包含新琼寡糖作为有效成分的败血症或败血症性休克的预防或治疗用药学组合物

摘要

本发明涉及包含新琼寡糖作为有效成分的败血症或败血症性休克的预防或治疗用组合物，本发明的新琼寡糖不仅具有优秀的败血症预防效果，而且有效抑制炎症发生，进而免疫增进效果突出，因此可有用地使用在用于败血症或败血症性休克的预防或治疗及免疫增进的医药品及功能性食品中。

说明书

技术领域

本发明涉及包含新琼寡糖作为有效成分的败血症或败血症性休克的预防或治疗用组合物。

背景技术

琼脂（Agar）作为很久以前就被广泛利用为食品添加剂、医药品、化妆品、家畜饲料及工业原料等的具有代表性的来源于海藻类的多糖类，在韩国，每年生产量达到3600吨，为较丰富的水产资源之一。然而，在实际使用方面，只有全部生产量的一部分被简单加工处理，来用作廉价的原料，其剩余的大部分被放置不管，相对于自然资源量，附加价值非常低。因此，实际上大大要求对丰富的韩国琼脂的新用途开发和与附加价值有关的研究。

琼脂由琼脂糖（agarose）和琼脂胶（agaropectin）构成，但是琼脂糖为作为半乳糖（Dgalactose）和3，6-脱水-L-半乳糖（3，6-anhydro-L-galactose）以β-1，4的形态相键合的单体的琼脂二糖（agarobiose）反复而形成的由α-1，3键相连接的直链结构，凝胶（gel）化能力强，但与此相反，琼脂胶与琼脂糖相同，由琼脂二塘单位构成，但是含有硫酸基等的酸性基且凝胶化能力若。

双琼脂糖借助作用于β-1，4键的β-琼脂糖酶（β-agarase）来经新琼四糖（neoagarotetraose）分解成新琼双糖（neoagarobiose），接着，借助作用于α-1，3键的α-琼脂糖酶（α-agarase）来最终分解成半乳糖（D-galactose）和3，6-脱水-L-半乳糖。

另一方面，据悉，作为放线菌的天蓝色链霉菌（Streptomyces coelicolor）A3（2）生产分解琼脂的细胞外（向细胞外分泌）琼脂糖酶（agarase）（Stanier et al.，1942，J.Bacteriol.；Hodgson and Chater，1981，J. Gen. Microbiol.），此琼脂糖酶借助dagA基因来进行编码。在放线菌中，dagA基因为其基因唯一被公知的β-琼脂糖酶基因，在放线菌中琼脂糖酶的生产研究中占重要地位。尤其，天蓝色链霉菌作为在放线菌的分子生物学研究中最广泛使用的菌株，在2002年英国的桑格中心（Sanger>

另一方面，败血症（sepsis）作为在致病性革兰氏阴性菌感染活体的情况下，作为细胞壁成分的脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）以毒素的形式起作用，使活体的免疫体系过度活性化而诱发的炎症反应，在全身引起感染症或在症状严重的情况下，还伴随休克。具体地，败血症主要在如恶性重伤、白血病、恶性淋巴瘤、艾滋病（AIDS）、胶原病、肾功能衰竭、肝病、脑血管障碍、糖尿病等的基础疾病的患者或高龄者、早产儿等具有体液免疫缺陷或细胞免疫缺陷的抵抗力弱的宿主接受肾上腺类固醇或抗肿瘤剂的化学疗法、钴照射等的放射线治疗或摄入导管、血液透析、器官移植、心脏手术等的处置、手术的情况下发病。败血症是住进医院重患者病房的患者死亡的主要原因，是由此造成的致死率通常在30％以上的非常严重的疾病。尽管医学技术在进步，但仍在全世界范围内因手术后遗症被感染而引起败血症的情况很多，在如新生儿或老人等体内免疫力弱的人被感染的情况下，发展成败血症的情况很多。代表性地，在新生儿败血症的情况下，据悉，足月儿1000名中3名左右发病，早产儿发病率增加3倍至4倍。在得败血症的情况下，通常接受抗生素治疗，但是因适当的处置较慢，而在增殖许多菌的情况或被对抗生素耐性较强的菌株感染的情况下，不能仅用抗生素进行有效治疗，由于对多种抗生素具有耐性的病原菌逐渐增加，急需要开发新的败血症治疗剂。

