氢溴酸右美沙芬在治疗急慢性肾纤维化上的应用

摘要

本发明提供氢溴酸右美沙芬在治疗急慢性肾纤维化上的应用，氢溴酸右美沙芬的分子式是C

说明书

技术领域

本发明涉及氢溴酸右美沙芬(DXM)的新的应用，尤其是在治疗急慢性肾纤维化的治疗方案和应用。

背景技术

慢性肾病（chronic kidney disease，CKD）在我国的发生率约为10.8%，随着人口老龄化等问题的进一步加剧，其对大众健康的威胁以及给社会带来的负担日益凸显。CKD患者发生心脑血管疾病、感染等的风险显著增高，在发展到终末期肾病（end-stage renaldisease，ESRD）之前，即可因并发症丧失劳动力甚至死亡。肾脏间质纤维化是CKD的特征性病理改变，表现为肾小管及管周病理性纤维基质沉积，是CKD进展的共同途径和预后不良的标志，其严重程度是肾功能恶化的决定因素。因此，对RIF发生发展机制的研究是寻找延缓或逆转CKD进展靶点的关键，但目前尚无有效治疗手段应用于临床。

N-甲基-D-天冬氨酸受体（N-methyl-D-aspartic acid receptor，NMDAR）是一种由4个亚基（即2个NR1亚基与2个NR2亚基或1个NR2、1个NR3亚基）组成的蛋白分子，是细胞膜上重要的钙离子（Ca²⁺）通道，最早发现并主要分布于中枢神经系统（central>2+内流能够激活胞内一系列Ca²⁺相关信号通路，是发育、学习、记忆等过程中神经元迁移、突触形成的必要条件。近十年里，NMDAR在CNS外的分布及作用逐渐引起关注，对其结构与功能的调节为高特异性药物的研发提供了新思路。相较于其他器官与组织，NMDAR在肾脏中的研究较少，近年来才渐渐受到重视。NMDAR的各个亚基在肾脏中均有表达，其中结构保守的功能性亚单位NR1亚基在全肾表达最为丰富，NR2和NR3则主要分别分布在近端小管和集合管。肾脏通过肾小球滤过、肾小管重吸收及分泌维持机体内环境稳态。Deng等人在Wistar大鼠中发现了NMDAR受体具有非神经支配的调节肾血管舒缩的作用，进而影响肾小球滤过，并能够不受滤过影响地调节肾小管重吸收。Sproul等人根据对NR3A亚基敲除小鼠中内髓集合管功能的研究推测NMDAR可影响主细胞的水分重吸收功能及逆流倍增系统的维持。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供氢溴酸右美沙芬在治疗急慢性肾纤维化上的应用，氢溴酸右美沙芬作为NMDAR阻断剂可以有效降低急性肾损伤后的慢性肾纤维化，以及急性肾纤维化的病理进程。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是：

氢溴酸右美沙芬在治疗急慢性肾纤维化上的应用。

其中，氢溴酸右美沙芬的分子式是C₁₈H₂₅NO>2O。

进一步地，氢溴酸右美沙芬的形状为白色粉末。

进一步地，氢溴酸右美沙芬的剂型为注射剂。

进一步地，该注射剂为由氢溴酸右美沙芬粉末与生理盐水配置而成的母液稀释后的注射剂。

进一步地，母液中氢溴酸右美沙芬的浓度为10mg/ml。

进一步地，稀释剂为生理盐水。

进一步地，注射剂中氢溴酸右美沙芬的浓度为0.5mg/ml-3.5mg/ml。

本发明的有益效果是：本发明提供了一种已知药物（氢溴酸右美沙芬）在治疗急慢性肾纤维化上的应用，本发明的技术方案和技术效果能够证明，氢溴酸右美沙芬可以有效地预防和抑制肾缺血所导致的长期预后肾功能减弱、肾脏纤维化，该成分能够用于急性肾损伤后的中、长期肾功能保护，为急慢性肾纤维化提供了治疗的新方案，为氢溴酸右美沙芬的药物研究提供了新方向。

