一种金钱蒲的组织培养繁育方法

摘要

一种金钱蒲的组织培养方法，包括外植体消毒、诱导和增殖培养与继代培养、生根培养，以及炼苗与移栽的步骤。该方法繁殖速度快，根苗健壮，大大节约了成本和生产时间，还解决了常规繁育体系生产的种苗亲本来源复杂，种苗质量不稳定的难题，适宜标准化、工厂化规模化生产，为市场提供了统一标准的优良种苗，克服了金钱蒲种苗无法周年进行生产的难点。

说明书

技术领域

本发明属于组织培养领域，具体涉及一种金钱蒲的组织培养繁育方法。

背景技术

金钱蒲(AcorusgramineusSoland)是天南星科菖蒲属，多年生挺水草本植物，分枝丛生。产江苏、浙江、江西、湖北、湖南、广东、广西、陕西、甘肃、四川、贵州、云南。金钱蒲常绿、叶丛翠绿而具光泽，端庄秀丽，具有香气，适宜水景岸边及水体绿化。也可盆栽观赏或作布景用。叶、花序还可作插花材料。全株芳香，可作香料或驱蚊虫；根茎可入药，味辛，性温。化湿开胃，开窍豁痰，醒神益智。除作挺水植物观赏外，还可作沉水植物或地被植物观赏，是一种新优的观叶水生花卉。具有较高的观赏及经济价值。随着室内观赏植物的发展，其产品供应一直处于紧缺的状况。

金钱蒲繁殖方法主要是根茎分株繁殖，但分株繁殖数量少，易损坏株型，恢复很慢且受季节限制，不能在短期内获得大量种苗；难以进行规模化、标准化生产和大面积的推广。因此探索一种快速有效金钱蒲的繁育方法势在必行。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于克服现有的根茎繁殖的传统繁殖种苗的方法，导致繁殖速度慢，繁殖系数低，材料要求高、用量大、难以规模化生产等缺陷和不足，从而提供一种能适宜金钱蒲工厂化组培快繁的方法及专用培养基，以满足金钱蒲优质种苗的大规模生产需要。

即本发明的第一目的在于提供一种金钱蒲的组织培养方法，包括以下步骤：

1)外植体消毒：对金钱蒲外植体进行消毒；

2)诱导和增殖培养：将消毒的金钱蒲外植体接入到诱导培养基中，培养至长成茎尖苗，继续培养诱导增殖丛生芽的分化；

3)继代培养：将分化诱导的外植体转接到增殖培养基中，继代培养25～30d后，转入相同增殖培养基相同条件下继代1次～2次，将培养出诱导分化的苗转入步骤(4)培养；未成苗的丛生芽转入增殖培养基中，并在与继代培养所述的相同的培养条件下继续培养，待培养出诱导分化的苗转入步骤(4)培养；

4)生根培养：将获得的苗接种到生根培养基中，培养至植株基部长出根；

5)炼苗与移栽：将植株基部有根的幼苗进行常规炼苗，消毒后移栽至装育苗袋中生长，即得金钱蒲移栽苗。

优选地，在本发明的所述金钱蒲的组织培养方法中，所述诱导培养基与增殖培养基相同，所述诱导培养、增殖培养与继代培养、生根培养的培养条件相同。

优选地，在本发明的所述金钱蒲的组织培养方法中，所述步骤1)的金钱蒲外植体为金钱蒲根茎两侧萌发的茎尖。

优选地，在本发明的所述金钱蒲的组织培养方法中，所述步骤1)的消毒方法为用洗衣粉清洗干净，流动的自来水冲洗1小时，再用72％硫酸链霉素浸泡3小时。再用在超净环境下用质量分数为75％的酒精浸泡30-40s后，依次放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中消毒20min，吐温两滴，次氯酸钠混合液中消毒15min，再用无菌水冲洗4～5次，每次1～2min；其中所述的次氯酸钠混合液是由次氯酸钠溶液加入吐温20混合而成，次氯酸钠溶液与吐温20的配比是：质量分数为2％的次氯酸钠溶液100ml中加入2滴吐温20。

