一种山楂中的黄酮类化合物及其制备方法与应用

摘要

本发明涉及一种山楂中的黄酮类化合物及其制备方法与应用，属于植物化学技术领域。该黄酮类化合物是从山楂中分离得到，化合物命名为：2′‑羟基‑7‑(3‑羟丙基)‑6‑甲氧基‑黄酮，英文名为：2′‑hydroxy‑7‑(3‑hydroxypropyl)‑6‑methoxy‑flavone，其分子式为C

说明书

技术领域

本发明属于植物化学技术领域，涉及一种山楂中的黄酮类化合物及其制备方法与应用，具体涉及一种从山楂中首次提取得到的黄酮类化合物。该化合物添加到卷烟滤嘴中，卷烟抽吸时烟气更清晰圆润，生津感得到加强，喉部刺激性得到降低，口腔略带回甜感，余味改善明显。

背景技术

山楂(Crataegus pinnatifida)，又名山里果、山里红，为蔷薇科山楂属落叶小乔木，在我国南北各地地均有分布，生于海拔100-1500米的山坡林边或灌木丛中。山楂果实酸甜可口，含丰富的维生素、山楂酸、柠檬酸、黄酮类化合物等，能生津止渴，亦可入药，是一种非常受人们喜爱的果实。经常吃山楂可以帮助减肥瘦身、强心降脂、降血压、生津开胃等功效。山楂干果还具有非常高的药用价值；民间中成药焦兰仙、保和丸、山楂丸等均以山楂为其主要成分。山楂入药归脾、胃、肝经，有消食化积、活血散瘀的功效。

国内外研究表明，山楂中的主要化学成分有：黄酮类化合物、有机酸类化合物、三萜类化合物、原花青素等。黄酮类物质是山楂中的主要活性成分，目前，从山楂中分离得到100余种黄酮类化合物。山楂黄酮具有降血脂、抗动脉粥样硬化、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等多种较强的生理活性。黄酮类化合物泛指两个具有酚羟基的苯环（A-与B-环）通过中央三碳原子相互连结而成的一系列化合物，其基本母核为2-苯基色原酮。黄酮类化合物结构中常连接有酚羟基、甲氧基、甲基、异戊烯基等官能团。此外，它还常与糖结合成苷。黄酮的功效是多方面的，它是一种很强的抗氧剂，阻止氧化的能力是维生素E的十倍以上，这种抗氧化作用可以阻止细胞的退化、衰老，也可阻止癌症的发生。黄酮可以改善血液循环，降低胆固醇，改善心脑血管疾病。另外，黄酮类化合物也有突出的改善味觉功效，有些黄酮类化合物的味觉表现非常特别，入口后有一种自然的甜味。橄榄所含的黄酮就是其能回甘的主要原因，而且黄酮含量越高，回甘就越明显，气味越醇厚。本发明从山楂中分离得到了一种黄酮类化合物，该化合物添加到卷烟过滤嘴中，卷烟抽吸时烟气更清晰圆润，生津感得到加强，喉部刺激性得到降低，口腔略带回甜感，余味改善明显。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种山楂中的黄酮类化合物；第二目的在于提供所述黄酮类化合物的制备方法；第三目的在于提供所述黄酮类化合物在卷烟滤嘴加香中的应用，滤嘴中添加了该黄酮类化合物的卷烟抽吸时烟气更清晰圆润，生津感得到加强，喉部刺激性得到降低，口腔略带回甜感，余味改善明显

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明的第一目的是这样实现的，一种山楂中的黄酮类化合物是从山楂中分离得到，该化合物为浅黄色胶状物，命名为：2′-羟基-7-(3-羟丙基)-6-甲氧基-黄酮，英文名为：2′-hydroxy-7-(3-hydroxypropyl)-6-methoxy-flavone，其分子式为C₁₉H₁₈O₅，其结构式如式（I）所示：

，式（I）。

本发明的第二目的是这样实现的，所述黄酮类化合物的制备方法，是以山楂为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、MCI脱色、硅胶柱层析和高效液相色谱分离步骤制得，具体为：

