一种3,4‑二氢吡喃3,2‑c色烯‑5‑酮类化合物的合成方法及其应用

摘要

本发明公开了一种3,4‑二氢吡喃[3,2‑c]色烯‑5‑酮类化合物的合成方法，包括如下步骤：在反应容器中分别加入4‑羟基香豆素、苯胺、丙酮和有机溶剂混合均匀，4‑羟基香豆素、取代苯胺和丙酮的摩尔比为1:0.5～4:1.2～10，将混合均匀后的反应混合物在40℃‑140℃条件下搅拌反应12小时至反应完成，将得到的反应产物减压蒸馏除去低沸点物质，获得固体产物，用乙醇对固体产物进行重结晶获得3,4‑二氢吡喃[3,2‑c]色烯‑5‑酮类化合物。本发明所提供的合成方法反应条件温和、过程经济、环保，合成操作简单产物易于分离提纯、产率高、过程经济环保、不需使用任何催化剂。

说明书

技术领域：

本发明属于有机化学合成和药物研发领域，具体涉及一种3,4-二氢吡喃[3,2-c]色烯-5-酮类化合物的合成方法及其应用。

背景技术：

新有机合成方法的获得和新药先导物的发现是我们多年研究的主要目标。目前，2,4,4-三甲基-2-取代苯基氨基-3,4-二氢吡喃[3,2-c]色烯-5-酮类化合物的合成方法，以及对2,4,4-三甲基-2-取代苯基氨基-3,4-二氢吡喃[3,2-c]色烯-5-酮类化合物进行活性测试，在现有技术中均未见报道。

发明内容：

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供3,4-二氢吡喃[3,2-c]色烯-5-酮类化合物的合成方法及其应用。本发明所提供的合成方法反应条件温和、过程经济、环保，合成操作简单产物易于分离提纯、产率高、过程经济环保、不需使用任何催化剂。

本发明的第一个目的是提供一种3,4-二氢吡喃[3,2-c]色烯-5-酮类化合物的合成方法，包括如下步骤：在反应容器中分别加入4-羟基香豆素、苯胺、丙酮和有机溶剂混合均匀，4-羟基香豆素、苯胺和丙酮的摩尔比为1:0.5～4:1.2～10，将混合均匀后的反应混合物在40℃-140℃条件下搅拌反应10～14小时至反应完成，将得到的反应产物减压蒸馏除去低沸点物质，获得固体产物，用乙醇对固体产物进行重结晶，获得3,4-二氢吡喃[3,2-c]色烯-5-酮类化合物。在本发明中，反应混合物的加热方式选择常见方式加热或微波加热均可实现。

本发明提出的合成方法简单快速，合成反应步骤少、操作简单、产物易于分离提纯、产率高、过程经济和环保、不需使用任何催化剂。

优选，所述的苯胺为取代苯胺，所述的取代苯胺中的取代基选自氢、烷基、芳基、取代芳基、卤素、三氟甲基、氨基、取代氨基、烷氧基、羧基、酯基和酰基中的一种。

优选，所述的有机溶剂选自丙酮、氯代烷、烷基苯、醚类和酯类溶剂中的一种。在本发明中，4-羟基香豆素为固体，取代苯胺为固体或液体，丙酮为液体。当有机溶剂为丙酮时，丙酮既为反应物，同时也是溶剂，不需要使用任何催化剂，正是如此，该反应比较经济、环保。本发明也可以选用其他溶剂，如氯代烷、烷基苯、醚类和酯类溶剂，该反应也可进行。

