一种太行菊总黄酮的提取方法

摘要

本发明涉及一种太行菊总黄酮的提取方法，其具备包括如下步骤：(1)将太行菊进行粉碎，在碱性条件下，向其中依次加入碱性纤维素酶、碱性果胶酶、亚硝酸钠、三乙醇胺、氟化钠、椰子油脂肪酸二乙醇胺和氧化铝颗粒，保持温度在35‑50℃之间搅拌0.5‑6h；(2)用NaOH溶液调节步骤(1)所得溶液的pH至11‑12，取滤液，用酸调pH至5.5‑6.5，向溶液中加入丙酮萃取，收集有机相，蒸干得到总黄酮粗提物；(3)双水相萃取，减压干燥得到太行菊总黄酮，本发明提供的方法根据太行菊以及所含黄酮类物质的性质设计，有利于促进太行菊总黄酮的溶出，有效提高了总黄酮得提取率，并减少了在提取过程中太行菊总黄酮的氧化。

说明书

技术领域

本发明涉及一种太行菊总黄酮的提取方法。

背景技术

太行菊(Opisthopappus> )为菊科植物太行菊属的头状花序，太行菊为草本植物。太行菊一般高为10-15厘米，太行菊的茎部的颜色为血色，四周被覆浓厚或稀少的短毛。基生叶片一般呈椭圆形或卵形，长2.5-3.5，二回羽状割裂对照规则，一、二回全数全裂。一回侧裂片一般为1-2对。

太行菊中化学成分比较复杂，其主要成分为黄酮类化合物、挥发油和萜类、棕榈酸和野菊花黄色素类等化学成分。其中黄酮的药理作用主要有：改善血液循环、降低胆固醇的含量、抑制炎性生物酶的渗出、促进伤口的快速愈合，并且具有降血压、抗肿瘤、抗糖尿病和抑菌的作用。并且黄酮类具备很强的抗氧化活性，对体内的氧基具备很好的扫除作用。

目前太行菊总黄酮的提取方法一般有如下几种：1. 传统溶剂提取法，即用热水进行提取。2. 醇提取法，根据相似相溶的原则，极性比较大的苷元及苷类易溶于极性较大的丙酮、乙醇、甲醇或混合溶剂，黄酮类物质提取经常使用的溶剂是丙酮、甲醇和乙醇。3. 超声波辅助提取法，工作原理是超声波可以使植物的细胞壁、细胞膜等结构遭到破坏，有利于细胞中的活性成分溶出；另外，超声过程中不断地震荡，更能增加溶质的运动能力；因为超声波辅助提取法用时较短、能源消耗比较低、尽量不破坏植物中有效成分的特点，较常规浸泡提取法具有较大的优势。4. 酶浸渍萃取法，是指在提取黄酮类物质的过程当中，人为地采用适当的酶加入反应过程中，使其产生转糖和酶解反应，使得产品黄酮得率和浓度大幅度增加的新兴实验手段。采用合适的酶掺入反应中，不但通过发生的酶解反应使得植物组织得到分解，并且还使油溶性的总黄酮变为较易溶于水的糖苷类，加速提取过程。5. 超临界萃取法是应用一些溶剂在临界点附近时具备差异的特性，对混合物中的可溶解性成分进行提取的一种先进的生物分离技术。与传统方法相比，超临界萃取法具有无味、无毒、安全，易分离、污染小等各种优点。在超临界萃取方法中通常选取CO₂为超临界溶剂，因为CO₂无毒、操作温度低、临界压力低等各种性质比较稳定、具有不易燃易爆等优点。

由于黄酮类结构中存在酚羟基，稳定性差，所以在用以上方法进行直接提取的时候很容易发生氧化，提取效果并不理想。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种总黄酮得率高，减少氧化的太行菊总黄酮的提取方法。

为了实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：

一种太行菊总黄酮的提取方法，其具备包括如下步骤：

(1)将太行菊进行粉碎，过60目筛，加入相当于太行菊重量两倍的水，用5wt%NaOH调pH值至8.5-9.5，搅拌10-20min，向其中依次加入碱性纤维素酶、碱性果胶酶、亚硝酸钠、三乙醇胺、氟化钠、椰子油脂肪酸二乙醇胺和氧化铝颗粒，保持温度在35-50℃之间搅拌0.5-6h，其中太行菊与碱性纤维素酶、碱性果胶酶、亚硝酸钠、三乙醇胺、氟化钠、椰子油脂肪酸二乙醇胺和氧化铝颗粒的质量比为：100:0.3-0.5:0.1-0.3:3.5-9.6:6-14:4-7:5-12:100-150，所述氧化铝颗粒的粒径为150-250μm；

(2)用10wt%NaOH溶液调节步骤(1)所得溶液的pH至11-12，过滤，取滤液，用酸调pH至5.5-6.5，向溶液中加入丙酮萃取，收集有机相，蒸干得到总黄酮粗提物；