附图说明

图1是氢溴酸右美沙芬(DXM)对肾缺血小鼠血肌酐值的影响。

图2是DMX对小鼠肾萎缩的治疗作用示意图。

图3是DMX治疗小鼠肾萎缩的统计结果图。

图4是DXM抑制缺血后肾EMT进程的示意图。

图5是DMX抑制小鼠肾上皮转间质化的统计结果图。

图6是对Control组、IR组、HD组肾组织进行HE、Masson、PAS染色的结果图。

图7是DMX抑制小鼠肾组织纤维化的统计结果图。

图8是急性梗阻性肾纤维化的Masson染色图。

图9是DXM减缓急性肾纤维化的统计结果图。

具体实施方式

以下结合实施例进一步阐述本发明的技术方案，实施例只是为了更具体地说明本发明的实施过程，并不是对本发明的限定。

实施例1，配置氢溴酸右美沙芬注射剂。

氢溴酸右美沙芬（分子式C₁₈H₂₅NO>2O，简称DXM），白色粉末，购于Sigma-Aldrich公司。取100mg>

实施例2，试验准备。

由浙江大学实验动物中心购入8周龄健康雄性C57BL/6小鼠，行右侧肾动脉夹闭45分钟后开放，引起右肾缺血复灌损伤从而导致慢性肾纤维化。缺血/复灌后2周，小鼠随机分为4组，假手术组（Control）、缺血复灌（IR）组、IR＋低剂量（5mg/kg, LD）组、IR＋中剂量（15mg/kg, MD）组、IR＋高剂量（30 mg/kg, HD）组，每组8只。假手术组给予正常饮用水。

实施例3，验证DXM对缺血小鼠血清肌酐的降低作用。

在实施例2的基础上，缺血后，每两周对小鼠血清肌酐进行测定，结果差异显著性用GraphPad Prism 7.0做Two-way ANOVA分析，结果如图1显示，用药前肾缺血小鼠血清肌酐均显著较假手术组增高；用药2周（4wk）后，高剂量组小鼠血清肌酐首先下降，较非用药组显著降低；用药4周（6wk）和6周（8wk）后，高、中、低剂量均对小鼠血清肌酐值有显著下调作用，且具有一定剂量效应，高、中剂量组在用药6周（8wk）后血清肌酐值无差异。

实施例4，验证DXM减缓缺血后肾萎缩的作用。

在实施例2的基础上，缺血8周后观察肾萎缩情况对比，发现I/R组损伤导致缺血侧肾脏严重萎缩，肾表面颗粒感增强，低、中、高剂量DXM可使肾萎缩情况显著减少，肾表面较为平滑，如图2所示，图像结果经Two-way ANOVA分析，结果如图3显示，DXM可显著减少肾脏萎缩，且具有一定剂量效应。

实施例5，验证DXM对缺血后肾EMT进程的抑制。

对各组的组织冰冻切片行免疫荧光染色，绿色为E-cadherin，红色为Vimentin，如图4所示，DXM抑制小鼠肾上皮转间质化的统计结果如图5所示，结果显示缺血肾组织中E-cadherin表达显著下降，同时Vimentin表达显著上升，而DXM可以显著减少这两个蛋白的表达变化趋势，对肾上皮转间质化（EMT）具有抑制作用，并有显著剂量相应。

实施例6，验证DXM对肾纤维化的抑制作用。

对Control组、IR组、HD组肾组织分别进行HE、Masson、PAS染色，结果如图6所示，结果显示，DXM对于缺血肾组织缺血复灌后慢性纤维化有抑制作用。Masson染色分值标准：0为无纤维化；1为微量肾小管萎缩和间质扩张；2为间质纤维化增加，更多的小管萎缩；3为50%间质纤维化、肾小管萎缩、并伴有小球硬化；4为大多数正常组织被纤维化组织替代、肾小管萎缩消失、肾小球硬化。Masson统计结果如图7所示，结果显示缺血导致4-8周后肾组织显著纤维化，DXM可显著减少纤维化。

实施例7，验证DXM在急性梗阻性肾纤维化进程中的治疗功能、效果及安全性。

由浙江大学实验动物中心购入8周龄健康雄性C57BL/6小鼠，UUO处理（右侧输尿管结扎）引起右肾急性肾梗阻从而导致急性肾纤维化。小鼠随机分为4组，假手术组、UUO组、UUO＋口服药物组（30mg/kg，DXM）、UUO＋腹腔注射组，每组8只。7天后测定各组小鼠血肌酐值，以及测定各组右肾组织行Masson染色，比较损伤和纤维化程度。图8为Masson染色结果和，图9为Masson统计结果,两项结果显示，UUO导致肾组织严重纤维化，但DXM可显著降低肾组织纤维化。

通过急性毒性试验与亚慢性毒性试验验证，结果显示，在小鼠急性毒性与大鼠亚慢性毒性试验中，DXM未引起剂量相关的动物整体健康状况、生理生化功能和器官组织形态学等各项重要指标的异常变化,表明该受试品对小鼠、大鼠是安全的。