用于治疗、缓解或预防与Tau聚集物相关病症的四氢苯并呋喃并2.3-c吡啶和β-咔啉化合物

摘要

本发明涉及可用于治疗、缓解或预防与Tau(微管蛋白相关单元)蛋白聚集物相关的一组病症和异常的新型化合物，所述病症和异常包括但不限于神经原纤维缠结(NFT)，例如阿尔茨海默病(AD)。

说明书

发明领域

本发明涉及可用于治疗、缓解或预防与Tau(微管蛋白相关单元)蛋白聚集物相关的一组病症和异常的新型化合物，所述病症和异常包括但不限于神经原纤维缠结(NFT)，例如阿尔茨海默病(AD)。

发明背景

许多衰老性疾病基于或涉及淀粉样蛋白或类淀粉样蛋白(amyloid-likeprotein)的细胞外或胞内沉积物，其有助于疾病的发病机理以及疾病进展。形成细胞外聚集物的最具特征的淀粉样蛋白是β淀粉样蛋白(Aβ)。形成细胞外聚集物的淀粉样蛋白的其他实例是朊病毒、ATTR(运甲状腺素蛋白)或 ADan(ADanPP)。主要形成胞内聚集物的类淀粉样蛋白包括但不限于Tau、α- 突触核蛋白、TAR DNA结合蛋白43(TDP-43)和亨廷顿蛋白(htt)。涉及Tau聚集物的疾病通常被列为Tau病变，例如AD。

淀粉样蛋白或类淀粉样蛋白的沉积物由蛋白质错误折叠随后聚集得到β-折叠(β-sheet)组装体而产生，其中多个肽或蛋白质通过分子间氢键结合在一起。尽管淀粉样蛋白或类淀粉样蛋白具有不同的一级氨基酸序列，但它们的沉积物通常含有许多共有的分子成分，特别是存在β-折叠四级结构。淀粉样蛋白沉积物与疾病之间的关系在很大程度上尚不清楚。已发现各种各样的蛋白质聚集物、包括与疾病病理相关的和与疾病病理无关的聚集物，都是有毒的，这表明淀粉样蛋白的共同分子特征与疾病发作有关或是造成疾病发作的原因(Bucciantini 等人,Nature,2002,416,507-11)。β-折叠聚集的肽或蛋白质的各种多聚体也与不同肽或蛋白质的毒性有关，范围从二聚体到可溶性低分子量低聚物、原细纤维或不溶性原纤维沉积物。

阿尔茨海默病是一种神经系统疾病，主要被认为由淀粉样斑块引起，所述斑块是脑中(淀粉样蛋白-β)Aβ聚集物的异常沉积的细胞外积聚。AD中其它的主要神经病理学标志是胞内神经原纤维缠结(NFT)，其产生于高磷酸化Tau蛋白、错折叠Tau或病理性Tau及其构象异构体的聚集。AD与多种神经变性Tau 病变、特别是特定类型的额颞叶痴呆(frontotemporal dementia)(FTD)有共同的发病机理。Tau蛋白是一种易溶的“天然未折叠”蛋白，与微管(MT)强烈结合以促进其组装和稳定性。MT对于神经元的细胞骨架完整性-从而对于神经元回路的正确形成和功能、因此对于学习和记忆是至关重要的。Tau与MT的结合受到动态磷酸化和去磷酸化的控制，这主要在体外和非神经元细胞中得到证实。在AD脑中，Tau病理(Tau病变)的发展晚于淀粉样蛋白病理，但是仍然有争议地讨论了Aβ蛋白是否是AD的致病因子，这构成了所谓的淀粉样蛋白级联假说的实质(Hardy等人,Science 1992,256,184-185；Musiek等人,Nature Neurosciences 2015,18(6),800-806)。将淀粉样蛋白与Tau病理学联系起来的确切机制在很大程度上尚不清楚，但已提出涉及激活神经元信号传导通路，该通路作用于GSK3和cdk5或由GSK3和cdk5作为主要“Tau激酶”发挥作用(Muyllaert等人,Rev.Neurol.(Paris),2006,162,903-7；Muyllaert等人,Genes Brain和Behav.2008,增刊1,57-66)。即使Tau病变的发生晚于淀粉样蛋白，它也不仅仅是单纯的副作用，而是AD中主要的病理执行者。在实验性小鼠模型中，由于缺乏Tau蛋白，淀粉样蛋白病理学引起的认知缺陷几乎得到了完全缓解(Roberson等人,Science,2007,316(5825),750-4)，并且认知功能障碍和痴呆的严重程度与Tau病变而不是淀粉样蛋白病理学相关。

牵涉Tau聚集物的疾病通常被列为tau病变，且它们包括但不限于阿尔茨海默病(AD)、家族性AD、PART(原发性年龄相关性Tau病变)、克-雅病 (Creutzfeldt-Jacobdisease)、拳击员痴呆(dementia pugilistica)、唐氏综合征、格 -施-沙病(GSS/

在2017年用于治疗阿尔茨海默病的临床试验中的所有药剂中，靶向Tau的药剂非常稀少，且仅代表II期临床试验的8％(Cummings等人,Alzheimer’s& Dementia:Translational Research&Clinical Interventions 3(2017)367-384)。目前靶向Tau蛋白的治疗方法主要包括基于抗体的方法，主要限制是仅靶向细胞外Tau。在使用小分子的方法中，尽管在毒性和特异性方面非常具有挑战性，但已经开发了几种Tau激酶抑制剂。然而，目前仅有一种激酶抑制剂尼罗替尼还在临床试验中进行测试。最后，在Tau聚集抑制剂中，仅一种LMTX目前处于临床试验中(Cummings等人,2017)。尽管近年来，基于Tau的治疗已成为日益关注的焦点，但仍非常需要靶向已知或推测会导致Tau病变的病理性Tau构象异构体的另外的治疗剂。

WO2011/128455涉及适合用于治疗与淀粉样蛋白或类淀粉样蛋白相关的病症的具体化合物。

附图描述

图1:使用实施例44通过免疫细胞化学(immunocytochrmistry)测定分化的神经母细胞瘤细胞中胞内Tau错误折叠的减少。数据显示为平均值+SD。

发明概述

本发明的一个目的是提供可用于治疗、缓解或预防一组与Tau蛋白聚集物相关的病症和异常的化合物，所述病症和异常包括但不限于NFT如阿尔茨海默病(AD)。此外，本领域需要可用作治疗剂的化合物，所述治疗剂用于(a)通过识别聚集的Tau和解聚Tau、例如通过改变Tau聚集物分子构象来减少Tau聚集物/NFT，和/或(b)防止Tau聚集物的形成，和/或(c)胞内干扰Tau聚集物。本发明人已经惊人地发现，这些目的可以通过下文所述的式(I)化合物来实现。

式(I)的化合物通过识别聚集的Tau和解聚Tau、例如通过改变Tau聚集物分子构象，显示出减少Tau聚集物的高能力。一些式(I)化合物防止Tau聚集物的形成，和/或胞内干扰Tau聚集物。虽然不希望受理论的束缚，但认为式(I)化合物抑制Tau聚集或解聚预形成的Tau聚集物，包括当存在于胞内时。由于它们独特的设计特征，这些化合物显示诸如适当的亲脂性和分子量、脑摄取和药代动力学、细胞渗透性、溶解性和代谢稳定性的性质，以便成为用于治疗、缓解或预防Tau病变的成功药物。

超微结构分析表明Tau包涵体由成对的螺旋纤丝(PHF)或直丝(SF)构成。高分辨率结构分析已经显示，这些纤丝由核心区域构成，所述核心区域包含采用交叉β/β螺旋结构的Tau的氨基酸306-378。本发明的化合物可以识别聚集的 Tau和解聚Tau，例如通过改变Tau聚集物分子构象，并且因此可以预期促进 Tau清除。

此外，已经显示Tau能够在细胞间传播，并且某些形式的Tau(充当种子) 能够诱导健康胞内天然Tau蛋白的结构变化，以经历错误折叠和聚集。认为聚集的Tau负责接种，并因此负责Tau病理扩散。本发明的化合物可以在胞内干扰聚集的Tau，并且因此可以预期减少Tau病理扩散，并最终预防或减少AD 中的相关认知缺陷。

本发明公开了新的式(I)的化合物，其具有例如通过改变Tau聚集物的分子构象减少Tau聚集物、识别聚集的Tau和解聚Tau的能力。

本发明公开了新的式(I)化合物，其具有防止Tau聚集物的形成和/或胞内干扰Tau聚集物的能力。

本发明提供了使用式(I)的化合物或其药物组合物治疗与Tau蛋白聚集物相关的病症和异常的方法，所述病症和异常包括但不限于NFT。本发明还提供了一种药物组合物，其包含式(I)的化合物和药学上可接受的载体或赋形剂。

将本发明概述在如下条款中：

1.式(I)的化合物：

或其立体异构体、外消旋混合物、互变异构体、药学上可接受的盐、前药、水合物、溶剂化物和多晶型物；

其中

A选自

B选自O和NR

E和V独立地选自N、NR

G选自苯环和吡啶环；

J选自O、N–R

Y、Y

Z独立地选自H、卤素、O–烷基、烷基和CN；

R独立地选自

R

R

R

R

R

R

R

n为0、1、2、3或4；

r和s独立地为0、1、2或3；且

t和u独立地为1、2或3。

2.条款1的化合物，其为式(Ia)的化合物：

其中A、R

3.条款1和2任一项的化合物，其中A为

4.条款1-3任一项的化合物，其为式(Ib)的化合物：

其中R

5.条款1-4任一项的化合物，其中该化合物选自：

6.药物组合物，包含如条款1-5任一项中所定义的化合物和任选的药学上可接受的载体或赋形剂。

7.如条款1-5任一项中所定义的化合物，用作药物。

8.如条款1-5任一项中所定义的化合物，用于治疗、缓解或预防与Tau蛋白聚集物相关的病症或异常。

9.如条款1-5任一项中所定义的化合物，用于减少tau聚集物。

10.如条款1-5任一项中所定义的化合物，用于预防Tau聚集物形成和/或用于抑制Tau聚集。

11.如条款1-5任一项中所定义的化合物，用于在胞内干扰Tau聚集物。

12.治疗、缓解或预防与Tau蛋白聚集物相关的病症的方法，该方法包括对有此需要的受试者施用有效量的如条款1-5任一项中所定义的化合物。

13.减少tau聚集的方法，该方法包括对有此需要的受试者施用有效量的如条款1-5任一项中所定义的化合物。

14.预防Tau聚集物形成和/或抑制Tau聚集的方法，该方法包括对有此需要的受试者施用有效量的如条款1-5任一项中所定义的化合物。

15.在胞内干扰Tau聚集物的方法，该方法包括对有此需要的受试者施用有效量的如条款1-5任一项中所定义的化合物。

16.如条款1-5任一项中所定义的化合物在制备用于治疗与Tau蛋白聚集物相关的病症或异常的药物中的用途。

17.如条款1-5任一项中所定义的化合物在制备用于减少Tau聚集的药物中的用途。

18.如条款1-5任一项中所定义的化合物在制备用于预防Tau聚集物形成和 /或用于抑制Tau聚集的药物中的用途。

19.如条款1-5任一项中所定义的化合物在制备用于在胞内干扰Tau聚集物的药物中的用途。

20.混合物，包含如条款1-5任一项中所定义的化合物和至少一种其他生物活性化合物、药学上可接受的载体、稀释剂和赋形剂，所述至少一种其他生物活性化合物选自不同于条款1-5任一项中所定义的化合物的治疗剂。

