LOC105373420在帕金森病诊断、治疗中的应用

摘要

本发明公开了LOC105373420在帕金森病诊断和治疗中的应用。经实验证明，与正常人相比，帕金森病患者血液中的LOC105373420基因表达上调，表明可以通过检测血液中LOC105373420的水平来诊断帕金森患者。通过构建体外PD细胞模型，发现细胞中LOC105373420的水平，可以影响细胞的生长，提示LOC105373420可作为靶点应用于帕金森的精准治疗。

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地涉及人LOC105373420在帕金森病诊断、治疗中的用途。

背景技术

帕金森病(Parkinson’disease，PD)是仅次于阿尔茨海默病的第二大类神经变性性疾病(Tysnes OB，Storstein A.Epidemiology of Parkinson’S disease.J NeuralTransm(Vienna)201 7)，在60岁以上人群中，发病率接近1％。目前认为其运动机能的恶化与黑质纹状体多巴胺能神经元减少有关，这也是其最突出的病理特征之一，而PD另一个最突出的病理特征是黑质细胞中与泛素结合的α-突触核蛋白在路易小体中的异常沉积，导致了多巴胺细胞的变性(Zhang ZX，Roman GC，Hong Z，et a1.Parkinson’S disease inChina：prevalence in Beijing，Xian，and Shanghai.Lancet 2005；365：595-7.)。帕金森病的主要临床表现包括静止性震颤，肌强直，行动迟缓，姿势平衡障碍，非运动症状包括焦虑、抑郁和痴呆等(Weiner WJ.There is no Parkinson disease.Arch Neurol 2008；65：705—8.)。尽管经过积极的研究和努力，患者的治疗和临床研究却仍然受到诊断、预后、对治疗措施反应的预测、疾病进展的跟踪方法等多方面的制约。

目前，诊断治疗PD面临的难题主要有：发病机制不清：PD的发病受多种因素影响，目前认为主要是在老龄化的基础上，遗传和环境共同作用造成的。许多研究显示PD患者黑质多巴胺能(DA)神经元变性可能与线粒体功能障碍、氧化应激、神经营养因子缺乏、兴奋性毒性、免疫调节异常、细胞调亡等一系列机制有关。流行病学调查研究显示，约有5～10％的帕金森病患者有家族史。但只有6个被证实能够引起遗传性单基因突变，表明帕金森病的发病与遗传因素密切相关。缺乏客观的实验室诊断方法：PD异质性高，目前除了影像方法辅助以外，统一帕金森病评分量表(The Unified Parkinson’S Disease Rating Scale，UPDRS)和Hoehn-Yahr分级量表是PD临床诊断和评估治疗的常用方法。根据英国脑库的帕金森病诊断标准，患者有少动，再加上静止性震颤、肌强直、姿势步态异常三种症状中的一种，即可诊断为PD。但是由于发病机制的复杂性，不同患者的临床症状、体征可能有所不同，而且同一患者在不同时间的病情也会有变化，且评定结果常常受患者及医生的主、客观因素的影响，使得结果缺乏可比性，给临床诊断带来困难。因此，筛选出PD相关的生物标记物对于揭示其发病机制并开发出客观的诊断方法，进而达到疾病预防、控制和治疗的目的具有重要意义。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种可用于帕金森病诊断的分子标志物LOC105373420基因。相比传统的帕金森病的诊断方法，使用基因标志物来诊断帕金森病具有及时性、特异性和灵敏性，从而使患者在早期就能知晓疾病风险，从而采取相应的措施。

本发明的目的之二在于提供一种可用于帕金森治疗的分子靶点，通过靶向分子靶点，改变分子靶点的表达情况，从而达到治疗或缓解疾病的效果。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面提供了一种试剂，所述试剂能够检测LOC105373420的水平。

