一种甲磺酸中甲磺酸烷基酯与甲磺酰氯含量的GC/FID测定方法

摘要

本发明公开了一种甲磺酸（MsOH）中甲磺酸烷基酯与甲磺酰氯含量的GC/FID测定方法，即甲磺酸甲酯（MMS），甲磺酸乙酯（EMS），甲磺酸异丙酯（IMS）和甲基磺酰氯（MsCl），其特征在于：将甲磺酸经过水与二氯甲烷萃取，分层处理后，通过气相色谱和氢火焰离子检测器（GC/FID），采用内标法定量检测甲磺酸中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯，甲磺酸异丙酯和甲基磺酰氯的含量。本方法提供的检测方法，将甲磺酸甲酯MMS、甲磺酸乙酯EMS，甲磺酸异丙酯IMS和甲基磺酰氯MsCl合并在一个方法中检测，提高了检测效率，萃取方法简单有效，且灵敏度高，回收率好。

说明书

技术领域

本发明涉及医药化工领域，更具体地涉及一种甲磺酸中甲磺酸烷基酯与甲磺酰氯含量的GC/FID测定方法。

背景技术

甲磺酸烷基酯，如甲磺酸甲酯（MMS），甲磺酸乙酯（EMS），甲磺酸异丙酯（IMS），是甲磺酸与甲醇，乙醇，异丙醇或其它低级醇（lower alcohol）形成的酯。 特别是在以甲磺酸盐或甲磺酸酯形成的药物活性成分中或其合成过程中涉及到在甲磺酸（MsOH）或甲磺酰氯（MsCL）存在的情况下，使用了低级醇，甲磺酸烷基酯会被视为潜在杂质。临床研究发现甲磺酸烷基酯能够直接与生物大分子(DNAs、RNAs及蛋白质)发生烷基化反应，可能会导致DNA的突变。甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯及甲磺酸异丙酯已被证明具有基因毒性，而其他具有甲磺酸基的物质可能存在潜在基因毒性，对人类健康造成威胁。因此，研究检测甲磺酸烷基酯的限度是非常必要的。

目前欧洲药典( EP) 已经给出了通用的基因毒性杂质检测方法，利用GC-MS方法分别针对活性成分中的甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯及甲磺酸酰氯进行检测。GC-MS法灵敏度高，但对于一般企业普及率不高，因此利用GC/FID的方法对甲磺酸中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯及甲磺酸酰氯进行检测方法，达到检测限度的要求。因此，利用GC/FID的方法进行检测，该方法在现有欧洲药典( EP) 的方法上进行了优化，将甲磺酸烷基酯与甲磺酰氯两个方法合并成一个方法，提高了检测效率。

发明内容

本发明公开了一种甲磺酸（MsOH）中甲磺酸烷基酯与甲磺酰氯含量的GC/FID测定方法，即甲磺酸甲酯（MMS），甲磺酸乙酯（EMS），甲磺酸异丙酯（IMS）和甲基磺酰氯（MsCl），其特征在于：将甲磺酸经过水与二氯甲烷萃取，分层处理后，通过气相色谱和氢火焰离子检测器（GC/FID），采用内标法定量检测甲磺酸中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯，甲磺酸异丙酯，甲磺酸正己酯和甲基磺酰氯的含量。本方法提供的检测方法，将甲磺酸甲酯MMS、甲磺酸乙酯EMS，甲磺酸异丙酯IMS，甲磺酸正己酯HMS和甲基磺酰氯MsCl合并在一个方法中检测，提高了检测效率，萃取方法简单有效，且灵敏度高，回收率好。

一种甲磺酸（MsOH）中甲磺酸烷基酯与甲磺酰氯含量的GC/FID测定方法，即甲磺酸甲酯（MMS），甲磺酸乙酯（EMS），甲磺酸异丙酯（IMS）和甲基磺酰氯（MsCl），其特征在于：将甲磺酸经过水与二氯甲烷萃取，分层处理后，通过气相色谱和氢火焰离子检测器（GC/FID），采用内标法定量检测甲磺酸中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯，甲磺酸异丙酯，甲磺酸正己酯和甲基磺酰氯的含量。

