一种永生化兔小肠上皮细胞系及其构建方法

摘要

本发明涉及分子生物学领域，具体公开了一种永生化兔小肠上皮细胞系及其构建方法。采集新生兔的小肠，利用含有胶原酶和中性蛋白酶的酶消化液进行消化，消化后使用重悬离心和相差贴壁的方法对隐窝细胞团进行提纯，可获得高纯度的原代隐窝上皮细胞。这类隐窝上皮细胞可进行培养与传代。对获得的隐窝上皮细胞进行脂质体转染表达SV40大T抗原的质粒，再连续细胞传代最终筛选得到一株永生化兔小肠上皮细胞系。该永生化兔小肠上皮细胞系可同时表达肠上皮表面标志分子和隐窝基层干细胞的表面分子。所述肠上皮表面标志分子包括但不限于角蛋白8，E‑降钙素和ki67；所述隐窝基层干细胞的表面分子包括但不限于Lgr5，sox9。所述永生化兔小肠上皮细胞系可应用于建立兔小肠上皮体外模型，用于研究营养吸收机理，细胞通路挖掘，和病原体体外培养等方向。