一种甲磺酸多拉司琼注射液有关物质的检测方法

摘要

本发明公开了一种甲磺酸多拉司琼注射液有关物质的高效液相色谱检测方法，采用硅胶表面键合C8官能团的固定相为填充剂色谱柱，以磷酸盐缓冲液‑乙腈‑甲醇和乙腈为双流动相，梯度洗脱，该方法可以快速有效的分离甲磺酸多拉司琼注射液主要的制剂工艺杂质与降解杂质。为检控甲磺酸多拉司琼注射液有关物质提供了一种快速有效的检测方法，从而保证甲磺酸多拉司琼注射液产品质量和用药安全。

说明书

技术领域

本发明属于药物分析检测领域，具体涉及一种甲磺酸多拉司琼注射液有关物质的高效液相色谱检测方法。

背景技术

5-HT3受体拮抗剂应用于治疗化疗导致的恶心和呕吐，其机制是化疗实际可导致大量来自肠粘膜肠嗜铬细胞释放5-HT，从而特异性的刺激迷走传入神经上的5-HT3受体，使迷走神经传入冲动增多，同时在化疗药物的作用下，伴有局部脑最后区的5-HT神经元释放5-HT，再刺激化学感受器触发区的5-HT3受体产生冲动，触发催吐反射。由于5-HT3受体拮抗剂的结构与5-HT极其相似，可与5-HT竞争性的结合5-HT3受体，阻止5-HT引起的呕吐反射冲动的传导。因此，5-HT3受体拮抗剂通过竞争受体有效的阻止外周和中枢的5-HT3受体来抑制或减少恶心和呕吐反射的发生。同时5-HT3受体拮抗剂一类药物自身高效，耐受性良好，无椎体外系副作用等优点。

甲磺酸多拉司琼是一种5-HT3受体拮抗剂，强效且具有高度选择性，对其他的5-HT受体，a或β肾上腺素能受体，多巴胺受体等均无明显作用。耐受性好，LD50值高，安全性好，更加保证其在临床应用中具有广阔的市场前景。

但是，据FDA报道：甲磺酸多拉司琼注射液(Dolasetron Mesylate Injection)具有明显的心脏节律的副作用，而其片剂具有良好的安全性。在样品检测过程中，发现注射剂中存在主成分与甘露醇产生的特定杂质。USP36中仅仅收录了多拉司琼原料药的有关物质检测方法，而该USP方法无法对该特定杂质进行有效检测。杨秀丽等在《国产甲磺酸多拉司琼有关物质的测定及其稳定性的初步研究》(药物分析杂志，2008,28(1))中将USP方法略作改进，仍然保留均含有乙腈的双流动相，对甲磺酸多拉司琼注射液进行高温、高湿、酸、碱破坏后进行检测，因为并未检测出特殊杂质，因而认为高温对甲磺酸多拉司琼注射液并无影响。专利CN201110295660.3也提供了类似的检测方法，对各处方下的注射液进行检测，但仍未能检测到新的特有杂质，并认为多羟基物质如甘露醇等的增加可以增强甲磺酸多拉司琼注射液的稳定性。本发明的发明人发现，采用现有方法并不能很好的将甲磺酸多拉司琼注射液中的一些特殊有关杂质分离和检测出来，因而影响对杂质的判断和控制。

因此本发明能够弥补甲磺酸多拉司琼注射液在实际生产和储藏过程中产生的特定杂质进行很好的检测分析，从而保证甲磺酸多拉司琼注射液产品的质量和患者的安全用药。所以本发明对甲磺酸多拉司琼注射液的有关物质检测和控制非常具有实用价值。

发明内容

鉴于在生产和储存过程中，甲磺酸多拉司琼注射液可能产生具有心脏节律副作用的特殊有关杂质，而现有方法，包括USP(美国药典)方法均不能提供有效的分离和检测该有关杂质的方法，本发明的目的在于提供一种甲磺酸多拉司琼注射液有关物质的高效液相色谱检测方法，能有效检测甲磺酸多拉司琼注射液特殊有关物质，从而保证药物的安全性、质量可控性。

本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：

一种甲磺酸多拉司琼注射液有关物质的检测方法，该方法为高效液相色谱法，其特征在于，色谱条件为：以硅胶表面键合C8官能团的填充剂为色谱柱固定相；以pH为6.5～7.5的缓冲液-乙腈为流动相A，缓冲液和乙腈的体积比为(900～1100):(50～56)，以甲醇为流动相B，按照下表进行梯度洗脱：

