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法律状态信息
法律状态
2020-06-26
授权
授权
2020-06-23
专利申请权的转移 IPC(主分类):A61K31/715 登记生效日:20200604 变更前: 变更后: 申请日:20180212
专利申请权、专利权的转移
2018-10-26
实质审查的生效 IPC(主分类):A61K31/715 申请日:20180212
实质审查的生效
2018-09-25
公开
公开
技术领域
本发明属于免疫增强剂领域,尤其涉及一种禽畜使用的中药免疫增强剂。
背景技术
畜禽传染性疾病尤其是病毒性疾病,是危害畜牧业发展的首要问题,也给畜禽养殖业带来巨大损失。因病毒具有独特的生物特征和发病机理,目前还没有针对病毒性疾病有效的治疗方法,所以疫苗接种则成了主要的预防措施。但临床因各种原因,免疫失败现象经常出现。为提高机体对抗原或微生物特异性反应,使机体获得更好的免疫保护作用,免疫增强剂应运而生。免疫增强剂是通过一定途径来提高机体对抗原或微生物特异性反应的一类物质,也称免疫佐剂。目前国内外广泛使用的化学性免疫增强剂有Al(OH)3、AlPO4等,但他们具有一定的残留,且对机体组织有一定的刺激、损伤、致癌作用。其后蜂胶佐剂、乳酸杆菌DNA免疫佐剂和脂质体佐剂被广泛研究,但以上三种佐剂成本较高,效果不太稳定,限制了其在临床广泛的应用。因此寻找高效、安全、无耐药性,在畜产品中无残留,但又能提高疫苗的免疫保护率的免疫增强剂,成为当前畜禽生产中迫切需要解决的问题。
近年来,来源于植物的多糖,由于其安全、低毒、低残留等特点,在生物医药领域备受研究者关注,尤其是在提高和改善动物免疫功能方面的作用越来越引起人们的重视。因此,在现代畜牧业中,开发利用天然多糖提取物作为免疫增强剂,受到人们的普遍重视,很多人也用植物多糖对畜禽传染性疾病进行了大量研究。 郭振换等研究了香菇多糖对新城疫苗的免疫效果影响,结果显示香菇多糖可增强新城疫苗的免疫效果。王学斌等将黄芪多糖(APS)添加到鸡新城疫油乳剂疫苗中作为免疫佐剂,结果表明免疫佐剂提高了疫苗的免疫力,提高脾和法氏囊指数等。邱妍等分析了黄芪多糖、板蓝根多糖、山药多糖、牛膝多糖等四种种中药多糖对新城疫病毒感染细胞能力的影响及对雏鸡粘膜免疫功能的影响等,结果显示四种多糖可以提高机体的黏膜免疫功能,从而提高机体免疫力。上述研究表明,中药多糖在机体免疫调节方面起着重要的作用,在预防或治疗动物传染性疾病方面均有一定的促进作用。
在专利号为
发明内容
为解决以上问题,本发明提供一种灵芝多糖中药免疫增强剂的制备与使用方法,其步骤如下:
(1)取赤灵芝子实体根茎洗净、切块,置于
(2)加入5倍体积分数
(3)取经预处理后灵芝干燥粉末10g,然后将药材粉末置于100mL圆底烧瓶中按料液比
(4)合并提取液,浓缩至150mL,再缓缓加入3倍体积即450mL的
(5)将步骤(4)中静置12h后的提取液在
(6)收集所得成分置于水浴锅上80
(7)将膏状物冷冻干燥至恒重,即得粗制灵芝多糖中药免疫增强剂,使用硫酸苯酚法测定粗制灵芝多糖中药免疫增强剂中的灵芝多糖含量;
(8)取1日龄非免疫雏鸡,饲养至14日龄时用新城疫Ⅳ滴鼻和点眼进行首次免疫,首次免疫的同时,给雏鸡经口灌服灵芝多糖中药免疫增强剂,连续给药3天,每次给药剂量以灵芝多糖中药免疫增强剂中所含的灵芝多糖计则其给药计量为
(9)28日龄时用新城疫Ⅳ滴鼻和点眼进行进行二次免疫,二次免疫时给雏鸡经口灌服灵芝多糖中药免疫增强剂,连续给药3天,每次给药剂量以灵芝多糖中药免疫增强剂中所含的灵芝多糖计则其给药计量为
