一套等位基因高效替换系统及其建立方法

摘要

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一套等位基因高效替换系统及其建立方法。该系统依赖于一套双筛选表达盒，所述双筛选表达盒针对位于两条姐妹染色单体的等位基因，分别引入了两种不同的荧光蛋白、两种不同的抗性基因，并分别添加胸腺激酶负向筛选基因。利用该表达盒和对应的基因替换系统，我们提供了一种新的基于SSA修复机制的精确编辑思路，可以在实现高效基因组精确编辑的同时，有效避免传统基于Cre/LoxP重组酶系统的LoxP序列残留、转座子系统敲出的筛选基因序列在基因组“跳跃”造成的插入，以及同源重组修复系统二次HDR筛选效率低等问题，为基因组精确编辑提供了一条简洁高效的新思路。