优选地，在本发明的所述金钱蒲的组织培养方法中，所述诱导培养基、增殖培养基的配方为:

MS基本培养液

优选地，在本发明的所述金钱蒲的组织培养方法中，所述诱导培养、增殖培养与继代培养、生根培养的培养条件为在温度为25℃±2℃，光照强度为1800lx～2000lx，，光照时间为10～12h/d；所述诱导培养、生根培养的条件为温度为25℃±2℃，光照强度为2000lx，，光照时间为10～12h/d。

优选地，在本发明的所述金钱蒲的组织培养方法中，所述步骤4)中生根培养基的配方为

MS基本培养液

因此，本发明还提供了用于金钱蒲的组织培养的培养基，包括述诱导培养基、增殖培养基与生根培养基。

优选地，本发明的用于金钱蒲的组织培养的培养基中，所述诱导培养基、增殖培养基的配方为:

MS基本培养液

所述生根培养基的配方为

MS基本培养液

本发明与现有技术相比，本发明具有以下优点：

1、本发明所述的金钱蒲繁育的专用培养基和金钱蒲的繁育方法，配置了特别适宜金钱蒲的组培繁育的专用培养基和培养条件及方法，采用该专用培养基及方法繁殖速度快，25～30天为一个周期，一个周期繁殖倍数可达4～5倍；生根培养25～30天左右，每株植株即可生长出5～7条根，其苗健壮，根系发达，利于出瓶后生长。

2、本发明首次提出了对整个金钱蒲种苗生产技术流程中关键环节的技术方案，同步进行芽诱导和增殖培养，继代培养基与芽诱导和增殖培养基相同，培养条件基本相同，既达到了好的效果又简化了组培技术的培养程序，大大节约了成本和生产时间，还解决了常规繁育体系生产的种苗亲本来源复杂，种苗质量不稳定的难题，本发明方法，能使种苗性状稳定，种苗来源单一，适宜标准化、工厂化规模化生产，为市场提供了统一标准的优良种苗。

3、本发明方法生产的无菌生根苗直接移栽进入育苗袋中管理，省去了组培苗营养钵移栽的环节，移栽成活的种苗便于运输，移栽苗适应性强，摘去育苗袋后即可直接栽种。

4、本发明繁育方法在培养室内即可实现周年生产，既节约了土地资源，又提高了经济效益，克服了金钱蒲种苗无法周年进行生产的难点。

说明书附图

图1为本发明的一个实施例中的金钱蒲外植体消毒及诱导外观图；

图2为本发明的一个实施例中的金钱蒲继代培养图；

图3为本发明的一个实施例中的金钱蒲生根培养图；

图4为本发明的一个实施例中的金钱蒲炼苗与移栽效果图。

具体实施方式

下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

(1)如图1所示，取健康的金钱蒲根茎两侧萌发的茎尖为外植体用洗衣粉清洗干净，流动的自来水冲洗1小时，再用72％硫酸链霉素浸泡3小时。再用在超净环境下用质量分数为75％的酒精浸泡40s后，依次放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中消毒20min，吐温两滴，次氯酸钠混合液中消毒15min，吐温两滴，再用无菌水冲洗4～5次，每次1～2min；其中所述的次氯酸钠混合液是由次氯酸钠溶液加入吐温20混合而成，次氯酸钠溶液与吐温20的配比是：质量分数为2％的次氯酸钠溶液100ml中加入2滴吐温20。

(2)诱导和增殖培养：如图2所示，将步骤(1)获得的金钱蒲根茎的侧株的萌发的无菌茎尖接入盛有下列诱导增殖培养基的培养瓶中：

MS基本培养液

在温度为25℃条件下培养20天，光照强度为2000lx，光照时间为12h/d的条件下，培养至长成茎尖苗，继续培养诱导增殖丛生芽的分化；

(3)继代培养：将步骤(2)分化诱导的芽转接到盛有与步骤(2)所述的诱导增殖培养基配方相同的新的诱导增殖培养基的培养瓶中，在光照强度为2000lx，温度为25℃，光照时间为12h/d的条件下，继代培养30天后，再转接到盛有与步骤(2)所述的诱导增殖培养基配方相同的新的诱导增殖培养基的培养瓶中，并在与继代培养所述的相同的培养条件下继代培养30天，如此反复，待增殖基数达到所需的数量时，将培养出诱导分化的苗转入步骤(4)培养；继代培养的次数可以根据需要的组培苗的数量而定，可以只继代培养一次，也可以继代培养2次以上。