较佳的,步骤(8)、步骤(9)中,首次免疫、二次免疫时罐服的灵芝多糖中药免疫增强剂浓度相同。
较佳的,灵芝多糖中药免疫增强剂的浓度为
本发明提供的这种灵芝多糖中药免疫增强剂的使用方法,其有益效果如下:
(1)在雏鸡首免(14日龄)、二免(28日龄)新城疫疫苗时,连续3天给它们灌服灵芝多糖中药免疫增强剂,在首免后的第7天、第14天(即二免时间)、第21天和第28天进行测定,发现灵芝多糖可明显促进外周血淋巴细胞增值,提升抗体水平,提高免疫器官指数。在二免后14天,灵芝多糖能够显著促进免疫雏鸡外周血淋巴细胞中
(2)经过研究发现直接使用灵芝多糖亦可达到增强疫苗的免疫效果,而无需再增加其他中药材的多糖,降低了免疫增强剂的制备成本,且省去将不同种中药材多糖混合的步骤,大大提高了制备速率。
(3)只需在首次免疫及二次免疫时使用特定量的灵芝多糖中药免疫增强剂便可达到增强免疫的效果,其相对全程增加于饲料中而言,省去每日都需要混合饲料的麻烦,并且对于禽畜而言,所服食的免疫增强剂量也减少了,其养殖成本也降低了。
附图说明
图1为各组雏鸡血清抗体效价变化(Log2)折线图;
图2为各组
图3为各组
图4为各组盲肠扁桃体
图5为各组十二指肠
具体实施方式
实施例一
一种灵芝多糖中药免疫增强剂的制备与使用方法,其步骤如下:
(1)取赤灵芝子实体根茎洗净、切块,置于105
(2)加入5倍体积分数
(3)取经预处理后灵芝干燥粉末10g,然后将药材粉末置于100mL圆底烧瓶中按料液比
(4)合并提取液,浓缩至150mL,再缓缓加入3倍体积即450mL的
(5)将步骤(4)中静置12h后的提取液在
(6)收集所得成分置于水浴锅上80
(7)将膏状物冷冻干燥至恒重,即得粗制灵芝多糖中药免疫增强剂,使用硫酸苯酚法测定粗制灵芝多糖中药免疫增强剂中的灵芝多糖含量;
(8)取1日龄非免疫雏鸡,饲养至14日龄时用新城疫Ⅳ滴鼻和点眼进行首次免疫,首次免疫的同时,给雏鸡经口灌服灵芝多糖中药免疫增强剂,连续给药3天,每次给药剂量以灵芝多糖中药免疫增强剂中所含的灵芝多糖计则其给药计量为
(9)28日龄时用新城疫Ⅳ滴鼻和点眼进行进行二次免疫,二次免疫时给雏鸡经口灌服灵芝多糖中药免疫增强剂,连续给药3天,每次给药剂量以灵芝多糖中药免疫增强剂中所含的灵芝多糖计则其给药计量为
实施例二
一种灵芝多糖中药免疫增强剂的制备与使用方法,其步骤如下:
(1)取赤灵芝子实体根茎洗净、切块,置于105
(2)加入5倍体积分数
(3)取经预处理后灵芝干燥粉末10g,然后将药材粉末置于100mL圆底烧瓶中按料液比
(4)合并提取液,浓缩至150mL,再缓缓加入3倍体积即450mL的
(5)将步骤(4)中静置12h后的提取液在
(6)收集所得成分置于水浴锅上80
(7)将膏状物冷冻干燥至恒重,即得粗制灵芝多糖中药免疫增强剂,使用硫酸苯酚法测定粗制灵芝多糖中药免疫增强剂中的灵芝多糖含量;
(8)取1日龄非免疫雏鸡,饲养至14日龄时用新城疫Ⅳ滴鼻和点眼进行首次免疫,首次免疫的同时,给雏鸡经口灌服灵芝多糖中药免疫增强剂,连续给药3天,每次给药剂量以灵芝多糖中药免疫增强剂中所含的灵芝多糖计则其给药计量为
(9)28日龄时用新城疫Ⅳ滴鼻和点眼进行进行二次免疫,二次免疫时给雏鸡经口灌服灵芝多糖中药免疫增强剂,连续给药3天,每次给药剂量以灵芝多糖中药免疫增强剂中所含的灵芝多糖计则其给药计量为
实施例三
一种灵芝多糖中药免疫增强剂的制备与使用方法,其步骤如下:
(1)取赤灵芝子实体根茎洗净、切块,置于105