根据本发明的一些具体实施例，所述梯度洗脱按照下表进行：

所述硅胶表面键合C8官能团的填充剂为色谱柱固定相，优选的色谱柱为ZORBAXSB C8柱(250×4.6mm)。

作为优选，缓冲液和乙腈的体积比为(900～1100):(50～56)，更优选为1000:53。

作为优选，所述缓冲液pH为6.8～7.0。

根据本发明的一些实施例，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液或乙酸盐缓冲液。

所述磷酸盐优选为磷酸二氢钠或磷酸氢二铵，在本发明的一些实施例中，以0.01mol/L的磷酸二氢钠溶液用1mol/L的氢氧化钠调pH至6.5～7.5，更优的调pH至6.8～7.0，缓冲液和乙腈的体积比为1000:53。

根据本发明的一些实施例，流动相流速为1.0ml/min～2.0ml/min，优选为1.5ml/min；其中色谱柱的柱温为20～30℃，优选为25℃；采用的检测器为紫外检测器，检测波长为200nm～220nm，优选为210nm。

在本发明的一个实施方案中，提供了一种甲磺酸多拉司琼注射液有关物质的检测方法，具体步骤如下

a).取甲磺酸多拉司琼注射液用20％乙腈稀释制成每1ml中约甲磺酸多拉司琼6.25mg的样品溶液；

b).取甲磺酸多拉司琼注射液150℃破坏5小时后用20％乙腈稀释制成每1ml中约甲磺酸多拉司琼6.25mg高温降解溶液；

c).取a)、b)的溶液100μl，注入液相色谱仪，按所述的色谱条件测定，记录色谱图，完成有关物质的测定。

甲磺酸多拉司琼注射液有关物质主要是杂质，本发明采用高效液相色谱法用C8柱对其进行分离，采用不同于现有方法和USP方法的流动相以及洗脱程序，实现了杂质的有效分离。并通过高温加速甲磺酸多拉司琼注射液降解增加降解杂质，来考察本发明方法的专属性。

本发明的高温加速试验将甲磺酸多拉司琼注射液在150℃破坏5小时，用本发明的检测方法发现其有关杂质明显增加，而且本发明的方法在样品溶液和加速降解溶液中都有效的分离和检测出现有方法不能分离的杂质(参见附图1-7中的杂质1-6)，可见甲磺酸多拉司琼注射液并不是对热稳定的，加速试验的条件和检测手段对检测结果有重要影响。由于现有方法的局限性，并不能有效分离和检测出甲磺酸多拉司琼注射液中杂质1-6，因此不能对所述杂质进行研究和有效控制，也影响药品储存的指导的正确性。

通过对比试验，本发明的方法检测出采用现有技术方法不能有效分离和检测到的杂质，这对确定影响甲磺酸多拉司琼注射液质量的因素，从而调整甲磺酸多拉司琼注射液的生产工艺和储藏条件，减少最终产品中杂质含量，保证产品质量和患者用药安全具有十分重要的意义。

附图说明

图1为实施例1甲磺酸多拉司琼注射液有关物质的HPLC图；

图2为实施例1甲磺酸多拉司琼注射液高温降解有关物质的HPLC图；

图3为对比试验1下甲磺酸多拉司琼注射液有关物质的HPLC图；

图4为对比试验1下甲磺酸多拉司琼注射液高温降解有关物质的HPLC图；

图5为对比试验2下甲磺酸多拉司琼注射液高温降解有关物质的HPLC图；

图6为对比试验3下甲磺酸多拉司琼注射液高温降解有关物质的HPLC图；

图7为对比试验4下甲磺酸多拉司琼注射液高温降解有关物质的HPLC图。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清晰明白，下面结合具体实施方式对本方面进一步的详细说明。

实施例1

检测仪器与色谱条件

检测仪器：岛津LC-20AT高效液相色谱仪

色谱条件：色谱柱为ZORBAX SB C8柱(250×4.6mm)，色谱柱柱温为25℃，采用紫外检测器，检测波长设置为210nm；流动相流速为1.5ml/min；以磷酸缓冲盐(0.01mol/L的磷酸二氢钠溶液用1mol/L的氢氧化钠调pH置6.8～7.0)-乙腈(1000:53)为流动相A，以甲醇为流动相B，洗脱梯度为：

实验步骤

取甲磺酸多拉司琼注射液用20％乙腈稀释制成每1ml中约甲磺酸多拉司琼6.25mg的样品溶液；取甲磺酸多拉司琼注射液于150℃破坏5小时后用20％乙腈稀释制成每1ml中约甲磺酸多拉司琼6.25mg高温降解样品溶液。

取样品溶液和高温降解样品溶液100μl，注入液相色谱仪，按所述的色谱条件测定，记录色谱图，完成有关物质的测定；图1为样品溶液的HPLC图，图2为高温降解样品的HPLC图。

从检测结果可看出，本发明方法对甲磺酸多拉司琼注射液有关物质均能有效分离，通过高温降解使降解杂质增大后，仍能实现杂质的有效分离，方法专属性好。

对比试验1(甲磺酸多拉司琼USP标准条件)