未成苗的丛生芽转接到盛有与步骤(2)所述的诱导增殖培养基配方相同的新的诱导增殖培养基的培养瓶中，并在与继代培养所述的相同的培养条件下继续培养，待成苗后，将培养出的苗转入步骤(4)培养；

(4)生根培养基：将步骤(3)获得的苗接种到盛有下列生根培养基的培养瓶中：

MS基本培养液

如图3所示，在光照强度为2000lx，温度为25℃，光照时间为12h/d的条件下培养至植株基部长出根；

(5)如图4所示，将步骤(4)植株已长有根的培养瓶置于大棚内进行常规炼苗5天，再将培养瓶内的苗取出，按常规洗净苗上的培养基，放入质量分数为0.1％的多菌灵溶液中消毒2min后，移栽至装有下列基质的育苗袋中，所述基质由泥炭、珍珠岩和蛭石混合而成，泥炭、珍珠岩和蛭石的质量比为：泥炭：珍珠岩：蛭石＝7:2:1；在喷灌喷水、遮阴和常规施肥管理条件下，生长35天后，即得金钱蒲移栽苗。

实施例2

(1)实施例2除以下措施不同外其余措施与实施例1相同，不再赘述。

取健康的金钱蒲根茎两侧萌发的茎尖为外植体，在超净环境下用质量分数为75％的酒精浸泡30s后，依次放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中消毒18min，吐温两滴，次氯酸钠混合液中消毒16min，吐温两滴。

(2)诱导和增殖培养：将步骤(1)获得的金钱蒲根茎的侧株的萌发的无菌茎尖接入盛有下列诱导增殖培养基的培养瓶中：

MS基本培养液

在温度为23℃条件下培养15天，光照强度为1800lx，光照时间为10h/d的条件下，培养至长成茎尖苗，继续培养诱导增殖丛生芽的分化；

(3)继代培养：将步骤(2)分化诱导的芽转接到盛有与步骤(2)所述的诱导增殖培养基配方相同的新的诱导增殖培养基的培养瓶中，在光照强度为1800lx，温度为23℃，光照时间为10h/d的条件下，继代培养25天后，再转接到盛有与步骤(2)所述的诱导增殖培养基配方相同的新的诱导增殖培养基的培养瓶中，并在与继代培养所述的相同的培养条件下继代培养25天，如此反复，待增殖基数达到所需的数量时，将培养出诱导分化的苗转入步骤(4)培养；未成苗的丛生芽转接到盛有与步骤(2)所述的诱导增殖培养基配方相同的新的诱导增殖培养基的培养瓶中，并在与继代培养所述的相同的培养条件下继续培养，待成苗后，将培养出的苗转入步骤(4)培养；

(4)生根培养基：将步骤(3)获得的苗接种到盛有下列生根培养基的培养瓶中：

MS基本培养液

在光照强度为1800lx，温度为23℃，光照时间为10h/d的条件下培养至植株基部长出根；

(5)将步骤(4)植株已长有根的培养瓶置于大棚内进行常规炼苗3天，再将培养瓶内的苗取出，按常规洗净苗上的培养基，放入质量分数为0.2％的多菌灵溶液中消毒1min后，移栽至装有下列基质的育苗袋中，所述基质由泥炭和珍珠岩混合而成，泥炭、腐质土、珍珠岩和蛭石的质量比为：泥炭：珍珠岩＝7:3:1:0.5，在喷灌喷水、遮阴和常规施肥管理条件下，生长40天后，即得金钱蒲移栽苗。

以上各实施例繁殖速度快，25～30天为一个繁殖周期，一个周期繁殖倍数可达4～5倍；生根培养25～30天左右，每株植株即可生长出5～7条根，其苗健壮，根系发达，利于出瓶后生长

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。