适合于特别是猪类物种的人工授精的经稀释动物精液的包装袋以及包括其的系统

摘要

本发明的袋包括通过封接区彼此固定的两个柔性薄片（11），所述封接区界定出当所述袋被充填时具有预定体积的，所述包被提供用于包含具有所述预定体积的所述经稀释动物精液的剂量（27）。每个所述柔性薄片（11）具有其面对所述包（14）的表面（30），其构成可封接热塑性材料层（35）的一部分。对于一个或者优选对于每个所述薄片（11）来说，所述可封接热塑性材料层（35）包含三氯生；并且所述包的所述预定体积与面对所述包的所述薄片（11）的表面（30）的面积之和之间的比为0.3ml/cm

说明书

技术领域

本发明一般地涉及适合于特别是猪类物种的人工授精的经稀释动物精液的保存。

背景技术

已知对于这些物种来说，在新鲜精液提取和授精之间，将新鲜精液与稀释介质混合以获得经稀释精液，然后该经稀释精液以个体剂量进行包装，每个剂量具有适合于进行人工授精的预定体积，每个剂量被包装在一个容器中，在该容器中，其将被一直保存到进行人工授精。

为了包装经稀释精液的个体剂量，尤其由欧洲专利申请EP 0 605 406、PCT申请WO 01/13818、法国专利申请2 813 784或者法国专利申请2 848 812已知包括通过封接区彼此固定的两个柔性热塑性材料薄片的袋，所述封接区界定出当所述袋被充填时具有预定体积的包(poche)，所述包被提供用于包含具有此预定体积的经稀释动物精液的剂量。

通常，所述柔性热塑性材料薄片是双层的，具有内层(该层具有面对另一薄片和面对该包的表面)，其由可封接热塑性材料制成以使得能够获得封接区，并且具有外层，该外层通常是气密性的并且所具有的熔点高于形成内层的可封接热塑性材料的熔点。

该封接区除了界定出该包之外还界定出通过其将该包用经稀释动物精液充填的管道，以及用于将该袋连接到人工授精探头的管道，以向动物传送在该袋中包装的剂量。

为了保持在保存期间的精液质量，已知的是在稀释介质中提供营养成分和抗菌成分，尤其是抗生素。

发明内容

本发明旨在消除或者无论如何显著减少用于经稀释动物精液保存的抗生素的使用。

本发明为此提出适合于特别是猪类物种的人工授精的经稀释动物精液的包装袋(sachet)，其包括通过封接区彼此固定的两个柔性薄片，所述封接区界定出当所述袋被充填时具有预定体积的包(poche)，所述包被提供用于包含具有所述预定体积的所述经稀释动物精液的剂量，每个所述柔性薄片具有其面对所述包的表面，其构成可封接热塑性材料层的一部分；其特征在于，对于一个所述薄片或者优选对于每个所述薄片来说，所述可封接热塑性材料层包含三氯生；并且所述包的所述预定体积与面对所述包的所述薄片的表面的面积之和之间的比为0.3ml/cm²至0.5ml/cm²。

已知三氯生(triclosan)是C₁₂H₇Cl₃O₂，其化学式如下所示：

并且其由CAS号3380-34-5标识。

还已知三氯生是一种杀生物物质，其能够被引入到塑料材料中以使得这些塑料材料进而具有杀生物性能，并且原则上三氯生还可被看作是杀精子剂(例如参见PCT申请WO 00/72839)。

尽管这是出人意料的，但由申请人进行的工作已经使得能够确认可以(尤其如下文所述)提供可封接热塑性材料层，其具有的三氯生的量大至足以使得在该袋中包含的经稀释精液的剂量保持细菌抑制，并且小至足以不会对在该剂量中所包含的精子的活动性是不利的。

本发明基于以下的观察：在经稀释精液保存袋中，经稀释精液的剂量(dose)与该袋的薄片之间的接触区的面积相对于该包可包含的体积来说是特别高的。

由此观察所引起的问题在于是否该薄片的三氯生对经稀释精液的作用不是由于三氯生从薄片释放到精液中而产生的，而主要是由于接触作用产生的，这是有鉴于上面提及的面积的重要性，由此导致该袋中包含的经稀释精液的每个部分相对接近面对该包的薄片的表面。