(2)加入5倍体积分数
(3)取经预处理后灵芝干燥粉末10g,然后将药材粉末置于100mL圆底烧瓶中按料液比
(4)合并提取液,浓缩至150mL,再缓缓加入3倍体积即450mL的95%乙醇混合,边加边搅拌,静置12 h;
(5)将步骤(4)中静置12h后的提取液在
(6)收集所得成分置于水浴锅上80
(7)将膏状物冷冻干燥至恒重,即得粗制灵芝多糖中药免疫增强剂,使用硫酸苯酚法测定粗制灵芝多糖中药免疫增强剂中的灵芝多糖含量;
(8)取1日龄非免疫雏鸡,饲养至14日龄时用新城疫Ⅳ滴鼻和点眼进行首次免疫,首次免疫的同时,给雏鸡经口灌服灵芝多糖中药免疫增强剂,连续给药3天,每次给药剂量以灵芝多糖中药免疫增强剂中所含的灵芝多糖计则其给药计量为
(9)28日龄时用新城疫Ⅳ滴鼻和点眼进行进行二次免疫,二次免疫时给雏鸡经口灌服灵芝多糖中药免疫增强剂,连续给药3天,每次给药剂量以灵芝多糖中药免疫增强剂中所含的灵芝多糖计则其给药计量为
试验例:
1、取1日龄非免疫健康罗曼蛋公鸡225只,随机分为5组,每组45只;
2、第一组为空白对照组(BC),不用新城疫免疫疫苗;
3、第二组为免疫对照组(VC),14日龄时使用新城疫Ⅳ滴鼻、点眼,进行首次免疫,28日龄时进行二次免疫;
4、第三组为实施例一组,14日龄时按照实施例一的步骤使用新城疫疫苗进行首次免疫,并连续灌服三日实施例一中的灵芝多糖中药免疫增强剂,28日龄时按照实施例一的步骤使用新城疫疫苗进行二次免疫,并连续灌服三日实施例一中的灵芝多糖中药免疫增强剂;
5、第四组为实施例二组,14日龄时按照实施例二的步骤使用新城疫疫苗进行首次免疫,并连续灌服三日实施例二中的灵芝多糖中药免疫增强剂,28日龄时按照实施例二的步骤使用新城疫疫苗进行二次免疫,并连续灌服三日实施例二中的灵芝多糖中药免疫增强剂。
6、第五组为实施例三组,14日龄时按照实施例二的步骤使用新城疫疫苗进行首次免疫,并连续灌服三日实施例二中的灵芝多糖中药免疫增强剂,28日龄时按照实施例二的步骤使用新城疫疫苗进行二次免疫,并连续灌服三日实施例三中的灵芝多糖中药免疫增强剂。
各项检测数据如下:
(1)灵芝多糖对外周血淋巴细胞转化功能的影响
注:1、竖排相同字母代表组间差异不显著,表2、3、4、5同。
2、D7为首次免疫后第七天;D14为首次免疫后第14天;D21为首次免疫后第21天;D28为首次免疫后第28天,表2、3、4、5同。
由表1可以看出,首免后第7天和第14天,高中低三个多糖组的吸光度值均显著大于空白对照组
(2)灵芝多糖对鸡血清
由表2和图1可以看出,首免后第7天,三个多糖组的抗体效价显著高于空白对照组
(3)灵芝多糖对免疫雏鸡免疫器官指数的影响
免疫雏鸡器官指数的动态变化见表3。首免后的第28天,高剂量组(50
(4)灵芝多糖对免疫雏鸡外周血淋巴细胞因子表达的影响
注:同列数据后所标字母相异表示差异显著
由表4、图2可以看出,高中低三个多糖组的鸡外周血淋巴细胞中
注:同列数据后所标字母相异表示差异显著
赤灵芝多糖对免疫雏鸡外周血淋巴细胞中
(5)灵芝多糖对盲肠扁桃体和十二指肠黏膜
二免后第14天,各组盲肠扁桃体切片中棕色细胞为
染色后,
结论:在雏鸡首免、二免新城疫疫苗时,同时经口灌服灵芝多糖,连续给药3天。在
以上仅为本发明较佳的实施例,故不能依此限定本发明实施的范围,即依本发明说明书内容所作的等效变化与装饰,皆应属于本发明覆盖的范围内。
机译: 一种治疗禽流感的中药组合物及其制备和使用方法
机译: 一种中药微丸的制备方法及用该方法制备的中药微丸
机译: 一种中药微丸的制备方法及用该方法制备的中药微丸。