进一步，所述试剂包括：

特异性识别LOC105373420的探针；或

特异性扩增LOC105373420的引物。

在本发明的具体实施方式中，特异性扩增LOC105373420的引物的引物序列如SEQID NO.1～2所示。

本发明的第二方面提供了一种试剂盒，包括本发明第一方面所述的试剂，所述试剂能够检测LOC105373420的水平。

本发明的第三方面提供了一种芯片，包括本发明第一方面所述的试剂，所述试剂能够检测LOC105373420的水平。

本发明的第四方面提供了一种药物组合物，包括LOC105373420的抑制剂。其中，所述抑制剂选自：以LOC105373420基因为靶序列、且能够抑制LOC105373420基因的干扰分子，包括：shRNA(小发夹RNA)、小干扰RNA(siRNA)、dsRNA、微小RNA、反义核酸，或能表达或形成所述shRNA、小干扰RNA、dsRNA、微小RNA、反义核酸的构建物。

进一步，所述抑制剂为siRNA。

在筛选有效的siRNA序列时，本发明人通过大量的比对分析，从而找出最佳的有效片段。通过设计合成了多种siRNA序列，并将它们分别通过转染试剂转染至细胞系进行验证，选出干扰效果最佳的siRNA，序列如SEQ ID NO.7～8所示，进一步地在细胞水平实验，结果证明该siRNA能有效的抑制细胞中LOC105373420基因的水平，以及细胞的增殖。

进一步，所述药物组合物还包括与所述抑制剂配伍的其他药类以及药学上可接受的载体和/或辅料。其中，药学上可接受的载体和/或辅料包括(但不限于)如缓冲剂、乳化剂、悬浮剂、稳定剂、防腐剂、生理食盐等。作为缓冲剂，能够使用磷酸盐、甘氨酸，山梨酸，山梨酸钟，饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物，水，盐或电解质例如硫酸钾、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐，胶态二氧化硅，三硅酸镁，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙二醇，羧甲基纤维素钠，聚丙烯酸酯，蜡，聚乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物，聚乙二醇和羊毛脂等。作为乳化剂，能够使用阿拉伯树胶、海藻酸钠、西黄芪胶等。作为悬浮剂，能够使用单硬脂酸甘油、单硬脂酸铝、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟甲基纤维素、月桂基硫酸钠等。作为稳定剂，能够使用丙二醇、二亚乙基亚硫酸盐、抗坏血酸等。作为防腐剂，能够使用叠氮化钠、苯扎氯铵、对羟苯甲酸、氯丁醇等。

本发明的药物组合物还可以包括离子交换剂如矾土，硬脂酸铝，卵磷脂，半乳化药物递送系统(SEDDS)例如dα-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸盐，在药物剂型中使用的表面活性剂例如吐温或其它类似聚合递送基质，血清蛋白例如人血清白蛋白，也可以使用环糊精例如α-环糊精、β-环糊精、和γ-环糊精，或化学修饰的衍生物例如是羟基烷基环糊精，包括2-和3-羟基丙基-β-环糊精、或其它增溶衍生物来促进本发明化合物的递送。本发明所述携带基因的载体是本领域已知的各种载体，如市售的载体、包括质粒、粘粒、噬菌体、病毒等。

本发明的药物组合物还包括药学上可接受的赋形剂、填充剂、凝结剂与调和剂，如含水乳糖或无水乳糖、淀粉、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、硅酸、微晶纤维素、羟甲基纤维素钠、淀粉甘醇酸钠及其衍生物等。

本发明的药物组合物还包含界面活性剂、乳化剂、扩散剂、消泡剂、涂层材料等。任何药学上或医学上可接受的界面活性剂、乳化剂、扩散剂、消泡剂等皆可被使用。

本发明所述药物组合物可口服给药、非胃肠道给药、通过吸入喷雾给药、局部给药、直肠给药、鼻给药、颊给药、阴道给药或通过植入的贮药装置给药。优选口服给药或注射给药。本发明药物组合物可含有任何常用的无毒可药用载体、辅料或赋形剂。在某些情况下，药用酸、碱或缓冲剂可用来调节制剂的pH以提高所配制的化合物或其给药剂型的稳定性。本文所用术语非胃肠道包括皮下、皮内、静脉内、肌内、关节内、动脉内、滑膜内、胸骨内、鞠内、损伤部位内、和颅内注射或输注技术。只要能达到目标组织，本发明所述药物组合物可以通过任何途径给予受体。