A、浸膏提取：将山楂粉用溶剂超声提取2~5次，每次所用提取溶剂的质量为山楂粉质量的2~6倍，每次提取时间为30~60分钟，合并提取液并过滤，滤液减压浓缩至刚有沉淀物析出，静置20~60分钟，滤除沉淀物，之后将所得滤液减压浓缩成浸膏a；

B、有机溶剂萃取：向浸膏a中加入重量是浸膏a重量1~3倍的水，然后用有机溶剂萃取3~5次，每次所用有机溶剂的体积与水体积的相同，合并有机溶剂萃取相，之后将合并得到的有机溶剂萃取相减压浓缩成浸膏b；

C、MCI脱色：向浸膏b中加入是浸膏b重量3~5倍的体积浓度为95%甲醇水溶液，待浸膏b完全溶解后，上MCI柱，用体积浓度为90%~95%甲醇水溶液进行洗脱，合并洗脱液，之后将合并后的洗脱液减压浓缩成浸膏c；

D、硅胶柱层析：将浸膏c上硅胶柱层析，装柱硅胶为160~200目，所用硅胶的重量为浸膏c重量6~10倍量；以体积比为1:0~0:1的氯仿和丙酮混合有机溶剂梯度洗脱，每个梯度洗脱到TLC点板无点后，更换下一梯度洗脱；收集各梯度的梯度洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；

E、高效液相色谱分离：将采用体积比为7:3的氯仿-丙酮混合有机溶剂洗脱得到的部分采用高效液相色谱分离纯化，即得所述的黄酮类化合物。

进一步，优选的是，所述A步骤的溶剂为体积浓度为70~100%的丙酮水溶液、体积浓度为90~100%的乙醇水溶液或体积浓度为90~100%的甲醇水溶液。

进一步，优选的是，所述B步骤的有机溶剂为二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、乙醚或石油醚。

进一步，优选的是，所述D步骤中浸膏c在经硅胶柱层析前，先用重量是浸膏c 1.5~3倍的丙酮或者甲醇溶解，然后用重量是浸膏c 0.5~2.0倍的80~100目硅胶拌样，之后上样。

进一步，优选的是，所述D步骤中，梯度洗脱时，所使用的氯仿和丙酮混合有机溶剂的体积比依次为20:1、9:1、8:2、7:3、6:4和1:1；每个梯度洗脱到TLC点板无点后，更换下一梯度洗脱。

进一步，优选的是，所述E步骤的高效液相色谱分离纯化是以体积浓度为55%的甲醇水溶液为流动相，流速20 ml/min，以21.2×250mm，5μm的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为355 nm，每次进样50~200μL，收集34.2 min的色谱峰，多次累加后蒸干即可得本发明的化合物。

本发明的山楂粉为普通市购品。本发明对山楂粉的粒度无限制。

本发明化合物添加到卷烟过滤嘴中，卷烟抽吸时烟气更清晰圆润，生津感得到加强，喉部刺激性得到降低，口腔略带回甜感，余味改善明显。

所制备的化合物的结构通过以下方法进行鉴定：

本发明化合物为黄色胶状物；

HRESI-MS显示其准分子离子峰为349.1059 [M+Na]⁺(计算值349.1052)，结合¹H>19H₁₈O₅，不饱和度为11。红外光谱中显示了羟基(3408)、羰基(1665)和芳环(1614、1550和1438>-1)的共振吸收峰。而紫外光谱在210、250、355>

化合物的¹H和¹³C>α,β-不饱和羰基(C-2、C-3、C-4，H-3)，1个羟丙基(C-1''~C-3''，H₂-1''~H₂-3'')，1个甲氧基>d_{C>56.3 q，dH>dH>α,β-不饱和羰基和双键信号，可推测该化合物为黄酮类化合物。根据H-3和C-2、C-4、C-10、C-1′，H-5和C-4、C-9、C-10，H-8和C-6、C-7、C-9、C-10，以及H-6′和C-2的HMBC相关(如图2)可进一步确认化合物为黄酮类结构。化合物的母体确定后，其余的取代基，羟丙基、甲氧基和酚羟基可视为黄酮上的取代基。}