21.条款20的混合物，其中所述其他生物活性化合物为用于治疗淀粉样变性的化合物。

22.条款20或21的混合物，其中所述其他生物活性化合物选自抗氧化应激的化合物、抗凋亡化合物、金属螯合剂、DNA修复抑制剂如哌仑西平和代谢物、 3-氨基-1-丙磺酸(3APS)、1,3-丙二磺酸盐(1,3PDS)、α-分泌酶激活剂、β-和γ-分泌酶抑制剂、Tau蛋白、神经递质、β-折叠破坏剂、β淀粉样蛋白清除/耗竭细胞成分的引诱剂、N-末端截短的淀粉样蛋白β的抑制剂包括焦谷氨酸化的淀粉样蛋白β3-42、抗炎分子，或胆碱酯酶抑制剂(ChEI)如他克林、利斯的明 (rivastigmine)、多奈哌齐和/或加兰他敏，M1激动剂，其它药物，包括任何淀粉样蛋白或Tau修饰药物和营养补充剂，抗体，包括任何其功能等效抗体或功能部分，或疫苗。

23.条款22的混合物，其中所述其他生物活性化合物为胆碱酯酶抑制剂 (ChEI)。

24.条款22的混合物，其中所述其他生物活性化合物选自他克林、利斯的明、多奈哌齐、加兰他敏、烟酸和美金刚。

25.条款22的混合物，其中所述其他生物活性化合物为抗体，特别是单克隆抗体，包括任意功能上等效的抗体或其功能部分。

26.条款20-25任一项的混合物，其中所述化合物和/或所述其他生物活性化合物以治疗有效量存在。

27.用于条款8的用途的化合物、条款12的方法或条款16的用途，其中所述病症选自阿尔茨海默病(AD)、家族性AD、原发性年龄相关性Tauo病变 (PART)、克-雅病、拳击员痴呆、唐氏综合征、格-施-沙病(GSS)、包涵体肌炎、朊病毒蛋白脑淀粉样变性血管病、创伤性脑损伤(TBI)、肌萎缩性侧索硬化症 (ALS)、关岛型帕金森病-痴呆复合征、非关岛型运动神经元病伴神经原纤维缠结、嗜银颗粒病、皮质基底节变性(CBD)、弥漫性神经原纤维缠结伴钙化症、与染色体17相关的额颞叶痴呆伴帕金森病(FTDP-17)、哈-斯病、多系统萎缩(MSA)、C型尼曼-皮克病、苍白球-脑桥-黑质变性、皮克病(PiD)、进行性皮质下神经胶质增生、进行性核上麻痹(PSP)、亚急性硬化性全脑炎、缠结优势型痴呆、脑炎后帕金森病、强直性营养不良、亚急性硬化全脑病、LRRK2突变、慢性创伤性脑病(CTE)、家族性英国型痴呆、家族性丹麦型痴呆、其他额颞叶变性、 Guadeloupean帕金森病、神经变性伴脑铁积聚、SLC9A6-相关性精神发育迟缓、具有球状神经胶质包涵体的白质Tau病变、癫痫、卢伊体痴呆(LBD)、轻度认知损伤(MCI)、多发性硬化、帕金森病、HIV-相关性痴呆、成年型糖尿病、老年心脏淀粉样变性、青光眼、缺血性卒中、AD中的精神病和亨廷顿病，优选阿尔茨海默病(AD)、皮质基底节变性(CBD)、皮克病(PiD)和进行性核上麻痹(PSP)。

28.如条款1-5任一项中所定义的化合物作为分析参比物或体外筛选工具的用途。

29.下式的化合物：

或其药学上可接受的盐。

定义

在本申请的含义内，应用以下定义：

“烷基”是指由碳和氢原子组成的饱和的直链或支链有机部分。适合的烷基的实例具有1-6个碳原子，优选1-4个碳原子，且包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基和异丁基。

“Hal”或“卤素”是指F、Cl、Br和I，优选F。

“3-8元环”是指三-、四-、五-、六-、七-或八-元环，其中在环中零个、一个或多个碳原子被1或2个(对于三元环)、1、2或3个(对于四元环)、1、2、3 或4个(对于五元环)或1、2、3、4或5个(对于六元环)、1、2、3、4、5或6个 (对于七元环)或1、2、3、4、5、6或7个(对于八元环)相同或不同的杂原子替代，其中杂原子选自O、N和S。

具有一个或多个旋光活性碳的本发明化合物可以以外消旋体和外消旋混合物(包括所有比例的混合物)、立体异构体(包括非对映异构体混合物和单独的非对映异构体、对映异构体混合物和单一的对映异构体、构象异构体的混合物和单一构象异构体)、互变异构体、阻转异构体和旋转异构体的形式存在。所有的异构体形式都包括在本发明中。本发明中描述的含有烯属双键的化合物包括E 和Z几何异构体。本发明还包括所有药学上可接受的盐、前药、多晶型物、水合物和溶剂化物。

术语“多晶型物”是指本发明化合物的各种结晶结构。这可以包括但不限于晶体形态(和无定形材料)和所有晶格形式。本发明的盐可以是结晶的，并且可以以多于一种多晶型物存在。

本发明还包括盐的溶剂化物、水合物以及无水形式。溶剂化物中包含的溶剂没有特别限制，并且可以是任何药学上可接受的溶剂。实例包括水和C

“药学上可接受的盐”定义为所公开的化合物的衍生物，其中通过制备其酸或碱盐来修饰母体化合物。药学上可接受的盐的实例包括但不限于碱性残基如胺的无机或有机酸盐；酸性残基如羧酸的碱或有机盐；等。药学上可接受的盐包括例如由无毒的无机酸或有机酸形成的母体化合物的常规无毒盐或季铵盐。例如，这种常规无毒盐包括衍生自无机酸的那些盐，所述无机酸例如但不限于盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等；和由有机酸制备的盐，所述有机酸例如但不限于乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、扑酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、磺胺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙二磺酸、草酸、羟乙磺酸等。本发明的药学上可接受的盐可以通过常规化学方法从含有碱性或酸性部分的母体化合物合成。通常，这种盐可以通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计量量的合适的碱或酸在水中或在有机溶剂中或在两者的混合物中反应来制备。有机溶剂包括但不限于非水介质如醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。适合的盐的列表可见于Remington's PharmaceuticalSciences,第18版,Mack Publishing Company,Easton,PA, 1990,p.1445，其公开内容特此通过引用并入。

本发明的化合物还可以以前药的形式提供，即在体内代谢为活性代谢物的化合物。如在下文本发明说明书和权利要求书中所用，术语“前药”是指任何由于体内生物转化而释放活性母体药物的共价键合的化合物。描述前药的 Goodman和Gilman的参考文献(ThePharmacological Basis of Therapeutics, 第8版,McGraw-Hill,Int.Ed.1992,"Biotransformation of Drugs",p 13-15)一般性地特此通过引用并入本文。

“药学上可接受的”定义为在合理的医学判断范围内适用于与人类和动物的组织接触而没有过度的毒性、刺激、过敏反应或其它问题或并发症、与合理的效益/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。

本发明中的患者或受试者典型地是动物，特别是哺乳动物，更特别是人。

本文所用的“Tau”是指主要在神经元中发现的高度可溶的微管结合蛋白，并且包括主要的6种同种型、裂解或截短形式和其它修饰形式，例如由磷酸化、糖基化、糖化、脯氨酰异构化、硝化、乙酰化、多胺化、泛素化、类泛素化和氧化产生的修饰形式。

“聚集的Tau”指Tau肽或蛋白的聚集单体，其折叠成寡聚或多聚结构。

本文所用的“神经原纤维缠结”(NFT)是指含有成对螺旋纤丝(PHF)和直丝的过度磷酸化Tau蛋白的不溶性聚集物。它们的存在是AD和其它称为Tau病变的疾病的标志。

除非另有说明，否则在“定义”部分中给出的定义和优选定义适用于以下描述的所有实施方案。

发明详述

下面将描述本发明的化合物。应当理解，还涵盖以下定义的所有可能的组合。

在一个实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物：

或其立体异构体、外消旋混合物、互变异构体、药学上可接受的盐、前药、水合物、溶剂化物和多晶型物。

式(I)的化合物的一个优选的实施方案为

式(I)的化合物的另一个优选的实施方案为

更优选地，式(I)的化合物为

如下A的定义适用于式(I)的化合物及其优选的实施方案。

A选自

在一个优选的实施方案中，A为

在一个更优选的实施方案中，A选自

在另一个优选的实施方案中，A选自

在一个甚至更优选的实施方案中，A为

在上述A的定义及其优选的实施方案中，

在上述A的定义及其优选的实施方案中，A被一个或多个取代基R

如下定义酌情适用于式(I)及其优选的实施方案。

B选自O和NR

E和V独立地选自N、NR

优选地，

E、V和G的相同组合可以被视为

J选自O、N–R

Y、Y

Z独立地选自H、卤素(优选F)、O–烷基、烷基和CN，优选为H、卤素(优选F)和O–烷基。在一个优选的实施方案中，一个Z为卤素(优选F)，或O–烷基，而另一个Z为H。在一个更优选的实施方案中，一个Z为卤素(优选F)，而另一个Z为H。

R独立地选自

R

R

R

R

R

R

R

n为0、1、2、3或4，更优选0、1或2，甚至更优选n为0。

p为1或2，更优选1。

r和s独立地为0、1、2或3。

t和u独立地为1、2或3。

式(I)的优选化合物为：

优选的化合物还示例在实施例中。

本发明中还设想了本文公开的实施方案、优选实施方案和更优选实施方案的任意组合。

药物组合物

虽然本发明的化合物可以单独施用，但是优选根据标准药学实践将它们配制成药物组合物。因此，本发明还提供了药物组合物，其包含任选地与药学上可接受的载体、稀释剂、佐剂或赋形剂混合的治疗有效量的式(I)的化合物。

药学上可接受的赋形剂在药学领域是众所周知的，并且例如描述于 Remington'sPharmaceutical Sciences,第15版,Mack Publishing Co.,New Jersey(1975)中。可以根据预期的施用途径和标准药物实践选择药物赋形剂。赋形剂在对其接受者无害的意义上必须是可接受的。

可用于配制本发明药物组合物的药学上有用的赋形剂可包括例如载体、媒介物、稀释剂、溶剂如一元醇如乙醇、异丙醇和多元醇如二醇，和食用油如大豆油、椰子油、橄榄油、红花油、棉籽油、油酯如油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、粘合剂、助剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂、崩解剂、助流剂、润滑剂、缓冲剂、乳化剂、湿润剂、悬浮剂、甜味剂、着色剂、调味剂、包衣剂、防腐剂、抗氧化剂、加工剂、药物递送改性剂和增强剂如磷酸钙、硬脂酸镁、滑石粉、单糖、二糖、淀粉、明胶、纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、右旋糖、羟丙基-β-环糊精、聚乙烯吡咯烷酮、低熔点蜡和离子交换树脂。

本发明化合物的施用(递送)途径包括但不限于以下一种或多种：口服(例如作为片剂、胶囊剂或作为可吸收溶液)、局部、粘膜(例如作为用于吸入的鼻喷雾剂或气雾剂)、鼻、肠胃外(例如通过可注射形式)、胃肠、脊柱内、腹膜内、肌内、静脉内、子宫内、眼内、皮内、颅内、气管内、阴道内、脑室内、大脑内、皮下、眼科(包括玻璃体内或前房内)、透皮、直肠、颊、硬膜外和舌下。

例如，化合物可以以片剂、胶囊剂、软胶囊(ovule)、酏剂、溶液剂或混悬剂的形式口服施用，其可以含有矫味剂或着色剂，用于立即、延迟、改性、持续、脉冲或控制释放施用。

