具有抑制RXRα转录活性的香豆素酯化衍生物及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了具有抑制RXRα转录活性的香豆素酯化衍生物及其制备方法和应用，所述香豆素酯化衍生物为以下通式所示的4‑氯甲基‑7‑羟基香豆素酯化衍生物。本发明同时公开了该类4‑氯甲基‑7‑羟基香豆素酯化衍生物的制备方法，使用无水氯化铋作催化剂在无溶剂条件下制备4‑氯甲基‑7‑羟基香豆素，另通过将不同侧链酸制备成相应的酰氯，再与该4‑氯甲基‑7‑羟基香豆素反应制备得到相应化合物。本发明的4‑氯甲基‑7‑羟基香豆素酯化衍生物具有一定的抑制RXRα转录活性的作用，为开发以RXRα为靶点的药物提供了思路。

说明书

技术领域

本发明属于药物化学领域，具体涉及了具有抑制RXRα转录活性的香豆素酯化衍生物及其制备方法和应用。

背景技术

视黄醇X受体(Retinoid X Receptor，RXR)属于非类固醇激素受体超家族，是核受体家族中一个具有多种生物学功能的独特成员，介导着许多激素、维生素A和其它药物的生物学功能。RXR参与了机体从胚胎发育到器官形成，以及成体各种新陈代谢的生理调控等过程。近年来还发现，RXR在不同配体调控下可以进行核浆穿梭，执行不同的生物学功能，如细胞凋亡，增殖和分化等。根据利用的启动子和剪切方式的不同，RXR包括三种亚型。三个亚型的表达部位有很大不同。其中RXRα在肝、肾、脾、胎盘、表皮和各种内脏组织中表达丰富。由于RXR参与许多核受体以及生长和凋亡信号转导通路中关键信号分子的功能调控，该基因被认为是核受体超家族中最有开发前景的重要成员。RXRα作为肿瘤药物开发的一个关键分子靶点，改变它的表达和功能会影响肿瘤细胞的生长。香豆素类化合物具有广泛的生物活性，而该类化合物作为核受体抑制剂的研究报道尚不多见。目前也尚未有具有RXRα转录活性的香豆素酯化衍生物的相关报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供了具有抑制RXRα转录活性的香豆素酯化衍生物及其制备方法和应用。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案之一是：

一类具有抑制RXRα转录活性的香豆素酯化衍生物，所述香豆素酯化衍生物为以下通式(Ⅰ)所示的4-氯甲基-7-羟基香豆素酯化衍生物：

其中，R为山梨酰基已酰基烟酰基苯丙酰基苯氧乙酰基呋喃甲酰基或苯乙酰基

即上述4-氯甲基-7-羟基香豆素酯化衍生物为以下结构式所示的化合物K1、K2、K3、K4、K5、K6、K7：

表1化合物K1、K2、K3、K4、K5、K6、K7的R基及物理性质

本发明解决其技术问题所采用的技术方案之二是：

上述具有抑制RXRα转录活性的香豆素酯化衍生物的制备方法，包括：

1)将间苯二酚和4-氯乙酰乙酸乙酯按照摩尔比1:1.1～1.3的比例混合，加入无水氯化铋作为催化剂，其中无水氯化铋的量为间苯二酚的4.5～5.5％；在无溶剂条件下60～70℃搅拌反应4～6h，反应结束后，按照4-氯乙酰乙酸乙酯与45～55％乙醇水溶液的体积比为1:1.8～4的比例加入45～55％乙醇水溶液，继续在60～70℃搅拌8～12min进行重结晶，冷却至室温，固液分离，固体部分水洗至中性，干燥，得到如式(Ⅱ)所示的4-氯甲基-7-羟基香豆素；

2)在-2～5℃下，以滴入了1～2滴DMF的无水二氯甲烷为溶剂，将有机酸溶于该溶剂中，加入酰化试剂，其中有机酸与酰化试剂的摩尔比为1:1.5～2.5，在-2～5℃下放置25～35min后逐渐恢复至室温，室温(例如为0～25℃)下搅拌反应2～4h，反应结束后除去未反应的酰化试剂，得到的产物如式(Ⅲ)所示；产物用无水二氯甲烷溶解后加入至含有步骤1)得到的4-氯甲基-7-羟基香豆素与缚酸剂的二氯甲烷混合液中，其中4-氯甲基-7-羟基香豆素与缚酸剂的摩尔比为1:1.1～1.3；在碱性条件下室温反应2～4h；反应结束后，调节反应液pH值至中性，二氯甲烷萃取，有机相依次用饱和碳酸氢钠溶液、饱和食盐水洗涤，然后干燥，过滤，浓缩，得到粗产品；粗产品在硅胶色谱柱上提纯，以体积比1～7:1的石油醚-乙酸乙酯混合液为洗脱剂，得到最终产物；所述有机酸为山梨酸、己酸、烟酸、苯丙酸、苯氧乙酸、呋喃甲酸、苯乙酸时分别得到K1、K2、K3、K4、K5、K6、K7。