化合物的HMBC谱中(如图3)可观察到甲氧基氢(d_H>d_C>2-1''>d_{H>2.79)与C-6(dC>dC130.5)、C-8(dC>2}-2''>d_H1.90)与C-7(d_C 130.5)，以及H-8>d_{H>6.79)和C-1''(dC28.8)的HMBC相关，可证实羟丙基取代在C-7位。酚羟基取代在C-2'可通过酚羟基氢(dH10.90)和C-1'>dC 119.4)、C-2'>dC 158.4) 和C-3'>dC>dH>dH>dH>6.90 (d) 7.6；H-4′，dH>dH>dH>}

至此，化合物的结构得到确定，并命名为：2′-羟基-7-(3-羟丙基)-6-甲氧基-黄酮。

表1. 本发明化合物的¹H>13C>3)

化合物的红外、紫外和质谱数据： UV (甲醇) λ_max>ε)>ν_{max>3408、2832、1665、1614、1550、1438、1160、1258、1137、1062>–1;^{>H 和13C>m/z 349;>m/z>+}>19}H₁₈NaO₅，349.1052).

本发明的第三目的是这样实现的：

所述的山楂中的黄酮类化合物作为制备卷烟滤嘴添加剂的应用。

本发明考虑到三醋酸甘油酯为卷烟滤嘴成型最常用的增塑剂，而且本发明化合物溶于三醋酸甘油酯，在卷烟滤嘴成型过程中，本发明化合物可通过三醋酸甘油酯添加到过滤嘴中。

供添加用卷烟为红塔集团的卷烟“红塔山经典”，用三醋酸甘油酯将上述黄酮类化合物用配成0.5 mg/mL的溶液。按滤嘴丝束重量的5-8%均匀的喷洒到滤嘴丝束上，制成滤棒，然后将该滤棒通过常规的卷烟卷接制成卷烟，进行感官评析，并以未添加该化合物的相同卷烟作为对照。评析结果表明：和对照相比较，本发明化合物添加到卷烟滤嘴中，卷烟抽吸时烟气更清晰圆润，生津感得到加强，喉部刺激性得到降低，口腔略带回甜感，余味改善明显。

本发明与现有技术相比，其有益效果为：

本发明化合物是以山楂中分离得到，原料来源非常广泛，成本低；生产该化合物可综合利用废弃资源，对提高山楂加工的附加值具有重要现实意义。

本发明化合物结构简单，也可通过人工合成进行生产，较容易实现，为烟草工业提供新添加剂。而本发明化合物溶于三醋酸甘油酯，在卷烟滤嘴成型过程中，可通过三醋酸甘油酯添加到过滤嘴中，不增加额外的工序，在卷烟中的应用容易实现。

和对照相比较，本发明化合物添加到卷烟滤嘴中，卷烟抽吸时烟气更清晰圆润，生津感得到加强，喉部刺激性得到降低，口腔略带回甜感，余味改善明显。

附图说明

图1本发明黄酮类化合物的核磁共振碳谱（¹³C>

图2为本发明黄酮类化合物的核磁共振氢谱（¹H>

图3本发明黄酮类化合物的关键HMBC相关图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的详细描述。

本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用材料或设备未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。

本发明所述的山楂中的黄酮类化合物是从山楂中分离得到，命名为：2′-羟基-7-(3-羟丙基)-6-甲氧基-黄酮，英文名为：2′-hydroxy-7-(3-hydroxypropyl)-6-methoxy-flavone，其分子式为C₁₉H₁₈O₅，其结构式如式（I）所示：

，式（I）。

该化合物为浅黄色胶状物，命名为：化合物命名为：2′-羟基-7-(3-羟丙基)-6-甲氧基-黄酮，英文名为：2′-hydroxy-7-(3-hydroxypropyl)-6-methoxy-flavone。

本发明所述黄酮类化合物的制备方法，是以山楂为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、MCI脱色、硅胶柱层析和高效液相色谱分离步骤制得，具体为：

A、浸膏提取：将山楂粉用溶剂超声提取2~5次，每次所用提取溶剂的质量为山楂粉质量的2~6倍，每次提取时间为30~60分钟，合并提取液并过滤，滤液减压浓缩至刚有沉淀物析出，静置20~60分钟，滤除沉淀物，之后将所得滤液减压浓缩成浸膏a；