换言之，所引起的问题在于是否表面作用(并且不是体积作用)足以获得可保存经稀释精液剂量的细菌抑制作用。

这个问题通过假定是否三氯生未被释放到经稀释精液中(或者至少以非常小的量释放)而提出，三氯生对精子的作用将是极小的并且因而不会对它们的活动性不利，并且因此精液将保持其受精质量。

申请人进行的工作使得能够验证：事实上，如果在该袋的薄片的可封接热塑性材料层中引入合适量的三氯生(尤其如下文所述)，则可获得保存经稀释精液所需的细菌抑制作用，而不会释放(或者至少释放非常少的量)三氯生到该袋所包含的剂量中；并且事实上，精子所具有的活动性在它们在该袋中停留结束时仍保持良好。

在根据本发明的袋中，该包在其被充填时的体积与面对该包的薄片的表面的面积之间的比的数值范围已经被选择为特别有效地实施以上提及的组合技术作用。

要指出，归因于本发明的袋，在由稀释介质和包装袋形成的系统中，经稀释精液剂量在细菌抑制条件下的保持效果不再由稀释介质提供，这使得能够消除或者无论如何能够非常显著地减少传统上在稀释介质中提供的抗生素。

还观察到，在三氯生不释放到该袋中包含的经稀释精液剂量中或者无论如何几乎不释放三氯生到经稀释精液中的情况下，在人工授精时动物不会接收到或者接收极少量的杀生物物质。

根据有利的特性：

-所述包的所述预定体积是50ml-100ml；

-所述可封接热塑性材料层包含1mg/m²-40mg/m²的三氯生；

-所述可封接热塑性材料层包含10mg/m²-40mg/m²的三氯生；

-所述可封接热塑性材料层包括以不同等级的所述可封接热塑性材料制成的多个子层，所述柔性薄片中的一个或者优选每个具有其面对所述包的表面，其构成最内子层的一部分，仅该最内子层包含三氯生；

-在该最内子层中，存在0.0075％-0.3％重量的三氯生；

-所述最内子层占该可封接热塑性材料层的12％-18％重量；

-所述柔性薄片中的一个或者优选每个除了包括所述可封接热塑性材料层之外还包括与所述可封接热塑性材料不同的材料的至少一个其它层，其在与所述包相对侧覆盖所述可封接热塑性材料层，仅所述可封接热塑性材料层包含三氯生；

-所述与所述可封接热塑性材料不同的材料的其它层是由热塑性材料制成的外层；

-所述可封接热塑性材料是聚乙烯(PE)并且该外层的所述热塑性材料是聚酯(PET)；和/或

-所述可封接热塑性材料层具有20μm-110μm的厚度。

本发明的第二方面还涉及用于在袋中包装适合于特别是猪类物种的人工授精的经稀释动物精液的系统，包括用于提供经稀释精液的新鲜精液稀释介质，以及利用所述经稀释精液充填的袋；其特征在于，所述袋如上所述并且所述稀释介质不含抗生素。