进一步的，所述的有机溶剂为丙酮，反应温度为60℃-80℃。

进一步的，所述的有机溶剂选自氯代烷、烷基苯、醚类和酯类溶剂中的一种，反应温度为60℃-80℃。

优选，4-羟基香豆素、苯胺和丙酮的摩尔比为1:1:2.5。

本发明的第二个目的是提供根据上述的合成方法制备得到的3,4-二氢吡喃[3,2-c]色烯-5-酮类化合物，结构式如式1所示：

其中：R选自氢、烷基、芳基、卤素、三氟甲基、氨基、取代氨基、烷氧基、羧基、酯基和酰基中的一种。

本发明提出的3,4-二氢吡喃[3,2-c]色烯-5-酮类化合物，以4-羟基香豆素、丙酮和取代苯胺为原料，合成路线特征用以下反应式来表示：

其中：R选自氢、烷基、芳基、取代芳基、卤素、三氟甲基、氨基、取代氨基、烷氧基、羧基、酯基、酰基等。

优选，式1所示的3,4-二氢吡喃[3,2-c]色烯-5-酮类化合物如表1所示：

表1

本发明的第三个目的是提供3,4-二氢吡喃[3,2-c]色烯-5-酮类化合物在乙酰胆碱酯酶抑制剂的应用。通过活性测试发现3,4-二氢吡喃[3,2-c]色烯-5-酮类化合物具有乙酰胆碱酯酶的抑制活性，在抗老年痴呆方面具有明确的潜在应用价值。

本发明的第四个目的是提供一种防治抗老年痴呆的药物，3,4-二氢吡喃[3,2-c]色烯-5-酮类化合物作为活性成分。

本发明与现有技术相比具有如下优点：

1.本发明提供的合成方法反应条件温和、过程经济、环保，合成操作简单产物易于分离提纯、产率高、过程经济环保、不需使用任何催化剂。

2.本发明所制备的3,4-二氢吡喃[3,2-c]色烯-5-酮类化合物具有乙酰胆碱酯酶的抑制活性，在抗老年痴呆方面具有明确的潜在应用价值。

具体实施方式：

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

除特别说明，本发明中的实验材料和试剂均为本技术领域常规市购产品。

实施例1：

2,4,4-三甲基-2-苯基氨基-3,4-二氢吡喃[3,2-c]色烯-5-酮的合成(化合物1)

合成方法1：在50mL圆底烧瓶中分别加入10.0毫摩尔(1.62克)4-羟基香豆素、10.0毫摩尔(0.93克)苯胺和25.0毫摩尔(1.74克)丙酮和5毫升丙酮混合均匀，将混合均匀后的反应混合物在70℃条件下搅拌12小时，该反应利用TLC跟踪反应，直至反应完成。反应完成后获得固体产物，把适量乙醇加入到固体产物中，进行重结晶获得纯产物。经计算该化合物1的产率65％。

¹H>3)δ:7.89(dd,J₁＝8.2Hz,J₂＝1.6Hz,1H),7.50(dd,J₁＝8.6Hz,J₂＝1.6Hz,1H),7.36–7.18(m,4H),7.00(d,J＝7.6Hz,2H),6.92(t,J＝7.3Hz,1H),4.44(br,1H),2.33–2.11(m,2H),1.82(s,3H),1.66(s,3H),1.56(s,3H).¹³C>3)δ:161.2,157.1,152.6,142.8,131.4,129.1,123.7,123.2,121.1,119.4,116.3,116.2,108.5,89.2,49.6,30.8,28.8,28.6,25.4.ESRMs>+。

依据合成方法1，反应温度依次为40℃，60℃，80℃和90℃，经计算化合物1的产率依次为15％、63％、65％、61％。核磁数据显示产物同反应温度为70℃获得同样的产物。由此看出，在反应温度为60℃～80℃时，化合物1的产率最高。

依据合成方法1，依次改变4-羟基香豆素、苯胺和丙酮的摩尔比例，由1:0.5:1.2至1:4:10，在70℃条件下搅拌反应12小时，得到产物的收率范围为25％至65％。多次实验结果表明，4-羟基香豆素、苯胺和丙酮的摩尔比例为1:1:2.5时的化合物1的产率最高，最为经济。