该片剂可含有赋形剂如微晶纤维素、乳糖、柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸氢钙和甘氨酸，崩解剂例如淀粉(优选玉米、马铃薯或木薯淀粉)、羟乙酸淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠和某些复合硅酸盐，以及制粒粘合剂如聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羟丙基纤维素(HPC)、蔗糖、明胶和阿拉伯胶。另外，可以包括润滑剂如硬脂酸镁、硬脂酸、山嵛酸甘油酯和滑石。相似类型的固体组合物也可用作明胶胶囊中的填充剂。在这方面优选的赋形剂包括乳糖 (lactose)、淀粉、纤维素、乳糖(milk sugar)或高分子量聚乙二醇。对于水性混悬剂和/或酏剂，该试剂可以与各种甜味剂或矫味剂、着色剂或染料，与乳化剂和/或悬浮剂以及与稀释剂如水、乙醇、丙二醇和甘油及其组合结合。

如果本发明的化合物经肠胃外给药，则这种给药的实例包括以下一种或多种：静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内、颅内、肌内或皮下施用化合物；和/或通过使用输注技术。对于肠胃外施用，化合物最好以无菌水溶液形式使用，该水溶液可以含有其他物质，例如足够的盐或葡萄糖以使溶液与血液等渗。如果必要，水溶液应该适当地缓冲(优选至3至9的pH)。无菌条件下适合的肠胃外制剂的制备可以通过本领域技术人员众所周知的标准制药技术容易地完成。

如所指出的，本发明的化合物可以鼻内或通过吸入施用，并以干粉吸入器的形式或以气溶胶喷雾呈递的形式从加压容器、泵、喷雾器或雾化器中使用合适的推进剂方便地递送，所述推进剂例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、氟代烷烃如1,1,1,2-四氟乙烷(HFA134AT)或1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷 (HFA 227EA)、二氧化碳或其他合适的气体。在加压气溶胶的情况下，剂量单位可通过提供阀门以递送计量的量来确定。加压容器、泵、喷雾器或雾化器可含有活性化合物的溶液或悬浮液，例如使用乙醇和推进剂的混合物作为溶剂，其可另外含有润滑剂如脱水山梨醇三油酸酯。可将用于吸入器或吹入器的胶囊和药筒(例如由明胶制成)配制成含有化合物和适合的粉末基质如乳糖或淀粉的粉末混合物。

或者，本发明的化合物可以以栓剂或阴道栓剂的形式施用，或者其可以以凝胶、水凝胶、洗剂、溶液剂、乳霜、软膏或扑粉剂的形式局部施用。本发明的化合物还可以例如通过使用皮肤贴剂经皮或透皮施用。

它们也可以通过肺或直肠途径施用。它们也可以通过眼途径施用。对于眼科用途，可以将化合物在等渗(调节pH)无菌盐水中配制成微粉化悬浮液，或者优选在等渗(调节pH)无菌盐水中配制成溶液，任选与防腐剂如苯扎氯铵组合。或者，它们可以配制在软膏如凡士林中。

为了局部施用于皮肤，本发明的化合物可以配制成合适的软膏，该软膏含有悬浮或溶解在例如以下一种或多种的混合物中的活性化合物：矿物油、液体凡士林、白凡士林、丙二醇、乳化蜡和水。或者，它们可以配制成合适的洗剂或乳霜，悬浮或溶解在例如以下一种或多种的混合物中：矿物油、脱水山梨醇单硬脂酸酯、聚乙二醇、液体石蜡、聚山梨醇酯60、鲸蜡酯蜡、鲸蜡硬脂醇、 2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。

典型地，临床医师将确定最适合个体受试者的实际剂量。任何特定个体的具体剂量水平和给药频率都可以改变，并且将取决于多种因素，包括所用具体化合物的活性、该化合物的代谢稳定性和作用时间、年龄、体重、一般健康、性别、饮食、施用方式和时间、排泄率、药物组合、特定病况的严重程度以及接受疗法的个体。

用于向人(约70kg体重)施用的根据本发明化合物的建议剂量为0.1mg-1g，优选1mg-500mg活性成分/单位剂量。单位剂量可以每天例如施用1-4次。剂量将取决于施用途径。应当理解，可能有必要根据患者的年龄和体重以及所治疗病况的严重程度对剂量进行常规改变。确切的剂量和施用途径最终将由主治医师或兽医决定。

本发明的化合物也可以与其他治疗剂组合使用。当本发明的化合物与对相同疾病有效的第二治疗剂组合使用时，每种化合物的剂量可以不同于单独使用该化合物时的剂量。

以上提及的组合可以方便地以药物制剂的形式供使用。可以通过任何方便的途径在分开的或组合的药物制剂中依次或同时施用这种组合的各个组分。当顺序施用时，可以首先施用本发明的化合物或第二治疗剂。当同时施用时，可以以相同或不同的药物组合物施用该组合。当在相同制剂中组合时，将理解的是，两种化合物必须是稳定的，并且彼此以及与制剂的其他组分相容。当分开配制时，它们可以以任何方便的制剂形式提供，方便地以本领域中这种化合物已知的方式提供。

可以以本领域技术人员本身已知的方式如例如在Remington's PharmaceuticalSciences,第15版,Mack Publishing Co.,New Jersey(1975)中描述的方式制备本发明的药物组合物。

可以用本发明的化合物治疗、缓解或预防的疾病或病况是与Tau蛋白聚集物相关的病症或异常，例如神经退行性病症。可以治疗、缓解或预防的疾病和病况的实例是由神经原纤维病变的形成引起或与之相关。这是Tau病变中主要的脑部病理。所述疾病和病况包括神经退行性疾病或病况的异质组，包括显示 Tau和淀粉样蛋白病理并存的疾病或病况。

可以治疗、缓解或预防的疾病和病况的实例包括但不限于阿尔茨海默病 (AD)、家族性AD、PART(原发性年龄相关性Tau病变)、克雅病、拳击员痴呆、唐氏综合征、格-施-沙病(GSS)、包涵体肌炎、朊病毒蛋白脑淀粉样变性血管病、创伤性脑损伤(TBI)、肌萎缩性侧索硬化症(ALS)、关岛帕金森病-痴呆复合征、非关岛运动神经元病伴神经原纤维缠结、嗜银颗粒病、皮质基底节变性(CBD)、弥漫性神经原纤维缠结伴钙化症、与染色体17相关的额颞叶痴呆伴帕金森病(FTDP-17)、哈-斯病、多系统萎缩(MSA)、C型尼曼-皮克病、苍白球 -脑桥-黑质变性、皮克病(PiD)、进行性皮质下神经胶质增生、进行性核上麻痹 (PSP)、亚急性硬化性全脑炎、缠结优势型痴呆、脑炎后帕金森病、肌强直性营养不良、亚急性硬化全脑病、LRRK2突变、慢性创伤性脑病、家族性英国型痴呆、家族性丹麦型痴呆、其他额颞叶变性、Guadeloupean帕金森病、神经变性伴脑铁积聚、SLC9A6-相关性精神发育迟缓、具有球状神经胶质包涵体的白质Tau病变、癫痫、卢伊体痴呆(LBD)、轻度认知损伤(MCI)、多发性硬化、帕金森病、HIV-相关性痴呆、成年型糖尿病、老年心脏淀粉样变性、青光眼、缺血性卒中、AD中的精神病，和亨廷顿病。优选地，可以治疗、缓解或预防的疾病和病况包括阿尔茨海默病(AD)以及其他神经退行性Tau病变，例如克雅病、拳击员痴呆、肌萎缩性侧索硬化症(ALS)、嗜银颗粒病、皮质基底节变性(CBD)、17号染色体相关的额颞叶痴呆伴帕金森病(FTDP-17)、皮克氏病 (PiD)、进行性核上性麻痹(PSP)、缠结优势型痴呆、关岛帕金森病-痴呆复合征、哈-斯病、慢性创伤性脑病(CTE)、创伤性脑损伤(TBI)以及其他额颞叶变性。更优选阿尔茨海默病(AD)、皮质基底节变性(CBD)、皮克病(PiD)和进行性核上性麻痹(PSP)。

本发明的化合物还可以用于减少蛋白质聚集，特别是Tau聚集。化合物减少Tau聚集的能力例如可以使用ThT测定法测定(Hudson等人,FEBS J.,2009, 5960-72)。

本发明的化合物可以用于治疗广泛的病症，其中神经炎症过程与Tau蛋白的错折叠和/或病理性聚集相关。

本发明的化合物可以用作分析参考物或体外筛选工具，用于表征具有Tau 病理学的组织和用于测试靶向这种组织上Tau病理学的化合物。

本发明的化合物也可以与至少一种其他生物活性化合物和/或药学上可接受的载体和/或稀释剂和/或赋形剂的混合物形式提供。化合物和/或其他生物活性化合物优选以治疗有效量存在。

其他生物活性化合物的性质将取决于混合物的预期用途。其他生物活性物质或化合物可以通过与根据本发明的化合物相同或相似的机制，或者通过不相关的作用机制，或者通过多个相关和/或不相关的作用机制发挥其生物学作用。

通常，所述其他生物活性化合物可以包括神经元传递增强剂、精神治疗药物、乙酰胆碱酯酶抑制剂、钙通道阻滞剂、生物胺、苯并二氮杂

在进一步的实施方案中，根据本发明的混合物可以包含烟酸或美金刚(memantine)以及根据本发明的化合物和任选地药学上可接受的载体和/或稀释剂和/或赋形剂。

在本发明的又一个实施方案中，提供了混合物，其包含作为其他生物活性化合物的“非典型抗精神病药”，例如氯氮平(clozapine)、齐拉西酮 (ziprasidone)、利培酮(risperidone)、阿立哌唑(aripiprazole)或奥氮平 (olanzapine)，用于治疗阳性和阴性精神病症状，包括幻觉、妄想、思维障碍 (表现为明显的不连贯、思维脱轨(derailment)、言不及义(tangentiality))，和怪异或杂乱无章的行为以及快感不足(anhedonia)、垂头丧气的情感(flattered affect)、冷漠(apathy)和社交退缩，以及根据本发明的化合物和任选的药学上可接受的载体和/或稀释剂和/或赋形剂。

可以适合与根据本发明的化合物组合用于混合物中的其他化合物例如描述于 WO2004/058258(尤其参见第16和17页)中，包括治疗药物靶标(第36至39 页)、烷磺酸和烷醇硫酸(第39至51页)、胆碱酯酶抑制剂(第51至56页)、 NMDA受体拮抗剂(第56至58页)、雌激素(第58至59页)、非甾体类抗炎药(第 60和61页)、抗氧化剂(第61和62页)、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR) 激动剂(第63至67页)、降胆固醇药(第68至75页)、淀粉样蛋白抑制剂(第75 至77页)、淀粉样蛋白形成抑制剂(第77至78页)、金属螯合剂(第78和79页)、抗精神病药和抗抑郁药(第80至82页)、营养补充剂(第83至89页)和增加大脑中生物活性物质利用率的化合物(参见第89至93页)和前药(第93和94)，该文献通过引用并入本文。

本发明还包括本发明化合物的所有适合的同位素变体。本发明化合物的同位素变体定义为其中至少一个原子被具有相同原子序数但原子质量不同于自然界通常发现的原子质量的原子替代的变体。可以掺入本发明化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、硫、氟和氯的同位素如分别为