本发明人为了满足如上所述的要求，进行反复研究的结果发现，通过DagA酶反应制备而成的来源于琼脂的新琼寡糖不仅抑制菌的增殖，而且还具有去除从死菌分离的内毒素的优秀的效果，在与抗生素联用的情况下，可使由抗生素引起的副作用最小化，且与单独给药相比，具有显著的优秀的败血症治疗效果，从而完成了本发明。

发明内容

技术问题

本发明的目的在于，提供包含新琼寡糖作为有效成分的败血症或败血症性休克的预防或治疗用组合物。

本发明的另一目的在于，提供包含新琼寡糖作为有效成分的免疫增强用组合物。

解决问题的方案

为了解决如上所述的问题，本发明提供包含新琼寡糖作为有效成分的败血症或败血症性休克的预防或治疗用药学组合物。

并且，本发明提供包含新琼寡糖作为有效成分的败血症或败血症性休克的预防或改善用食品组合物。

并且，本发明提供包含新琼寡糖作为有效成分的免疫增强用药学组合物。

并且，本发明提供包含新琼寡糖作为有效成分的免疫增强用功能性食品。

发明的效果

本发明的新琼寡糖不仅具有优秀的败血症预防效果，而且有效抑制炎症发生，进而免疫增进效果突出，因此可有用地使用在用于败血症或败血症性休克的预防或治疗及免疫增进的医药品及功能性食品中。

附图说明

图1为示出pUWL201pw载体的地图的图。

图2为示出本发明的一实施例的重组载体的地图的图。

图3为示出通过高效液相色谱蒸发光散射检测法（HPLC-ELSD）对本发明的酶反应产物进行分析的结果的图。

图4为示出经本发明的新琼寡糖预处理及败血症诱导动物模型随时间的存活率的图。

图5为示出经本发明的新琼寡糖预处理及败血症诱导动物模型的血清内炎症性细胞因子的分泌量的图。

图6为示出经本发明的新琼寡糖预处理及败血症诱导动物模型的血清内谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）及血尿素氮（BUN）的浓度的图。

图7为示出经本发明的新琼寡糖预处理及脂多糖给药的动物模型随时间的存活率的图。

图8为示出本发明的新琼寡糖预处理及脂多糖给药动物模型的血清内炎症性细胞因子的分泌量的图。

图9为示出经本发明的新琼寡糖预处理及脂多糖给药的动物模型的血清内谷草转氨酶、谷丙转氨酶及血尿素氮的浓度的图。

图10为示出经本发明的新琼寡糖预处理及脂多糖给药的动物模型的肺组织内炎症诱发细胞的浸润程度的图。

图11为示出经本发明的新琼寡糖预处理及脂多糖给药的动物模型的脾组织内细胞凋亡程度的图。

具体实施方式

以下，对本发明进行详细说明。

本发明提供包含利用琼脂(agar)或琼脂糖(agarose)并通过DagA酶反应制备而成的新琼寡糖（neoagarooligosaccharide）作为有效成分的败血症或败血症性休克的预防或治疗用组合物。

上述组合物包含药学组合物及食品组合物。

本发明的DagA指作为β-琼脂糖酶(β-agarase)且具有序列2的氨基酸序列的蛋白质，包含从作为放线菌的天蓝色链霉菌(Streptomyces>)生产或从异种菌株生产的蛋白质。并且，在功能完全改变或不失去β-琼脂糖酶活性的范围内，包含如下的蛋白质，上述蛋白质按照通常的方法，即，为了有利于纯化而包含标记氨基酸或为了异种表达而变更氨基酸序列等方法重组而成。

更具体地，本发明的DagA利用由天蓝色链霉菌生产的β-琼脂糖酶从基因进行翻译时，具有序列2的309个氨基酸，以分子量为约35kDa的状态生产，N-末端30个的氨基酸信号肽被切割，从而以具有序列2的31位至309位的氨基酸序列的完成的细胞外型蛋白质（为约32kDa）状态分泌。

天蓝色链霉菌的dagA基因编码上述DagA，可由序列1的碱基序列表示dagA基因。序列1作为存在于天蓝色链霉菌A3（2）的基因组的基因的碱基序列，在美国国家生物技术信息中心（NCBI）数据库上被命名为“SCO3471”。通过体外（In>dagA基因的转录由被RNA聚合酶的至少不同3种全酶（holoenzyme）所认知的4种或5种不同启动子（promoter）所调节。通过分析dagA基因的转录过程，示出在编码序列的上部第32位、77位、125位及220位碱基开始转录。