依据合成方法1，反应温度控制在70℃，反应时间分别为4小时、8小时、10小时、12小时、14小时和18小时，后处理得到的化合物1的产率依次为18％、44％、60％、65％、63％和59％。核磁数据显示产物为化合物1。由此看出，在反应温度为70℃，反应时间为12小时，化合物1的产率最高。

合成方法2：在50mL圆底烧瓶中分别加入10.0毫摩尔(1.62克)4-羟基香豆素、10.0毫摩尔(0.93克)苯胺和25.0毫摩尔(1.74克)丙酮以及5毫升四氢呋喃，把反应混合物在60-870℃条件下搅拌12小时，该反应利用TLC跟踪反应，直至反应完成。反应完成后，减压蒸馏除去低沸点物质，获得固体产物。把适量乙醇加入到固体产物中，进行重结晶获得纯产物。经计算该化合物1的产率67％。核磁数据显示产物同合成方法1获得同样的产物。

使用丁醚、三氯甲烷、丁酮有机试剂来代替合成方法2中的四氢呋喃，其他反应条件不变，最后得到产物，经计算该化合物1的产率50％～65％，与合成方法1相近，核磁数据显示产物同合成方法1获得同样的产物。

实施例2：

2,4,4-三甲基-2-(4-甲苯基氨基)-3,4-二氢吡喃[3,2-c]色烯-5-酮的合成(化合物2)

与实施例1的合成方法1相同，不同之处在于：取代苯胺为对甲苯胺，获得化合物2，经计算化合物2的产率60％。

¹H>3)δ:7.87(dd,J₁＝7.9Hz,J₂＝1.6Hz,1H),7.50(dd,J₁＝7.3Hz,J₂＝1.6Hz,1H),7.32–7.25(m,2H),7.06(d,J＝8.0Hz,2H),6.94(d,J＝8.1Hz,2H),4.49(br,1H),2.29(s,3H),2.26–2.10(m,2H),1.77(s,3H),1.63(s,3H),1.55(s,3H).¹³C>3)δ:161.3,157.3,152.6,140.1,131.3,131.0,130.5,129.6,128.4,123.6,123.2,120.6,116.2,108.4,89.7,49.6,30.8,28.7,26.9,26.5,25.3,20.6.ESRMs>+.

依据合成方法1，反应温度依次为40℃，60℃，80℃和90℃，经计算化合物2的产率依次为15％、58％、60％、52％。核磁数据显示产物同反应温度为70℃获得同样的产物。由此看出，在反应温度为60℃～80℃时，化合物2的产率最高。

依据合成方法1，依次改变4-羟基香豆素、对甲苯胺和丙酮的摩尔比例，由1:0.5:1.2至1:4:10，在70℃条件下搅拌反应12小时，得到产物的收率范围为20％至60％。多次实验结果表明，4-羟基香豆素、对甲苯胺和丙酮的摩尔比例为1:1:2.5时的化合物2的产率最高，最为经济。

依据合成方法1，反应温度控制在70℃，反应时间分别为4小时、8小时、10小时、12小时、14小时和18小时，后处理得到的化合物2的产率依次为15％、40％、55％、60％、57％和54％。核磁数据显示产物为化合物2。由此看出，在反应温度为70℃，反应时间为12小时，化合物2的产率最高。

实施例3：

2,4,4-三甲基-2-(3-甲苯基氨基)-3,4-二氢吡喃[3,2-c]色烯-5-酮的合成(化合物3)

与实施例1的合成方法1相同，不同之处在于：取代苯胺为间甲苯胺，获得化合物3，经计算化合物3的产率55％。

¹H>3)δ:7.90(dd,J₁＝8.1Hz,J₂＝1.6Hz,1H),7.50(dd,J₁＝8.6Hz,J₂＝1.6Hz,1H),7.35–7.24(m,2H),7.12(t,J＝7.7Hz,1H),6.89–6.78(m,2H),6.74(d,J＝7.5Hz,1H),4.41(br,1H),2.30(s,3H),2.28–2.11(m,2H),1.82(s,3H),1.67(s,3H),1.56(s,3H).¹³C>3)δ:161.3,157.1,152.7,142.7,138.9,131.4,128.9,123.6,123.1,121.9,120.2,116.4,116.3,116.2,108.6,89.2,49.7,30.7,28.8,28.5,25.4,21.5.ESRMs>+.