本发明的化合物可以通过以下方案中所示的一般方法之一来合成。给出这些方法仅用于示例目的，并且不应解释为限制性的。

方案1

在酸性条件下在适合的溶剂中加热商购的苯肼衍生物(Z＝H、F或OMe)与商购的3-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(Fischer-吲哚合成)，纯化后得到三环衍生物(对于Z＝F或OMe可能形成区域异构体)。在形成区域异构体的情况下，通过超临界流体色谱法(SFC)分离它们，得到期望的四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚衍生物。进一步用Boc-保护基、使用适合的溶剂和碱保护三环结构单元的脂族仲NH-部分，纯化后得到期望的Boc-保护的结构单元。

方案2

在适合的溶剂中，使用适合的碱，用碘甲烷或甲苯磺酰氯处理三环结构单元的NH-部分，在纯化后得到N-甲基或N-甲苯磺酰基衍生物。在适当的溶剂中，通过酸处理将Boc保护基裂解，从而在纯化后得到期望的N-甲基或N-甲苯磺酰基三环结构单元。如果在裂解Boc-保护基后没有进行碱处理，则得到相应的盐。

方案3

在酸性条件下在适合的溶剂中加热商购的苯肼衍生物(Z＝F)与商购的2-氧代-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(Fischer吲哚合成)，得到三环衍生物。在2-或3-取代的苯肼衍生物的情况下，通过超临界流体色谱法(SFC)分离区域异构体。然后使用适合的溶剂和碱对脂族仲胺部分进行Boc-保护，纯化后得到期望的结构单元。然后用甲苯磺酰氯在适合的溶剂中、使用适合的碱处理吲哚部分的NH-部分，纯化后得到N-甲苯磺酰基衍生物。通过在适合的溶剂中进行酸处理裂解Boc-保护基，纯化后得到包含仲胺的三环结构单元。在裂解Boc-保护基后无碱处理的情况下，得到相应的盐。

方案4

在适合的溶剂中并使用另外的碱，用伯胺或仲胺处理包含两个卤素(Br或 Cl)原子的商购的苯并[d]噻唑(G＝Ph)或苯并[d]噁唑(G＝Ph)衍生物。通过用伯胺或仲胺亲和取代替代离去基X，纯化后得到相应的氨基取代的苯并[d]噻唑或苯并[d]噁唑衍生物。在反应性较低的胺的情况下，通过在微波条件下进行亲核取代得到期望的苯并[d]噻唑(G＝Ph)或苯并[d]噁唑(G＝Ph)衍生物。在适合的溶剂中并使用另外的碱，用吗啉处理包含两个卤素(Br或Cl)原子的相应的噻唑并[5,4-b] 吡啶(G＝Py)和噻唑并[4,5-b]吡啶(G＝Py)衍生物，纯化后得到相应的亲和置换产物(吗啉代-噻唑并[5,4-b]吡啶(G＝Py)和吗啉代-噻唑并[4,5-b]吡啶(G＝Py)衍生物)。

方案5

通过钯化学，使用适合的钯源如乙酸钯(II)(Pd(OAc)

方案6

通过钯化学，使用适合的钯源如乙酸钯(II)(Pd(OAc)

方案7

通过钯化学，使用适合的钯源如乙酸钯(II)(Pd(OAc)

实施例

所有试剂和溶剂均购自商业渠道，且无需进一步纯化即使用。1H NMR光谱使用Bruker AV 300和400MHz光谱仪在氘代溶剂中记录。化学位移(δ)以百万分之一和以hertz计的偶合常数(J值)表示。自旋多重性由以下符号表示：s(单峰)，d(双峰)，t(三重峰)，q(四重峰)，m(多峰)，bs(宽峰)。在配备6130Chemstation 的Agilent 1290Infinity II光谱仪和配备6130Chemstation的Agilent 1200 Infinity II光谱仪上获得质谱。使用Agilent7890B气相色谱仪和5977B质谱仪收集GC-MS数据。红外光谱使用PerkinElmer光谱仪得到。色谱使用硅胶(Fluka: 硅胶10l 60,0.063-0.2mm)和具体实施例所示的适合溶剂进行。使用Biotage Isolera与HP-Sil或KP-NH SNAP柱(Biotage)和具体实施例中所示的溶剂梯度进行快速纯化。薄层色谱法(TLC)使用硅胶板与UV检测进行。

制备例1

在0℃向(4-氟苯基)肼HCl-盐(1g,6.1mmol)和3-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯 (1.2g,6.1mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的溶液中加入浓H

向来自上述步骤A的标题化合物(0.6g,3.15mmol)在THF(10mL)中的溶液中加入三乙胺(1.3mL,9.47mmol)和二碳酸二叔丁酯(0.757g,3.46mmol)，将该反应混合物搅拌12h。通过TLC证实反应完成后，减压除去溶剂，通过闪蒸柱色谱法，使用己烷/乙酸乙酯(80:20)纯化粗反应混合物，得到标题化合物，为淡黄色固体(0.55g,60％)。

向来自上述步骤B的标题化合物(0.55g,1.89mmol)在THF(5mL)中的溶液中加入氢化钠(0.136g,5.6mmol)，随后加入碘甲烷(0.13mL,2.07mmol)。将该反应混合物在室温搅拌2h。将该混合物溶于乙酸乙酯(20mL)，用水和盐水洗涤。分离有机相，用Na

MS:305.0(M+H)

向来自上述步骤C的标题化合物(0.42g,1.38mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入2N HCl(5mL)的1,4-二噁烷溶液。将该反应混合物搅拌过夜。反应完成后，蒸发该反应混合物以除去溶剂，用乙醚洗涤，得到标题化合物，为类白色固体(0.25g,80％)。

制备例2

向来自制备例1步骤B的标题化合物(0.55g,1.89mmol)在THF(5mL)中的溶液中加入氢化钠(0.136g,5.6mmol)，随后添加对甲苯磺酰氯(0.396g, 2.07mmol)。将该反应混合物在室温搅拌30分钟。将该混合物溶于乙酸乙酯 (20mL)，用水和盐水洗涤。分离有机相，用Na

向来自上述步骤A的标题化合物(0.4g,0.9mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入2N HCl(5mL)的1,4-二噁烷溶液。将该反应混合物在室温搅拌12h。反应完成后，蒸发该反应混合物以除去溶剂，用乙醚洗涤，得到标题化合物，为类白色固体(0.25g,80％)。将粗产物照此用于下一步。MS:345.0(M+H)

制备例3

在0℃向(4-甲氧基苯基)肼HCl-盐(10g,57.5mmol)和3-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(11.4g,57.5mmol)在1,4-二噁烷(100mL)中的溶液中加入浓H

向来自上述步骤A的标题化合物(10g,49.5mmol)在THF(10mL)中的溶液中加入三乙胺(20mL,148.5mmol)和二碳酸二叔丁酯(11.8g,54mmol)，将该反应混合物搅拌12h。通过TLC证实反应完成后，减压除去溶剂，通过闪蒸柱色谱法，使用己烷/乙酸乙酯(80:20)纯化粗反应混合物，得到标题化合物，为白色固体(4g,26.7％)。

向来自上述步骤B的标题化合物(2g,6.6mmol)在THF(10mL)中的溶液中加入氢化钠(0.317g,13.2mmol)，随后添加碘甲烷(0.4mL,7.26mmol)。将该反应混合物在室温搅拌2h。将该混合物溶于乙酸乙酯(200mL)，用水和盐水洗涤。分离有机相，用Na

向来自上述步骤C的标题化合物(0.65g,2.05mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入4N HCl(5mL)的1,4-二噁烷溶液。将该反应混合物搅拌过夜。反应完成后，蒸发该反应混合物以除去溶剂，用乙醚洗涤，得到标题化合物，为类白色固体(0.5g,98％)。

制备例4

向来自制备例3步骤B的标题化合物(2g,6.6mmol)在THF(10mL)中的溶液中加入氢化钠(0.317g,13.2mmol)，随后添加对甲苯磺酰氯(1.5g,7.9mmol)。将该反应混合物在室温搅拌2h。将该混合物溶于乙酸乙酯(200mL)，用水和盐水洗涤。分离有机相，用Na

向来自上述步骤A的标题化合物(1.5g,3.28mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液中加入2N HCl(10mL)的1,4-二噁烷溶液。将该反应混合物在室温搅拌12h。反应完成后，蒸发该反应混合物以除去溶剂，用乙醚洗涤，得到标题化合物，为类白色固体(1g,77％)。

制备例5

将5-氟-2-肼吡啶(5g)和3-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(5g)在甲醇(50mL)中的溶液在25℃搅拌12h。通过TLC证实反应完成后，浓缩该反应混合物，将深棕色粗产物(10g)不经进一步纯化直接用于下一步。MS:309.1(M+H)

使用微波将来自上述步骤A的粗标题化合物(10g)在二甘醇(20mL)中的溶液在180℃加热90min(4批)。通过LCMS证实反应完成后，将该反应混合物倾入水，随后用二氯甲烷萃取。分离有机层，浓缩，得到粗产物，用乙醚洗涤，真空干燥，得到标题化合物，为浅棕色固体(1g,16％)。MS:192.2(M+H)

向来自上述步骤B的标题化合物(1g,5.23mmol)在THF(10mL)中的溶液中加入三乙胺(2.2mL,15.39mmol)，随后添加二碳酸二叔丁酯(1.36g,6.28mmol)。然后将该反应混合物在室温搅拌12h。通过TLC证实反应完成后，除去溶剂，通过闪蒸柱色谱法，使用己烷/乙酸乙酯纯化粗反应混合物(60:40)，得到标题化合物，为黄色固体(1.1g,72％)。

在0℃向来自上述步骤C的标题化合物(1.1g,3.78mmol)在N,N’-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中加入氢化钠(0.226g,5.67mmol)。将该反应混合物在0℃搅拌30min，随后在0℃添加碘甲烷(0.25mL,4.15mmol)。然后将该反应混合物在0℃搅拌30min。通过TLC证实反应完成后，用水使该反应混合物淬灭，随后用乙酸乙酯(20mL)萃取。浓缩有机层，得到粗产物，为黄色固体(1g)，不经进一步纯化直接用于下一步。MS:306.1(M+H)

向来自上述步骤D的标题化合物(1g)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入2N HCl(5mL)的1,4-二噁烷溶液。将该反应混合物在室温搅拌3h。反应完成后，蒸发该反应混合物以除去溶剂，用乙醚洗涤，得到标题化合物，为淡黄色固体 (0.25,37％)。

制备例6

在0℃向来自制备例5步骤C的标题化合物(1.1g,3.78mmol)在N,N’-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中加入氢化钠(0.226g,5.67mmol)。将该反应混合物在 0℃搅拌30min，然后添加对甲苯磺酰氯(0.788g,4.15mmol)。将该反应混合物在0℃搅拌30min。用冰水使该化合物淬灭，用乙酸乙酯(20mL)萃取。分离有机相，用Na

向来自上述步骤A的标题化合物(1g)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入2N HCl(5mL)的1,4-二噁烷溶液。将该反应混合物在室温搅拌3h。反应完成后，蒸发该反应混合物以除去溶剂，用乙醚洗涤，得到标题化合物，为淡黄色固体 (0.75g,65％)。

制备例7

在0℃向(3-氟苯基)肼HCl-盐(25g,153.7mmol)和3-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(30.59g,153.7mmol)在1,4-二噁烷(250mL)中的溶液中加入浓H

向来自上述步骤A的标题化合物(23g,121.05mmol)在THF(250mL)中的溶液中加入三乙胺(33.7mL,242.1mmol)和二碳酸二叔丁酯(32g,145.2mmol)，将该反应混合物搅拌12h。通过TLC证实反应完成后，减压除去溶剂，通过闪蒸柱色谱法，使用己烷/乙酸乙酯(80:20)纯化粗反应混合物，得到标题化合物，为淡黄色固体(7g,20％)。MS:191.2(M-Boc)