一实施例中：所述缚酸剂为三乙胺。

一实施例中：所述酰化试剂为草酰氯或二氯亚砜。

上述制备方法的反应式如下式所示：

本发明解决其技术问题所采用的技术方案之三是：

上述具有抑制RXRα转录活性的香豆素酯化衍生物在制备抑制RXRα转录活性的药物和/或抑制剂上的用途。

上述具有抑制RXRα转录活性的香豆素酯化衍生物在制备抗肿瘤药物上的用途。

一实施例中：所述抗肿瘤是通过抑制RXRα转录活性来实现。

本技术方案与背景技术相比，它具有如下优点：

1.本发明提供了一类具有抑制RXRα转录活性的香豆素酯化衍生物的结构及其制备方法。

2.本发明用BiCl₃作为催化剂合成4-氯甲基-7-羟基香豆素，相比传统方法合成，虽然产率稍低，但具有廉价易得，反应时间短，后处理方便，环境污染少等优点。

3.本发明的化合物具有一定的抑制RXRα转录活性的作用，为开发以RXRα为靶点的药物提供了思路。

附图说明

下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。

图1为实施例中得到的化合物K1～K7对9-cis-RA引起的RXRα转录活性激活效应的抑制作用结果，其中纵坐标为9-cis-RA的荧光素酶相对活性。

具体实施方式

下面通过实施例具体说明本发明的内容：

实施例1：制备4-氯甲基-7-羟基香豆素

将间苯二酚(5.5g,0.05mol)，4-氯乙酰乙酸乙酯(9.9g,0.06mol)，无水氯化铋(0.8g，2.5mmol)混于100mL圆底烧瓶中，在无溶剂条件下65℃加热搅拌反应5h，反应结束后，加入50％乙醇水溶液16mL，继续在65℃加热搅拌10min，冷却至室温，抽滤，固体部分水洗至中性，烘干，得到白色固体7.45g，即为4-氯甲基-7-羟基香豆素，产率70％。

4-氯甲基-7-羟基香豆素的NMR数据：

¹H>6):δ4.95(s,2H,CH₂Cl),6.42(s,1H,3-H),6.76(d,1H,J＝2.4Hz,8-H),6.83,6.85(dd,1H,J＝2.4Hz,J＝8.7Hz,6-H),7.67(d,1H,J＝8.7Hz,5-H),10.66(s,1H,OH)ppm

实施例2：制备4-氯甲基-7-山梨酰氧基香豆素(化合物K1)

在0℃下，将山梨酸(0.224g，2.0mmol)置于25mL两颈圆底烧瓶中，滴入2滴DMF，加入10mL无水二氯甲烷(CH₂Cl₂)溶解，用一次性注射器加入草酰氯(0.2mL，4.0mmol)；两颈圆底烧瓶的一个口用橡皮塞塞紧，另一口接尾气吸收装置；冰浴30min后逐渐恢复至室温，室温下搅拌反应2h，反应结束后，减压蒸馏至干除去未反应的草酰氯；产物用2mL>2Cl₂溶解后，用注射器抽取将其加入至10mL的含有4-氯甲基-7-羟基香豆素(0.315g，1.5mmol)和三乙胺(0.208g，1.8mmol)的CH₂Cl₂混合液中，室温反应3h；反应结束后，用1M>

化合物K1的NMR数据：

¹H>6):δ1.87(d,3H,J＝4.5Hz,6'-CH3),5.04(s,2H,CH₂Cl),6.11(d,1H,J＝15.3Hz,2'-H),6.36-6.46(m,2H,3',4'-CHCH),6.68(s,1H,3-H),7.26,7.28(dd,1H,J＝2.2Hz,J＝8.7Hz,6-H),7.37(d,1H,J＝2.2Hz,8-H),7.44-7.50(m,1H,5'-H),7.90(d,1H,J＝8.7Hz,5-H)ppm

实施例3：制备4-氯甲基-7-己酰氧基香豆素(化合物K2)

