一种醉马草麦角病的接病方法

摘要

本发明适用于微生物接种技术领域，提供了一种醉马草麦角病的接病方法，其包括以下步骤：将醉马草麦角菌配制成孢子悬浮液，以用于对醉马草进行接病；在醉马草的初花期，先在醉马草穗部喷水，然后将孢子悬浮液喷至醉马草穗部，并用透明自封袋套住喷完后的麦角菌的穗部；取掉透明自封袋，在醉马草开花期间重复喷施孢子悬浮液。本发明采用孢子悬浮液，用喷雾法接病，方法简单，接种后发病率较高；而且接病后套透明自封袋保湿效果较好，且不受阴雨天气的的影响，适合麦角的大批量生产。另外，本发明所选寄主植物为醉马草，醉马草带内生真菌本身会产生生物碱，麦角菌侵染也会产生丰富的生物碱，从而可以为生物碱的提取提供良好的原材料。

说明书

技术领域

本发明属于微生物接种技术领域，尤其涉及一种醉马草麦角病的接病方法。

背景技术

醉马草(Achnatheruminebrians)是我国北方天然草原主要的烈性毒草之一，主要分布于我国北方和西北部的天然草原及蒙古国，对羊、牛、马等家畜有毒。研究者调查发现新疆、青海、甘肃、内蒙古、宁夏和西藏等五六省(区)的植株带菌率均在95％以上，有的高达100％。

麦角菌(Claviceps)产生的生物碱毒素，易引起人和动物中毒，同时也具有多种生物活性，在医学上得到了广泛的应用。早在1474年的德国处方就已经记载药用，在医学上主要用于治疗偏头疼、产后出血、乳腺病、帕金森病、脑血管系统和癌症等疾病。

目前世界各国麦角碱的生产主要是依靠野生麦角或人工接种栽培麦角作原料。日本在1953年就种植了2500亩的黑麦，以供接种；匈牙利自1957年以来,每年都种植2000公顷黑麦，年产麦角可达30吨左右。

然而，现有的麦角病的接种方法是注射接种法，接病方法繁琐，且接病后受天气的影响较大，如遇阴雨天气，注射的孢子易被雨水冲走，很难发病，注射的孢子浓度较低，接病后的侵染率较低。

发明内容

本发明实施例的目的在于提供一种醉马草麦角病的接病方法，旨在解决背景技术中提出的问题。

本发明实施例是这样实现的，一种醉马草麦角病的接病方法，其包括以下步骤：

将醉马草麦角菌配制成孢子悬浮液，以用于对醉马草进行接病；

在醉马草的初花期，先在醉马草穗部喷水，然后将孢子悬浮液喷至醉马草穗部，并用透明自封袋套住喷完后的麦角菌的穗部；

取掉透明自封袋，在醉马草开花期间重复喷施孢子悬浮液。

作为本发明实施例的一种优选方案，所述孢子悬浮液中孢子浓度为10

作为本发明实施例的另一种优选方案，所述步骤中，对醉马草进行接病时，土壤的含水量控制为55％～60％。

作为本发明实施例的另一种优选方案，所述步骤中，对醉马草进行接病时，空气的相对湿度控制为70％～80％，温度控制为10～15℃。

作为本发明实施例的另一种优选方案，所述步骤中，在早晨9:00～11:00时，对醉马草进行接病。

作为本发明实施例的另一种优选方案，所述醉马草麦角菌的培养方法包括以下步骤：

取醉马草麦角，将醉马草麦角置于培养基上，并置于23～27℃的温度下进行培养，然后进行纯化，得到纯化后的菌株；

将纯化后的菌株用打菌饼的方式接种到培养基上，并置于23～27℃的温度下进行培养后，再根据菌落生长速率及产孢量来筛选菌株，得到醉马草麦角菌。

作为本发明实施例的另一种优选方案，所述培养基为马铃薯葡萄糖琼脂培养基。

本发明实施例提供的一种醉马草麦角病的接病方法，为一对一的精准接病，其采用孢子浓度较大的孢子悬浮液，用喷雾法接病，方法简单，接种后发病率较高；而且接病后套透明自封袋保湿效果较好，且不受阴雨天气的的影响，适合麦角的大批量生产。另外，本发明实施例提供的接病方法所选寄主植物为醉马草，醉马草带内生真菌本身会产生生物碱，麦角菌侵染也会产生丰富的生物碱，从而可以为生物碱的提取提供良好的原材料。

