Leu Trp Val Leu Asp Ile
405 410 415
Cys Tyr Ile Asp Trp Glu Leu Pro Phe Pro Thr Glu Ser Thr Arg Glu
420 425 430
Gln Gln Met Ala Met Asn Ile Arg Glu Val His Ile Asn Lys Gly Arg
435 440 445
Ile Trp Arg Arg Asn Phe Ala Trp Arg Arg Leu Lys Asn Leu Arg Lys
450 455 460
Leu Arg Val Ile Glu Pro Thr His Pro Trp Gly Asn Lys Gly Glu Ile
465 470 475 480
Asp Glu Phe Ala Asp Met Leu Lys Leu Glu Ile Leu Asp Leu Ser Lys
485 490 495
Asn Thr Met Ile Gln Val Leu Pro Ser Leu Cys Gly Ala Ser Ser Leu
500 505 510
Lys Thr Leu Ile Leu Asp Asp Cys Val Val Leu Glu Gln Val Gly Pro
515 520 525
Gln Gly Leu Pro Pro Ser Leu Glu Ser Phe Ser Phe Ala Ser Arg Glu
530 535 540
Gly Asn Lys Ala Lys Ile Ser Ser Ile Ser Leu Ala Gly Cys Ser Ser
545 550 555 560
Leu Val Asn Phe Thr Leu Arg Gly Pro Leu Gln Asn Leu Arg Gly Leu
565 570 575
Asp Leu Ser Gly Thr Met Ile Lys Met Leu Asp Leu Arg Asp Val Gln
580 585 590
Asp Ser Cys Ile Gly Gln Ile Ile Leu Leu Arg Cys Glu Lys Leu Cys
595 600 605
Thr Ile Leu Trp Pro Gly Glu Gly Phe Pro Lys Leu Arg Met Leu His
610 615 620
Ile Asp Ser Leu Val Cys His Val Glu Thr Glu His Gln Gln Ala Tyr
625 630 635 640
Ala Thr Val Met Asp Leu Arg Phe Val Gln Ser Leu Val Leu Arg Ser
645 650 655
Lys Tyr Lys Phe Cys Trp Asn Tyr Asn Lys Thr His Ile Asn Ile Cys
660 665 670
Ile Ser Ser Thr Pro Lys Asp Ala Thr Pro Lys Lys Lys Thr Met Ser
675 680 685
Tyr Tyr Ser Ala Gln Lys Val Val Gly Ser Pro Leu His Met Pro Ile
690 695 700
Val Thr Thr Ile Gln Pro Val Val Cys Tyr Lys Asp Val Asn Leu Ala
705 710 715 720
Met Ile Ser Ala Ile Glu Leu Glu Gly Ser Ser Ala Pro Arg His Glu
725 730 735
Pro Leu Asp Ile His Val Glu Ile Gly Glu Gly Ile Ser Tyr Ala Asn
740 745 750
Val Val Ser Glu Gln Ala Trp Ser Ala Val Ser Phe Ile Met Asn Glu
755 760 765
Ala Glu Ser Leu His Val His Asp Asn Phe Ser Ile Thr Ser Val Asn
770 775 780
Pro Lys His Met Met Ser Gln Val Ala Trp Asp Cys Leu Lys Arg Cys
785 790 795 800
His Ile Glu Arg Cys His Arg Leu Asn Pro Val Phe Phe Ile Asp Tyr
805 810 815
Ile Gly Thr Trp Phe Glu Thr Leu Glu Ala Phe Ser Ala Ala Glu Leu
820 825 830
Met Met Ala Asn Cys Ile Trp Ser Arg Gly Arg Thr Phe Pro Arg Ser
835 840 845
Glu Ser Asn Thr Phe Ala Lys Leu Arg Ser Ile His Leu His Tyr Cys
850 855 860
Pro Arg Leu Thr Phe Val Leu Pro Leu Ser Trp Pro Thr Ser Asp Ser
865 870 875 880
His Leu Pro Ser Leu Glu Thr Leu His Ile Val Tyr Cys Ser Glu Leu
885 890 895
Arg Gln Ile Phe Pro Val Glu Ala Val Ala Leu Arg Glu Gln Pro Arg
900 905 910
Gly Val Leu Arg Phe Pro Lys Leu Lys His Ile His Leu Tyr Asp Val
915 920 925
Pro Lys Leu His Gln Ile Cys Glu Ile Ser Arg Met Val Ala Pro Val
930 935 940
Leu Glu Thr Ile Arg Val Arg Gly Cys Trp Ala Leu Lys Arg Ile Pro
945 950 955 960
Ala Ile Asp Gly Ser Leu Arg Gly Gln Asp Ser Arg Pro Ile Val Asp
965 970 975
Cys Glu Lys Asp Trp Trp Glu Lys Leu Glu Trp Glu Gly Met Asn Val
980 985 990
Gly His Asp Pro Ser Leu Phe Glu Pro Arg His Ser Met Tyr Tyr Lys
995 1000 1005
Lys Ala Leu Pro Arg Cys Ser Leu Leu Trp
1010 1015
<210> 3
<211> 3057
<212> DNA
<213> 水稻(Oryza sativa)
<400> 3
atgctttggg agagctttta tgcgactagt gttgaggagg cggtagaagt actaatcact 60
tacttggagg ataccagcag tgctgcacag aagtccatct acttggacgg atgggtagga 120
ctgggtgctt ctgcggtgct cagagcgata gcagaaaatc cagcaccatc tctgaggaag 180
aaatttgaca ggattatcca tgttgactgc tcgagatgga agaacccaag gcaactgcaa 240
agagcgatcg ctgatcaact caagcttcct cagcatgtaa tggatttgtt tgataggcag 300