本发明的药物还可与其他治疗帕金森的药物联用，多种药物联合使用可以大大提到治疗的成功率。

本发明的第五方面提供了一种筛选治疗帕金森的候选物质的方法，所述方法包括：

用待筛选物质处理表达或含有LOC105373420基因的培养体系；和

检测所述体系中LOC105373420基因的表达；

其中，若待筛选物质可降低LOC105373420基因的表达或活性，则表明该物质是预防或治疗帕金森的候选物质。

所述培养体系包括(但不限于)细胞体系、亚细胞体系、溶液体系、组织体系、器官体系或动物体系(如动物模型，优选非人哺乳动物的动物模型，如鼠、兔、羊、猴等)等。

本发明的第六方面提供了如下任一项所述的应用：

a.本发明第一方面所述的试剂在制备诊断帕金森的产品中的应用；

b.本发明第二方面所述的试剂盒在制备诊帕金森的产品中的应用；

c.本发明第三方面所述的芯片在制备诊断帕金森的产品中的应用；

d.本发明第四方面所述的药物组合物在制备治疗帕金森的产品中的应用；

e.LOC105373420在筛选治疗帕金森的候选物质中的应用；

f.本发明第五方面所述的方法在筛选治疗帕金森的候选物质中的应用。

本发明的实用性并不局限于对本发明的标志物基因的任何特定变体的基因表达进行定量。作为非限制性的实例，标志物基因可具有如目前国际公共核酸数据库GeneBank中LOC105373420基因(NC_000002.12)所示的序列。

在本发明中，LOC105373420可以使用本领域普通技术人员已知的多种核酸技术进行检测，这些技术包括但不限于：核酸测序、核酸杂交和核酸扩增技术。

核酸测序技术的示例性非限制性实例包括但不限于链终止子(Sanger)测序和染料终止子测序。本领域的普通技术人员将认识到，由于RNA在细胞中不太稳定并且在实验中更易受到核酸酶攻击，因此在测序前通常将RNA逆转录成DNA。

本发明可在检测前或与检测同时地对核酸(例如，ncRNA)进行扩增。核酸扩增技术的示例性非限制性实例包括但不限于：聚合酶链式反应(PCR)、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、转录介导的扩增(TMA)、连接酶链式反应(LCR)、链置换扩增(SDA)和基于核酸序列的扩增(NASBA)。本领域的普通技术人员将认识到，某些扩增技术(例如，PCR)需要在扩增前将RNA逆转录成DNA(例如，RT-PCR)，而其他扩增技术则直接扩增RNA(例如，TMA和NASBA)。

通常称为PCR的聚合酶链式反应使用变性、引物对与相反链的退火以及引物延伸的多个循环，以指数方式增加靶核酸序列的拷贝数；TMA的转录介导的扩增(在基本上恒定的温度、离子强度和pH的条件下自身催化地合成靶核酸序列的多个拷贝，其中靶序列的多个RNA拷贝自身催化地生成另外的拷贝；LCR的连接酶链式反应使用与靶核酸的相邻区域杂交的两组互补DNA寡核苷酸；其他扩增方法包括例如：通常称为NASBA的基于核酸序列的扩增；使用RNA复制酶(通常称为Qβ复制酶)扩增探针分子本身的扩增；基于转录的扩增方法；以及自我维持的序列扩增。

在本发明中，术语“探针”指能与另一分子的特定序列或亚序列或其它部分结合的分子。除非另有指出，术语“探针”通常指能通过互补碱基配对与另一多核苷酸(往往称为“靶多核苷酸”)结合的多核苷酸探针。根据杂交条件的严格性，探针能和与该探针缺乏完全序列互补性的靶多核苷酸结合。探针可作直接或间接的标记，其范围包括引物。杂交方式，包括，但不限于：溶液相、固相、混合相或原位杂交测定法。

