具有抗炎、抗过敏作用的中药及其制备方法

摘要

本发明提供了一种具有抗炎、抗过敏作用的中药，所述中药包含为山楂、人参和青蒿。本发明提供的中药组合物能克服西药制剂的安全性问题，从中药中筛选得到具有较好活性的阻断CaN-NF-AT通路的药物，为治疗湿疹等炎症和自身免疫性疾病提供了科学依据，同时为舒缓类化妆品提供了良好的素材。

说明书

技术领域

本发明涉及一种医药及其制造方法。

背景技术

钙调磷酸酶(caleineurin，CaN)又称蛋白磷酸酶2B(PP2B)，属丝/苏氨酸蛋白磷酸酶家族成员，是迄今发现的唯一受Ca²⁺/钙调素(CaM)调节的丝/苏氨酸蛋白磷酸酶。CaN通过使底物脱磷酸发挥作用。在T细胞中，Ca²⁺内流、细胞内浓度Ca²⁺增加，Ca²⁺同CaM与CaN结合，激活CaN，活化的CaN使其底物NF-AT脱磷酸，入核，引起IL-2等一些列细胞因子的表达。CaN-NF-AT通路在T细胞活化中起着调节枢纽的作用。

钙调神经磷酸酶抑制剂目前是临床上最有效的免疫抑制剂药物。用于器官移植，控制移植物排斥反应、自身免疫性疾病的治疗(RA，CD，银屑病)、特别是其近年来用于湿疹、并取得良好治疗效果。钙调磷酸酶抑制剂(CNIs)作为一种免疫抑制剂，分为外源性抑制剂和内源性蛋白质抑制剂。外源性抑制剂主要有环孢素、他克莫司等，内源性蛋白质抑制剂主要有Cain、FKBP38等。目前，临床应用最多的是子囊霉素衍生物环孢素A、他克莫司和匹美克莫司，都具有相似的理化性质、作用机制和作用效果，但其毒副作用(如肾毒性，高血糖等)成为该类抑制剂应用的重要障碍。因此，以CaN-NF-AT通路为作用靶标寻找更加安全有效的抑制剂对研发新型皮肤炎症具有重要意义。

中草药为我国的传统用药，在临床上，中草药在湿疹等炎症和自身免疫 性疾病的治疗中具有较好的效果。现代研究发现某些中药单体成分能直接与CaN结合并抑制其活性，如槲皮素、山奈酚、酚醛棉酚等；同时，某些中药有效成分能在细胞水平有效抑制CaN-NF-AT通路的活化，抑制Th1和Th2型细胞因子的表达，抑制T细胞的活化，如虫草素、杜鹃素、非瑟酮等。中草药具有来源广、成本低和毒性低的特点，用其作为筛选CaN-NF-AT通路的抑制剂，得到具有较好疗效同时毒性小的可能性很大。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于克服了西药制剂的安全性问题，从中药中筛选得到具有较好活性的阻断CaN-NF-AT通路的药物，为治疗湿疹等炎症和自身免疫性疾病提供了科学依据，同时为舒缓类化妆品提供了良好的素材。

本发明提供了一种具有抗炎、抗过敏作用的中药，所述中药包含为山楂、人参和青蒿。

其中，所述山楂的含量为50～60wt％、所述人参的含量为20～30wt％，所述青蒿的含量为20～30wt％。

本发明还提供了一种上述中药在阻断CaN-NF-AT通路中的应用。

本发明还提供了一种上述中药的制备方法，包含如下步骤：

(1)将人参加入其15～30倍量的50wt％～70wt％乙醇，渗漉法提取12～24h后，减压浓缩至药材等重量，加入纤维素酶配制酶活为400～2000IU，15～20℃条件下水解12～24h，加热至60℃以上，使酶灭活，得水解人参提取物；

(2)将山楂和青蒿分别加入30倍量的95wt％乙醇，渗漉法提取；

(3)渗漉法提取24h，收集滤液；

(4)低温减压浓缩至药材等重量，即得山楂和青蒿提取物；

(5)按照山楂提取物50～60wt％、青蒿提取物20～30wt％、水解人参 提取物20～30wt％混合均匀，得天然抗炎、抗过敏提取物。

本发明提供的中药组合物在抗炎、抗过敏的作用上相互之间有明显的协同作用，并且能够相互调和、降低毒性。

本发明提供的中药组合物具有优异的抗炎、抗过敏作用。

具体实施方式

下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。可以理解的是，此处所描述的具体实施例仅仅用于解释本发明，而非对本发明的限定。另外还需要说明的是，为了便于描述，具体实施例中仅示出了与本发明相关的部分而非全部内容。