附图说明

本发明将通过以下参考附图以说明性而非限制性方式给出的实施例的详细描述来进一步说明，在附图中：

-附图1是处于扁平状态(即未被充填)的根据本发明的袋的平面图；

-附图2是沿着附图1中的II-II获取的截面图；

-附图3和4是类似于附图1和2的图，但该袋利用经稀释精液充填；

-附图5是附图4的细节V的放大图；

-附图6是显示利用其制造袋的热塑性材料薄片的生产步骤的示意图；

-附图7是在附图6中显示的薄膜之一的截面图；

-附图8显示包含新鲜动物精液的采集袋；

-附图9显示包含稀释介质的瓶，所述稀释介质要与新鲜动物精液混合以提供经稀释动物精液；并且

-附图10显示覆盖有保护袋的有柄壶(pichet)，包含通过混合附图8的袋的新鲜动物精液与附图9的瓶的稀释介质获得的经稀释动物精液。

具体实施方式

附图1中所示的袋10包括两个柔性热塑性材料薄片11和12，它们通过封接区13彼此固定，所述封接区13界定出包14、充填管道15和排出管道16。

封接区13包括两个侧区段17和18、四个端部区段19、20、21和22以及凸缘(pontet)23。

侧区段17和18彼此以一定距离平行延伸。

侧区段17在其末端之一处连接到端部区段19，而在其另一末端处连接到端部区段20。

侧区段18在其末端之一处连接到端部区段21，而在其另一末端处连接到端部区段22。

凸缘23在端部区段20和端部区段22之间延伸。

充填管道15位于端部区段19和端部区段21之间。

排出管道16位于端部区段20和端部区段22之间并且在包14的相对侧由凸缘23封闭。

在此，侧区段17和18是相对窄的，而端部区段19、20、21和22是相对宽的。

在此，每个侧区段17和18位于包14和袋10的相应边缘之间。

在附图1和2所示的袋10的扁平状态下，包14是空的，并且薄片11和12彼此相抵。

包14具有总体上矩形的轮廓，其长侧由侧区段17和18界定并且其短侧由端部区段19、21和20、22界定。

充填管道15在其一个末端处通到包14中并且在其另一末端处通到包14的外部。

排出管道16在其一个末端处通到包14中并且在其另一个末端处由凸缘23封闭。

除了彼此通过封接区13固定的薄片11和12之外，袋10在此还包括置于排出管道16中的套管(canule)25。

为了充填袋10并且更特别地是它的包14，通过充填管道15引入经稀释精液。

在实践中，使用插入到充填管道15中的接头以开始充填袋10的体积。

一旦袋10并且更特别地是包14如此被充填以具有包14所限定的预定体积的经稀释精液的剂量27(附图3和4)，则充填管道15由封接带26封闭(附图3)。

然后完成经稀释精液的剂量27的包装。

为了利用在袋10中包含的经稀释精液的剂量27进行人工授精，抽出套管25，例如通过利用与包14相对的套管的末端撞击凸缘23来进行，该与包14相对的套管25的末端因而变得可及并且将人工授精探头连接到其中。

关于袋10的更多细节，可参考法国专利申请2 813 784。

在附图1-4中所示的袋10旨在包含其体积为70ml的经稀释精液的剂量27。

当袋10处于扁平状态时(附图1和2)，包14的宽度(侧区段17和18之间的距离)是5.5cm并且端部区段19、21和20、22之间的距离是17.3cm。

因而，面对包14的薄片11的表面30的面积是95cm²。

同样，面对包14的薄片12的表面31的面积是95cm²。

显然，当该袋处于附图3和4所示的充填状态时，这个面积保持相同。

因而，面对包14的薄片11和12的面积之和是95cm²+95cm²，即190cm²。

包14包含的所考虑体积与面对包14的薄片11和12的面积之和之间的比因而是70ml/190cm²，即0.37ml/cm²。

现在将参考附图5描述薄片11的布置。

可以理解，此描述也适用于相同的薄片12。

薄片11是双材料的：它包括内层35和外层36。内层35由第一热塑性材料制成并且外层36由与第一材料不同的第二热塑性材料制成。

面对包14的表面30构成内层35的一部分。

在此，利用其制成内层35的第一热塑性材料是聚乙烯(PE)并且利用其制成外层36的热塑性材料是聚酯(PET)。

已知聚乙烯(PE)是相当易于可封接的塑料材料，其熔点温度相对低并且无论如何低于该聚酯(PET)的熔点温度。

因而，封接区13可在薄片11和12之间利用达到高于聚乙烯(PE)的熔点并且低于聚酯(PET)的熔点的温度的电极来制成，以使得当产生封接区13时，不存在薄片11和12的外层36的熔融。薄片11和12的外部面因而保持它们的原始光滑外观。

还已知，与聚乙烯(PE)不同，聚酯(PET)提供良好的气密性，使得薄片11和12不仅对液体而且还对气体是密封的。

现在将参考附图6描述如何制造薄片11。

要理解，以下针对薄片11的制造所给出的描述也适用于相同的薄片12。

薄片11通过如下方式制造：叠置各自来自保存其的卷轴的两个薄膜40和41，叠置的薄膜通过叠置的薄膜经过其间的一对辊42和43热压。薄膜40和41因而共层合(colaminés)。在薄片11中，内层35来源于薄膜40并且外层36来源于薄膜41。

