一种蛇舌兰快速成苗方法

摘要

本发明提供一种蛇舌兰快速成苗的方法，属于兰科植物种质资源再生领域，采集蛇舌兰蒴果，在无菌条件下进行芽诱导、增殖生根同时完成诱导培养，得到可移栽的蛇舌兰幼苗，兰科植物的二步成苗法，解决了兰科植物培养周期长，成本高等生产问题同时解决了现有技术中一些珍贵兰属资源来源困难，生于海拔250‑1450米的山地林中树干上或沟谷岩石上且对环境条件要求苛刻，野生资源少，观赏效果好，自然繁衍能力、传播扩散能力不强，自然更新困难、优良种苗稀缺等问题，是国家二级保护植物，具有较高的园艺观赏价值，为兰科植物园林装饰以及兰花公园装饰具有重要意义。

说明书

技术领域

本发明属于兰科植物种质资源再生领域，具体涉及一种蛇舌兰快速成苗的方法。

背景技术

蛇舌兰（学名：Diploprora championii (Lindl.) Hook. f.）：茎质地硬，圆柱形或稍扁的圆柱形，常下垂。叶纸质，镰刀状披针形或斜长圆形，基部具宿存的鞘，边缘有时波状。总状花序与叶对生，比叶长或短，下垂，具2-5朵花；花具香气，稍肉质，开展，萼片和花瓣淡黄色；花瓣比萼片较小；唇瓣白色带玫瑰色，中部以下凹陷呈舟形，无距，长约10毫米，宽约4毫米，稍3裂。蒴果圆柱形。花期2-8月，果期3-9月。

生于海拔250-1450米的山地林中树干上或沟谷岩石上。分布于中国、斯里兰卡、印度（德干高原）、锡金、缅甸、泰国、越南。此花有栽培，具有较高的园艺价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种蛇舌兰快速成苗的方法，解决了兰科植物培养周期长，成本高等生产问题同时解决了现有技术中一些珍贵兰属资源来源困难，生于海拔250-1450米的山地林中树干上或沟谷岩石上且对环境条件要求苛刻，野生资源少，观赏效果好，自然繁衍能力、传播扩散能力不强，自然更新困难、优良种苗稀缺等问题，是国家二级保护植物，具有较高的园艺观赏价值，为兰科植物园林装饰以及兰花公园装饰具有重要意义。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种蛇舌兰快速成苗方法，包括如下步骤：

1）材料选取与消毒：采摘当年90%成熟荚果用洗涤剂漂洗干净，再置于流水中冲洗20分钟；种子消毒处理：将荚果进行清洗，置饱和漂白粉上清液中浸泡15min，并用软毛刷刷洗荚果外部，冲洗干净后，自来水下滴冲0.5h，双蒸水冲荡2-3次，置超净工作台内用75%酒精消毒30s后倒去酒精，加入0.1%升汞处理5-8min，将汞液倒入废汞瓶，无菌水冲3-4遍后，用消毒滤纸吸干表面水分后，待用；

2）芽诱导培养：取饱满经消毒处理后的荚果，用枪状镊夹住荚果，手术刀顺着荚果垂直方向剖开，取出荚果内种子，分别接种于经高温、高压灭菌的芽诱导培养基中；培养条件：培养室温度为23±2℃，无光培养69d后，第70d光照时间设置3h，光照强度500lx，之后10d光照时间5h，光照强度500-1000lx，培养时间80d（全部萌发为80d），得到直接诱导的生长植株；

3）增殖生根同时完成培养：将经上述诱导培养，所得到生长良好的丛芽根据植株大小进行分株接种，高0.3-0.5cm、叶片1-2片的小植株接种于芽增殖培养基中，高约0.5-1.0cm、叶片2-3片的大植株接种于完成生根过程的培养基中，光照时间8h/d，光照强度1500-2000lx，增殖培养时间35-45d，得到增殖生根同时完成培养幼苗；

4）试管瓶苗培养完成：当生根培养试管苗生长至高5-6cm，根3-5条，叶3-5片，叶长1.5-2.5cm时完成蛇舌兰种子诱导发芽及快速繁殖培养；

6）将完成生根培养试管瓶苗放在自然光下炼苗5-7天，打开瓶盖炼苗1-2d，以增强试管苗对室外环境的适应能力；然后从培养瓶中取出，洗净附着在根系的残留培养基，移入腐殖土：水草质量比为1:2混合的基质中，保湿遮阴，温度控制在15-30℃，湿度保持在75％-85％，避免阳光直射，；2-3周后植株适应能力逐渐增强，获得自然生长健壮完整种苗。

所述的芽诱导培养基为：MS+1.0mg/L花宝1号+0.5mg/LNAA+1.0g/L蛋白胨+20g/L蔗糖+5.8g/L琼脂粉+1.0 g·L^-1活性炭；pH值为5.4-5.7。

