法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
2018-09-21
授权
授权
2017-03-01
实质审查的生效 IPC(主分类):C07D311/92 申请日:20160829
实质审查的生效
2017-01-25
公开
公开
技术领域
本发明属于天然产物制备技术领域,特别涉及一种从毛喉鞘蕊花中提取福斯高林的制备方法。
背景技术
毛喉鞘蕊花[Coleus forskohlii(Wild.)Briq.]系唇形科(Labiatae)鞘蕊花属(Coleus Lour)植物,主要分布在印度、马来西亚、菲律宾、巴西等国家,目前我国云南东川和湖北通州两地也引进种植了该种植物。毛喉鞘蕊花中的活性成分倍半菇类化合物具有强降压和强心作用,可用于治疗心血管疾病、感冒、咳嗽和呼吸紊乱等疾病。福斯高林(forskolin)是从毛喉鞘蕊花根部提取的活性成分,是唯一已知源自植物的能直接激活腺苷酸环化酶的纯天然活性成分。腺苷酸环化酶被激活后,可升高环磷酸腺苷的浓度,进而提高激素敏感酯酶的活性,加快脂肪分解。因此,福斯高林作为化妆品中的功效活性物,可起到通过外用涂抹减少局部脂肪堆积的作用,在瘦身类化妆品中具有良好的应用前景。
然而,现有研究表明,福斯高林在原植物中含量极低,其中根部0.14%,叶0.07%,茎0.04%,并且野生资源有限,栽培方法及条件尚有不少困难。另一方面,应用传统的化学全合成法获得的福斯高林价格十分昂贵,使得其在未来市场化生产和的推广中障碍重重,进而难以惠及普通大众,同时化学全合成法还存在高污染、高消耗、多副反应和收率低等缺点,故而难为有效的获取高纯度福斯高林的方法。因此,提高毛喉鞘蕊花中提取福斯高林的得率和纯度是十分有必要的。
发明内容
本发明要解决的技术问题是,提供一种从毛喉鞘蕊花中提取福斯高林的制备方法,该方法提取得率高,所制备的福斯高林纯度高、成本低,便于工业化生产。
为解决上述技术问题,本发明采用的技术方案具体如下:一种从毛喉鞘蕊花中提取福斯高林的制备方法,其特征在于采用以下步骤:
1)选择毛喉鞘蕊花根部切片作为外植体,消毒后接种于MS培养基(购于Sigma,M 5524)进行无菌萌发,2~8d后萌发长出无菌苗;
2)取无菌苗胚根为外植体,接入愈伤组织诱导培养基中黑暗培养7天,诱导出愈伤组织,培养温度25oC,愈伤组织诱导培养基pH>
3)将愈伤组织于50oC真空干燥箱中干燥至恒重,取干燥后的愈伤组织1~10>2萃取罐中,加入乙醇(CAS>2流量为10~50>
4)将福斯高林初提液通过膜孔径20~100 nm的聚偏氟乙烯超滤膜(陶氏DowTM SFP系列)过滤,控制过滤压力0.2~0.5 MPa,过滤温度25~40℃;
5)上述过滤液经真空浓缩(miVac Duo 真空离心浓缩仪,英国GeneVac)得到福斯高林提取物。真空浓缩的条件:真空度30~80 KPa,浓缩温度35~65℃,离心转速1000~3000 rpm,浓缩时间10~90 min。
本发明应用植物细胞工程技术,对毛喉鞘蕊花根部进行愈伤组织培养,利用植物组织的形态分化加强次生产物的形成和积累,提高活性物含量,使得愈伤组织中福斯高林含量高于1.16%,是原植物根部(0.14%)含量的8倍多;采用超临界CO2萃取法,对毛喉鞘蕊花愈伤组织进行萃取,超滤膜对提取液进行过滤,提高提取率和产物纯度,获得福斯高林的纯度大于90%,提取率高于1%。
综上所述,本发明具有提取得率高,所制备的福斯高林纯度高、成本低,便于工业化生产等有益效果。
具体实施方式
以下举出的实施例是对本发明进行进一步详细说明,但本发明不仅限于这些实施例。
实施例1:
一种从毛喉鞘蕊花中提取福斯高林的制备方法,步骤如下:
1)取毛喉鞘蕊花根部切片,消毒后接种于MS培养基进行无菌萌发,5 d后萌发长出无菌苗;
2)切取无菌苗的胚根接入愈伤组织诱导培养基中黑暗(0 lx)培养7天,诱导出愈伤组织,培养温度25oC,培养基pH>
2)将愈伤组织于50oC真空干燥箱中干燥至恒重,称取10>2萃取罐中,加入乙醇作为夹带剂,控制乙醇添加量为15>2流量为30>
3)上述过程中提取的福斯高林初提液通过膜孔径为50 nm的聚偏氟乙烯超滤膜过滤,控制过滤压力为0.45 MPa,过滤温度为25℃;