通过SFC手性柱(YMC Amylose-SA)分离来自上述步骤B的区域异构体混合物(7.0g,比例:95/5)，得到期望的主要区域异构体，为淡黄色固体，其具有 100％的区域异构体纯度(3g,43％)。

还分离了次要区域异构体(0.3g,4.3％)。

向来自上述步骤C的主要区域异构体(1.5g,5.16mmol)在N,N’-二甲基甲酰胺(15mL)中的溶液中加入氢化钠(0.3g,7.74mmol)，然后添加对甲苯磺酰氯(1.17g,6.19mmol)。将该反应混合物在室温搅拌30min。将该混合物溶于乙酸乙酯(50mL)，用水和盐水洗涤。分离有机相，用Na

向来自上述步骤D的标题化合物(2g,4.5mmol)在二氯甲烷(120mL)中的溶液中加入2N HCl(10mL)的1,4-二噁烷溶液。将该反应混合物在室温搅拌12h。反应完成后，蒸发该反应混合物以除去溶剂，用乙醚洗涤，得到标题化合物，为黄白色固体(1.6g,94％)。

制备例8

向来自制备例7步骤C的次要区域异构体(0.3g,1.034mmol)在THF(10mL) 中的溶液中加入氢化钠(0.082g,2.06mmol)，随后添加对甲苯磺酰氯(0.294g, 1.55mmol)。将该反应混合物在室温搅拌30min。将该混合物溶于乙酸乙酯(30mL)，用水和盐水洗涤。分离有机相，用Na

向来自上述步骤A的标题化合物(0.25g,0.56mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入2N HCl(2mL)的1,4-二噁烷溶液。将该反应混合物在室温搅拌12h。反应完成后，蒸发该反应混合物以除去溶剂，用乙醚洗涤，得到粗的标题化合物，为类白色固体(0.2g)。MS:345.1(M+H)

制备例9

向来自制备例7步骤C的主要区域异构体(1.0g,3.44mmol)在THF(15mL) 中的溶液中加入氢化钠(0.275g,6.89mmol)，随后添加碘甲烷(10.3mL,4.14mmol). 将该反应混合物在室温搅拌30min。将该混合物溶于乙酸乙酯(40mL)，用水、盐水洗涤，用Na

向来自上述步骤A的标题化合物(1.0g,3.28mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入2N HCl(5mL)的1,4-二噁烷溶液。将该反应混合物在室温搅拌12h。反应完成后，蒸发该反应混合物以除去溶剂，用乙醚洗涤，得到标题化合物，为类白色固体(0.75g 96％)。

制备例10

在0℃向(4-氟苯基)肼HCl-盐(2g,12.3mmol)和2-氧代-8-氮杂双环[3.2.1] 辛烷-8-甲酸叔丁酯(2.7g,12.3mmol)在1,4-二噁烷(30mL)中的溶液中加入浓 H

向来自上述步骤A的标题化合物(2g,5.1mmol)在THF(20mL)中的溶液中加入三乙胺(2.56mL,18mmol)和二碳酸二叔丁酯(2.21g,10mmol)，将该反应混合物搅拌12h。通过TLC证实反应完成后，减压除去溶剂，通过闪蒸柱色谱法、使用40％-50％乙酸乙酯的石油醚溶液纯化粗反应混合物，得到标题化合物，为淡黄色固体(0.9g,31％)。

在0℃向来自上述步骤B的标题化合物(1g,3.16mmol)在THF(15mL)中的溶液中少量分批加入氢化钠(60％的矿物油溶液；0.25g,6.32mmol)。添加完成后，将该反应混合物在室温搅拌30min，然后再将该反应混合物冷却至0℃。然后在 0℃向该反应混合物中滴加对甲苯磺酰氯(0.72g,3.79mmol)在THF(5mL)中的溶液。添加完成后，将该反应混合物在室温搅拌2h。通过TLC证实反应完成后，将该反应混合物冷却至0℃，用冰水淬灭，然后用乙酸乙酯(50mL)萃取。用水(10mL)和盐水溶液(10mL)洗涤乙酸乙酯层。用Na

在0℃向来自上述步骤C的标题化合物(0.9g,1.91mmol)在二氯甲烷(5mL) 中的溶液中加入4N HCl(10mL)的1,4-二噁烷溶液。将该反应混合物在环境温度下搅拌12h。反应完成后，蒸发该反应混合物以除去溶剂，用乙醚(10mL)洗涤，得到粗标题化合物，为类白色固体(0.65g,93％)。MS:371.1(M+H)

制备例11

在0℃向搅拌的tryptoline(2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[4,3-b]吲哚)(150g,0.871mol)在THF(1.5L)中的溶液中加入三乙胺(243mL,1.74mol)和二碳酸二叔丁酯(228g,1.04mol)，将该反应混合物在25℃搅拌12h。反应完成后(通过TLC 监测)，在冰冷却下向该反应混合物中加入水，用乙酸乙酯(2x 500mL)萃取。用盐水(1x 250mL)洗涤合并的有机萃取物，用无水Na

在0℃向搅拌的氢化钠(15.86g,60％的矿物油溶液,1.10mol)在干THF (400mL)中的混悬液中缓慢地加入来自上述步骤A的标题化合物(100g, 0.367mol)在干THF(1L)中的溶液，在相同温度下搅拌30min。然后在0℃滴加对甲苯磺酰氯(105g,0.55mol)在干THF(100mL)中的溶液，将该反应混合物在 0℃搅拌1h。反应完成后(通过TLC监测)，将该反应混合物冷却至0℃，用冰水(500mL)淬灭，随后使用乙酸乙酯(3x 500mL)萃取。用水(2x500mL)、盐水(1 x 250mL)洗涤合并的有机萃取物，用Na

在0℃向来自上述步骤B的标题化合物(130g,0.30mol)在1,4-二噁烷(1.3L) 中的溶液中加入4M HCl的1,4-二噁烷溶液(500mL)。将该反应混合物在25℃搅拌12h。反应完成后，减压蒸发该反应混合物，用乙醚洗涤残余物，得到标题化合物，为浅棕色固体(95g,94％)。

制备例12

在0℃向搅拌的氢化钠(15.86g,60％的矿物油溶液,1.10mol)在干THF (400mL)中的混悬液中缓慢地加入来自制备例11步骤A的标题化合物(100g, 0.367mol)在干THF(1L)中的溶液，在相同温度下搅拌30min。然后在0℃滴加碘甲烷(10mL,0.55mol)在干THF(100mL)中的溶液，将该反应混合物在0℃搅拌1h。反应完成后(通过TLC监测)，将该反应混合物冷却至0℃，用冰水(500mL) 淬灭，随后用乙酸乙酯(3x 500mL)萃取。用水(2x 300mL)、盐水(1x 250mL)洗涤合并的有机萃取物，用Na

MS:287.2(M+H)

在0℃向来自上述步骤A的标题化合物(93g,0.32mol)在1,4-二噁烷(1.0L) 中的溶液中加入4M HCl的1,4-二噁烷溶液(400mL)。将该反应混合物在25℃搅拌12h。反应完成后，减压蒸发该反应混合物，用乙醚洗涤残余物，得到标题化合物，为浅棕色固体(58g,80％)。

制备例13

向6-溴-2-氯苯并[d]噻唑(1g,4.0mmol)在乙醇(6mL)中的溶液中加入4M甲胺溶液(1.5mL)，使用Biotage微波将该反应混合物在150℃加热45min。将该反应混合物冷却至室温。减压除去溶剂，将粗产物溶于二氯甲烷(150mL)，用 1M NaOH溶液、水、盐水洗涤，用Na

制备例14

向5-溴-2-氯苯并[d]噻唑(0.9g,3.62mmol)在乙醇(12mL)中的溶液中加入4M 甲胺溶液(1mL)，使用Biotage微波将该反应混合物在150℃加热45min。将该反应混合物冷却至室温。减压除去溶剂，通过闪蒸柱色谱法，使用己烷:乙酸乙酯(50:50)纯化粗反应混合物，得到标题化合物，为固体(0.57g,65％)。

制备例15

向2,5-二氯苯并[d]噻唑(5g,24.5mmol)在干二氯甲烷(50mL)中的溶液中加入2M二甲胺的THF溶液(18.37mL,36.65mmol)，将该反应混合物冷却至0℃。向该冷反应混合物中滴加三乙胺(6.8mL,49mmol)。添加完成后，将该反应混合物在室温搅拌4h。反应完成后，用水(2x 20mL)处理该反应混合物，用二氯甲烷萃取。分离有机层，用Na

制备例16

向6-溴-2-氯苯并[d]噻唑(0.45g,1.81mmol)在乙醇(12mL)中的溶液中加入 2M二甲胺的THF溶液(3mL)，将该反应混合物在150℃、使用Biotage微波加热45min。将该反应混合物冷却至室温。减压除去溶剂，通过闪蒸柱色谱法，使用己烷:乙酸乙酯(50:50)纯化粗反应混合物，得到标题化合物，为固体(0.441g 95％)。

制备例17

向2,6-二氯苯并[d]噁唑(5g,26.8mmol)在干二氯甲烷(50mL)中的溶液中加入吗啉(3.50g,40.3mmol)，将该反应混合物冷却至0℃。向该冷反应混合物中滴加三乙胺(4.0g,39.6mmol)。添加完成后，将该反应混合物在室温搅拌4h。反应完成后，用水(2x 20mL)处理该反应混合物，用二氯甲烷萃取。分离有机层，用 Na

制备例18

向2,5-二氯苯并[d]噁唑(5g,26.8mmol)在干二氯甲烷(50mL)中的溶液中加入吗啉(3.50g,40.3mmol)，将该反应混合物冷却至0℃。向该冷反应混合物中滴加三乙胺(4.0g,39.6mmol)。添加完成后，将该反应混合物在室温搅拌4h。反应完成后，用水(2x 20mL)处理该反应混合物，用二氯甲烷萃取。分离有机层，用Na

制备例19

在0℃向搅拌的商购的2,6-2,6-二氯苯并[d]噻唑(500g,2.45mol)在二氯甲烷(4L)中的溶液中加入三乙胺(1031mL,7.35mol)和吗啉(290mL,3.67mol)。然后将该反应混合物在25℃搅拌48h。反应完成后(通过TLC监测)，向该反应混合物中加入水，随后用二氯甲烷(2x 2.5L)萃取。用Na

制备例20

向2,5-二氯苯并[d]噻唑(5g,24.5mmol)在干二氯甲烷(50mL)中的溶液中加入吗啉(3.19g,36.6mmol)，将该反应混合物冷却至0℃。向该冷反应混合物中滴加三乙胺(3.71g,36.7mmol)，将该反应混合物在室温搅拌4h。反应完成后，用水(2x 20mL)处理该反应混合物，用二氯甲烷萃取。分离有机层，用Na

制备例21

向3,4-二氟硝基苯(5g,31.4mmol)在乙腈(50mL)中的溶液中加入N-甲基哌嗪(3.7g,37.7mmol)和碳酸钾(12.8g,94.3mmol)。然后将该反应混合物加热至回流 3小时。过滤该反应混合物，真空浓缩，用乙醚洗涤得到的固体，得到标题化合物，为黄色固体(5.2g,69％)。

向来自上述步骤A的标题化合物(5.2g,21.7mmol)在乙醇(100mL)中的溶液中加入10％Pd/C(0.5g)，将该反应混合物氢化16小时。将该反应混合物通过硅藻土垫过滤，真空浓缩，得到标题化合物，为棕色固体(4.0g,88％)。