所述的芽增殖培养基：1/2MS+1.0g/L花宝2号+0.5mg/LKT+0.1mg/LNAA+25g/L 蔗糖+5.6g/L琼脂粉+1.50g·L^-1活性炭；pH值为5.4-5.7。

所述的生根过程的培养基为1/2MS+1.0g/L花宝2号+0.5mg/LKT+0.1mg/LNAA+25g/L 蔗糖+5.6g/L琼脂粉+1.50g·L^-1活性炭；pH值为5.4-5.7。

本发明的优点在于：

1、体系建立材料的选择：采摘当年成熟度为90%饱满未开裂荚果；2、正确的消毒时间和材料的处理方法；3、准确合理的培养基成分构成；4、合理的光照时间光照强度的设置，提高了萌发率；5、增殖生根同时完成培养，诱导生根率可达100%，成活率可达95%以上；培养时间缩短成苗移植后成活率高，病虫害少，降低了大量成本，幼苗健壮挺拔，长势良好，整齐一致。

附图说明

图1是经过诱导培养后的芽植株。

图2增殖生根培养后同时完成的幼苗。

具体实施方式

实施例1

1）材料选取与消毒：采摘当年90%成熟荚果用洗涤剂漂洗干净，再置于流水中冲洗20分钟；种子消毒处理：将荚果进行清洗，置饱和漂白粉上清液中浸泡15min，并用软毛刷刷洗荚果外部，冲洗干净后，自来水下滴冲0.5h，双蒸水冲荡3次，置超净工作台内用75%酒精消毒30s后倒去酒精，加入0.1%升汞处理6min，将汞液倒入废汞瓶，无菌水冲4遍后，用消毒滤纸吸干表面水分后，待用；

2）芽诱导培养：取饱满经消毒处理后的荚果，用枪状镊夹住荚果，手术刀顺着荚果垂直方向剖开，取出荚果内种子，分别接种于经高温、高压灭菌的芽诱导培养基中；培养条件：培养室温度为23±2℃，无光培养69d后，第70d，光照时间设置3h，之后10d光照时间5h，光照强度800lx，培养时间80d，得到直接诱导的生长植株；

3）增殖生根同时完成培养：将经上述诱导培养，所得到生长良好的丛芽根据植株大小进行分株接种，高0.3-0.5cm、叶片1-2片的小植株接种于芽增殖培养基中，高0.5-1.0cm、叶片2-3片的大植株接种于完成生根过程的培养基中，光照时间8h/d，光照强度1800lx，增殖培养时间40d，得到增殖生根同时完成培养幼苗；

4）试管瓶苗培养完成：当生根培养试管苗生长至高6cm，根4条，叶4片，叶长2cm时完成蛇舌兰种子诱导发芽及快速繁殖培养；

6）将完成生根培养试管瓶苗放在自然光下炼苗6天，打开瓶盖炼苗2d，以增强试管苗对室外环境的适应能力；然后从培养瓶中取出，洗净附着在根系的残留培养基，移入腐殖土：水草质量比为1:2混合的基质中，保湿遮阴，温度控制在25℃，湿度保持在80％，避免阳光直射，； 3周后植株适应能力逐渐增强，获得自然生长健壮完整种苗。

所述的芽诱导培养基为：MS+1.0mg/L花宝1号+0.5mg/LNAA+1.0g/L蛋白胨+20g/L蔗糖+5.8g/L琼脂粉+1.0 g·L^-1活性炭；pH值为5.6。

所述的芽增殖培养基：1/2MS+1.0g/L花宝2号+0.5mg/LKT+0.1mg/LNAA+25g/L 蔗糖+5.6g/L琼脂粉+1.50g·L^-1活性炭；pH值为5.6。

所述的生根过程的培养基为1/2MS+1.0g/L花宝2号+0.5mg/LKT+0.1mg/LNAA+25g/L 蔗糖+5.6g/L琼脂粉+1.50g·L^-1活性炭；pH值为5.6。

成活率达到100%。

实施例2

1）材料选取与消毒：采摘当年90%成熟荚果用洗涤剂漂洗干净，再置于流水中冲洗20分钟；种子消毒处理：将荚果进行清洗，置饱和漂白粉上清液中浸泡15min，并用软毛刷刷洗荚果外部，冲洗干净后，自来水下滴冲0.5h，双蒸水冲荡2次，置超净工作台内用75%酒精消毒30s后倒去酒精，加入0.1%升汞处理5min，将汞液倒入废汞瓶，无菌水冲3遍后，用消毒滤纸吸干表面水分后，待用；

2）芽诱导培养：取饱满经消毒处理后的荚果，用枪状镊夹住荚果，手术刀顺着荚果垂直方向剖开，取出荚果内种子，分别接种于经高温、高压灭菌的芽诱导培养基中；培养条件：培养室温度为23±2℃，无光培养69d后，第70d光照时间设置3h，光照强度500lx，之后10d光照时间5h，光照强度500-1000lx，培养时间80d（全部萌发为80d），得到直接诱导的生长植株；