可通过培养作为原来DagA的生产菌株的天蓝色链霉菌来生产本发明的DagA，但是为了提高生产效率，优选地，利用作为异种菌株的变铅青链霉菌（Streptomyces>）的表达系统，而且可使用如下的方法，即，将上述dagA基因插入放线菌用载体中来制备重组载体后，利用上述重组载体转化变铅青链霉菌，进而培养其转化体。在此情况下，优选地，重组载体以dagA基因借助来源于放线菌的启动子来对转录进行调节的方式构成。

来源于放线菌的启动子中存在sgtR启动子（sgtRp）、ermE启动子（ermEp）、tipA启动子（tipAp）等多种启动子，因此在制备重组载体时可选择使用这些启动子。已开发以借助这些启动子来对转录进行调节的方式构成的各种种类的多个载体，若在此载体克隆SCO3471，则可制备借助来源于放线菌的启动子来对转录进行调节的结构的重组载体。

利用重组载体转化宿主菌株来制备转化体，但是根据宿主菌株，存在多种用于转化的方法，因此可选择适当的方法来使用。例如，在将变铅青链霉菌作为宿主菌株来使用的情况下，可使用以聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG）为媒介的转化方法。

若在液体培养基培养如转化体等DagA生产菌株，则可生产DagA，且可通过获取培养液并利用如超滤法等通常的蛋白质纯化方法来生产高纯的DagA。此时，使琼脂(agar)或琼脂糖(agarose)包含在液体培养基中，可更有效地生产DagA。

如琼脂及琼脂糖等多糖类可通过上述DagA的酶反应来生成大小相对小的寡糖，优选地，上述酶反应在35℃至45℃的温度及pH为6至8的条件下进行，但并不限定于此。

作为上述酶反应的产物，生成新琼寡糖，上述新琼寡糖可单独为新琼双糖(neoagarobiose)、新琼四糖(neoagarotetraose)及新琼六糖（neoagarohexaose），也可为混合它们的状态，但并不限定于此。

本发明的新琼寡糖减少传染症性细胞因子、增加抗炎症性细胞因子、显著降低因败血症或败血症休克的死亡率，从而具有败血症的预防或治疗效果。

在本发明中，“败血症”指被微生物感染而在全身出现严重的炎症反应的状态。在出现体温上升至38℃以上的发热症状或下降至36℃以下的低体温症、呼吸次数增加至每分钟24次以上（频呼吸）、每分钟90次以上的心跳次数（频脉）、血液检查上白血球数的增加或显著减少的症状中的两种以上的症状的情况下，称之为全身炎症反应综合征（systemicinflammatory response syndrome；SIRS）。当这种全身炎症反应综合征为因微生物感染而引起的症状时，称为败血症。在身体的感染病灶中，病原菌持续性或间歇性地进入血流并落在各种胀器形成病灶，且具有严重的全身症状。作为原因菌，包括葡萄球菌、链球菌、大肠菌、绿脓菌、结核菌、肺炎杆菌、真菌、厌氧菌等。

并且，本发明提供包含利用琼脂(agar)或琼脂糖(agarose)并通过DagA酶反应制备而成的新琼寡糖(neoagarooligosaccharide)作为有效成分的免疫增强用组合物。

上述组合物包含药学组合物及保健品。

本发明的新琼寡糖通过抑制传染症性细胞因子的分泌且增加抗炎症性细胞因子的分泌来示出免疫增强效果。

上述组合物可利用于免疫疾病的预防或治疗，上述免疫疾病包括由生物的免疫体系异常诱发的多种炎症性疾病、过敏性疾病及癌等，例如，可包括感冒、哮喘、肺炎、过敏性鼻炎、过敏性结膜炎、特应性皮炎、过敏、类风湿关节炎、阿尔茨海默氏症、自身免疫性甲状腺疾病、炎症性肠病、再生障碍性贫血、红斑狼疮及银屑病等，但并不限定于此。