本发明中的示例性探针包括PCR引物以及基因特异性DNA寡核苷酸探针，例如固定于微阵列基底上的微阵列探针、定量核酸酶保护检验探针、与分子条形码连接的探针、以及固定于珠上的探针。

这些探针具有与靶点基因的特定的碱基序列互补的碱基序列。这里，所谓“互补”，只要是杂交即可，可以不是完全互补。这些多核苷酸通常相对于该特定的碱基序列具有80％以上、优选90％以上、更优选95％以上、特别优选100％的同源性。这些探针可以是DNA，也可以是RNA，另外，可以为在其一部分或全部中核苷酸通过PNA、LNA、ENA、GNA、TNA等人工核酸置换得到的多核苷酸。

在本发明的上下文中，“诊断帕金森病”既包括判断受试者是否已经患有帕金森病、也包括判断受试者是否存在患有帕金森病的风险。

在本发明的上下文中，“治疗帕金森病”从疾病的状态变化来分，可以包括疾病的缓解、疾病的完全治愈；从药物发挥的作用不同，可以包括提高多巴胺效应、促进多巴胺的合成和释放、阻断多巴胺的降解。

本发明的优点和有益效果：

本发明首次发现了LOC105373420基因表达与帕金森病相关，通过检测受试者血液中LOC105373420的表达，可以判断受试者是否患有帕金森病、或者判断受试者是否存在患有帕金森病的风险，从而指导临床医师给受试者提供预防方案或者治疗方案。

本发明发现了一种新的分子标记物LOC105373420基因，相比传统的检测手段，基因诊断更及时、更特异、更灵敏，能够实现帕金森病的早期诊断，从而降低帕金森病的死亡率。

附图说明

图1显示利用QPCR检测LOC105373420基因在帕金森病患者血液中的表达情况；

图2显示利用QPCR检测siRNA对LOC105373420基因表达的影响；

图3显示利用MTT检测LOC105373420基因表达对帕金森神经细胞生长的影响。

具体的实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring HarborLaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1筛选与帕金森病相关的基因标志物

1、样品收集

各收集10例正常人血液和帕金森病患者血液样本，写明样本名称、编号、取样日期、样本处理过程等情况，上述所有标本的取得均通过伦理委员会的同意。

2、RNA样品的制备

利用Invitrogen的血液RNA提取试剂盒提取RNA样品，具体操作详见说明书。

3、RNA样品的质量分析

将上述提取的RNA进行琼脂糖凝胶电泳，利用Nanodrop2000对所提RNA的浓度和纯度进行检测，琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性，Agilent2100测定RIN值。单次建库要求RNA总量5ug，浓度≥200ng/μL，OD260/280介于1.8～2.2之间。

4、去除rRNA

使用Ribo-Zero试剂盒除去总RNA中的核糖体RNA。

5、构建cDNA文库

利用Illumina TruseqTM RNA sample Prep Kit进行cDNA文库的构建，具体操作按说明书进行。

6、上机测序

使用Illumina x-ten测序平台对cDNA文库进行测序，具体操作按说明书进行。

7、高通量转录组测序数据分析

对测序结果进行生物信息学分析，利用TopHat v1.3.1进行RNA-seq读段定位，通过Cufflinks v1.0.3将RNA-seq片段数目进行标准化计算转录本的相对丰度，利用cuffdiff检测差异表达，当p值<0.05时，认为基因显著差异表达。