依据合成方法1，反应温度依次为40℃，60℃，80℃和90℃，经计算化合物3的产率依次为18％、53％、55％、50％。核磁数据显示产物同反应温度为70℃获得同样的产物。由此看出，在反应温度为60℃～80℃时，化合物3的产率最高。

依据合成方法1，依次改变4-羟基香豆素、间甲苯胺和丙酮的摩尔比例，由1:0.5:1.2至1:4:10，在70℃条件下搅拌反应12小时，得到产物的收率范围为20％至55％。多次实验结果表明，4-羟基香豆素、间甲苯胺和丙酮的摩尔比例为1:1:2.5时的化合物3的产率最高，最为经济。

依据合成方法1，反应温度控制在70℃，反应时间分别为4小时、8小时、10小时、12小时、14小时和18小时，后处理得到的化合物3的产率依次为15％、35％、52％、55％、53％和50％。核磁数据显示产物为化合物3。由此看出，在反应温度为70℃，反应时间为12小时，化合物3的产率最高。

实施例4：

2,4,4-三甲基-2-(2-甲苯基氨基)-3,4-二氢吡喃[3,2-c]色烯-5-酮的合成(化合物4)

与实施例1的合成方法1相同，不同之处在于：取代苯胺为邻甲苯胺，获得化合物4，经计算化合物4的产率58％。

¹H>3)δ:7.95–7.88(m,1H),7.53–7.46(m,1H),7.35(d,J＝8.1Hz,1H),7.28(d,J＝14.2Hz,2H),7.14(dd,J₁＝13.4Hz,J₁＝7.2Hz,2H),6.84(t,J＝7.4Hz,1H),4.36(br,1H),2.40-2.15(m,5H),1.86(s,3H),1.70(s,3H),1.57(s,3H).¹³C>3)δ:161.3,157.2,152.6,141.1,131.3,130.6,126.6,126.1,123.7,123.2,120.5,118.2,116.3,108.5,89.2,50.1,30.6,28.9,28.8,25.3,18.0.ESRMs>+.

依据合成方法1，反应温度依次为40℃，60℃，80℃和90℃，经计算化合物4的产率依次为15％、55％、58％、50％。核磁数据显示产物同反应温度为70℃获得同样的产物。由此看出，在反应温度为60℃～80℃时，化合物4的产率最高。

依据合成方法1，依次改变4-羟基香豆素、邻甲苯胺和丙酮的摩尔比例，由1:0.5:1.2至1:4:10，在70℃条件下搅拌反应12小时，得到产物的收率范围为20％至58％。多次实验结果表明，4-羟基香豆素、邻甲苯胺和丙酮的摩尔比例为1:1:2.5时的化合物4的产率最高，最为经济。

依据合成方法1，反应温度控制在70℃，反应时间分别为4小时、8小时、10小时、12小时、14小时和18小时，后处理得到的化合物3的产率依次为15％、38％、50％、58％、55％和50％。核磁数据显示产物为化合物4。由此看出，在反应温度为70℃，反应时间为12小时，化合物4的产率最高。

实施例5：

2,4,4-三甲基-2-(4-甲氧基苯基氨基)-3,4-二氢吡喃[3,2-c]色烯-5-酮的合成(化合物5)