本发明的新琼寡糖不仅具有优秀的败血症预防效果，而且还具有突出的免疫增进效果，因此可有用地使用在用于败血症或败血症性休克的预防或治疗及免疫增进的医药品及功能性食品中。

本发明的组合物还可包含在药学组合物的制备中通常使用的适当的载体、赋形剂及稀释剂。本发明的药学组合物可根据各个通常的方法，以成散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、悬浮液、乳液、糖浆、气雾剂等的口服型剂型、外用剂、栓剂及灭菌注射溶液的形态进行剂型化来使用。作为本技术领域中公知的合适的制剂，优选地，使用文献（Remington'sPharmaceutical Science，Mack Publishing Company，Easton PA）中所公开的制剂。

作为可包含在本发明的药学组合物的载体、赋形剂及稀释剂，可列举乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇，麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、海藻酸钠、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁及矿物油。

在对本发明的药学组合物进行制剂化的情况下，通过使用填充剂、增量剂、结合剂、湿润剂、崩解剂、表面活性剂等的稀释剂或赋形剂来制备。用于口服给药的固体制剂包括片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂等，这种固体制剂通过在上述有效成分中混合至少一种以上的如淀粉、碳酸钙、蔗糖、乳糖、明胶等赋形剂来制备。并且，除了简单的赋形剂之外，还使用如硬脂酸镁、滑石等润滑剂。用于口服给药的液相制剂有悬浮剂、内用液剂、乳剂、糖浆剂等，但是除了作为通常使用的简单稀释剂的水、液体石蜡之外，可包含各种各样的赋形剂，例如，湿润剂、甜味剂、芳香剂、保存剂等。用于非口服给药的制剂包括经灭菌的水溶液、非水性溶剂、悬浮剂、乳剂、冷冻干燥制剂、栓剂。作为非水性溶剂、悬浮剂，可使用如丙二醇（propylene glycol）、聚乙二醇、橄榄油、可注射的酯如油酸乙酯等植物性油。作为栓剂的基剂，可使用witepsol、聚乙二醇、吐温（tween）61、可可油脂、月桂油、甘油明胶等。

在本发明中所使用的术语“给药”指以任何适当的方法向个体提供一定的本发明的组合物。

本发明的药学组合物的优选的给药量随着个体的状态及体重、疾病的程度、药物形态、给药途径及期间而不同，但是可由本领域普通技术人员适当地选择。为了优选的效果， 1日可给药0.001mg/kg至1000mg/kg的本发明的组合物。可以每日给药一次，也可以分几次进行给药。上述给药量在任何方面都不会限定本发明的范围。

可通过多种途径向个体给药本发明的药学组合物。可预期给药的所有方式，例如，能够以口服、注射于直肠或静脉、肌肉、皮下、子宫内膜或脑血管内的方式进行给药。优选地，本发明的药学组合物能够以注射剂形态进行给药。

本发明的药学组合物除了包含上述有效成分之外，还可包含一种以上具有败血症或败血症性休克的预防或治疗或免疫增强效果的公知的物质。

本发明的药学组合物包含上述有效成分之外，还可包含支气管扩张剂、抗组胺药或消炎止痛药。

例如，作为上述支气管扩张剂，可使用β-激动剂、抗胆碱能剂、甲基黄嘌呤等，作为上述抗组胺药，可使用阿伐斯汀（acrivastine）、西替利嗪（cetirizine）、地氯雷他定（desloratadine）、非索非那定（fexofenadine）、盐酸左西替利嗪片（levocertirizine）、氯雷他定（loratadine）、咪唑斯汀（mizolastine）、阿利马嗪（ailmemazine）、chlocertirizine、氯马斯汀（clemastine）、赛庚啶（cypropheptadine）、羟嗪（hydroxyzine）、甲哌噻庚酮（ketotifen）、盐酸异丙嗪（promenthazine）等，作为上述消炎止痛药，可使用阿司匹林（aspirin）、双氯芬酸（diclofenac）、非诺洛芬（fenoprofen）、氟比洛芬（flurbiprofen）、布洛芬（ibuprofen）、吲哚美辛（indomethacin）、酮洛芬（ketoprofen）、萘普生（naproxen）、吡罗昔康片（piroxicam）、舒林酸（sulindac）、塞来昔布（celecoxib）、伐地考昔（valdecoxib）、罗非考昔（rofecoxib）等。