gatgaggagg atgatttcag cggggttgaa gaaagctcca gagcaggggt aacagatatc 360
ggaaaggaga tctatcaaac catcaaggac ctcagttgtt tgttgatttt tcataatggg 420
agtgacgaca cagttgatac aagcaaactt ggcttccccc tatacgattg gtataattct 480
aatgttaata aagtgctttg gaccttcaga gggaggctaa gactcaatcc aaaaattgca 540
gataatgtgg acagttcaca actcaatatt tttagtcgtc atatgcattt ttcaagttat 600
atttggaagg attcattatc aagagaagct gaagaaatca ctcaatactc aggtgagctc 660
caccttgatg gcaccaaagc tgcagaatgt tgcttgtatc tattgtctct gaattatagg 720
ggtggcgaca tcatggacta caactgggca acccatgcct gcaactattg ggtttgcgat 780
ggaataataa cagtacaaga agaaaaagga ggaggtagcc tacaggagga ccaagcatgg 840
gagcttgcat ctgctctgca tcaggagata cgtctagagg actactcatc caacagagtg 900
cctccttttg gttatggttt ggatactccc ccaaatcgat gggttttggt cacccaggag 960
tctgacatga aaaacaaacc aactctagat acaacgtcct tgttcattgc attccaaagt 1020
gtggtattgt taccggatga catgttccat caagcaaaca aagtccaagt actgagattg 1080
tgcaactgtg ccttcaactt ttcgtcacct cctttccatt gctgccacaa cttaagattt 1140
cttggcctgg ataaatgcca agatcatcgg acacaagaag ctggagagga taagagcaac 1200
actagttcag cactggagat ttttcagagg ctatgggtat tagacatatg ctacatagat 1260
tgggagctgc ctttccctac agagagtaca agagagcagc aaatggcaat gaacattagg 1320
gaggtacata taaacaaggg aaggatttgg cgcagaaatt ttgcatggcg gcgattgaag 1380
aaccttcgaa agcttcgagt aattgagcct acacaccctt ggggtaacaa aggggaaata 1440
gatgagtttg ctgacatgct gaagctggag atccttgacc tgtctaagaa tactatgata 1500
caagttttgc caagcctatg tggtgccagt agcctcaaaa cactgatcct agatgattgt 1560
gttgtgctgg aacaagttgg cccccaggga cttcctcctt cgcttgaatc attcagcttt 1620
gcttcaagag aaggaaacaa agctaaaatc tcatctatct ccttggctgg ttgctcaagc 1680
ttggtgaact tcacattacg tgggccattg caaaacctta ggggattgga cctctctggc 1740
acaatgataa aaatgcttga ccttcgagat gtacaagact catgtattgg acaaataatt 1800
ctgctacggt gtgagaagct atgcaccata ttatggccag gggagggatt cccaaaacta 1860
agaatgctac acattgattc attggtttgc catgtagaaa cagagcacca gcaagcatat 1920
gcaaccgtga tggatttaag atttgttcaa tccttggtgt taagaagcaa atacaagttc 1980
tgttggaact acaataagac ccatataaat atatgcatct cttctacccc aaaagatgca 2040
acaccaaaaa agaagacaat gagctattac agcgctcaaa aagtagttgg ctcacctcta 2100
cacatgccaa tagtcaccac cattcaacct gttgtttgct acaaggatgt caacttggcc 2160
atgatatctg ctattgagct ggaaggcagc agtgcaccac ggcatgagcc actagacatc 2220
catgtggaga tcggagaggg aataagctat gctaatgttg tcagtgaaca agcatggagt 2280
gcagtatcat ttataatgaa cgaggccgag tctttgcacg tacatgacaa tttttcaatc 2340
accagtgtta accctaaaca catgatgtca caggttgcat gggattgtct aaagaggtgc 2400
cacattgaga gatgtcacag gttgaaccct gtctttttta tcgattatat tggcacctgg 2460
tttgaaacac tggaggcatt ttcagcagct gagctcatga tggcaaattg tatttggagc 2520
agaggaagga cattccctcg ttcggaaagt aatacgtttg caaaactgag gagtatacac 2580
ttacactact gtccgaggct cacgtttgtg cttccactat catggcctac atcagactca 2640
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cccgtggagg cagttgctct aagggaacaa ccaagaggtg tgctgagatt cccaaagctg 2760
aagcacatcc acctgtatga tgtccccaag ctgcatcaga tatgcgaaat cagcaggatg 2820
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gccatcgacg gcagcctccg tggtcaggac agtcgcccaa tcgtggactg cgagaaggac 2940
tggtgggaga agctggaatg ggaggggatg aatgttggcc atgacccctc cctctttgag 3000
cctcgccact cgatgtacta caagaaggct ctacccagat gctctcttct ctggtga 3057
机译: E75 dsRNA的组成和使用针对小褐飞虱核受体E75基因的dsRNA控制由小褐飞虱介导的病毒的方法
机译: E75 dsRNA的组成和使用针对小褐飞虱核受体E75基因的dsRNA控制由小褐飞虱介导的病毒的方法
机译: 抗褐飞虱的水稻品种