3）增殖生根同时完成培养：将经上述诱导培养，所得到生长良好的丛芽根据植株大小进行分株接种，高0.3-0.5cm、叶片1-2片的小植株接种于芽增殖培养基中，高约0.5-1.0cm、叶片2-3片的大植株接种于完成生根过程的培养基中，光照时间8h/d，光照强度1500lx，增殖培养时间35-45d，得到增殖生根同时完成培养幼苗；

4）试管瓶苗培养完成：当生根培养试管苗生长至高5cm，根3条，叶3片，叶长1.5cm时完成蛇舌兰种子诱导发芽及快速繁殖培养；

6）将完成生根培养试管瓶苗放在自然光下炼苗5天，打开瓶盖炼苗1d，以增强试管苗对室外环境的适应能力；然后从培养瓶中取出，洗净附着在根系的残留培养基，移入腐殖土：水草质量比为1:2混合的基质中，保湿遮阴，温度控制在15℃，湿度保持在75％，避免阳光直射；2周后植株适应能力逐渐增强，获得自然生长健壮完整种苗。

所述的芽诱导培养基为：MS+1.0mg/L花宝1号+0.5mg/LNAA+1.0g/L蛋白胨+20g/L蔗糖+5.8g/L琼脂粉+1.0 g·L^-1活性炭；pH值为5.4。

所述的芽增殖培养基：1/2MS+1.0g/L花宝2号+0.5mg/LKT+0.1mg/LNAA+25g/L 蔗糖+5.6g/L琼脂粉+1.50g·L^-1活性炭；pH值为5.4。

所述的生根过程的培养基为1/2MS+1.0g/L花宝2号+0.5mg/LKT+0.1mg/LNAA+25g/L 蔗糖+5.6g/L琼脂粉+1.50g·L^-1活性炭；pH值为5.4。

成活率达到99%。

实施例3

1）材料选取与消毒：采摘当年90%成熟荚果用洗涤剂漂洗干净，再置于流水中冲洗20分钟；种子消毒处理：将荚果进行清洗，置饱和漂白粉上清液中浸泡15min，并用软毛刷刷洗荚果外部，冲洗干净后，自来水下滴冲0.5h，双蒸水冲荡3次，置超净工作台内用75%酒精消毒30s后倒去酒精，加入0.1%升汞处理8min，将汞液倒入废汞瓶，无菌水冲4遍后，用消毒滤纸吸干表面水分后，待用；

2）芽诱导培养：取饱满经消毒处理后的荚果，用枪状镊夹住荚果，手术刀顺着荚果垂直方向剖开，取出荚果内种子，分别接种于经高温、高压灭菌的芽诱导培养基中；培养条件：培养室温度为23±2℃，无光培养69d后，第70d光照时间设置3h，光照强度500lx，之后10d光照时间5h，光照强度1000lx，培养时间80d，得到直接诱导的生长植株；

3）增殖生根同时完成培养：将经上述诱导培养，所得到生长良好的丛芽根据植株大小进行分株接种，高0.5cm、叶片2片的小植株接种于芽增殖培养基中，高约1.0cm、叶片3片的大植株接种于完成生根过程的培养基中，光照时间8h/d，光照强度2000lx，增殖培养时间45d，得到增殖生根同时完成培养幼苗；

4）试管瓶苗培养完成：当生根培养试管苗生长至高6cm，根5条，叶5片，叶长2.5cm时完成蛇舌兰种子诱导发芽及快速繁殖培养；

6）将完成生根培养试管瓶苗放在自然光下炼苗7天，打开瓶盖炼苗2d，以增强试管苗对室外环境的适应能力；然后从培养瓶中取出，洗净附着在根系的残留培养基，移入腐殖土：水草质量比为1:2混合的基质中，保湿遮阴，温度控制在30℃，湿度保持在85％，避免阳光直射，； 3周后植株适应能力逐渐增强，获得自然生长健壮完整种苗。

所述的芽诱导培养基为：MS+1.0mg/L花宝1号+0.5mg/LNAA+1.0g/L蛋白胨+20g/L蔗糖+5.8g/L琼脂粉+1.0 g·L^-1活性炭；pH值为5.7。

所述的芽增殖培养基：1/2MS+1.0g/L花宝2号+0.5mg/LKT+0.1mg/LNAA+25g/L 蔗糖+5.6g/L琼脂粉+1.50g·L^-1活性炭；pH值为5.7。

所述的生根过程的培养基为1/2MS+1.0g/L花宝2号+0.5mg/LKT+0.1mg/LNAA+25g/L 蔗糖+5.6g/L琼脂粉+1.50g·L^-1活性炭；pH值为5.7。

成活率达到99%。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。