附图说明

图1为实施例1从醉马草麦角上筛选出的醉马草麦角菌的外观图。

图2为实施例1得到的醉马草麦角菌的分生孢子图。

图3为未接病的醉马草穗子。

图4为醉马草接病后套袋的示意图。

图5为醉马草发病初期的外观图。

图6为醉马草麦角成熟期的外观图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

下述实施例中涉及的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；涉及的试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

实施例1

该实施例提供了一种醉马草麦角病的接病方法，其包括以下步骤：

S1、采收4℃下保存于农业部牧草与草坪草种子质量监督检验测试中心(兰州)贮藏室的醉马草种子，并播种于兰州大学榆中校区网格试验田中。

S2、将采集自新疆、甘肃、青海的醉马草麦角用无菌刀切成4m m的小段，分别用无菌镊子接种到马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)上，用封口膜封口，放到25℃的恒温培养箱中，培养4d，待白色菌丝长出，将真菌转接到PDA培养基上进行纯化，得到纯化后的菌株。

S3、将上述三个地区的纯化后的菌株用打菌饼的方式分别接种到PDA培养基上，放至25℃的恒温培养箱中，连续培养30d，接着，测量其菌落生长速率及产孢量(用血球计数板计算孢子数)，筛选出生长速度最快和产孢量最大的菌株，即可得到醉马草麦角菌，如图1所示。另外，如附图2所示，该醉马草麦角菌的分生孢子大小为5.9×2.46mm，通过形态鉴定，该株麦角菌为Claviceps pururea NSZJ，其于2020年10月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC 3.20175，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院中国科学院微生物研究所。

S4、将上述得到的醉马草麦角菌配制成孢子浓度为10

S5、将种植醉马草的土壤的含水量控制为58％，空气的相对湿度控制为75％，温度控制为12℃，在醉马草的初花期(开始抽穗时)，且在早晨10:00，先在醉马草穗部喷水，如附图3所示，然后将上述配制的孢子悬浮液喷至醉马草穗部，并用塑料材质的透明自封袋套住喷完后的麦角菌的穗部，如附图4所示。

S6、第二天，取掉透明自封袋，然后在醉马草开花期间重复喷施上述配制的孢子悬浮液，8d后醉马草开始发病，如附图5～6所示。

实施例2

该实施例提供了一种醉马草麦角病的接病方法，其包括以下步骤：

S1、采收4℃下保存于农业部牧草与草坪草种子质量监督检验测试中心(兰州)贮藏室的醉马草种子，并播种于兰州大学榆中校区网格试验田中。

S2、将采集自新疆、甘肃、青海的醉马草麦角用无菌刀切成3m m的小段，分别用无菌镊子接种到马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)上，用封口膜封口，放到23℃的恒温培养箱中，培养3d，待白色菌丝长出，将真菌转接到PDA培养基上进行纯化，得到纯化后的菌株。

S3、将上述三个地区的纯化后的菌株用打菌饼的方式分别接种到PDA培养基上，放至23℃的恒温培养箱中，连续培养30d，接着，测量其菌落生长速率及产孢量(用血球计数板计算孢子数)，筛选出生长速度最快和产孢量最大的菌株，即可得到醉马草麦角菌，如图1所示。

S4、将上述得到的醉马草麦角菌配制成孢子浓度为10

S5、将种植醉马草的土壤的含水量控制为55％，空气的相对湿度控制为70％，温度控制为10℃，在醉马草的初花期(开始抽穗时)，且在早晨9:00，先在醉马草穗部喷水，然后将上述配制的孢子悬浮液喷至醉马草穗部，并用塑料材质的透明自封袋套住喷完后的麦角菌的穗部。

S6、第二天，取掉透明自封袋，然后在醉马草开花期间重复喷施上述配制的孢子悬浮液，7d后醉马草开始发病。

实施例3

该实施例提供了一种醉马草麦角病的接病方法，其包括以下步骤：

S1、采收4℃下保存于农业部牧草与草坪草种子质量监督检验测试中心(兰州)贮藏室的醉马草种子，并播种于兰州大学榆中校区网格试验田中。

S2、将采集自新疆、甘肃、青海的醉马草麦角用无菌刀切成5m m的小段，分别用无菌镊子接种到马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)上，用封口膜封口，放到27℃的恒温培养箱中，培养5d，待白色菌丝长出，将真菌转接到PDA培养基上进行纯化，得到纯化后的菌株。