4)过滤后真空浓缩得到福斯高林样品,真空度30 KPa,浓缩温度50℃,离心转速1000 rpm,浓缩时间30 min;
实施例1所得毛喉鞘蕊花愈伤组织中福斯高林含量为1.22%,提取产物福斯高林纯度为99.2%,提取率1.21%。
实施例2:
一种从毛喉鞘蕊花中提取福斯高林的制备方法,步骤如下:
1)取毛喉鞘蕊花根部切片,消毒后接种于MS培养基进行无菌萌发,8 d后萌发长出无菌苗;
2)切取无菌苗的胚根接入愈伤组织诱导培养基中黑暗(0 lx)培养7天,诱导出愈伤组织,培养温度25oC,培养基pH>
2)将愈伤组织于50oC真空干燥箱中干燥至恒重,称取5>2萃取罐中,加入乙醇作为夹带剂,控制乙醇添加量为5>2流量为50>
3)上述过程中提取的福斯高林初提液通过膜孔径为20 nm的聚偏氟乙烯超滤膜过滤,控制过滤压力为0.20 MPa,过滤温度为35℃;
4)过滤液经真空浓缩得到福斯高林样品,真空度60 KPa,浓缩温度35℃,离心转速3000 rpm,浓缩时间60 min;
实施例2所得毛喉鞘蕊花愈伤组织中福斯高林含量为1.19%,提取所得福斯高林纯度为90.2%,提取率1.07%。
实施例3:
一种从毛喉鞘蕊花中提取福斯高林的制备方法,步骤如下:
1)取毛喉鞘蕊花根部切片,消毒后接种于MS培养基进行无菌萌发,2 d后萌发长出无菌苗;
2)切取无菌苗的胚根接入愈伤组织诱导培养基中黑暗(0 lx)培养7天,诱导出愈伤组织,培养温度25oC,培养基pH>
2)将愈伤组织于50oC真空干燥箱中干燥至恒重,称取2>2萃取罐中,加入乙醇作为夹带剂,控制乙醇添加量为20>2流量为10>
3)上述过程中提取的福斯高林初提液通过膜孔径为100 nm的聚偏氟乙烯超滤膜过滤,控制过滤压力为0.30 MPa,过滤温度为30℃;
4)过滤液经真空浓缩得到福斯高林样品,真空度80 KPa,浓缩温度60℃,离心转速2000 rpm,浓缩时间10 min;
实施例3所得毛喉鞘蕊花愈伤组织中福斯高林含量为1.36%,进一步提取所得福斯高林纯度为94.7%,提取率1.29%。
实施例4:
一种从毛喉鞘蕊花中提取福斯高林的制备方法,步骤如下:
1)取毛喉鞘蕊花根部切片,消毒后接种于MS培养基进行无菌萌发,4 d后萌发长出无菌苗;
2)切取无菌苗的胚根接入愈伤组织诱导培养基中黑暗(0 lx)培养7天,诱导出愈伤组织,培养温度25oC,培养基pH>
2)将愈伤组织于50oC真空干燥箱中干燥至恒重,称取1>2萃取罐中,加入乙醇作为夹带剂,控制乙醇添加量为10>2流量为50>
3)上述过程中提取的福斯高林初提液通过膜孔径为80 nm的聚偏氟乙烯超滤膜过滤,控制过滤压力为0.50 MPa,过滤温度为40℃;
4)过滤液经真空浓缩得到福斯高林样品,真空度50 KPa,浓缩温度65℃,离心转速1800 rpm,浓缩时间90 min;
实施例4所得毛喉鞘蕊花愈伤组织中福斯高林含量为1.19%,进一步提取所得福斯高林纯度为95.4%,提取率1.28%。
实施例5:
一种从毛喉鞘蕊花中提取福斯高林的制备方法,步骤如下:
1)取毛喉鞘蕊花根部切片,消毒后接种于MS培养基进行无菌萌发,6 d后萌发长出无菌苗;
2)切取无菌苗的胚根接入愈伤组织诱导培养基中黑暗(0 lx)培养7天,诱导出愈伤组织,培养温度25oC,培养基pH>
2)将愈伤组织于50oC真空干燥箱中干燥至恒重,称取1>2萃取罐中,加入乙醇作为夹带剂,控制乙醇添加量为12>2流量为25>
3)上述过程中提取的福斯高林初提液通过膜孔径为60 nm的聚偏氟乙烯超滤膜过滤,控制过滤压力为0.35 MPa,过滤温度为30oC;
4)过滤液经真空浓缩得到福斯高林样品,真空度50 KPa,浓缩温度45℃,离心转速2500 rpm,浓缩时间45 min;
实施例5所得毛喉鞘蕊花愈伤组织中福斯高林含量为1.23%,进一步提取所得福斯高林纯度为93.7%,提取率1.35%。
机译: 使用毛蕊花提取物治疗皮肤疾病的方法
机译: 福斯高林或含有它的提取物在制备用于治疗酒精成瘾的药物中的用途
机译: 拉丹(Laeus forskohlii)提取拉丹类二萜,特别是福斯高林的方法