B、有机溶剂萃取：向浸膏a中加入重量是浸膏a重量1~3倍的水，然后用有机溶剂萃取3~5次，每次所用有机溶剂的体积与水体积的相同，合并有机溶剂萃取相，之后将合并得到的有机溶剂萃取相减压浓缩成浸膏b；

C、MCI脱色：向浸膏b中加入是浸膏b重量3~5倍的体积浓度为95%甲醇水溶液，待浸膏b完全溶解后，上MCI柱，用体积浓度为90%~95%甲醇水溶液进行洗脱，合并洗脱液，之后将合并后的洗脱液减压浓缩成浸膏c；

D、硅胶柱层析：将浸膏c上硅胶柱层析，装柱硅胶为160~200目，所用硅胶的重量为浸膏c重量6~10倍量；以体积比为1:0~0:1的氯仿和丙酮混合有机溶剂梯度洗脱，每个梯度洗脱到TLC点板无点后，更换下一梯度洗脱；收集各梯度的梯度洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；

E、高效液相色谱分离：将采用体积比为8:2的氯仿-丙酮混合有机溶剂洗脱得到的部分采用高效液相色谱分离纯化，即得所述的黄酮类化合物。

所述A步骤的溶剂为体积浓度为70~100%的丙酮水溶液、体积浓度为90~100%的乙醇水溶液或体积浓度为90~100%的甲醇水溶液。

所述B步骤的有机溶剂为二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、乙醚或石油醚。

所述D步骤中浸膏c在经硅胶柱层析前，先用重量是浸膏c 1.5~3倍的丙酮或者甲醇溶解，然后用重量是浸膏c 0.5~2.0倍的80~100目硅胶拌样，之后上样。

所述D步骤中，梯度洗脱时，所使用的氯仿和丙酮混合有机溶剂的体积比依次为20:1、9:1、8:2、7:3、6:4和1:1；每个梯度洗脱到TLC点板无点后，更换下一梯度洗脱。

所述E步骤的高效液相色谱分离纯化是以体积浓度为55%的甲醇水溶液为流动相，流速15~25 ml/min，以21.2×250 mm，5μm的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为355 nm，每次进样50~200 μL，收集34.2 min的色谱峰，多次累加后蒸干。

本发明化合物添加到卷烟过滤嘴中，而且和对照相比较，，卷烟抽吸时烟气更清晰圆润，生津感得到加强，喉部刺激性得到降低，口腔略带回甜感，余味改善明显。

实施例1

山楂样品来源于云南大理，品种为大金星。

A、浸膏提取：将山楂粉用溶剂超声提取2次，每次所用提取溶剂的质量为山楂粉质量的2倍，每次提取时间为30分钟，合并提取液并过滤，滤液减压浓缩至刚有沉淀物析出，静置20分钟，滤除沉淀物，之后将所得滤液减压浓缩成浸膏a；

B、有机溶剂萃取：向浸膏a中加入重量是浸膏a重量1倍的水，然后用有机溶剂萃取3次，每次所用有机溶剂的体积与水体积的相同，合并有机溶剂萃取相，之后将合并得到的有机溶剂萃取相减压浓缩成浸膏b；

C、MCI脱色：向浸膏b中加入是浸膏b重量3倍的体积浓度为95%甲醇水溶液，待浸膏b完全溶解后，上MCI柱，用体积浓度为90%甲醇水溶液进行洗脱，合并洗脱液，之后将合并后的洗脱液减压浓缩成浸膏c；

D、硅胶柱层析：浸膏c先用重量是浸膏c 1.5倍的丙酮溶解，然后用重量是浸膏c 0.8倍的80目硅胶拌样，之后上样进行柱层析，装柱硅胶为160目，所用硅胶的重量为浸膏c重量6倍量；以体积比为20:1、9:1、8:2、7:3、6:4和1:1的氯仿和丙酮混合有机溶剂梯度洗脱，每个梯度洗脱到TLC点板无点后，更换下一梯度洗脱；收集各梯度的梯度洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；

E、高效液相色谱分离：将采用体积比为7:3的氯仿-丙酮混合有机溶剂洗脱得到的部分采用高效液相色谱分离纯化，高效液相色谱分离纯化的具体方法是：以体积浓度为55%的甲醇水溶液为流动相，流速20 ml/min，以21.2×250mm，5μm的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为355 nm，每次进样50μL，收集34.2 min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的黄酮类化合物。