在本发明中，“功能性食品”指以在食品中利用物理、生化、生物技术、方法等来使该食品的功能作用、表达于特定目的的方式赋予附加价值的食品组或以使食品组合具有的生物防御节奏调节、疾病防治和恢复等相关的体内调节功能充分表达的方式设计并加工的食品。

上述功能性食品可包含食品学上可接受的食品辅助添加剂，进一步地，还可包含通常使用于功能性食品的制备的适当的载体、赋形剂及稀释剂。

在将本发明的组合物用作食品添加剂的情况下，可直接添加上述组合物来使用或者与其他食品或食品成分相混合来使用，且可根据通常的方法适当地使用。有效成分的混合量可根据使用目的（预防、健康或治疗性处置）适当地决定。通常，当制备食品或饮料时，相对于原料，添加15重量百分比以下的本发明的组合物，优选地，添加10重量百分比的的本发明的组合物。然而，在以健康及卫生为目的或调解健康为目的而长期摄取的情况下，可以在上述范围以下，由于在安全性方面不存在任何为题，因此可使用上述范围以上的有效成分。

除了上述成分之外，本发明的组合物可包含各种营养剂、维生素、电解质、风味剂、着色剂、果胶酸及其盐、海藻酸及其盐、有机酸、保护胶体增稠剂、pH调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、酒精、使用于碳酸饮料的碳酸化剂等。此外，本发明的组合物可包含用于制备天然果汁、果汁饮料及蔬菜汁的果肉。这些成分可单独使用或组合使用。这些添加剂的比例虽然不是很重要，但是，通常，本发明的组合物在每100重量份中选自0.01重量份至0.1重量份的范围中。

以下，根据实施例更详细说明本发明。但是，下述实施例仅用于更加容易理解本发明而例示的，本发明的内容并不限定于实施例。

实施例1．DagA生产

以天蓝色链霉菌A3（2）的染色体DNA为模板，通过使用下述的Asm-F及Asm-R引物的聚合酶链式反应（PCR）扩增dagA基因片段（编码DagA的信号肽及完成型肽的947bp片段，在序列1中包含有引物的一部分序列的状态），通过利用片段的限制酶部位（NdeI/BamHI）来在图1中所示的pUWL201pw载体中克隆dagA基因，以使dagA基因的转录可由ermE启动子调节，从而制备重组载体，如图2所示。

Asm-F引物：5′-GACATATGGTGGTCAACCGACGTGATC-3′（NdeI）（序列3）

Asm-R引物：5′-GGTGGATCCCTACACGGCCTGATACG-3′（BamHI）（序列4）

将利用上述重组载体转化变铅青链霉菌(Streptomyces>)TK24来获取的转化菌株使用于DagA的生产中。

将此菌株接种于包含有0.3％（w/v）的琼脂的R2YE液体培养基，并在28℃的温度下以120rpm振荡培养48小时至72小时。经预培养过程后进行本培养，各培养时间为2.5日。对通过本培养获取的培养液进行离心分离来去除菌体后，利用防渗膜（5kDa cut-offmembrane）过滤上清液，并分离剂纯化未通过过滤膜的蛋白质。通过冷冻干燥获取的浓缩液（酶液）来保管并使用。

实施例2．DagA的琼脂糖酶活性测定

利用还原当量测定方法（DNS method）测定对上述实施例1的DagA的琼脂糖酶活性。在上述实施例1中获取的10μl的酶液混合0.5ml的溶解有0.5％（w/v）的琼脂糖的20mM的三（羟甲基）氨基甲烷（Tris-HCl）溶液（pH7），在40℃的温度下反应15分钟后，加入0.5ml的DNS试剂（6.5g的二硝基水杨酸（dinitrosalicylic acid）、325ml的2M的氢氧化钠（NaOH）、45ml的甘油（glycerol）、1l的蒸馏水），加热10分钟后，冷却后测定吸光度（Å540nm）。将酶1U定义为在反应15分钟后生成吸光度（Å540nm）0.001的活性。

实施例3．通过DagA酶反应的琼脂或琼脂糖的分解

制备1l的溶解有0.5％（w/v）至5％（w/v）的琼脂或琼脂糖等的20mM的三（羟甲基）氨基甲烷溶液，在100℃的温度下加热10分钟来充分溶解后，降温至40℃，并处理2000U至50000U的DagA酶并进行24小时酶反应。