与实施例1的合成方法1相同，不同之处在于：取代苯胺为对甲氧基苯胺，获得化合物5，经计算化合物5的产率60％。

¹H>3)δ：7.84(d,J＝7.9Hz,1H),7.51(t,J＝7.8Hz,1H),7.34–7.25(m,2H),7.00(d,J＝8.5Hz,2H),6.82(d,J＝8.6Hz,2H),4.18(br,1H),3.79(s,3H),2.28–2.08(m,2H),1.69(s,3H),1.61(s,3H),1.56(s,3H).¹³C>3)δ:161.3,157.5,155.8,152.7,135.2,131.3,124.6.123.6,123.2,116.2,114.2,108.3,90.5,55.5,49.3,30.9,28.9,28.5,25.3.ESRMs>+.

依据合成方法1，反应温度依次为40℃，60℃，80℃和90℃，经计算化合物5的产率依次为18％、57％、60％、52％。核磁数据显示产物同反应温度为70℃获得同样的产物。由此看出，在反应温度为60℃～80℃时，化合物5的产率最高。

依据合成方法1，依次改变4-羟基香豆素、甲氧基苯胺和丙酮的摩尔比例，由1:0.5:1.2至1:4:10，在70℃条件下搅拌反应12小时，得到产物的收率范围为20％至60％。多次实验结果表明，4-羟基香豆素、甲氧基苯胺和丙酮的摩尔比例为1:1:2.5时的化合物5的产率最高，最为经济。

依据合成方法1，反应温度控制在70℃，反应时间分别为4小时、8小时、10小时、12小时、14小时和18小时，后处理得到的化合物1的产率依次为15％、43％、52％、60％、58％和54％。核磁数据显示产物为化合物5。由此看出，在反应温度为70℃时，反应时间为12小时时化合物5的产率最高。

通过对上述五种化合物的反应条件的比较，包括反应温度，反应时间，反应物的摩尔比和溶剂的使用，由产物的收率选择此类反应的优化条件为：反应温度70℃，反应时间12小时，4-羟基香豆素、取代苯胺和丙酮的摩尔比例为1:1:2.5，不包括溶剂。鉴于此，下面的实施例，就以上述优化条件为基础，对本发明进行说明。

实施例6：

2,4,4-三甲基-2-(3-甲氧基苯基氨基)-3,4-二氢吡喃[3,2-c]色烯-5-酮的合成(化合物6)

与实施例1的合成方法1相同，不同之处在于：取代苯胺为间甲氧基苯胺，获得化合物6，经计算化合物6的产率58％。

¹H>3)δ:7.91(dd,J₁＝7.9Hz,J₂＝1.6Hz,1H),7.50(dd,J₁＝8.7Hz,J₂＝1.6Hz,1H),7.32–7.25(m,2H),7.13(t,J＝8.1Hz,1H),6.58(d,J＝8.0Hz,2H),6.48(d,J＝8.3Hz,1H),4.42(br,1H),3.77(s,3H),2.32–2.11(m,2H),1.84(s,3H),1.66(s,3H),1.55(s,3H).¹³C>3)δ:161.2,160.4,157.0,152.6,144.3,131.4,129.8,123.6,123.1,116.3,116.1,111.5,108.6,106.1,104.9,88.9,55.2,49.8,30.7,28.8,28.5,25.4.ESRMs>+.

实施例7：

2,4,4-三甲基-2-(2-甲氧基苯基氨基)-3,4-二氢吡喃[3,2-c]色烯-5-酮的合成(化合物7)

与实施例1的合成方法1相同，不同之处在于：取代苯胺为邻甲氧基苯胺，获得化合物7，经计算化合物7的产率56％。

¹H>3)δ:7.92–7.87(m,1H),7.48(dd,J₁＝8.6Hz,J₂＝1.6Hz,1H),7.30–7.24(m,3H),6.88(dd,J₁＝6.8Hz,J₂＝2.2Hz,1H),6.84–6.77(m,2H),5.12(br,1H),3.78(s,3H),2.38–2.13(m,2H),1.88(s,3H),1.72(s,3H),1.55(s,3H).¹³C NMR(75MHz,CDCl3)δ161.3,157.1,152.6,148.2,132.8,131.2,123.6,123.1,120.8,119.5,116.7,116.2,109.9,108.8,88.6,55.5,49.9,30.5,29.1,28.1,25.4.ESRMs>+.