在0℃用注射器向来自上述步骤B的标题化合物(3.0g,14.33mmol)在乙腈 (30mL)中的混悬液中历时10min加入亚硝酸叔丁酯(2.5mL,21.5mmol)。然后在 0℃分批加入溴化铜(II)(3.8g,17.2mmol)，搅拌30min。将该反应混合物温热至 25℃ 1h，加热至60℃ 4h。反应完成后(通过TLC监测)，将该反应混合物通过硅藻土垫过滤，用乙酸乙酯洗涤，得到粗产物。通过硅胶(60-120)柱色谱法，使用二氯甲烷/甲醇(99:1)纯化粗物质，得到标题化合物，为棕色固体(1g,25％)。

制备例22

向3,4-二氟硝基苯(0.5g,3.14mmol)在乙酸乙酯(10mL)中的溶液中加入三乙胺(81.3mL,9.42mmol)，随后加入8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷盐酸盐(0.56g,3.77mmol)。然后将该反应混合物室温搅拌16h。过滤该反应混合物，真空浓缩，用乙醚洗涤得到的固体，得到标题化合物，为黄色固体(0.7g,88％)。

向来自上述步骤A的标题化合物(0.7g,2.77mmol)在乙醇(20mL)中的溶液中加入10％Pd/C(0.1g)，将该反应混合物氢化16小时。将该反应混合物通过硅藻土垫过滤，真空浓缩，得到标题化合物，为浅棕色树胶状固体(0.6g,96％)。

在0℃用注射器向来自上述步骤B的标题化合物(0.50g,2.24mmol)在乙腈 (10mL)中的混悬液中历时10min加入亚硝酸叔丁酯(0.4mL,3.35mmol)。然后在 0℃分批加入溴化铜(II)(0.6g,2.68mmol)，搅拌30min。将该反应混合物温热至 25℃ 1h，加热至60℃ 4h。反应完成后(通过TLC监测)，将该反应混合物通过硅藻土垫过滤，用乙酸乙酯洗涤，得到粗产物。通过硅胶(60-120)柱色谱法，使用二氯甲烷/甲醇(99:1)纯化粗物质，得到标题化合物，为浅棕色固体(0.27g, 42％)。

制备例23

向4-溴-3-氟苯胺(1g,5.26mmol)在N,N’-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中加入碘化钾(2.18g,13.1mmol)和碳酸钠(1.95g,18.4mmol)，将该反应混合物加热至 150℃。然后加入1-溴-2-(2-溴乙氧基)乙烷(1.34g,5.77mmol)，持续加热16h。反应完成后(通过TLC监测)，用水(25mL)稀释该反应混合物，用乙酸乙酯(2x 15mL)萃取。用Na

制备例24

在0℃向2,6-二氯苯并[d]噁唑(5g,26.6mmol)在干二氯甲烷(50mL)中的溶液中加入2M二甲胺的THF溶液(26.6mL,53.2mmol)，加入三乙胺(5.6mL, 39.9mmol)。然后将该反应混合物在25℃搅拌4h。反应完成后(通过TLC监测)，用水(20mL)稀释该反应混合物，用二氯甲烷(2x 20mL)萃取。用Na

制备例25

向5-溴-2-氟苯胺(1g,5.26mmol)在N,N’-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中加入碘化钾(2.18g,13.1mmol)和碳酸钠(1.95g,18.4mmol)，将该反应混合物加热至 150℃。然后加入1-溴-2-(2-溴乙氧基)乙烷(1.34g,5.77mmol)，持续加热16h。反应完成后(通过TLC监测)，用水(25mL)稀释该反应混合物，用乙酸乙酯(2x 15mL)萃取。用Na

制备例26

将5-溴-3-碘吡啶-2-胺(5g,16.73mmol)和异硫氰酸苯甲酰酯(3.29, 20.16mmol)在丙酮(10mL)中的溶液在60℃搅拌12h。反应完成后(通过TLC监测)，减压蒸发该反应混合物，过滤固体，用己烷(200mL)洗涤，干燥，得到标题化合物，为类白色固体(4g,52％)。

在25℃向来自上述步骤A的标题化合物(4g,8.67mmol)在1,4-二噁烷(60mL) 中的溶液中加入碳酸钾(2.5g,18.1mmol)、L-脯氨酸(0.28g,2.43mmol)和碘化亚铜 (I)(0.462g,2.42mmol,)，将该反应混合物在80℃搅拌16h。反应完成后(通过TLC 监测)，将该反应混合物倾入水(100mL)和饱和NH

将来自上述步骤B的粗标题化合物(2g,5.98mmol)在H

在0℃用注射器向来自上述步骤C的标题化合物(0.3g,1.3mmol)在乙腈 (5mL)中的混悬液中历时10min加入亚硝酸叔丁酯(0.2g,1.95mmol)。然后在0℃分批加入氯化铜(II)(0.2g,1.48mmol)，将该反应混合物搅拌30min。将该反应混合物温热至25℃ 1h，加热至65℃ 4h。反应完成后(通过TLC监测)，减压蒸发溶剂，用水(20mL)稀释得到的残余物，用二氯甲烷/甲醇(95:5)(3x 20mL)萃取。用盐水(10mL)洗涤合并的有机层，用Na

在0℃向来自上述步骤D的标题化合物(0.18g,0.72mmol)在干二氯甲烷 (5mL)中的溶液中加入三乙胺(0.3mL,2.16mmol)和吗啉(74mg,0.85mmol)，将该反应混合物在25℃搅拌6h。反应完成后(通过TLC监测)，减压浓缩该反应混合物，得到粗产物，通过硅胶(60-120目)柱色谱法，使用己烷/乙酸乙酯(70:30) 纯化，得到标题化合物，为类白色固体(0.18g,83％)。

制备例27

向2-溴-6-氯吡啶-3-胺(5g,24.1mmol)和硫氰酸钾(7g,72.3mmol)在乙醇 (50mL)中的溶液中加入盐酸(37％,100mL)，将该反应混合物在100℃搅拌40-45 h。通过TLC证实反应完成。将该反应混合物冷却至室温，浓缩，得到棕色固体，使其分配在二氯甲烷(150mL)与1N NaOH水溶液(50mL)之间。过滤固体，干燥，得到粗的标题化合物，为淡黄色固体(3.5g,79％)。将产物照此用于下一步。MS:186.1(M+H)

用注射器在0℃向来自上述步骤A的标题化合物(1.5g,8.08mmol)在乙腈 (25mL)中的混悬液中历时10min加入亚硝酸叔丁酯(1.4mL,12.12mmol)。然后分批加入溴化铜(II)(2.16g,9.69mmol)。在0℃ 30分钟后，将该反应混合物温热至室温2h。通过TLC监测反应进展。反应完成后，蒸发溶剂，用水(20mL)和二氯甲烷/甲醇(95:5)(3x 20mL)稀释。用盐水(10mL)洗涤合并的有机层，用 Na

向来自上述步骤B的粗的标题化合物(0.65g,2.61mmol)在干二氯甲烷(5mL) 中的溶液中加入三乙胺(1.1mL,7.83mmol)和吗啉(0.34g,3.91mmol)。然后将该反应混合物在室温搅拌6h。真空浓缩该反应混合物。通过硅胶(60-120)柱色谱法纯化粗化合物，用石油醚/乙酸乙酯(50/50)洗脱，得到标题化合物，为类白色固体 (0.6g,90％)。

制备例28

在微波试管中加入商购的6-溴-2-氯噻唑并[4,5-c]吡啶(50mg,0.20mmol)和吗啉(3.5mL,40.1mmol)。密封试管，在室温搅拌10分钟，然后在150℃在微波反应器(Biotage)中搅拌10分钟。减压除去溶剂，得到标题化合物(0.60g,78％)。

制备例29

向商购的(2-氟苯基)肼盐酸盐(10.0g,0.0615mol)和3-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(12.3g,0.0615mol)在1,4-二噁烷(100.0mL)中的搅拌的溶液中加入浓H

浓缩该反应混合物，通过使用30％NaOH水溶液(pH＝9-10)碱化粗产物，然后进行二氯甲烷萃取。减压浓缩二氯甲烷层，得到标题化合物(10.0g,粗品)，为棕色油状物。

将粗化合物不经进一步纯化用于下一步。MS:191.1(M+H)

在0℃向来自上述步骤A的粗标题化合物(10.0g,粗品)在四氢呋喃 (100.0mL)中的溶液中加入三乙胺(2.83mL,0.0205mol)和二碳酸二叔丁酯 (1.88mL,0.00820mol)，然后在室温在氮气气氛中搅拌12h。通过TLC和LCMS 监测反应。用乙酸乙酯(50mL)和水(100mL)稀释该反应混合物。分离有机相，用乙酸乙酯将水相再萃取2次。用Na

在0℃向氢化钠(0.575g,15.0mmol)在THF(10.0mL)中的混悬液中滴加来自上述步骤B的标题化合物(1.50g,5.00mmol)的THF溶液(10.0mL)，将该混合物在室温搅拌60min。在0℃滴加甲苯磺酰氯(1.20g,6.00mol)，然后在室温在氮气气氛中搅拌3h。

通过TLC证实反应完成后，用冰水使该反应混合物猝灭，然后用乙酸乙酯(50.0mL)萃取。分离有机层，用硫酸钠干燥，过滤，然后减压浓缩。用HP-Sil 柱(Biotage)，通过使用石油醚/乙酸乙酯梯度纯化粗产物(100/0->80/20)，得到标题化合物(1.6g,71.8％)，为类白色固体。

在0℃向搅拌的来自上述步骤C的标题化合物(1.6g,3.59mmol)在二氯甲烷(10.0mL)中的溶液中加入4M HCl的1,4-二噁烷溶液(10.00mL)，然后在0℃搅拌2h，温热至室温。通过TLC证实反应完成后，浓缩该反应混合物，得到标题化合物(1.3g,94.6％)，为灰色固体。将粗化合物不经进一步纯化用于下一步。 MS:345.1(M+H)

制备例30

在0℃向搅拌的商购的(2-氟苯基)肼盐酸盐(10.0g,0.0615mol)和3-氧代哌啶 -1-甲酸叔丁酯(12.3g,0.0615mol)在1,4-二噁烷(100.0mL)中的溶液中加入浓 H

将粗化合物不经进一步纯化用于下一步。MS:191.1(M+H)

在0℃向搅拌的来自步骤A的标题化合物(10.0g,粗品)在四氢呋喃 (100.0mL)中的溶液中加入三乙胺(2.83mL,0.0205mol)和二碳酸二叔丁酯 (1.88mL,8.20mmol)。将该混合物在室温在氮气气氛中搅拌12h。通过TLC和 LCMS监测反应。用乙酸乙酯(50mL)和水(100mL)稀释该反应混合物。分离有机相，用乙酸乙酯将水相再萃取2次。用Na

在0℃向氢化钠(0.421g,0.0110mol)在THF(10.0mL)中的混悬液中滴加来自步骤B的标题化合物(1.1g,3.66mol)的THF溶液(10mL)。然后将该混合物在室温搅拌60min。在0℃加入碘甲烷(0.624g,4.39mmol)，然后将该混合物在室温在氮气气氛中搅拌3h。通过TLC证实反应完成后，用冰水使该反应混合物淬灭，然后用乙酸乙酯(50.0mL)萃取。分离有机层，用硫酸钠干燥，过滤，然后浓缩，得到标题化合物(1.10g,96.2％)，为浅棕色固体。

将粗化合物不经进一步纯化用于下一步。MS:305.3(M+H)

