一种基于非同源末端连接机制的解脂耶氏酵母基因组整合的方法

摘要

本发明公开了一种基于非同源末端连接机制的解脂耶氏酵母基因组整合的方法，将解脂耶氏酵母内源基因DL4和XRCC4，外源智人基因PAXX以rDNA位点整合的方式整合到解脂耶氏酵母ATCC201249菌株的基因组rDNA位点，得到重组菌株YNH01；将待转入基因表达盒与启动子截短到11bp的URA3营养标签U11连接，得到的连接片段转化到YNH01得到高压力筛选标签菌株；将连接片段转化到高压力筛选标签菌株，得到经过两轮转化的重组菌株；将连接片段再次转化到经过两轮转化的重组菌株，得到转入的基因高表达的菌株。本发明在短时间内获得大量的多样性菌株，实现了NHEJ整合技术在天然产物微生物合成中的高效应用。