一种用于PCR扩增快速提取丝状真菌DNA技术

摘要

本发明涉及快速提取丝状真菌DNA技术，是一种用于PCR扩增快速提取丝状真菌DNA技术；按下述方法进行：1、在1.5mL离心管中加入裂解液为0.25％SDS30μL。2、尽可能少地挑取对数生长期中期未形成孢子的真菌菌丝加入1.5mL离心中，使菌丝在液面以下。3、盖紧1.5mL离心管盖子，100℃沸水浴10min，水浴过程中盖子崩开的离心管，弃之。4、水浴完成后迅速把离心管插入冰中，5min。5、离心管12000rpm离心3min，上清液即丝状真菌DNA，即可用于PCR扩增。较传统提取技术需4‑8小时才能完成，本发明提取丝状真菌DNA仅需0.5h。

说明书

技术领域

本发明涉及丝状真菌提取DNA技术领域，是一种快速提取丝状真菌DNA技术。

背景技术

随着对环境微生物研究的深入，尤其是食品有益微生物或有害微生物研究的深入，以及食品微生物对人体健康认识的提高，开始研究食品中微生物的物种组成规律，尤其丝状真菌。但研究丝状真菌物种组成规律的一个重要前提就是提取丝状真菌的DNA，而后通过PCR扩增18S或26S rDNA，测序后对丝状真菌进行种属鉴定。然而，由于目前对食品中丝状真菌DNA提取速度慢，提取效果不好，使得从事食品中丝状真菌研究者十分头疼。食品丝状真菌DNA提取难度较大。目前，DNA提取方法大多采用，溶菌酶法，液氮研磨法，SDS(十二烷基磺酸钠)，反复冻融法，或直接使用商业化得试剂盒。这些方法都有各自的不足，但提取时间长，费用高昂，是这些方法的共同不足之处。目前，丝状真菌DNA的提取方法步骤繁多，费用高昂。本发明提供一种快速简便，成本低的丝状真菌DNA提取技术。

发明内容

本发明提供了一种食品微生物丝状真菌DNA的提取方法，克服现有技术的不足，能有效解决食品微生物丝状真菌DNA提取时间长，费用昂贵的缺点。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

一种快速提取丝状真菌DNA的方法，选取对数生长期未形成孢子的真菌菌丝，用裂解液进行裂解提取DNA。

所述裂解液为十二烷基磺酸钠，质量百分比浓度为

提取丝状真菌DNA的方法包括以下步骤：

第一步，在离心管中加入质量百分比浓度为0.25至1SDS裂解液中；

第二步，挑取对数生长期未形成孢子的真菌菌丝加入所述SDS裂解液中；

第三步，盖紧离心管，沸水浴5-10min；

第四步，沸水浴完成后把离心管放入冰中，冰浴5-10min；

第五步，最后5000-12000rpm离心5-10min，取上清液即为丝状真菌的DNA溶液。

本发明与现有技术相比具有的有益效果为：本发明提取的丝状真菌DNA技术可广泛应用于各种食品微生物丝状真菌DNA的提取，提取时间短，在30min内可完成，不需要昂贵的试剂，提取成本。尽可能的少挑挑取菌丝，以免菌丝中的其他成分含量过高对PCR反应产生影响。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

1.在1.5mL离心管中加入裂解液为0.25％SDS 30μL。

2.尽可能少(挑取太多的菌丝影响PCR扩增)地挑取对数生长期中期未形成孢子的真菌菌丝(形成孢子的菌丝不可用)加入1.5mL离心中，使菌丝在液面以下。

3.盖紧1.5mL离心管盖子，100℃沸水浴10min，水浴过程中盖子崩开的离心管，弃之。

4.水浴完成后迅速把离心管插入冰中，5min。

5.离心管12000rpm离心3min，上清液即丝状真菌DNA，即可用于PCR扩增。

本发明可用其他的不违背本发明的精神或主要特征的具体形式来概述。因此，无论从那一点来看，本发明的上述实施方案都只能认为是对本发明的说明而不能限制发明，权利要求书指出了本发明的范围，而上述的说明并未指出本发明的范围，因此，在与本发明的权利要求书相当的含义和范围内的任何变化，都应认为是包括在权利要求书的范围内。