检测仪器与色谱条件

检测仪器：岛津LC-20AT高效液相色谱仪

色谱条件：色谱柱为ZORBAX SB C8柱(250×4.6mm)，色谱柱柱温为25℃，采用紫外检测器，检测波长设置为210nm；流动相流速为1.5ml/min；以磷酸缓冲盐(0.01mol/L的磷酸氢二铵溶液用2mol/L的磷酸调pH置7.0)-乙腈(1000:53)为流动相A，以磷酸缓冲盐(0.01mol/L的磷酸氢二铵溶液用2mol/L的磷酸调pH置7.0)-乙腈(295:795)为流动相B，洗脱梯度为：

实验步骤：取甲磺酸多拉司琼注射液于150℃破坏5小时后用20％乙腈稀释制成每1ml中约甲磺酸多拉司琼6.25mg高温降解样品溶液；另取甲磺酸多拉司琼注射液用20％乙腈稀释制成每1ml中约甲磺酸多拉司琼6.25mg的样品溶液。

取高温降解样品溶液100μl，注入液相色谱仪，按所述的色谱条件测定，记录色谱图，完成有关物质的测定；图3为此条件下的样品HPLC图，图4为此条件下的高温降解样品HPLC图。

从检测结果可看出，主峰前后的杂质均未实现有效分离，不能达到分离要求，USP标准中原料所用色谱条件是不能实现注射液有关物质的分离的。

对比试验2

检测仪器与色谱条件

检测仪器：岛津LC-20AT高效液相色谱仪

色谱条件：色谱柱为ZORBAX SB C8柱(250×4.6mm)，色谱柱柱温为25℃，采用紫外检测器，检测波长设置为210nm；流动相流速为1.5ml/min；以磷酸缓冲盐(0.01mol/L的磷酸二氢钠溶液用1mol/L的氢氧化钠调pH置6.8～7.0)-乙腈(1000:53)为流动相A，以甲醇为流动相B，洗脱梯度为：

实验步骤：按对比实验1方法配制系统溶液。

取高温降解样品溶液100μl，注入液相色谱仪，按所述的色谱条件测定，记录色谱图，完成有关物质的测定；图5为此条件下的高温降解样品HPLC图。

从检测结果可看出，主峰后的杂质实现基线分离，但主峰前的杂质均未实现有效分离，不能达到分离要求。

对比试验3

检测仪器与色谱条件

检测仪器：岛津LC-20AT高效液相色谱仪

色谱条件：色谱柱为ZORBAX SB C8柱(250×4.6mm)，色谱柱柱温为25℃，采用紫外检测器，检测波长设置为210nm；流动相流速为1.5ml/min；以磷酸缓冲盐(0.01mol/L的磷酸二氢钠溶液用1mol/L的氢氧化钠调pH置6.8～7.0)-乙腈(1000:53)为流动相A，以甲醇为流动相B，洗脱梯度为：

时间(min) A(％)B(％)

0 75 25

9010 95

实验步骤：按对比实验1方法配制系统溶液。

取高温降解样品溶液100μl，注入液相色谱仪，按所述的色谱条件测定，记录色谱图，完成有关物质的测定；图6为此条件下的高温降解样品HPLC图。

从检测结果可看出，主峰前的杂质实现基线分离，但主峰后的杂质均未实现有效分离，不能达到分离要求。

对比试验4

检测仪器与色谱条件

检测仪器：岛津LC-20AT高效液相色谱仪

色谱条件：色谱柱为ZORBAX SB C8柱(250×4.6mm)，色谱柱柱温为25℃，采用紫外检测器，检测波长设置为210nm；流动相流速为1.5ml/min；以磷酸缓冲盐(0.01mol/L的磷酸二氢钠溶液用1mol/L的氢氧化钠调pH置6.8～7.0)-乙腈(1000:53)为流动相A，以甲醇为流动相B，洗脱梯度为：

实验步骤：按对比实验1方法配制系统溶液。

取高温降解样品溶液100μl，注入液相色谱仪，按所述的色谱条件测定，记录色谱图，完成有关物质的测定；图7为此条件下的高温降解样品HPLC图。

从检测结果可看出，主峰后的杂质基本实现基线分离但主峰前的杂质任有两个未实现有效分离，不能达到分离要求。

通过对比研究可见，本发明的检测方法专属性良好，能达到检测要求，在检测浓度下能有效的对甲磺酸多拉司琼注射液有关物质进行检测。所以本发明用于甲磺酸多拉司琼注射液有关物质检测是一行之有效的方法。

同时，应当指出，对于本领域内的技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，仍可做出若干改进和润色，这些改进和润色也应视为本发明的保护范围。