供试品的萃取：取5ml水，加入5ml甲磺酸供试品，置30ml分液漏斗中，加入含有内标物的二氯甲烷萃取剂，具塞震荡萃取5min，后将萃取液静置1h；

萃取液的净化：将2ml萃取液置于含有150mg无水硫酸镁的离心管中，在涡旋混合仪上以2000rpm的转速旋涡震荡2min，再以10000rpm的转速离心2min，取上清液进行GC/FID分析。

气相色谱条件为：

色谱柱:30m*0.53 mm *3μm6%氰丙基苯94%二甲基硅氧烷毛细管色谱柱或其他等效柱;

进样口温度:220℃；

检测器温度:260℃；

载气:氦气（纯度≥99.999％），恒流流速:2.5mL/min；

进样量:1μL，分流进样，分流比1:1；

升温程序:初始温度50，保持3min，以6℃/min的速率至220℃，保持18min；

运行时间:45.5min。

本发明与现有技术相比，具有以下优点：

1.本发明采用GC/FID法，成本低，经过试验，甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯，甲磺酸异丙酯和甲基磺酰氯能够完全分离且较好并能达到定量检测，该测定方法科学、合理、客观，适用于甲磺酸中甲磺酸烷基酯与甲磺酰氯含量的测定，为甲磺酸中甲磺酸烷基酯与甲磺酰氯含量的测定提供了一种准确的质量控制方法;

2. 本发明方法的检测限及定量限：

将本方法将所配标准工作溶液最低浓度溶液平行测定10次，分别取分析结果标准偏差的3倍及10倍作为其检出限及定量限，如表1所示;

表1.甲磺酸中甲磺酸烷基酯与甲磺酰氯的检出限及定量限

注:LOQ为定量限; LOD为检测限

3.本发明方法的重复性和加标回收率:

取已知甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯，甲磺酸异丙酯和甲基磺酰氯含量的甲磺酸样品3份，分别按照低、中、高三种水平加入甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯，甲磺酸异丙酯和甲基磺酰氯标准品，每个添加水平重复测定3个样品。加标后的样品分别进行前处理和GC/FID分析，并由加标量以及加标测定量计算回收率，结果见表2。从表2可知，甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯，甲磺酸异丙酯和甲基磺酰氯的平均加标回收率均在95.0％-105.0％之间，平均相对标准偏差（RSD）不大于1.5%，表明本方法准确性高，重复性好，适合定量；

表2.甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯，甲磺酸异丙酯和甲基磺酰氯的加标回收率

附图说明

图1 甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯，甲磺酸异丙酯和甲基磺酰氯标准溶液GC色谱图。

图2 甲磺酸样品中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯，甲磺酸异丙酯和甲基磺酰氯GC色谱图。

具体实施方式

本发明通过以下具体实施例作进一步描述，但不限制本发明。

1.仪器、试剂及仪器工作条件

1）仪器

气相色谱仪（Agilent7890A），配备有氢火焰离子检测器;BSA224S电子天平（感量:0.01mg，赛多利斯科学仪器有限公司）:Hy-8A调速振荡器（常州国华电器有限公司）,湘立Cenless 16R台式高速冷冻离心机。

2）试剂

二氯甲烷（色谱纯），乙磺酸异丙酯（内标，CAS:14245-62-6，纯度≥99％），甲磺酸甲酯、（CAS:66-27-3，纯度≥99％），甲磺酸乙酯（CAS:62-50-0纯度≥99％），甲磺酸异丙酯（CAS:926-06-7，纯度≥99％），甲基磺酰氯（CAS:558-25-8纯度≥99％），无水硫酸镁（分析纯）。