8、结果

RNA-seq结果显示，LOC105373420基因在帕金森病患者血液中的表达量显著高于正常血液中的水平。

实施例2QPCR测序验证LOC105373420基因的差异表达

1、根据高通量测序的检测结果选择LOC105373420基因进行大样本QPCR验证。按照实施例1中的样本收集方式选择帕金森患者血液和正常人血液各60例。

2、RNA提取

利用Invitrogen的血液RNA提取试剂盒提取RNA样品，具体操作详见说明书。

3、逆转录：

使用TAKARA公司的反转录试剂盒进行操作。具体步骤如下：

(1)取总RNA 2μg进行逆转录，加入Oligo(dT)2μl，充分混匀。70℃水浴5分钟后立即冰浴2-3分钟。

(2)构建25μl反应体系，其中包括5×逆转录缓冲液5μl，dNTP(2.5mM)5μl，RNasin40U/μl，M-MLV 200U/μl，补无核酶水至预期体积。

(3)42℃水浴60分钟后，95℃水浴5分钟以灭活M-MLV。

(4)-20℃储存备用。

4、QPCR扩增

(1)引物设计

根据Genbank中LOC105373420基因和GAPDH基因的编码序列设计QPCR扩增引物，由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。具体引物序列如下：

LOC105373420基因：

正向引物为5’-CATTGCCGATGTGATAAG-3’(SEQ ID NO.1)；

反向引物为5’-TATAAGGATACATTCATATTGGAT-3’(SEQ ID NO.2)。

GAPDH基因：

正向引物为5’-TTTAACTCTGGTAAAGTGGATAT-3’(SEQ ID NO.3)；

反向引物为5’-GGTGGAATCATATTGGAACA-3’(SEQ ID NO.4)。

(2)PCR反应体系：正向引物和反向引物各0.6μl，2×SuperReal PreMix Plus10μl，DNA模板2μl，ddH₂O>△2μl，灭菌蒸馏水4.8μl。

(3)PCR反应条件：95℃15min，(95℃10s，55℃30s，72℃32s)×40个循环，95℃15s，60℃60s，95℃15s。在ABI 7300型荧光定量PCR仪上进行PCR反应，通过融解曲线分析和电泳确定目的条带，ΔΔCT法进行相对定量。

5、统计学方法

实验采用3次重复实验，结果数据都是以平均值±标准差的方式来表示，使用SPSS13.0统计软件来进行统计分析的，两者之间的差异采用t检验，认为当P<0.05时具有统计学意义。

6、结果

结果如图1所示，与正常人血液相比，LOC105373420基因在帕金森病患者血液中的表达上调，差异具有统计学意义(P<0.05)，同RNA-sep结果一致，提示LOC105373420作为生物标志物应用于帕金森患者的诊断。

实施例3抑制LOC105373420基因表达

1、细胞培养

多巴胺神经元细胞SH-SY5Y，以含10％胎牛血清、1％P/S的DMEM培养液中(pH7.2～7.4)，在37℃、5％CO₂、相对湿度为90％的培养箱中培养。每隔2天换液一次，待细胞生长至90％接触时进行传代，用PBS清洗后加入0.25％-EDTA胰蛋白酶消化使细胞从瓶壁上分离下来，用含胎牛血清的DMEM培养液终止胰酶消化反应，1000g离心2min，弃上清，用新配置的培养液重悬，以1:3～1:4比例传代，24小时后细胞进入对数生长期更换培养液，并根据实验要求给予不同的干预。

2、siRNA设计

针对LOC105373420的siRNA序列：

siRNA1：

正义链为5’-UCAAAAGCAGCAAACACGCCC-3’(SEQ ID NO.5)，

反义链为5’-GCGUGUUUGCUGCUUUUGAAG-3’(SEQ ID NO.6)；

siRNA2：

正义链为5’-UUCUAGAAACAUCUGAAUGGA-3’(SEQ ID NO.7)，

反义链为5’-CAUUCAGAUGUUUCUAGAAAA-3’(SEQ ID NO.8)；

siRNA3：

正义链为5’-UAUCACAUCGGCAAUGACCUA-3’(SEQ ID NO.9)，

反义链为5’-GGUCAUUGCCGAUGUGAUAAG-3’(SEQ ID NO.10)。

3、重组腺病毒

根据腺病毒介导的siRNA的不同，将细胞分为五组，SH组：不转染任何病毒载体的SH-SY5Y细胞，作为空白对照；Ad组：感染空腺病毒质粒细胞组，siRNA1组：腺病毒介导干扰序列1感染细胞组：siRNA2组：腺病毒介导干扰序列2感染细胞组；siRNA3组：腺病毒介导干扰序列3感染细胞组。