薄膜41通过简单挤出单一等级的聚酯(PET)来制备。

薄膜40通过共挤出三种不同等级的聚乙烯(PE)来制备，使得薄膜40具有如图7所示的三个叠置的子层44、45和46。

子层44是最内子层。因此，薄片11的表面30构成子层44的一部分。

子层46是最外子层，其因而由外层36覆盖。

子层45是在子层44和子层46之间的中间子层。

子层46被提供用于薄膜40和41之间的结合(accrochage)。为了形成子层46，使用适合于与聚酯(PET)进行该结合的聚乙烯(PE)等级的粒料。

子层45被提供用于为薄片11提供某些机械特性。为了形成子层45，使用适合于提供这些机械特性的聚乙烯(PE)等级的粒料。

最内子层44被提供用于与袋10的另一薄片的相应子层可封接，以使得可形成封接区13。子层44还被提供用于通过面对包14的表面(即表面30)与经稀释精液的剂量27相互作用。

为了形成子层44，将一方面是适合于封接的等级的聚乙烯粒料与另一方面是具有15％重量三氯生的聚乙烯与三氯生的组合粒料进行混合。

粒料混合物的比例是99％重量的聚乙烯粒料和1％重量的聚乙烯与三氯生的组合粒料。

所获得的混合材料因而包含1％重量的聚乙烯与三氯生的组合粒料。因此，所获得的混合材料包含0.15％重量的三氯生。子层44因而包含0.15％重量的三氯生。

如上所指出的，薄膜40和41进行叠置并且通过它们经过其间的一对辊42和43进行热压，以提供薄片11。

要指出，在薄片11中，相对容易的是确认内层35和外层36的存在，但由于在辊42和43之间经过，因此难以在内层35中区分子层44、45和46，但它们是存在的。

在薄片11中，子层44占薄片11的总重量的13％。因而在薄片11中，每100g薄片11存在0.15％x 13％即0.02％或者换言之20mg的三氯生。

由于薄片11具有92g/m²的密度，因此每m²薄膜存在18mg的三氯生。

现在将参考附图8-10描述如何制备旨在用于在袋10中包装的经稀释精液。

附图8显示采集袋50，其包含新鲜动物精液51，在此是种公猪的精液。

附图9显示瓶52，其包含要与新鲜动物精液如精液51混合的稀释介质53，以提供经稀释动物精液如剂量27的经稀释动物精液。稀释介质53是无抗生素的。

附图10显示覆盖有保护袋55的有柄壶54。

由覆盖有袋55的有柄壶54所形成的整体包含经稀释动物精液56，其通过混合采集袋50的新鲜动物精液51和瓶52的稀释介质53而获得。

经稀释精液56旨在被细分为各自充填袋10的个体剂量27。

现在将描述利用用于保存经稀释精液的袋10所获得的结果的实施例。

实施例1

除了袋10(下文称作“袋A”)之外，使用与袋10类似的袋(下文称作“袋B”)，但其诸如11和12的薄片是传统的，也即没有三氯生。

从新鲜精液51的相同取样开始，利用无抗生素的稀释介质53在一小时内并且无论如何最迟在二十四小时内即时制备经稀释精液56(下文称作“经稀释精液A”)并且还利用包含抗生素的传统稀释介质来制备经稀释精液(下文称作“经稀释精液B”)。