为了去除在酶反应产物中未分解的琼脂糖，通过离心分离回收上清液后，利用薄层分析法（thin layer chromatography，TLC）确认酶反应生成物。通过超滤法并利用5KDa防渗膜对回收的上清液进行部分纯化。

实施例4．通过高效液相色谱蒸发光散射检测法（HPLC-ELSD）进行分析的DagA酶反应产物的组成确认

为了确认在上述实施例3中获取的酶反应产物的组成而通过高效液相色谱蒸发光散射检测法进行分析。使用NH2 P-50 4E multimode column（250×4.6mm），作为移动相，使用乙腈（acetonitrile）和水的混合溶液（乙腈：水=65：35），其结果如图3所示。

如图3所示，反应产物中由新琼双糖（neoagarobiose, 以下称为“DP2”）、新琼四糖（neoagarotetraose, 以下称为“DP4”）及新琼六糖（neoagarohexaose，以下称为“DP6”）构成的新琼寡糖的重量占65±20％（重量），以上述新琼寡糖的总量为基准，DP2、DP4、DP6分别占0～10％、50～70％、30～50％（重量）。

实验例1．基于新琼寡糖给药的败血症预防效果分析

为了分析基于新琼寡糖给药的败血症夜访效果分析，进行如下实验。

1-1．实验设计及存活率分析

作为实验动物，利用6周龄的雌性BALB/c小鼠。向小鼠的腹腔腹腔折射新琼寡糖来进行预处理后，1小时后，注射10⁷CFU/mice的大肠埃希氏菌K1（E.> K1）（dissolved in LBbroth）来诱导败血症。在图4中示出诱导败血症的实验组及对照组中的各小鼠基于时间的存活率。

如图4所示，确认对照组在败血症诱导18小时后均死亡。与此相反，与对照组相比，经新琼寡糖预处理的组的存活率显著增加。

1-2．血清分析

败血症诱导12小时后，从各小鼠分离血清来分析血清内炎症性细胞因子（肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-12p70（IL-12p70）及白介素-10（IL-10））、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、血尿素氮的数值。此时，利用酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒（eBiosciences，圣地亚哥（San Diego），CA）测定细胞因子的浓度，其结果如图5及6所示。

如图5所示，确认因败血症而增加的小鼠血清内作为传染症性细胞因子的肿瘤坏死因子-α、白介素-6、白介素-1β及白介素-12p70的量，在进行新琼寡糖预处理的情况下，被显著抑制。与此相反，确认作为抗炎症性细胞因子的白介素-10的分泌因新琼寡糖预处理而增加。

并且，如图6所示，确认与肝及肾脏毒性有关的血清内谷草转氨酶、谷丙转氨酶及血尿素氮的浓度因败血症而增加，但是，在对小鼠进行新琼寡糖预处理的情况下，被显著抑制。

实验例2．基于新琼寡糖给药的免疫增强效果分析

为了基于新琼寡糖给药的免疫增强效果，进行如下实验。

2-1．实验设计及存活率分析

作为实验动物，利用6周龄的雌性BALB/c小鼠。向小鼠的腹腔腹腔折射100mg/kg的新琼寡糖来进行预处理后，1小时后，注射20mg/kg的脂多糖。之后，在图7中示出实验组及对照组中的各小鼠基于时间的存活率。

如图7所示，对照组在给药脂多糖24小时后均死亡。与此相反，确认与对照组相比，经新琼寡糖预处理的组的存活率显著增加，且确认以依赖于新琼寡糖的浓度的方式增加。

2-2．血清分析

给药脂多糖 12小时后，从各小鼠分离血清来分析血清内炎症性细胞因子（肿瘤坏死因子-α、白介素-6、白介素-1β、白介素-12p70及白介素-10）、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、血尿素氮的数值。此时，利用酶联免疫吸附测定试剂盒（eBiosciences，圣地亚哥，CA）测定细胞因子的浓度，其结果如图8及9所示。

如图8所示，确认因脂多糖给药增加的小鼠血清内作为传染症性细胞因子的肿瘤坏死因子-α、白介素-6、白介素-1β及白介素-12p70的量，在进行新琼寡糖预处理的情况下，被显著抑制。与此相反，确认作为抗炎症性细胞因子的白介素-10的分泌因新琼寡糖预处理而增加。