将细胞按1×10⁵/孔接种到6孔细胞培养板中，每孔2ml，在37℃、5％CO₂培养箱中细胞培养24h，此时细胞融合密度约为50％-60％；吸出上清弃掉，用无血清培养基1ml洗两遍，用1ml无血清培养基稀释的MOI为50的各组腺病毒，每间隔20min摇晃培养板一次，以增加感染效果，感染48h后，再加入浓度为1000μmol/L>+完全培养基，孵育24h后。收集细胞用于提取RNA；

3、QPCR检测LOC105373420基因的转录水平

3.1细胞总RNA的提取

采用TRIzol Reagent(Invitrogen Cat.No.15596-018)总RNA提取试剂，按说明书提供方法提取SH-SY5Y细胞的总RNA。

3.2逆转录步骤同实施例2。

3.3QPCR扩增步骤同实施例2。

4、统计学方法

实验采用3次重复实验，结果数据都是以平均值±标准差的方式来表示，使用SPSS18.0统计软件来进行统计分析的，干扰LOC105373420基因表达组与对照组之间的差异采用t检验，认为当P<0.05时具有统计学意义。

5、结果

结果如图2显示，相比siRNA1、siRNA3，siRNA2能够更有效抑制LOC105373420水平，差异具有统计学意义(P<0.05)，因此选择siRNA2进行后续的实验。

实施例4 LOC105373420基因对神经细胞的影响

采用MTT实验检测LOC105373420基因对SH-SY5Y帕金森病细胞模型细胞增殖能力的影响。

1、细胞培养与腺病毒感染步骤同实施例3。

2、步骤：

调整SH-SY5Y细胞密度至5×10⁴/mL，以每孔100μl细胞接种于96孔培养板中，按照实施例3处理细胞，在处理后每隔12h应用MTT检测，直至72h。

MTT还原分析法检测细胞活性：将孔内溶液弃掉，加入100μl培养基，再每孔加入5mg/mL的MTT液10μl，37℃培养4h后，吸去培养基，每孔加入DMSO100μl，室震荡10min，使紫蓝色沉淀充分溶解，用酶标仪在490nm波长测吸光度值(OD值)。将OD值作为反映SH-SY5Y细胞活性的参数。

3、统计学方法

实验采用3次重复实验，使用SPSS18.0统计软件来进行统计分析，两者之间的差异采用t检验，认为当P<0.05时具有统计学意义。

4、结果

图3所示的结果显示：siRNA2组的细胞生长速度高于对照组组的细胞生长速度，差异具有统计学意义(P<0.05)。上述结果表明LOC105373420过表达不利于SH-SY5Y细胞的生长，通过抑制LOC105373420基因的表达可以促进神经细胞的生长。

上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。

序列表

<110> 北京泱深生物信息技术有限公司

<120> LOC105373420在帕金森病诊断、治疗中的应用

<160> 10

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

cattgccgat gtgataag 18

<210> 2

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

tataaggata cattcatatt ggat 24

<210> 3

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

tttaactctg gtaaagtgga tat 23

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

ggtggaatca tattggaaca 20

<210> 5

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

ucaaaagcag caaacacgcc c 21

<210> 6

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

gcguguuugc ugcuuuugaa g 21

<210> 7

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

uucuagaaac aucugaaugg a 21

<210> 8

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

cauucagaug uuucuagaaa a 21

<210> 9

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

uaucacaucg gcaaugaccu a 21

<210> 10

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

ggucauugcc gaugugauaa g 21