进行稀释以使得经稀释精液A和经稀释精液B具有每ml为3千5百万个精子的浓度。

在如此提取的样品上进行的细菌计数使得能够证实经稀释精液A和经稀释精液B初始具有相似的细菌载荷。

然后利用经稀释精液A的剂量充填袋A，用经稀释精液B的剂量充填袋B并且用经稀释精液A的剂量充填袋B。

然后将所述袋在常规保存条件下也即在17℃下以水平位置静置六天。

然后分析每个袋的经稀释精液。

一方面进行细菌计数并且另一方面进行精子活动性的评价。

利用种公猪的新鲜精液的五个其它取样进行相同的操作。

下表给出了对于六个取样所获得的平均结果。

关于细菌计数，结果如下所示：

细菌计数通过如下方式实施：进行样品取样，然后在包含琼脂Trytone Soja Agar(TSA)的Pétri盒中在30℃下培养四十八小时。一半的样品进行需氧培养并且另一半的样品进行厌氧培养。所获得的结果进行平均，这些结果以每ml的菌落形成单元(UFC)来表示。

关于精子的活动性，结果如下所示：

活动性分析通过由申请人以名称CASA(计算机辅助精子分析)销售的计算机辅助精液分析装置来进行。

这涉及到确定移动精子相对于所有精子的百分数的图像分析。

现在将描述利用与袋10类似但包含不同量三氯生的袋所获得的结果的另两个实施例。

实施例2

进行与实施例1相同的操作程序，但所使用的袋的诸如11和12的薄片的诸如44的子层利用粒料混合物形成，所述粒料混合物的比例不是99％重量的聚乙烯粒料和1％重量的聚乙烯与三氯生组合粒料，而是99.5％重量的聚乙烯粒料和0.5％重量的聚乙烯与三氯生组合粒料。

袋A的薄片在此实施例中包含每100g薄片为10mg的三氯生，也就是说每m²薄片为大约9mg的三氯生；并且最内子层44包含0.075％重量的三氯生。

关于细菌计数，所获得的结果如下所示：

关于活动性，结果如下所示：

实施例3

进行与实施例1相同的操作程序，但所使用的袋的诸如11和12的薄片的诸如44的子层利用粒料混合物形成，所述粒料混合物的比例不是99％重量的聚乙烯粒料和1％重量的聚乙烯与三氯生组合粒料，而是98.5％重量的聚乙烯粒料和1.5％重量的聚乙烯与三氯生组合粒料。

袋A的薄片在此实施例中包含每100g薄片为29mg的三氯生，也就是说每m²薄片为大约27mg的三氯生；并且最内子层44包含0.225％重量的三氯生。

关于细菌计数，所获得的结果如下所示：

关于活动性，结果如下所示：

释放的三氯生的量

现在将描述利用实施例3的袋的试验，以确定在此袋的诸如14的包中所包含的诸如27的经稀释精液剂量中释放的三氯生的量。

为了简化试验，经稀释精液剂量不是保存在袋中，而是仅保存在稀释介质中。

在这种情况下，使用稀释介质53(在下文称作“介质A”)和包含抗生素的传统稀释介质(在下文称“介质B”)。

用介质A的剂量充填实施例3的袋并且用介质B的剂量充填实施例3的袋。

然后将所述袋在常规保存条件下即在17℃下以水平位置静置五天。

然后分析在每个袋中包含的介质以确定三氯生的浓度。

这种分析利用与串联质谱检测器耦联的液相色谱(LC-MS-MS法)来进行。

由所获得的浓度确定旨在包含于袋中的完整剂量(也即70ml)中所释放的三氯生的量。

要指出，用于计算释放比例的实施例3的袋的诸如11和12的薄片中所考虑的三氯生的重量并不是在所有这些薄片中的三氯生的重量，而仅是面对诸如14的该包的部分中的三氯生的重量。在此，这些部分重量为大约1.835g(在切割和称重后确定)。由于每100g薄片存在29mg的三氯生，因此在这些部分中所包含的三氯生的量为大约532μg。

所获得的结果如下所示：

该剂量中释放的三氯生的量该剂量中释放的三氯生的比例介质A2.7μg0.5％介质B1.9μg0.35％

现在将评述以上描述的各种分析的结果。

通常，对于这些不同的分析，围绕着平均值的离散是低的，使得以上给出的结果可被认为是有效的。

现在将评述关于在稀释介质中释放的三氯生的量的结果。

可观察到，所释放的量是非常小的(在此为大约1％)。

申请人认为，利用现有的各种稀释介质，所释放的量应当保持是非常小的，例如小于2％重量。

现在将评述关于细菌计数的结果。

将观察到，对于每个实施例来说，在保存周期结束时，与对照袋相比(也即包含经稀释精液A的袋B)，对于根据本发明的袋(也即包含经稀释精液A的袋A)来说细菌种群显著更低。