并且，如图9所示，确认与肝及肾脏毒性有关的血清内谷草转氨酶、谷丙转氨酶及血尿素氮的浓度因 脂多糖给药而增加，但是，在对小鼠进行新琼寡糖预处理的情况下，被显著抑制。

2-3．组织分析

给药脂多糖12小时后，从各小鼠去除肺及脾组织，并根据公知的方法进行石蜡切片后，进行苏木精-伊红（H&E）染色，并通过显微镜观察，其结果如图10及图11所示。

如图10所示，确认在进行新琼寡糖预处理的情况下，与对照组相比，在肺组织中炎症诱发细胞的浸润被显著抑制。

并且，如图11所示，确认在进行新琼寡糖预处理的情况下，与对照组相比，在脾组织中的细胞凋亡被显著抑制。

通过上述实验结果，确认新琼寡糖的优秀的败血症及败血症性休克的预防效果，并且，确认有效抑制炎症发生，进而免疫增进效果突出。

以下，说明本发明的药学组合物及食品组合物的制剂例，这用于具体说明本发明，而不是限定本发明。

制剂例1．药学组合物的制备

1-1．散剂的制备

新琼寡糖20mg

乳糖100mg

滑石10mg

混合如上所述的成分，通过填充于气密布来制备散剂。

1-2．片剂的制备

新琼寡糖10mg

玉米淀粉100mg

乳糖100mg

硬脂酸镁2mg

混合如上所述的成分后，按照通常的片剂的制备方法，通过压片来制备片剂。

1-3．胶囊剂的制备

新琼寡糖10mg

结晶纤维素3mg

乳糖14.8mg

硬脂酸镁0.2mg

混合如上所述的成分后，按照通常的胶囊剂的制备方法，通过填充于明胶胶囊来制备胶囊剂。

1-4．注射剂的制备

新琼寡糖10mg

甘露醇180mg

注射用灭菌蒸馏水2974mg

磷酸氢二钠（Na₂HPO₄·2H₂O）26mg

按照通常的注射剂的制备方法，以每一次用量的针剂（2ml）的如上所述的成分含量制备。

1-5．液剂的制备

新琼寡糖10mg

异构糖10g

甘露醇5g

纯化水定量

按照通常的液剂的制备方法向纯化水中加入各个成分，使其溶解，加入适量的柠檬香后，混合如上所述的成分后，加入纯化水并加入所有纯化水，调节为100ml后，填充到褐色瓶并进行灭菌来制备液剂。

制剂例2．食品组合物的制备

2-1．保健食品的制备

新琼寡糖100mg

维生素混合物适量

维生素A醋酸盐70g

维生素E 1.0mg

维生素B1 0.13mg

维生素B2 0.15mg

维生素B6 0.5mg

维生素B12 0.2g

维生素C 10mg

生物素10g

烟酰胺1.7mg

叶酸50g

泛酸钙0.5mg

无机物混合物适量

硫酸亚铁1.75mg

氧化锌0.82mg

碳酸镁25.3mg

磷酸二氢钾15mg

磷酸氢钙55mg

柠檬酸钾90mg

碳酸钙100mg

氯化镁24.8mg

如上所述的维生素及矿物混合物的组成比通过优选实施例混合比较适合保健食品的成分来组成，但是对其配合比进行任何变形也无妨，可按照通常的制备方法混合如上所述的成分后，制备颗粒，并按照通常的方法使用于保健食品的制备中。