实施例1：

(1)取50g山楂加入150g 95wt％乙醇渗漉法提取；

(2)渗漉法提取24h，收集滤液；

(3)低温减压浓缩至50g，加丙二醇稀释至100g，即得山楂提取物。

实施例2：

(1)取50g青蒿加入150g 95wt％乙醇渗漉法提取；

(2)渗漉法提取24h，收集滤液；

(3)低温减压浓缩至50g，加丙二醇稀释至100g，即得青蒿提取物。

实施例3：

(1)取50g人参加入150g70wt％乙醇渗漉法提取；

(2)渗漉法提取24h，收集滤液；

(3)低温减压浓缩至50g，加入纤维素酶，调节酶活为1000IU，20℃条件下，水解20h；

(4)加热，使酶灭活后，加丙二醇稀释至100g，即得水人参提取物。

实施例4：

将实施例1、2、3得的提取物，取50g山楂提取物、20g青蒿提取物、g水解人参提取物，混合均匀得天然抗炎、抗过敏提取物。

对比实施例1：

(1)取50g人参加入150g70wt％乙醇渗漉法提取；

(2)渗漉法提取24h，收集滤液；

(3)低温减压浓缩至无乙醇，加丙二醇稀释至100g，即得人参提取物。

对比实施例2：

(1)取50g益母草加入150g95wt％乙醇渗漉法提取；

(2)渗漉法提取24h，收集滤液；

(3)低温减压浓缩即得益母草提取物。

对比实施例3：

(1)取50g淫羊藿加入150g95wt％乙醇渗漉法提取；

(2)渗漉法提取24h，收集滤液；

(3)低温减压浓缩即得淫羊藿提取物。

对比实施例4：

(1)取25g山楂加入150g95wt％乙醇渗漉法提取；

(2)渗漉法提取24h，收集滤液；

(3)低温减压浓缩即得山楂提取物Ⅰ。

对比实施例5：

(1)取50g土荆芥加入150g95wt％乙醇渗漉法提取；

(2)渗漉法提取24h，收集滤液；

(3)低温减压浓缩即得土荆芥提取物。

对比实施例6：

(1)取50g紫草加入150g95wt％乙醇渗漉法提取；

(2)渗漉法提取24h，收集滤液；

(3)低温减压浓缩即得紫草提取物。

一、检测方法：

1.钙调磷酸酶(CaN)-NF-AT通路阻断剂的筛选步骤：

1.1待测样品：所有提取物，用去离子水稀释成mg/ml的工作液，检测时取10μl加入测定管，待测提取物的终浓度为0.2mg/ml。

1.2测定方法：采用从美国affimatrix公司购买了稳定转染NFAT报告基因的细胞系NFAT K562Reporter Stable Cell Line，以PMA(蛋白激酶CPKC激活剂)和A23187(钙通道激活剂)刺激K562细胞，检测转录因子NFAT驱动的荧光素酶基因表达水平，反应钙调磷酸酶(CaN)通路的活化水平。

稳定转染NFAT报告基因的K562细胞常规传代培养于含10wt％胎牛血清的RPMI-1640培养基中，实验采用生长健康、处于对数增长期的细胞，将上述细胞按2×10⁵/孔接种于24孔细胞培养板，加入待测样品，孵育1小时，>

2.中草药提取物的细胞毒性检测：

采用常规的CCK8法：(1)在96孔板中配置100μL的K562细胞悬液(1×10⁵/孔)，将96孔板在培养箱预培养24小时(37℃，5wt％CO₂)；

(2)加入10μL待测物质；

(3)将96孔板在培养箱中孵育24小时；

(4)向每孔加入10μLCCK8溶液；

(5)将96孔板在培养箱内孵育4小时；

(6)用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

二、实验结果：

本发明与不同中药相比，产品对CaN-NF-AT通路的抑制作用结果如表1所示

表1：

本发明与不同中药相比，产品的非特异性细胞毒性结果如表2所示

表2：

由表1可知，山楂、青蒿、天然抗炎(抗过敏)提取物和紫草提取物都有较好的抑制CaN-NF-AT通路的作用。但是，根据表2，紫草提取物的细胞相对毒性较大，其抑制作用有可能是由于紫草成分的非特异性细胞毒性导致的。同时由表1可以看出，天然抗炎(抗过敏)提取物对CaN-NF-AT通路的抑制效果明显优于山楂、青蒿、水解人参提取物单独的效果；有表2可以看出，水解人参提取物的毒性明显低于不水解的人参提取物；山楂、青蒿、水解人参提取物按比例混合后，其毒性小于三者单独使用的毒性；本发明的两味中药山楂、青蒿提取物单独使用具有较好的CaN-NF-AT通路的抑制作用，二者与水解人参提取物按比例混合后，具有更好的CaN-NF-AT通路的抑制作用(明显的协同作用)可以作为抗湿疹的良好物质；并且二者与水解人参提取物按比例混合后，其毒性明显下降(明显拮抗作用)；人参提取物水解与不水解，其毒性由明显差异。同时，由于采用的是纯天然的中药提取物，克服了西药较大副作用的隐患，为抗湿疹及舒缓类化妆品提供了物质基 础。

以上仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。