实施例8：

2,4,4-三甲基-2-(4-氯苯基氨基)-3,4-二氢吡喃[3,2-c]色烯-5-酮的合成(化合物8)

与实施例1的合成方法1相同，不同之处在于：取代苯胺为对氯苯胺，获得化合物8，经计算化合物8的产率63％。

¹H>3)δ:7.85(dd,J₁＝7.8Hz,J₂＝1.6Hz,1H),7.52(dd,J₁＝8.6Hz,J₂＝1.6Hz,1H),7.33–7.25(m,2H),7.22–7.16(m,2H),6.96–6.89(m,2H),4.38(br,1H),2.26(d,J＝14.6Hz,2H),1.79(s,3H),1.65(s,3H),1.55(s,3H).¹³C>3)δ:161.1,156.9,152.6,141.5,131.5,129.0,126.1,123.7,122.9,120.5,116.3,116.0,108.6,88.9,49.6,30.7,28.7,28.6,25.3.ESRMs>+.

实施例9：

2,4,4-三甲基-2-(3-氯苯基氨基)-3,4-二氢吡喃[3,2-c]色烯-5-酮的合成(化合物9)

与实施例1的合成方法1相同，不同之处在于：取代苯胺为间氯苯胺，获得化合物9，经计算化合物9的产率60％。

¹H>3)δ:7.89(dd,J₁＝8.2Hz,J₂＝1.7Hz,1H),7.51(td,J₁＝7.7Hz,J₂＝1.6Hz,1H),7.35–7.27(m,2H),7.13(t,J＝8.1Hz,1H),7.04(t,J＝2.1Hz,1H),6.84(td,J₁＝8.5Hz,J₂＝2.0Hz,2H),4.45(br,1H),2.30–2.11(m,2H),1.83(s,3H),1.67(s,3H),1.55(s,3H).¹³C>3)δ:161.2,156.8,152.6,144.3,134.7,131.5,130.1,123.8,123.0,120.4,118.3,116.5,116.3,116.0,108.8,88.6,49.7,30.6,28.8,28.4,25.3.ESRMs>+.

实施例10：

2,4,4-三甲基-2-(2-氯苯基氨基)-3,4-二氢吡喃[3,2-c]色烯-5-酮的合成(化合物10)

与实施例1的合成方法1相同，不同之处在于：取代苯胺为邻氯苯胺，获得化合物10，经计算化合物10的产率62％。

¹H>3)δ7.90(dd,J₁＝8.2Hz,J₂＝1.7Hz,1H),7.53–7.47(m,1H),7.40(dd,J₁＝8.3Hz,J₂＝1.5Hz,1H),7.32–7.27(m,3H),7.16(dd,J₁＝8.4Hz,J₂＝1.6Hz,1H),6.78(td,J₁＝7.7Hz,J₂＝1.5Hz,1H),5.11(br,1H),2.37–2.16(m,2H),1.89(s,3H),1.75(s,3H),1.56(s,3H).¹³C>3)δ:161.1,156.7,152.6,139.7,131.4,129.4,127.4,123.7,122.9,121.7,120.2,117.4,116.3,116.0,109.0,88.1,50.1,30.4,29.1,28.2,25.4.ESRMs>+.