在0℃向来自步骤C的标题化合物(1.10g,3.52mol)在二氯甲烷(5.0mL)中的搅拌的溶液中加入4N HCl的二噁烷溶液(10.00mL)。将该混合物在0°搅拌2h，温热至室温。

浓缩该反应混合物，用乙醚(10.00mL)洗涤粗产物，真空干燥，得到标题化合物(750mg,78.8％)，为灰色固体。

制备例31

在0℃向商购的2,5-二氯-1,3-苯并噁唑(1.00g,5.32mmol)在二氯甲烷 (50.0mL)中的溶液中缓慢地加入三乙胺(1.61g,1.60mol)和1-甲基哌嗪(0.693g, 6.38mmol)。然后将该混合物在25℃搅拌12hr。用水(50.0mL)和二氯甲烷 (50.0mL)稀释该反应混合物。分离有机相，用二氯甲烷将水相再萃取2次。用 Na

制备例32

将商购的2,5-二溴吡啶(1.0g,4.22mmol)和N-甲基哌嗪(0.55g,5.49mmol)溶于脱气的甲苯并用氮气氛填充。然后加入三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.077g, 0.084mmol)、xantphos(0.147g,0.253mmol)和叔丁醇钠(0.609g,6.33mmol)，将该混合物加热至100℃5h。

用硅藻土过滤该反应混合物，用二氯甲烷和甲醇洗涤，减压蒸发溶剂。用 HP-Sil柱(Biotage)，通过使用DCM/MeOH梯度(100/0->96/04)纯化粗产物，得到标题化合物(0.46g,37％)，为淡黄色固体。

制备例33

将商购的2,5-二溴吡嗪(0.500g,2.10mmol)和1-甲基哌嗪(0.105g, 1.05mmol)、Xantphos(0.073g,0.126mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.0385g, 0.126mmol)和叔丁醇钠(0.404g,4.20mmol)加入脱气瓶中，加入干甲苯(15.0mL)。给小瓶充满氩气，密封，在100℃加热12小时。将该反应混合物通过硅藻土过滤，减压浓缩滤液，得到标题化合物(0.165g,28％)，为浅棕色树胶状固体。将粗化合物不经进一步纯化用于下一步。MS:259.0(M+2H)

制备例34

向商购的5-溴-2-氟吡啶(0.3g,1.70mmol)和4-甲基苯磺酸6-氧杂-3-氮杂双环[3.1.1]庚烷酯(0.463g,1.7mmol)在DMF中的溶液中加入碳酸钾(0.707g, 5.11mmol)。将该反应体系加热至90℃ 12h。

用乙酸乙酯(30mL)和水(30mL)稀释该反应混合物。分离有机相，用乙酸乙酯将水相再萃取2次。用Na

制备例35

向商购的5-溴-2-氯-吡啶(0.25g,2.451mmol)和六氢-1H-呋喃并[3,4-c]吡咯(0.647g,3.676mmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入碳酸钾(0.677g,4.902mmol)，将该混合物在90℃加热12h。用乙酸乙酯(30mL)和水(30mL)稀释该反应混合物。分离有机相，用乙酸乙酯将水相再萃取2次。用Na

制备例36

将商购的2,5-二溴吡啶(0.5g,2.2mmol)和(R)-2-甲基吗啉(0.234g,2.9mmol) 加入到反应试管中，加入脱气的甲苯(10.0mL)。然后加入Xantphos(0.073g, 2.1mol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.024g,0.4mmol)和叔丁醇钠(0.608g, 6.3mmol)，将该溶液在100℃在充满氩气的密封试管中加热5小时。

将该反应混合物通过硅藻土过滤，减压浓缩滤液。用HP-Sil柱(Biotage)，通过使用石油醚/乙酸乙酯梯度(100/0->70/30)纯化粗产物，得到标题化合物(0.3g, 55％)，为类白色固体。

制备例37

将商购的2,5-二溴吡啶(0.5g,2.2mmol)和(S)-2-甲基吗啉(0.234g,2.9mmol)加入到反应试管中，加入脱气的甲苯(10.0mL)。然后加入Xantphos(0.073g, 2.1mol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.024g,0.4mmol)和叔丁醇钠(0.608g, 6.3mmol)，将该溶液在100℃在充满氩气的密封试管中加热5小时。

将该反应混合物通过硅藻土过滤，减压浓缩滤液。用HP-Sil柱(Biotage)，通过使用石油醚/乙酸乙酯梯度(100/0->70/30)纯化粗产物，得到标题化合物 (0.37g,68％)，为类白色固体。

制备例38

将商购的2,5-二溴吡啶(1g,4.22mmol)和(R)-3-甲基吗啉(0.234g,2.9mmol)加入到反应试管中，加入脱气的甲苯(10.0mL)。然后加入Xantphos(0.146g, 0.253mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.048g,0.84mmol)和叔丁醇钠(1.21g, 12.66mmol)，将该溶液在100℃在充满氩气的密封试管中加热6小时。将该反应混合物通过硅藻土过滤，减压浓缩滤液。用HP-Sil柱(Biotage)，通过使用石油醚/乙酸乙酯梯度(100/0->70/30)纯化粗产物，得到标题化合物(0.17g,15％)，为类白色固体。将粗化合物不经进一步纯化用于下一步。MS:257.1(M+H)

制备例39

向商购的5-溴-2-氟-吡啶(0.5g,2.84mmol)和7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬烷(0.36g, 2.84mol)在DMF(5mL)中的溶液中加入碳酸钾(1.17g,8.52mmol)，将该混合物加热至90℃ 12h.用乙酸乙酯(30mL)和水(30mL)稀释该反应混合物。分离有机相，用乙酸乙酯将水相再萃取2次。用Na

制备例40

向商购的5-溴-2-氯-吡啶(0.83g,4.34mmol)和4-甲氧基哌啶(0.5g,4.34mmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入碳酸钾(1.79g,13.02mmol)，将该混合物加热至 90℃ 12h。用乙酸乙酯(50mL)和水(30mL)稀释该反应混合物。分离有机相，用乙酸乙酯将水相再萃取2次。用Na

制备例41

向反应试管中加入商购的2,5-二溴吡啶(0.5g,2.11mmol)和((1S,4S)-2-氧杂 -5-氮杂双环[2.2.1]庚烷(0.25g,2.53mmol)，加入脱气的甲苯(10.0mL)。然后加入Xantphos(0.073g,0.127mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.024g,0.042mmol)和叔丁醇钠(0.61g,6.3mmol)，将该溶液在100℃在充满氩气的密封试管中加热6 小时。将该反应混合物通过硅藻土过滤，减压浓缩滤液。用HP-Sil柱(Biotage)，通过使用石油醚/乙酸乙酯梯度(100/0->70/30)纯化粗产物，得到标题化合物(0.3g, 57％)，为类白色固体。

MS:255.1(M+H)

制备例42

向商购的5-溴-2-氟-吡啶(0.23g,1.30mmol)和((1R,4R)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷(0.18g,1.30mmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入碳酸钾(0.54g, 3.9mmol)，将该混合物加热至90℃ 12h。用乙酸乙酯(30mL)和水(30mL)稀释该反应混合物。分离有机相，用乙酸乙酯将水相再萃取2次。用Na

制备例43

向商购的5-溴-2-氯-吡啶(1g,5.19mmol)和((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉(0.778g,6.75mmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入碳酸钾(1.57g,11.43mmol)，将该混合物加热至90℃12h。用乙酸乙酯(50mL)和水(30mL)稀释该反应混合物。分离有机相，用乙酸乙酯将水相再萃取2次。用Na

制备例44

向反应试管中加入商购的2,5-二溴吡啶(0.5g,2.11mmol)和((S)-3-甲基吗啉(0.213g,2.11mmol)的溶液，加入脱气的甲苯(10.0mL)。然后加入Xantphos (0.073g,0.12mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.038g,0.042mmol)和叔丁醇钠 (0.608g,6.33mmol)，将该溶液在100℃在充满氩气的密封试管中加热6小时。将该反应混合物通过硅藻土过滤，减压浓缩滤液。用HP-Sil柱(Biotage)，通过使用石油醚/乙酸乙酯梯度(100/0->70/30)纯化粗产物，得到标题化合物(0.23g, 42％)，为淡黄色固体。

制备例45

向反应试管中加入商购的2,5-二溴吡啶(0.5g,2.11mmol)和2-氧杂-7-氮杂螺[3.5]壬烷(0.268g,2.11mmol)的溶液，加入脱气的甲苯(10.0mL)。然后加入 Xantphos(0.073g,0.12mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.038g,0.042mmol)和叔丁醇钠(0.608g,6.33mmol)，将该溶液在100℃在充满氩气的密封试管中加热 6小时。将该反应混合物通过硅藻土过滤，减压浓缩滤液，得到标题化合物(0.37g, 62％)，为黄白色固体。

制备例46

向商购的5-溴-2-氟-吡啶(0.5g,3.34mmol)和3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷(0.882g,5.0133mmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入碳酸钾(0.923g, 6.6844mmol)，将该混合物加热至90℃ 12h.用乙酸乙酯(30mL)和水(30mL)稀释该反应混合物。分离有机相，用乙酸乙酯将水相再萃取2次。用Na

制备例47

向来自制备例12的标题化合物(0.370g,0.00199mol)和商购的2,5-二氯-1,3- 苯并噁唑(0.336g,0.00179mol)在15mL DMF(15mL)中的搅拌的混悬液中加入碳酸钾(0.823g,0.00595mol)，将该混合物在100℃加热过夜。通过TLC证实反应完成后，加入水，得到固体。过滤固体，用己烷洗涤，得到标题化合物(0.4g,粗品)。MS:338.1(M+H)

制备例48

向来自制备例11的标题化合物(0.350g,0.00107mol)和商购的(0.181g,0.000965mol)在15mL DMF中的搅拌的混悬液中加入碳酸钾(0.445g, 0.000756mol)，将该反应混合物在100℃加热过夜。通过TLC证实反应完成后，加入水，得到固体。过滤固体，用己烷洗涤，得到标题化合物(0.45g,粗品)。 MS:478.1(M+H)

制备例49

向商购的3,6-二氯哒嗪(0.500g,3.3783mmol)和(2S,6R)-2,6-二甲基吗啉(0.505g,4.3918mmol)在乙醇(15mL)中的溶液中加入三乙胺(0.516g, 5.0675mmol)，将该反应体系在80℃加热12h。减压浓缩该反应混合物。用 HP-Sil柱(Biotage)，通过使用石油醚/乙酸乙酯梯度(100/0->70/30)纯化粗产物，得到标题化合物(0.500g,64.93％)。

制备例51

向商购的3,6-二氯哒嗪(0.500g,3.36mmol)和(2S)-2-甲基吗啉(0.339g,3.36mmol)在乙醇(15mL)中的溶液中加入三乙胺(0.509g,5.03mmol)，将该反应体系在80℃加热12h。减压浓缩该反应混合物。用HP-Sil柱(Biotage)，通过使用石油醚/乙酸乙酯梯度(100/0->70/30)纯化粗产物，得到标题化合物(0.250g, 34.5％)。

制备例52

向商购的3,6-二氯哒嗪(0.500g,3.36mmol)和(2R)-2-甲基吗啉(0.339g,3.36mmol)在乙醇(15mL)中的溶液中加入三乙胺(0.509g,5.03mmol)，将该反应体系加热至80℃ 12h。减压浓缩该反应混合物。用HP-Sil柱(Biotage)，通过使用石油醚/乙酸乙酯梯度(100/0->70/30)纯化粗产物，得到标题化合物(0.250g, 34.5％)。

