基于酶切连接从未知基因组中分离已知序列侧翼序列的方法

摘要

本发明提供了一种提供基于酶切连接从未知基因组中分离已知序列侧翼序列的方法，合成的接头引物能够互补且具有与某些酶切位点相同粘端，通过变性退火反应形成对应酶切位点的连接接头。此外本发明还公布了边酶切边连接构建目的基因侧翼序列文库的方法，通过2‑3轮巢式PCR精确的分离出目的基因的侧翼序列，可以解决无基因组参照动植物获得基因组信息困难、耗时、以及精准度较差等难题，同时，该方法对待分离基因所属的物种没有选择性，其核心技术环节接头的制备有多种变化模式，且能够通过电泳等方法快速简单的鉴别假阳性，能够高效、快速、廉价的从未知基因组中分离出目标基因的序列信息。