一种针对乳腺癌的药物靶点PARP9的表达和纯化方法

摘要

本发明公开一种针对乳腺癌的药物靶点PARP9的表达和纯化方法，步骤有：构建并转化表达质粒；取菌液在含有50μg/ml Kan+抗生素的LB液体培养基中，摇床上培养，加入IPTG，诱导培养；菌液离心，在缓冲液中重悬，破碎离心取上清镍柱进行蛋白纯化，不同咪唑浓度的洗脱液进行洗脱，将含有目的蛋白PARP9 300mM咪唑的洗脱液用凝胶层析法纯化，出峰位置即为目的蛋白PARP9分子量大小所在位置，收集出峰体积的液体，得到目的蛋白。本发明优点有：使用pET‑28a载体、大肠杆菌蛋白表达体系和优化的纯化系统，周期短，耗费成本低，转化操作简单，能获得高纯度的PARP9蛋白产物；为获得PARP9抗体，为设计出相应的特异性小分子抑制剂和制备出相关的抗体提供基础，以用于乳腺癌等相关疾病的治疗。