3）气相色谱条件为：

色谱柱:30m*0.53 mm *3μm6%氰丙基苯94%二甲基硅氧烷毛细管色谱柱或其他等效柱;

进样口温度:220℃；

检测器温度:260℃；

载气:氦气（纯度≥99.999％），恒流流速:2.5mL/min；

进样量:1μL，分流进样，分流比1:1；

升温程序:初始温度50，保持3min，以6℃/min的速率至220℃，保持18min；

运行时间:45.5min。

2.标准工作溶液的配制及标准工作曲线的确定

1）标准储备液的配置：

a）内标储备液:准确称取/100mg乙磺酸异丙酯于100mL容量瓶中，用二氯甲烷定容至刻度，配置成浓度为1000ug/mL的内标储备液，在4条件下保存；

b）甲磺酸甲酯储备液（1000ug/mL）:称取约100mg（＋/-5mg）甲磺酸甲酯于100mL容量瓶中，以萃取剂定容。在4℃条件下保存；

c）甲磺酸乙酯储备液（1000ug/mL）:称取约100mg（＋/-5mg）甲磺酸乙酯于100m容量瓶中，以萃取剂定容。在4℃条件下保存；

d）甲磺酸异丙酯储备液（1000ug/mL）:称取约100mg（＋/-5mg）甲磺酸异丙酯于100mL容量瓶中，以萃取剂定容。在4℃条件下保存；

e）甲基磺酰氯储备液（1000ug/mL）:称取约100mg（＋/-5mg）甲基磺酰氯于100mL容量瓶中，以萃取剂定容。在4℃条件下保存。

2）标准溶液的配制

分别准确移取10mL甲磺酸甲酯储备液，10mL甲磺酸乙酯储备液，10ml甲磺酸异丙酯储备液、10mL甲基磺酰氯储备液及10mL内标储备液于100mL容量瓶中，以二氯甲烷定容，所配制混合标准溶液中甲磺酸甲酯浓度为100ug/mL，甲磺酸乙酯浓度为100ug/mL。甲磺酸异丙酯浓度为100ug/mL，甲基磺酰氯浓度为100ug/mL.内标物浓度为100ug/mL。在4℃条件下保存。取5ml水，加入5ml标准溶液，置30ml分液漏斗中，具塞震荡萃取5min，后将萃取液静置1h；将2ml萃取液置于含有150mg无水硫酸镁的离心管中，在涡旋混合仪上以2000rpm的转速旋涡震荡2min，再以10000rpm的转速离心2min，取上清液。

3）供试品溶液的制备

取5ml水，加入5ml甲磺酸供试品，置30ml分液漏斗中，加入含有内标物的二氯甲烷萃取剂，具塞震荡萃取5min，后将萃取液静置1h；将2ml萃取液置于含有150mg无水硫酸镁的离心管中，在涡旋混合仪上以2000rpm的转速旋涡震荡2min，再以10000rpm的转速离心2min，取上清液进行GC/FID分析。

4）按照仪器测试条件测定样品，每个样品重复测定两次。

5）供试品中甲磺酸甲酯，甲磺酸乙酯，甲磺酸异丙酯及甲基磺酰氯的含量以如下公式所示：

含量%=100（As/As'）*（Ax/Ar）*（Cr/Cx）

式中： As：标准溶液中内标峰峰面积的平均值；

As'：供试品溶液中内标峰峰面积； Ax：供试品溶液中甲磺酸甲酯，甲磺酸乙酯，甲磺酸异丙酯及甲基磺酰氯的峰面积；

Ar：标准溶液中甲磺酸甲酯，甲磺酸乙酯，甲磺酸异丙酯及甲基磺酰氯的峰面积；Cr：标准溶液中甲磺酸甲酯，甲磺酸乙酯，甲磺酸异丙酯及甲基磺酰氯的浓度，ug/ml ；

Cx：供试品溶液的浓度，ug/ml；

以两次平行测定的平均值为最终测定结果。

表3 三批甲磺酸样品的检测结果