其中，A步骤的溶剂为体积浓度为70%的丙酮水溶液。所述B步骤的有机溶剂为氯仿。

实施例2

山楂样品来源于山东潍坊，品种为大绵球。

A、浸膏提取：将山楂粉用溶剂超声提取5次，每次所用提取溶剂的质量为山楂粉质量的6倍，每次提取时间为60分钟，合并提取液并过滤，滤液减压浓缩至刚有沉淀物析出，静置60分钟，滤除沉淀物，之后将所得滤液减压浓缩成浸膏a；

B、有机溶剂萃取：向浸膏a中加入重量是浸膏a重量2倍的水，然后用有机溶剂萃取5次，每次所用有机溶剂的体积与水体积的相同，合并有机溶剂萃取相，之后将合并得到的有机溶剂萃取相减压浓缩成浸膏b；

C、MCI脱色：向浸膏b中加入是浸膏b重量5倍的体积浓度为95%甲醇水溶液，待浸膏b完全溶解后，上MCI柱，用体积浓度为95%甲醇水溶液进行洗脱，合并洗脱液，之后将合并后的洗脱液减压浓缩成浸膏c；

D、硅胶柱层析：浸膏c先用重量是浸膏c 3倍的甲醇溶解，然后用重量是浸膏c 1.2倍的100目硅胶拌样，之后上样进行柱层析，装柱硅胶为200目，所用硅胶的重量为浸膏c重量10倍量；以体积比为20:1、9:1、8:2、7:3、6:4和1:1的氯仿和丙酮混合有机溶剂梯度洗脱，每个梯度洗脱到TLC点板无点后，更换下一梯度洗脱；收集各梯度的梯度洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；

E、高效液相色谱分离：将采用体积比为7:3的氯仿-丙酮混合有机溶剂洗脱得到的部分采用高效液相色谱分离纯化，高效液相色谱分离纯化的具体方法是：以体积浓度为55%的甲醇水溶液为流动相，流速20 ml/min，以21.2×250mm，5μm的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为355 nm，每次进样200μL，收集34.2 min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的黄酮类化合物。

其中，A步骤的溶剂为丙酮。所述B步骤的有机溶剂为二氯甲烷。

实施例3

山楂样品来源于陕西安康，品种为歪把红。

A、浸膏提取：将山楂粉用溶剂超声提取3次，每次所用提取溶剂的质量为山楂粉质量的3倍，每次提取时间为40分钟，合并提取液并过滤，滤液减压浓缩至刚有沉淀物析出，静置40分钟，滤除沉淀物，之后将所得滤液减压浓缩成浸膏a；

B、有机溶剂萃取：向浸膏a中加入重量是浸膏a重量1.5倍的水，然后用有机溶剂萃取4次，每次所用有机溶剂的体积与水体积的相同，合并有机溶剂萃取相，之后将合并得到的有机溶剂萃取相减压浓缩成浸膏b；

C、MCI脱色：向浸膏b中加入是浸膏b重量4倍的体积浓度为95%甲醇水溶液，待浸膏b完全溶解后，上MCI柱，用体积浓度为93%甲醇水溶液进行洗脱，合并洗脱液，之后将合并后的洗脱液减压浓缩成浸膏c；

D、硅胶柱层析：浸膏c先用重量是浸膏c 2倍的丙酮或者甲醇溶解，然后用重量是浸膏c1倍的90目硅胶拌样，之后上样进行柱层析，装柱硅胶为180目，所用硅胶的重量为浸膏c重量8倍量；以体积比为20:1、9:1、8:2、7:3、6:4和1:1的氯仿和丙酮混合有机溶剂梯度洗脱，每个梯度洗脱到TLC点板无点后，更换下一梯度洗脱；收集各梯度的梯度洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；

E、高效液相色谱分离：将采用体积比为7:3的氯仿-丙酮混合有机溶剂洗脱得到的部分采用高效液相色谱分离纯化，高效液相色谱分离纯化的具体方法是：以体积浓度为55%的甲醇水溶液为流动相，流速20 ml/min，以21.2×250mm，5μm的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为355 nm，每次进样100μL，收集34.2 min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的黄酮类化合物。