在0℃下，将己酸(0.232g，2.0mmol)置于25mL两颈圆底烧瓶中，滴入2滴DMF，加入10mL>2Cl₂溶解，用一次性注射器加入草酰氯(0.2mL，4.0mmol)；两颈圆底烧瓶的一个口用橡皮塞塞紧，另一口接尾气吸收装置；冰浴30min后逐渐恢复至室温，室温下搅拌反应2h，反应结束后，减压蒸馏至干除去未反应的草酰氯；产物用2mL>2Cl₂溶解后，用注射器抽取将其加入至10mL的含有4-氯甲基-7-羟基香豆素(0.315g，1.5mmol)和三乙胺(0.208g，1.8mmol)的CH₂Cl₂混合液中，室温反应3h；反应结束后，用1M>

化合物K2的NMR数据：

¹H>6):δ0.90(t,3H,J＝7.0Hz,6'-CH₃),1.29-1.39(m,4H,4',5'-CH₂CH₂),1.63-1.70(m,2H,3'-H),2.62(t,2H,J＝7.5Hz,2'-H),5.04(s,2H,CH₂Cl),6.68(s,1H,3-H),7.21,7.23(dd,1H,J＝2.2Hz,J＝8.7Hz,6-H),7.31(d,1H,J＝2.2Hz,8-H),7.90(d,1H,J＝8.7Hz,5-H)ppm

实施例4：制备4-氯甲基-7-烟酰氧基香豆素(化合物K3)

在0℃下，将烟酸(0.246g，2.0mmol)置于25mL两颈圆底烧瓶中，滴入2滴DMF，加入10mL>2Cl₂溶解，用一次性注射器加入草酰氯(0.2mL，4.0mmol)；两颈圆底烧瓶的一个口用橡皮塞塞紧，另一口接尾气吸收装置；冰浴30min后逐渐恢复至室温，室温下搅拌反应2h，反应结束后，减压蒸馏至干除去未反应的草酰氯；产物用2mL>2Cl₂溶解后，用注射器抽取将其加入至10mL的含有4-氯甲基-7-羟基香豆素(0.315g，1.5mmol)和三乙胺(0.208g，1.8mmol)的CH₂Cl₂混合液中，室温反应3h；反应结束后，用1M>

化合物K3的NMR数据：

¹H>

实施例5：制备4-氯甲基-7-苯丙酰氧基香豆素(化合物K4)

在0℃下，将苯丙酸(0.300g，2mmol)置于25mL两颈圆底烧瓶中，滴入2滴DMF，加入10mL>2Cl₂溶解，用一次性注射器加入草酰氯(0.2mL，4.0mmol)；两颈圆底烧瓶的一个口用橡皮塞塞紧，另一口接尾气吸收装置；冰浴30min后逐渐恢复至室温，室温下搅拌反应2h，反应结束后，减压蒸馏至干除去未反应的草酰氯；产物用2mL>2Cl₂溶解后，用注射器抽取将其加入至10mL的含有4-氯甲基-7-羟基香豆素(0.315g，1.5mmol)和三乙胺(0.208g，1.8mmol)的CH₂Cl₂混合液中，室温反应3h；反应结束后，用1M>

化合物K4的NMR数据：

¹H>6):δ2.94-3.03(m,4H,CH₂CH₂),5.04(s,2H,CH₂Cl),6.68(s,1H,3-H),7.14,7.16(dd,1H,J＝2.2Hz,J＝8.7Hz,6-H),7.23(d,1H,J＝2.2Hz,8-H),7.22-7.26(m,2H,aromatic,8-H),7.30-7.35(m,4H,aromatic),7.89(d,1H,J＝8.7Hz,5-H)ppm

实施例6：制备4-氯甲基-7-苯氧乙酰氧基香豆素(化合物K5)

在0℃下，将苯氧乙酸(0.304g，2mmol)置于25mL两颈圆底烧瓶中，滴入2滴DMF，加入10mL>2Cl₂溶解，用一次性注射器加入草酰氯(0.2mL，4.0mmol)；两颈圆底烧瓶的一个口用橡皮塞塞紧，另一口接尾气吸收装置；冰浴30min后逐渐恢复至室温，室温下搅拌反应2h，反应结束后，减压蒸馏至干除去未反应的草酰氯；产物用2mL>2Cl₂溶解后，用注射器抽取将其加入至10mL的含有4-氯甲基-7-羟基香豆素(0.315g，1.5mmol)和三乙胺(0.208g，1.8mmol)的CH₂Cl₂混合液中，室温反应3h；反应结束后，用1M>

化合物K5的NMR数据：

¹H>6):δ5.04(s,2H,CH₂Cl),5.13(s,2H,2’-H),6.70(s,1H,3-H),7.00-7.07(m,3H,aromatic),7.29,7.32(dd,1H,J＝2.24Hz,J＝8.72Hz,6-H),7.32-7.36(m,2H,aromatic),7.40(d,1H,J＝2.24Hz,8-H),7.94(d,1H,J＝8.72Hz)ppm