S3、将上述三个地区的纯化后的菌株用打菌饼的方式分别接种到PDA培养基上，放至27℃的恒温培养箱中，连续培养30d，接着，测量其菌落生长速率及产孢量(用血球计数板计算孢子数)，筛选出生长速度最快和产孢量最大的菌株，即可得到醉马草麦角菌。

S4、将上述得到的醉马草麦角菌配制成孢子浓度为10

S5、将种植醉马草的土壤的含水量控制为60％，空气的相对湿度控制为80％，温度控制为15℃，在醉马草的初花期(开始抽穗时)，且在早晨11:00，先在醉马草穗部喷水，然后将上述配制的孢子悬浮液喷至醉马草穗部，并用塑料材质的透明自封袋套住喷完后的麦角菌的穗部。

S6、第二天，取掉透明自封袋，然后在醉马草开花期间重复喷施上述配制的孢子悬浮液，10d后醉马草开始发病。

实施例4

该实施例提供了一种醉马草麦角病的接病方法，其包括以下步骤：

S1、采收4℃下保存于农业部牧草与草坪草种子质量监督检验测试中心(兰州)贮藏室的醉马草种子，并播种于兰州大学榆中校区网格试验田中。

S2、将采集自新疆、甘肃、青海的醉马草麦角用无菌刀切成4m m的小段，分别用无菌镊子接种到马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)上，用封口膜封口，放到24℃的恒温培养箱中，培养4d，待白色菌丝长出，将真菌转接到PDA培养基上进行纯化，得到纯化后的菌株。

S3、将上述三个地区的纯化后的菌株用打菌饼的方式分别接种到PDA培养基上，放至24℃的恒温培养箱中，连续培养30d，接着，测量其菌落生长速率及产孢量(用血球计数板计算孢子数)，筛选出生长速度最快和产孢量最大的菌株，即可得到醉马草麦角菌。

S4、将上述得到的醉马草麦角菌配制成孢子浓度为10

S5、将种植醉马草的土壤的含水量控制为56％，空气的相对湿度控制为75％，温度控制为14℃，在醉马草的初花期(开始抽穗时)，且在早晨10:00，先在醉马草穗部喷水，然后将上述配制的孢子悬浮液喷至醉马草穗部，并用塑料材质的透明自封袋套住喷完后的麦角菌的穗部。

S6、第二天，取掉透明自封袋，然后在醉马草开花期间重复喷施上述配制的孢子悬浮液，9d后醉马草开始发病。

实施例5

该实施例提供了一种醉马草麦角病的接病方法，其包括以下步骤：

S1、采收4℃下保存于农业部牧草与草坪草种子质量监督检验测试中心(兰州)贮藏室的醉马草种子，并播种于兰州大学榆中校区网格试验田中。

S2、将采集自新疆、甘肃、青海的醉马草麦角用无菌刀切成4m m的小段，分别用无菌镊子接种到马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)上，用封口膜封口，放到26℃的恒温培养箱中，培养4d，待白色菌丝长出，将真菌转接到PDA培养基上进行纯化，得到纯化后的菌株。

S3、将上述三个地区的纯化后的菌株用打菌饼的方式分别接种到PDA培养基上，放至26℃的恒温培养箱中，连续培养30d，接着，测量其菌落生长速率及产孢量(用血球计数板计算孢子数)，筛选出生长速度最快和产孢量最大的菌株，即可得到醉马草麦角菌。

S4、将上述得到的醉马草麦角菌配制成孢子浓度为10

S5、将种植醉马草的土壤的含水量控制为58％，空气的相对湿度控制为78％，温度控制为13℃，在醉马草的初花期(开始抽穗时)，且在早晨10:00，先在醉马草穗部喷水，然后将上述配制的孢子悬浮液喷至醉马草穗部，并用塑料材质的透明自封袋套住喷完后的麦角菌的穗部。

S6、第二天，取掉透明自封袋，然后在醉马草开花期间重复喷施上述配制的孢子悬浮液，8d后醉马草开始发病。

实验例：

按照上述实施例1提供的接病方法将醉马草麦角菌接种至醉马草上，接病前后的醉马草的麦角病发病率和病情指数如表1所示。

表1

从表1可以看出，使用本发明实施例提供的接病方法得到的接种后的醉马草的发病率较高。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。