其中，A步骤的溶剂为乙醇。所述B步骤的有机溶剂为乙酸乙酯。

本实施例采用山楂粉5.2 kg，得到浸膏a 350 g，浸膏b 110 g，浸膏c 76 g，体积比为7:3的氯仿-丙酮混合有机溶剂洗脱得到的部分22 g。

实施例4

山楂样品来源于新疆和田，品种为新疆山里红。

A、浸膏提取：将山楂粉用溶剂超声提取4次，每次所用提取溶剂的质量为山楂粉质量的4倍，每次提取时间为50分钟，合并提取液并过滤，滤液减压浓缩至刚有沉淀物析出，静置40分钟，滤除沉淀物，之后将所得滤液减压浓缩成浸膏a；

B、有机溶剂萃取：向浸膏a中加入重量是浸膏a重量1.2倍的水，然后用有机溶剂萃取4次，每次所用有机溶剂的体积与水体积的相同，合并有机溶剂萃取相，之后将合并得到的有机溶剂萃取相减压浓缩成浸膏b；

C、MCI脱色：向浸膏b中加入是浸膏b重量4.5倍的体积浓度为95%甲醇水溶液，待浸膏b完全溶解后，上MCI柱，用体积浓度为92%甲醇水溶液进行洗脱，合并洗脱液，之后将合并后的洗脱液减压浓缩成浸膏c；

D、硅胶柱层析：浸膏c先用重量是浸膏c 2.5倍的丙酮或者甲醇溶解，然后用重量是浸膏c 0.9倍的80目硅胶拌样，之后上样进行柱层析，装柱硅胶为160目，所用硅胶的重量为浸膏c重量8倍量；以体积比为20:1、9:1、8:2、7:3、6:4和1:1的氯仿和丙酮混合有机溶剂梯度洗脱，每个梯度洗脱到TLC点板无点后，更换下一梯度洗脱；收集各梯度的梯度洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；

E、高效液相色谱分离：将采用体积比为7:3的氯仿-丙酮混合有机溶剂洗脱得到的部分采用高效液相色谱分离纯化，高效液相色谱分离纯化的具体方法是：以体积浓度为55%的甲醇水溶液为流动相，流速20 ml/min，以21.2×250mm，5μm的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为355 nm，每次进样80μL，收集34.2 min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的黄酮类化合物。

其中，A步骤的溶剂为甲醇。所述B步骤的有机溶剂为乙醚。

本实施例采用山楂粉10 kg，得到浸膏a 820 g，浸膏b 315 g，浸膏c 220 g，体积比为7:3的氯仿-丙酮混合有机溶剂洗脱得到的部分63 g。

实施例5

山楂样品来源于四川西康，品种为歪把红。

A、浸膏提取：将山楂粉用溶剂超声提取4次，每次所用提取溶剂的质量为山楂粉质量的5倍，每次提取时间为35分钟，合并提取液并过滤，滤液减压浓缩至刚有沉淀物析出，静置55分钟，滤除沉淀物，之后将所得滤液减压浓缩成浸膏a；

B、有机溶剂萃取：向浸膏a中加入重量是浸膏a重量1.6倍的水，然后用有机溶剂萃取4次，每次所用有机溶剂的体积与水体积的相同，合并有机溶剂萃取相，之后将合并得到的有机溶剂萃取相减压浓缩成浸膏b；

C、MCI脱色：向浸膏b中加入是浸膏b重量4.5倍的体积浓度为95%甲醇水溶液，待浸膏b完全溶解后，上MCI柱，用体积浓度为94%甲醇水溶液进行洗脱，合并洗脱液，之后将合并后的洗脱液减压浓缩成浸膏c；

D、硅胶柱层析：浸膏c先用重量是浸膏c 2.4倍的丙酮或者甲醇溶解，然后用重量是浸膏c 1倍的100目硅胶拌样，之后上样进行柱层析，装柱硅胶为200目，所用硅胶的重量为浸膏c重量7倍量；以体积比为20:1、9:1、8:2、7:3、6:4和1:1的氯仿和丙酮混合有机溶剂梯度洗脱，每个梯度洗脱到TLC点板无点后，更换下一梯度洗脱；收集各梯度的梯度洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；