实施例11：

2,4,4-三甲基-2-(4-溴苯基氨基)-3,4-二氢吡喃[3,2-c]色烯-5-酮的合成(化合物11)

与实施例1的合成方法1相同，不同之处在于：取代苯胺为对溴苯胺，获得化合物11，经计算化合物11的产率40％。

¹H>3)δ:7.84(dd,J₁＝7.9Hz,J₂＝1.6Hz,1H),7.52(dd,J₁＝8.6Hz,J₂＝1.6Hz,1H),7.37–7.26(m,5H),6.89(d,J＝8.2Hz,2H),4.39(br,1H),2.30–2.10(m,2H),1.80(s,3H),1.65(s,3H),1.55(s,3H).¹³C>3)δ:162.3,161.2,156.9,152.6,142.0,131.9,131.5,123.8,123.0,120.6,116.3,116.0,113.2,108.6,88.8,49.6,30.7,28.8,28.4,25.3.ESRMs>+.

实施例12：

2,4,4-三甲基-2-(4-碘苯基氨基)-3,4-二氢吡喃[3,2-c]色烯-5-酮的合成(化合物12)

与实施例1的合成方法1相同，不同之处在于：取代苯胺为对碘苯胺，获得化合物12，经计算化合物12的产率35％。

¹H>3)δ7.84(dd,J₁＝7.9Hz,J₂＝1.6Hz,1H),7.51(dq,J₁＝7.3Hz,J₂＝1.6Hz,3H),7.34–7.27(m,2H),6.80(d,J＝8.2Hz,2H),4.34(br,1H),2.31–2.10(m,2H),1.81(s,3H),1.64(s,3H)，1.55(s,3H).¹³C>3)δ:161.1,156.9,152.6,142.7,137.8,131.5,123.8,122.9,120.8,116.3,115.9,108.7,88.7,82.8,49.6,31.6,30.7,28.8,28.5,25.3,22.7.ESRMs>+.

实施例13：

2,4,4-三甲基-2-(2,4-二甲基苯基氨基)-3,4-二氢吡喃[3,2-c]色烯-5-酮的合成(化合物13)

与实施例1的合成方法1相同，不同之处在于：取代苯胺为2.4-二甲基苯胺，获得化合物13，经计算化合物13的产率58％。

¹H>3)δ:7.90(dd,J₁＝8.3Hz,J₂＝1.6Hz,1H),7.53–7.46(m,1H),7.32–7.20(m,3H),6.95(d,J＝6.6Hz,2H),4.21(br,1H),2.22(d,J＝29.4Hz,8H),1.81(s,3H),1.67(s,3H),1.57(s,3H).¹³C>3)δ:161.4,157.4,152.7,138.3,131.3,130.5,127.3,127.0,123.7,123.2,119.7,116.3,108.4,89.8,50.0,30.8,28.8,25.2,20.5,18.1.ESRMs>+.

实施例14：

2,4,4-三甲基-2-(3,5-二甲基苯基氨基)-3,4-二氢吡喃[3,2-c]色烯-5-酮的合成(化合物13)

与实施例1的合成方法1相同，不同之处在于：取代苯胺为3.5-二甲基苯胺，获得化合物14，经计算化合物14的产率69％。

¹H>3)δ:7.90(dd,J₁＝7.9Hz,J₂＝1.6Hz,1H),7.50(dd,J₁＝8.6Hz,J₂＝1.6Hz,1H),7.33–7.24(m,2H),6.61(m,J＝29.9Hz,3H),4.33(br,1H),2.29–2.12(m,8H),1.82(s,3H),1.66(s,3H),1.54(s,3H).¹³C>3)δ:161.3,157.1,152.7,138.7,131.3,123.5,123.1,122.9,117.3,116.3,116.2,108.7,89.2,49.7,30.7,28.8,28.5,25.4,21.4.ESRMs>+.

实施例15：

2,4,4-三甲基-2-取代苯基氨基-3,4-二氢吡喃[3,2-c]色烯-5-酮类化合物的乙酰胆碱酯酶抑制活性

2,4,4-三甲基-2-取代苯基氨基-3,4-二氢吡喃[3,2-c]色烯-5-酮类化合物的体外乙酰胆碱酯酶抑制活性测试方法，参考如下三篇文献完成：

1、周金林，以生物碱为母体进行结构修饰的新药研究.中山大学博士毕业论文，2004.

