一种dead SaCas9-Fok1系统及其构建方法与应用

摘要

本发明公开了一种dead SaCas9‑Fok1系统及其构建方法与应用，由于SaCas9分子量小，p‑dead SaCas9‑Fok1重组质粒利用dead SaCas9替代传统的dead SpCas9，降低SpCas9空间位阻对Fok1相互结合的影响，从而提高其打靶效率；dead SaCas9‑Fok1系统需要配合2个21nt的Sa‑sgRNA共同作用，Sa‑sgRNA长于Sp‑sgRNA(20nt)，且SaCas9识别的PAM序列为6nt，长于SpCas9的PAM(3nt)，所以当dead SaCas9‑Fok1配合两个Sa‑sgRNA使用，进一步降低了脱靶效率。