实施例7：制备4-氯甲基-7-呋喃甲酰氧基香豆素(化合物K6)

在0℃下，将呋喃甲酸(0.224g，2mmol)置于25mL两颈圆底烧瓶中，滴入2滴DMF，加入10mL>2Cl₂溶解，用一次性注射器加入草酰氯(0.2mL，4.0mmol)；两颈圆底烧瓶的一个口用橡皮塞塞紧，另一口接尾气吸收装置；冰浴30min后逐渐恢复至室温，室温下搅拌反应2h，反应结束后，减压蒸馏至干除去未反应的草酰氯；产物用2mL>2Cl₂溶解后，用注射器抽取将其加入至10mL的含有4-氯甲基-7-羟基香豆素(0.315g，1.5mmol)和三乙胺(0.208g，1.8mmol)的CH₂Cl₂混合液中，室温反应3h；反应结束后，用1M>

化合物K6的NMR数据：

¹H>6):δ5.07(s,2H,CH₂Cl),6.71(s,1H,3-H),6.83,6.84(dd,1H,J＝1.7Hz,J＝3.5Hz,4’-H),7.39,7.41(dd,1H,J＝2.24Hz,J＝8.7Hz,6-H),7.52(d,1H,J＝2.2Hz,8-H),7.64(d,1H,J＝3.5Hz,3’-H),7.95(d,1H,J＝8.7Hz,5-H),8.15(d,1H,J＝1.7Hz,5’-H)ppm

实施例8：制备4-氯甲基-7-苯乙酰氧基香豆素(化合物K7)

在0℃下，将苯乙酸(0.272g，2mmol)置于25mL两颈圆底烧瓶中，滴入2滴DMF，加入10mL>2Cl₂溶解，用一次性注射器加入草酰氯(0.2mL，4.0mmol)；两颈圆底烧瓶的一个口用橡皮塞塞紧，另一口接尾气吸收装置；冰浴30min后逐渐恢复至室温，室温下搅拌反应2h，反应结束后，减压蒸馏至干除去未反应的草酰氯；产物用2mL>2Cl₂溶解后，用注射器抽取将其加入至10mL的含有4-氯甲基-7-羟基香豆素(0.315g，1.5mmol)和三乙胺(0.208g，1.8mmol)的CH₂Cl₂混合液中，室温反应3h；反应结束后，用1M>

化合物K7的NMR数据：

¹H>3):δ3.92(s,2H,2'-H),4.64(s,2H,CH₂Cl),6.64(s,1H,3-H),7.09-7.11(dd,1H,J＝2.24Hz,J＝8.70Hz,6-H),7.16(d,1H,J＝2.24Hz,,8-H),7.33-7.43(m,5H,aromatic),7.66(d,1H,J＝8.70Hz,5-H)ppm

上述实施例可实现下述实验例之技术效果：

实验例：化合物K1～K7对RXRα转录活性的抑制作用测试：

荧光素酶报告基因技术：Luciferase报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光(bioluminescence)。然后可以通过荧光测定仪也称化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系，可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。是检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用的一种检测方法。

本实验例之中采用荧光素酶报告基因的手段，在细胞内转入RXRα相关的荧光素酶报告基因的体系，通过将各个化合物分别和9-cis-RA(9-cis-RA为经典的RXRα的激活剂)共处理细胞12h，再通过发光强度检测这些化合物是否可以抑制9-cis-RA引起的RXRα转录活性激活效应。从而确定化合物是否能够抑制RXRα的转录活性。

具体地，细胞被提前用化合物K1～K7(20μM)分别和RA(0.1μM)共处理12h，收集细胞，用荧光素酶报告基因活性检测RXRα转录活性。9-cis-RA的荧光素酶活性作为空白对照。数据通过mean+SD(n＝3)模式处理，结果用实验组与空白对照组的比值表示，***p＜0.001。实验结果如图1所示。

实验结果可以进一步由表2说明：

表2化合物K1～K7对9-cis-RA引起的RXRα转录活性激活效应的抑制作用

上述实验结果显示：化合物K1～K7对9-cis-RA引起的RXRα转录活性激活效应均有抑制作用，且抑制率均达到30％以上，化合物K5对9-cis-RA引起的RXRα转录活性激活效应的抑制效果最好，抑制率达到45.31％。

由上述实验可知，本发明的化合物具有一定的抑制RXRα转录活性的作用，为开发以RXRα为靶点的药物提供了思路。

以上所述，仅为本发明较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。