<110> 达因比奥有限公司

<120> 包含新琼寡糖作为有效成分的败血症或败血症性休克的预防或治疗用药学组合物

<130> 1-9

<150> KR 14/0194174

<151> 2014-12-30

<160> 4

<170> KopatentIn 2.0

<210> 1

<211> 930

<212> DNA

<213> 天蓝色链霉菌

<400> 1

gtggtcaacc gacgtgatct catcaagtgg agtgccgtcg cactcggagc gggtgcgggg 60

ctcgcgggtc ccgcacccgc cgctcatgcc gcagacctcg aatgggaaca gtaccccgtg 120

ccggccgccc ctggcggaaa caggtcctgg cagcttctcc ccagccattc ggacgacttc 180

aactacaccg gcaagcctca aaccttcagg ggcagatggc tggaccagca caaggatggc 240

tggtcgggcc cggccaacag cctctacagt gcgcgccatt cctgggtggc tgacggaaat 300

ctcatcgtcg agggccgcag ggcgccggac gggagggtct actgcggcta cgtgacctcc 360

cgcaccccag tcgagtaccc tctctatacc gaagtactca tgcgtgtgag cgggctgaag 420

ctctcatcga atttctggct cctgagcaga gacgacgtca acgagattga cgtgatcgaa 480

tgctacggca acgagtcatt gcacggaaag cacatgaaca ccgcctacca catattccag 540

cggaacccct tcactgaact ggcgagaagc cagaaggggt atttcgcaga tgggagctac 600

gggtacaatg gtgagactgg gcaggtgttt ggggacggcg ccgggcaacc tcttcttcgg 660

aatggattcc accgctacgg cgtgcactgg ataagcgcca ccgaattcga tttctacttc 720

aacggcaggt tggtgcgccg gctgaaccgg tcgaacgacc tcagggaccc ccggagccgg 780

ttcttcgacc agccaatgca tctgatcctc aacaccgaga gtcatcagtg gcgcgtcgac 840

cgaggtatcg aacccacgga cgcggaactc gcagacccca gcatcaacaa catctactac 900

cgctgggtca ggacgtatca ggccgtgtag930

<210> 2

<211> 309

<212> PRT

<213> 天蓝色链霉菌

<400> 2

Met Val Asn Arg Arg Asp Leu Ile Lys Trp Ser Ala Val Ala Leu Gly

1 5 1015

Ala Gly Ala Gly Leu Ala Gly Pro Ala Pro Ala Ala His Ala Ala Asp

202530

Leu Glu Trp Glu Gln Tyr Pro Val Pro Ala Ala Pro Gly Gly Asn Arg

354045

Ser Trp Gln Leu Leu Pro Ser His Ser Asp Asp Phe Asn Tyr Thr Gly

505560

Lys Pro Gln Thr Phe Arg Gly Arg Trp Leu Asp Gln His Lys Asp Gly

65707580

Trp Ser Gly Pro Ala Asn Ser Leu Tyr Ser Ala Arg His Ser Trp Val

859095

Ala Asp Gly Asn Leu Ile Val Glu Gly Arg Arg Ala Pro Asp Gly Arg

100 105 110

Val Tyr Cys Gly Tyr Val Thr Ser Arg Thr Pro Val Glu Tyr Pro Leu

115 120 125

Tyr Thr Glu Val Leu Met Arg Val Ser Gly Leu Lys Leu Ser Ser Asn

130 135 140

Phe Trp Leu Leu Ser Arg Asp Asp Val Asn Glu Ile Asp Val Ile Glu

145 150 155 160

Cys Tyr Gly Asn Glu Ser Leu His Gly Lys His Met Asn Thr Ala Tyr

165 170 175

His Ile Phe Gln Arg Asn Pro Phe Thr Glu Leu Ala Arg Ser Gln Lys

180 185 190

Gly Tyr Phe Ala Asp Gly Ser Tyr Gly Tyr Asn Gly Glu Thr Gly Gln

195 200 205

Val Phe Gly Asp Gly Ala Gly Gln Pro Leu Leu Arg Asn Gly Phe His

210 215 220

Arg Tyr Gly Val His Trp Ile Ser Ala Thr Glu Phe Asp Phe Tyr Phe

225 230 235 240

Asn Gly Arg Leu Val Arg Arg Leu Asn Arg Ser Asn Asp Leu Arg Asp

245 250 255

Pro Arg Ser Arg Phe Phe Asp Gln Pro Met His Leu Ile Leu Asn Thr

260 265 270

Glu Ser His Gln Trp Arg Val Asp Arg Gly Ile Glu Pro Thr Asp Ala

275 280 285

Glu Leu Ala Asp Pro Ser Ile Asn Asn Ile Tyr Tyr Arg Trp Val Arg

290 295 300

Thr Tyr Gln Ala Val

305

<210> 3

<211> 27

<212> DNA

<213> 正向引物（Asm-F）

<400> 3

gacatatggt ggtcaaccga cgtgatc 27

<210> 4

<211> 26

<212> DNA

<213> 反向引物（Asm-R）

<400> 4

ggtggatccc tacacggcct gatacg 26

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