一种重组肺炎链球菌二氢叶酸还原酶的制备方法及其应用

摘要

本发明公开了一种重组肺炎链球菌二氢叶酸还原酶的制备方法及其应用，所述制备方法包括以下步骤：A.进行目的基因的扩增：以提取肺炎链球菌R6基因组为模板，采用引物P1和P2进行基因扩增；B.重组克隆菌株的构建：将扩增得到的二氢叶酸还原酶基因回收后连接到pEASYTM‑T1 Simple克隆质粒上，得到重组克隆载体，将重组克隆载体转化到感受态细胞；C.重组表达菌株的构建：将双酶切后获得的重组二氢叶酸还原酶基因连接到进行相同酶切处理的表达载体pET‑28a上，将重组表达载体pET‑28a‑dhfr转化到大肠杆菌中，筛选得到重组表达菌株；D.重组二氢叶酸还原酶的表达。上述制备方法简单，制备的重组表达菌株性状稳定，培养和表达周期短，能稳定表达高活性的重组肺炎链球菌二氢叶酸还原酶。