2、Ellman G L,Courtney D K,Andres V,Featherstone R M.A new and rapid colorimetric determination of acetylcholinesterase activity.Biochem.Pharmacol.1961,7:88-95.

3、Massoulie J,Bon S,Silman I.Structure and functions of acetylcholinesterase and butyrylcholinesterase.Prog.Brain Res.1993,98:139-146.

具体的测试方法如下：

溶液的配制:

(1)0.1M pH＝8.0磷酸盐缓冲溶液：用移液管移取6.4mL 1M KH₂PO₄，94.0mL>2HPO₄至1000mL容量瓶中，后用蒸馏水稀释，定容至1000mL。

(2)乙酰胆碱酯酶溶液(现用现配)：称取0.10mg乙酰胆碱酯酶用0.1M pH＝8.0磷酸盐缓冲液溶解，定容至1.0mL。

(3)2mg/mL硫代乙酰胆碱溶液(现用现配)：称取2.0mg硫代乙酰胆碱用0.1M pH＝8.0磷酸盐缓冲液溶解，定容至1.0mL。

(4)4mg/mL 5,5-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(现用现配)：称取4.0mg 5,5-二硫代双(2-硝基苯甲酸)用0.1M pH＝8.0磷酸盐缓冲液溶解，定容至1.0mL。

(5)1.0mM样品DMSO溶液：称取一定量待测分析样品用DMSO溶解，定容。

化合物对乙酰胆碱酯酶的抑制活性分析

以硫代乙酰胆碱为底物，化学标记的5,5-二硫代双(2-硝基苯甲酸)为显色剂，在0.1cm比色皿中测定样品对AChE抑制活性。其反应式为：

Acetylthiocholine+H₂O+AChE→Acetyrate+Thiochline

Thiocholine+5,5'-thiobis-2-nitrobenzoic acid→5-thio-2-nitrobenzoic acid

硫代乙酰胆碱被乙酰胆碱酯酶水解后，产生的硫代胆碱，能与5,5-二硫代双(2-硝基苯甲酸)反应，生成的5-硫-2-硝基苯甲酸可在412nm处产生紫外吸收。

取5支1.5mL分别装有840μL 0.1M pH＝8.0磷酸盐缓冲液的梨型管，依次加入0，5μL，10μL，20μL，40μL，50μL的上述步骤配制的浓度的样品DMSO溶液，并用DMSO加至890μL。分别加入50μL 4mg/mL 5,5-二硫代双(2-硝基苯甲酸)和10μL乙酰胆碱酯酶溶液，并在37℃保温15分钟，立刻加入50μL 2mg/mL硫代乙酰胆碱溶液，摇匀后测其在λ＝412nm处的A值(A_n)。参比用0.1M>control值作为100个活力单位：

然后以酶的相对活力对抑制剂浓度作图，根据抑制曲线求得各种化合物的IC₅₀值(抑制酶活力50％时的抑制剂浓度)。

由上述方法测定获得目标产物的IC₅₀值(μM)，列于表2。

表2化合物对乙酰胆碱酯酶的抑制活性据(IC₅₀值，μM)

注：^a由于溶解度的问题，其活性很差，没有测试。

从表2可以看出，这类化合物具有一定程度的乙酰胆碱酯酶抑制活性。该合成方法为一步反应便可提供结构复杂而新颖的化合物，可以通过该合成方法，制备出所希望的初步结构骨架，再进行结构改造，获得计划合成的化合物，有望进一步提高其活性。所以该合成方法以及所涉及的这类骨架结构的化合物具有潜在的药物研发价值。

以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的技术方案及其核心思想，应当指出，对于本技术领域的技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。