E、高效液相色谱分离：将采用体积比为7:3的氯仿-丙酮混合有机溶剂洗脱得到的部分采用高效液相色谱分离纯化，高效液相色谱分离纯化的具体方法是：以体积浓度为55%的甲醇水溶液为流动相，流速20 ml/min，以21.2×250mm，5μm的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为355 nm，每次进样120μL，收集34.2 min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的黄酮类化合物。

其中，A步骤的溶剂为体积浓度为95%的甲醇水溶液。所述B步骤的有机溶剂为石油醚。

实施例6

采用实施例1方法制备得到的黄酮类化合物的结构通过以下方法进行测定：

本发明化合物为黄色胶状物；

HRESI-MS显示其准分子离子峰为349.1059 [M+Na]⁺(计算值349.1052)，结合¹H>19H₁₈O₅，不饱和度为11。红外光谱中显示了羟基(3408)、羰基(1665)和芳环(1614、1550和1438>-1)的共振吸收峰。而紫外光谱在210、250、355>

化合物的¹H和¹³C>α,β-不饱和羰基(C-2、C-3、C-4，H-3)，1个羟丙基(C-1''~C-3''，H₂-1''~H₂-3'')，1个甲氧基>d_{C>56.3 q，dH>dH>α,β-不饱和羰基和双键信号，可推测该化合物为黄酮类化合物。根据H-3和C-2、C-4、C-10、C-1′，H-5和C-4、C-9、C-10，H-8和C-6、C-7、C-9、C-10，以及H-6′和C-2的HMBC相关(如图2)可进一步确认化合物为黄酮类结构。化合物的母体确定后，其余的取代基，羟丙基、甲氧基和酚羟基可视为黄酮上的取代基。}

化合物的HMBC谱中(如图3)可观察到甲氧基氢(d_H>d_C>2-1''>d_{H>2.79)与C-6(dC>dC130.5)、C-8(dC>2}-2''>d_H1.90)与C-7(d_C 130.5)，以及H-8>d_{H>6.79)和C-1''(dC28.8)的HMBC相关，可证实羟丙基取代在C-7位。酚羟基取代在C-2'可通过酚羟基氢(dH10.90)和C-1'>dC 119.4)、C-2'>dC 158.4) 和C-3'>dC>dH>dH>dH>6.90 (d) 7.6；H-4′，dH>dH>dH>}

至此，化合物的结构得到确定，并命名为：2′-羟基-7-(3-羟丙基)-6-甲氧基-黄酮。

实施例7

取实施例2-5制备的化合物，为黄色胶状物。测定方法与实施例6相同，确认实施例2-5制备的化合物为所述黄酮类化合物——2′-羟基-7-(3-羟丙基)-6-甲氧基-黄酮。

实施例8

取实施例1-5中任一制备的黄酮类化合物进行卷烟滤嘴的添加效果试验，试验情况如下：

供添加用卷烟为红塔集团的卷烟“红塔山经典”，用三醋酸甘油酯将上述黄酮类化合物用配成0.1 mg/mL的溶液。按滤嘴丝束重量的8%均匀的喷洒到滤嘴丝束上，制成滤棒，然后将该滤棒通过常规的卷烟卷接制成卷烟，进行感官评析，并以未添加该化合物的相同卷烟作为对照。评析结果表明：卷烟抽吸时烟气更清晰圆润，生津感得到加强，喉部刺激性得到降低，口腔略带回甜感，余味改善明显。

实施例9

取实施例1-5中任一制备的黄酮类化合物进行卷烟滤嘴的添加效果试验，试验情况如下：

供添加用卷烟为红云红河集团的卷烟“紫云”，用三醋酸甘油酯将上述黄酮类化合物用配成0.5 mg/mL的溶液。按滤嘴丝束重量的5%均匀的喷洒到滤嘴丝束上，制成滤棒，然后将该滤棒通过常规的卷烟卷接制成卷烟，进行感官评析，并以未添加该化合物的相同卷烟作为对照。评析结果表明：，卷烟抽吸时烟气更清晰圆润，生津感得到加强，喉部刺激性得到降低，口腔略带回甜感，余味改善明显。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。