一种用于小鼠胚胎干细胞的基因插入突变系统及其突变方法和应用

摘要

本发明公开了一种用于小鼠胚胎干细胞的基因插入突变系统及其突变方法和应用。本发明构建了含有筛选标记基因的内源基因突变载体和可诱导突变载体进行基因组整合的转座酶表达载体，利用电转染方法，将两种载体共同导入小鼠胚胎干细胞中，再通过诱导转座酶表达、细胞抗性筛选、细胞克隆鉴定和整合位点分析，构建小鼠胚胎干细胞内源基因的有效突变方法，获得携带单一突变基因和具备全能分化能力的细胞克隆。本发明突变载体可随机插入小鼠胚胎干细胞的基因组中，干扰该内源基因的转录表达。本发明突变方法可对小鼠胚胎干细胞基因组进行大规模插入突变，获得携带单一突变基因和具备全能分化能力的细胞克隆库，用于小鼠突变体的研制和基因功能研究。