制备例53

向商购的3,6-二氯哒嗪(0.230g,1.54mmol)和4-甲氧基哌啶(0.265g, 2.29mmol)在乙醇(15mL)中的溶液中加入三乙胺(0.301g,2.29mmol)，将该反应体系加热至90℃ 12h。减压浓缩该反应混合物。用HP-Sil柱(Biotage)，通过使用石油醚/乙酸乙酯梯度(100/0->70/30)纯化粗产物，得到标题化合物(0.335g, 95.44％)。

制备例54

向来自制备例12的标题化合物(0.5g,2.24mmol)和商购的2,6-二氯-1,3-苯并噁唑(0.43g,2.24mmol)在DMF(15mL)中的搅拌的混悬液中加入碳酸钾(0.93g, 6.72mmol)，将该混合物在100℃加热过夜。通过TLC证实反应完成后，加入水，得到固体。过滤固体，用己烷洗涤，得到标题化合物(0.76g,粗品)。

MS:338.1(M+H)

实施例1-122

按照上述方案5、6和7中报道的用于Buchwald偶联的一般方法制备本发明的实施例。所用的具体方法为：

向三环胺衍生物(0.15g,1eq.)在干1,4-二噁烷(5mL)中的搅拌的溶液中加入表1中所示的相应溴或氯衍生物(1eq.)和叔丁醇钠(3eq.)。将该反应混合物在N

向三环胺衍生物(0.15g,1eq.)在干1,4-二噁烷(5mL)中的搅拌的溶液中加入表1中所示的相应溴或氯衍生物(1eq.)和叔丁醇钠(3eq.)。将该反应混合物在N

将Pd(OAc)

将甲苯磺酰基衍生物(50mg,1eq.)、Cs

向搅拌的三环胺衍生物(0.15g,1eq.)在干1,4-二噁烷(5mL)中的溶液中加入表1中所示的相应溴或氯衍生物(1eq.)和Cs

向三环胺衍生物(150mg,1eq)在干二噁烷(5mL)中的搅拌的溶液中加入如表1中所示的相应的溴或氯衍生物(1eq.)。加入叔丁醇钠(3eq)，在氮气气氛中脱气 10min。向该反应混合物中加入Ruphosg4 Pd(0.3eq)，加热至100℃，直至反应完成。通过硅藻土床过滤该反应混合物，用EtOAc洗涤。浓缩滤液，通过柱色谱法或制备型HPLC纯化粗产物，得到如表1中所示的实施例化合物。

表1

实施例123

步骤A

在0℃向实施例44在THF(15.0mL)中的溶液中缓慢地加入氢化钠(60％)(0.0412g,1.79mmol)，然后在25℃搅拌1hr。在0℃缓慢地加入在15.0mL THF中的碘乙烷(0.305g,0.00179mol)，然后在25℃搅拌2hr。通过LCMS监测反应混合物，用水(50.0ml)稀释反应混合物。分离有机相，用乙酸乙酯再萃取水相2次。用Na

本发明化合物的HCl盐

一般方法

向冷却至0℃的实施例化合物(0.1g)在干DCM(10mL)中的溶液中加入1M HCl的醚溶液(5eq)或4M HCl的二噁烷溶液(5eq)，搅拌15分钟。真空浓缩该反应混合物，与乙醚一起研磨，得到期望的产物，如表2中所示。

按照上述一般方法中所述的盐酸盐方法，制备下列化合物。

表2

生物学测定描述

通过硫磺素T(ThT)进行的全长Tau(flTau)解聚测定

将人Tau的最长同种型(2N4R；441个氨基酸)在细菌中表达并纯化。对于通过ThT进行的Tau解聚测定，在37℃下，在50μM肝素(Sigma-Aldrich)和 10mM DTT(Sigma-Aldrich)存在下，在750RPM摇动下，使PBS中的35μM重组全长(fl)Tau聚集24小时。将化合物溶解在无水二甲基亚砜(DMSO， Sigma-Aldrich)中以达到10mM的浓度。将flTau聚集物和化合物的系列稀释液在PBS(体积50μL)中混合在一起至最终浓度为2μM的flTau聚集物和160至 0.04μM的化合物。将混合物在室温(RT)温育30分钟，然后将40μL该混合物转移至黑色384孔测定板(Perkin-Elmer)中，并与10μL 100μM ThT/250mM甘氨酸(两者均来自Sigma-Aldrich)的PBS溶液混合。在Tecan读数器上一式一份或一式两份测量荧光(相对荧光单位；RFU)(激发：440nm；发射：485nm)。然后计算flTau解聚的百分比，并假设单结合位点拟合模型，使用GraphPad Prism 版本5(GraphPad Software)确定半数最大有效浓度(EC

通过ThT进行的Tau K18解聚测定

将包含人Tau441最长同种型(2N4R)的氨基酸244-372的Tau K18片段在细菌中表达并纯化，或购买自SignalChem。对于通过ThT进行的K18解聚测定，在37℃下，在50μM肝素(Sigma-Aldrich)和10mM DTT(Sigma-Aldrich) 存在下，在750RPM摇动下，使PBS中的35μM重组K18聚集24小时。将化合物溶解在无水二甲基亚砜(DMSO，Sigma-Aldrich)中以达到10mM的浓度。将K18聚集物和化合物的系列稀释液在PBS(体积50μL)中混合在一起至最终浓度为2μM的K18聚集物和160至0.04μM的化合物。将混合物在室温(RT)温育 30分钟，然后将40μL该混合物转移至黑色384孔测定板(Perkin-Elmer)中，并与10μL 100μM ThT/250mM甘氨酸(两者均来自Sigma-Aldrich)的PBS溶液混合。在Tecan读数器上一式一份或一式两份测量荧光(相对荧光单位；RFU)(激发：440nm；发射：485nm)。然后计算K18解聚的百分比，并假设单结合位点拟合模型，使用GraphPad Prism版本5(GraphPad Software)确定半数最大有效浓度(EC

测定如下实施例化合物：

说明:+++EC

胞内Tau聚集的减少

在完全培养基[DMEM-F12 4.5g/L Glutamax(Invitrogen)、15％FBS (Biochrom)、1％Peni/Strep(Invitrogen)，补充有2.5μg/ml G418(Sigma-Aldrich) 选择抗生素]中培养过表达携带P301L突变的人Tau全长形式的人神经母细胞瘤细胞系。实验前一天，将5x10

通过AlphaLisa，使用以下抗体对，对磷酸化的、聚集的和总的Tau进行定量：

·HT7-受体珠+生物素(BT)-Tau13-供体珠:总Tau

·HT7-受体珠+生物素(BT)-HT7-供体珠:聚集的人Tau。

Tau13(Abcam)使用

对于每个抗体对，优化受体珠和生物素化抗体的浓度。首先以于PBS中的稀释系列测试所有样品，以确定每个样品和测定的线性范围和最佳稀释。对于最终方案，将以下试剂加入到384孔白色OptiPlate(PerkinElmer)中：

·5μL测试稀释样品

·20μL的以下终浓度的生物素-mAb受体珠混合物：

·1.25nM的HT7-BT与10μg/ml的HT7-Acc珠的组合

·5nM的Tau13-BT与2.5μg/ml的HT7-Acc珠的组合。

在室温下将该混合物温育1小时后，在黑暗中加入25μL 25μg/mL的链霉亲和素供体珠(Perkin Elmer)。温育30分钟后，使用EnSpire Alpha仪器和EnSpire Workstation3.00版分析板。将聚集Tau的数据标准化为总Tau，然后表示为 DMSO处理细胞的百分比。

测定如下实施例化合物：

说明:+++％>50；++％50

通过免疫细胞化学测定胞内Tau错折叠减少

在完全培养基中[DMEM-F12 4.5g/L Glutamax(Invitrogen),15％FBS(Biochrom),1％Peni/Strep(Invitrogen)，补充2.5μg/ml G418(Sigma-Aldrich) 选择抗生素]中培养过表达携带P301L突变的人Tau的全长形式的人神经母细胞瘤细胞系。

为了诱导胞内错折叠的Tau的积累，将细胞从成神经细胞瘤细胞体外分化为神经元样细胞。为此，将细胞以2500个细胞/孔的密度接种在96孔板中的100μl 补充有10μM视黄酸(RA；Sigma,R2625)的完全培养基中1周。每2至3天更换一次培养基，并添加新鲜的视黄酸。为了评估本发明化合物降低错折叠的胞内 Tau水平的能力，将化合物以0.1-10nM之间的浓度分配在细胞上24小时。与化合物一起温育后，将细胞固定在4％PFA中15min，并在PBS中洗涤3次。然后将细胞在室温在PBS中的10％纯山羊血清(NGS)、0.25％Triton X-100中封闭2小时。然后将通透化的固定细胞与按1:4000稀释的单克隆抗小鼠MC1 抗体(由Prof.Peter Davies,Albert Einstein College of Medicine,New York,USA 提供)于5％NGS/0.25％Triton X-100的PBS中温育过夜，以检测错折叠的Tau 和多克隆抗家兔总Tau(Abcam；ab64193)，并以1:400稀释以检测总Tau。与一抗温育后，将细胞在PBS中清洗3次，然后与二抗山羊抗小鼠FITC(Abcam ab6785)和山羊抗家兔Alexa Fluor 594(Abcam 150080)一起温育30min。然后将细胞用PBS洗涤3次，并且用Incucyte获取图像。将错折叠的Tau的信号标准化为总Tau信号，并将Tau错折叠的减少表示为与媒介物处理的细胞相比的百分比。数据是每孔至少3张图片的平均值。当评估其减少胞内Tau错折叠的能力时，实施例44在低nM浓度下显示出效力，如图1所示。

使用ThT进行的全长Tau(flT)抑制聚集测定

人Tau的同种型(2N4R；441个氨基酸)购自Biotechne(USA)。该蛋白质在细菌大肠杆菌中表达、纯化并且在PBS中浓缩至终浓度为50μM。

为了诱导Tau聚集，将4μM的单体flTau与Tau成对螺旋纤丝(PHF)在37℃的搅拌循环下温育72小时，所述搅拌循环由轨道摇动和混合功能组成，使用 Hula Mixer(LifeTechnologies)进行，所述Tau成对螺旋纤丝富集自一名阿尔茨海默病(AD)患者的验尸后大脑，得自以1:200稀释的外部来源(组织溶液)。富集方法是根据Jicha等人1997(Journal ofNeuroscience Research 48:128–132 (1997))和Rostagno和Ghiso,2009(Currentprotocols in cell biology(2009),第3 章,Unit 3.33 3.33.1-33)修改的。简言之，将约9g AD人脑样品在冰上解冻，并在玻璃Dounce均化器中用50mL均化缓冲液[在RAB缓冲液(100mM 2-(N-吗啉代)乙磺酸(MES)、1mM EGTA、0.5mM MgSO

为了测试本发明化合物抑制Tau聚集的能力，在温育之前，将化合物在 DMSO中的连续稀释液添加至单体flTau/PHF混合物中。温育后，将40μL混合物转移至黑色384孔测定板中(Perkin-Elmer)，并与10μL 100μM ThT/250mM 甘氨酸(均来自Sigma-Aldrich,Buchs,Switzerland)的PBS溶液混合。使用滤波器(激发：448nm/BW 7nm，发射：485nm/BW 20nm)的Tecan Reader Spark一式单份测量荧光。通过两次独立的实验获得了剂量响应类型的曲线，每个实验都具有技术副本，并使用GraphPad Prism 7.03计算IC50。

下表显示了用实施例44和实施例46抑制fltau聚集的IC50值：