一种基于CRISPR/Cas9高通量技术筛选药物靶点基因的方法

摘要

本发明涉及一种基于CRISPR/Cas9高通量技术筛选药物靶点基因的方法，首先建立sgRNA文库；然后用慢病毒包装sgRNA文库，并收集病毒；之后在癌细胞系中筛选sgRNA文库；再提取筛选所得细胞及筛选前细胞的基因组DNA；最后富集基因组DNA中的sgRNA。与现有技术相比，本发明对CRISPR/Cas细胞的筛选过程做了改进，利用被感染细胞的puromycin抗性，用简便的方法确定了病毒感染效率，确定了病毒MOI值；更重要的是，本发明极大优化了病毒包装方法，将病毒包装效率提高至常规方法的5倍以上，能够大大节省大规模的药物靶点筛选成本，用于推动癌症药物靶点筛选的产业化。