还将观察到，对于每个实施例来说，在保存周期结束时，细菌种群对于本发明袋和传统袋(也即包含经稀释精液B的袋B)来说是相当的，对于本发明袋来说甚至更低。

因而可认为，根据本发明的袋具有在细菌抑制条件下保存利用无抗生素的介质稀释的精液(精液A)的能力。

现在将评述关于精子活动性的结果。

将观察到，在保存周期结束时，对于根据本发明的袋(袋A)和传统袋(袋B)来说，活动性是相当的。

因而可认为，根据本发明的袋中所包含的三氯生并没有干扰精子的活动性。

通常，已经确定，当诸如14的包的体积与面对所述包的诸如11和12的薄片的诸如30和31的表面的面积之和之间的比为0.3ml/cm²-0.5ml/cm²时，根据本发明的袋提供良好的性能。

同样，已经确定，当诸如14的包的体积为50ml-100ml时，根据本发明的袋提供良好的性能。

还已经确定，当诸如44的最内子层占诸如35的可封接热塑性材料内层的重量的12-18％时，根据本发明的袋提供良好的性能。

在所示的实施例中，诸如35的内层具有大约80μm的厚度。还已经确定，当诸如35的内层具有20μm-110μm的厚度时，根据本发明的袋提供良好的性能。

还已经确定，当诸如35的内层包含1mg/m²-40mg/m²、优选10mg/m²-40mg/m²的三氯生时，根据本发明的袋提供良好的性能。

此外已经确定，当在诸如44的最内子层中存在0.0075％-0.3％重量的三氯生、优选0.075％-0.3％重量的三氯生时，根据本发明的袋提供良好的性能。

现在将描述如何可确定薄片11或薄片12所包含的三氯生的量。

要指出的是，所确定的量以重量/单位面积的这种薄片来表示(在此以mg/m²表示)。

薄片11或12的样品在袋10的包14处被切割。这个样品具有例如1cm²的确定的面积。

然后将样品浸入到丙酮中并且经历超声处理2小时以提取三氯生。

在所获得的溶液中的三氯生浓度然后通过如上所述的液相色谱针对所释放的三氯生的量进行确定。

利用相同的样品重复此剂量测定(利用超声处理浸入丙酮中，之后确定所获得的溶液的浓度)需要的次数，一直到在所获得的溶液中不再检测到三氯生。

然后把在每次剂量测定中确定的三氯生的量相加，以获得初始存在于样品中的三氯生的总量。

这个量最终与样品的表面相关联。

要指出，可例如通过腐蚀或者层离预先去除外层36来确定仅在内层35中的三氯生的量。但是，在此由于在外层36中没有三氯生，因此每单位面积的三氯生的量没有变化。

当然，可在具有或不具有超声处理的情况下利用不同于丙酮的溶剂如二氯甲烷提取样品的三氯生；并且通过另外的方法确定所获得的溶液的浓度，所述另外的方法例如是与具有DAD二极管阵列的UV检测器耦联的高效液相色谱法(HPLC)(HPLC-UV-DAD法)。

在所示的实施例中，三氯生仅在内层35的最内子层44中提供，这是特别经济的。在未示出的变化形式中，在除最内子层之外的其它地方存在三氯生，例如在诸如35的整个内层中，甚至在诸如36的外层中；或者仅薄片11和12之一包含三氯生。

在未示出的变化形式中，聚乙烯(PET)外层36由聚酰胺层、铝层或EVOH/聚丙烯层替换；并且不是进行诸如40和41的薄膜的共层合，而是诸如11和12的薄片完全通过共挤出制造。

在未示出的变化形式中，袋的布置是不同的，例如具有同时用于充填和排出的相同管道；或者不存在用于排出的套管。

根据情况，众多其它变化形式是可能的，并且在这方面要重申的是，本发明并不限于所示出且描述的实施例。