(3)将步骤(2)得到的总黄酮粗提物加入到C₂H₅OH-(NH₄)₂SO₄形成的双水相体系中，所述C₂H₅OH的质量分数为20%-28%，所述(NH₄)₂SO₄的质量分数为16%-21%，加入质量分数为1.5%-3%的NaCl，调节pH值为6-8，混匀，分相，减压干燥得到太行菊总黄酮。

作为本发明进一步的改进， 所述步骤(2)中的酸为0.1mol/L的HCl。

作为本发明进一步的改进，所述步骤(3)中总黄酮粗提物在双水相体系中的质量分数为15%-20%。

作为本发明进一步的改进，所述太行菊与碱性纤维素酶、碱性果胶酶、亚硝酸钠、三乙醇胺、氟化钠、椰子油脂肪酸二乙醇胺和氧化铝颗粒的质量比为：100:0.4:0.2:6.5:10:5.5:8:120。

作为本发明进一步的改进，所述步骤(3)中，C₂H₅OH的质量分数为23%，所述(NH₄)₂SO₄的质量分数为17%，加入质量分数为2.5%的NaCl，调节pH值为7，混匀，分相，减压干燥得到太行菊总黄酮。

与现有技术相比，本发明所取得的有益效果如下：

本发明所提供的方法通过研究太行菊独特的性能，在碱性条件下进行细胞壁的破壁和总黄酮的提取，减少了氧化，并且通过酶与亚硝酸钠、三乙醇胺、氟化钠和椰子油脂肪酸二乙醇胺共同作用，并在破壁萃取的过程中加入粒径为150-250μm的氧化铝颗粒，可以增加物料之间的碰撞、接触和融合，有利于促进太行菊总黄酮的溶出，有效提高了总黄酮得提取率，并减少了在提取过程中太行菊总黄酮的氧化。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合具体实施例对发明进行清楚、完整的描述。

实施例1

一种太行菊总黄酮的提取方法，其具备包括如下步骤：

(1)将100g太行菊进行粉碎，过60目筛，加入200g的水，用5wt%NaOH调pH值至9，搅拌15min，向其中依次加入0.4g碱性纤维素酶、0.2g碱性果胶酶、6.5g亚硝酸钠、10g三乙醇胺、5.5g氟化钠、8g椰子油脂肪酸二乙醇胺和120g粒径为150-250μm的氧化铝颗粒，保持温度在40±2℃的条件下搅拌2h。

(2)用10wt%NaOH溶液调节步骤(1)所得溶液的pH至11，过滤，取滤液，用0.1mol/L的HCl调pH至6，向溶液中加入丙酮萃取（50ml/次，3次），收集有机相，蒸干得到总黄酮粗提物；

(3)将步骤(2)得到的总黄酮粗提物加入到23%C₂H₅OH-17%(NH₄)₂SO₄形成的双水相体系中，总黄酮粗提物在双水相体系中的质量分数为17%，然后加入质量分数为2.5%的NaCl，调节pH值为7，混匀，分相，减压干燥得到太行菊总黄酮12.34g，UV检测含量为97.89%。

实施例2

一种太行菊总黄酮的提取方法，其具备包括如下步骤：

(1)将100g太行菊进行粉碎，过60目筛，加入200g的水，用5wt%NaOH调pH值至9.5，搅拌15min，向其中依次加入0.4g碱性纤维素酶、0.2g碱性果胶酶、6.5g亚硝酸钠、10g三乙醇胺、5.5g氟化钠、8g椰子油脂肪酸二乙醇胺和120g粒径为150-250μm的氧化铝颗粒，保持温度在40±2℃的条件下搅拌2h。

(2)用10wt%NaOH溶液调节步骤(1)所得溶液的pH至11，过滤，取滤液，用0.1mol/L的HCl调pH至6，向溶液中加入丙酮萃取（50ml/次，3次），收集有机相，蒸干得到总黄酮粗提物；

(3)将步骤(2)得到的总黄酮粗提物加入到23%C₂H₅OH-17%(NH₄)₂SO₄形成的双水相体系中，总黄酮粗提物在双水相体系中的质量分数为17%，然后加入质量分数为2.5%的NaCl，调节pH值为7，混匀，分相，减压干燥得到太行菊总黄酮11.27g，UV检测含量为96.29%。

实施例3

一种太行菊总黄酮的提取方法，其具备包括如下步骤：

(1)将100g太行菊进行粉碎，过60目筛，加入200g的水，用5wt%NaOH调pH值至8.5，搅拌15min，向其中依次加入0.4g碱性纤维素酶、0.2g碱性果胶酶、6.5g亚硝酸钠、10g三乙醇胺、5.5g氟化钠、8g椰子油脂肪酸二乙醇胺和120g粒径为150-250μm的氧化铝颗粒，保持温度在40±2℃的条件下搅拌2h。

(2)用10wt%NaOH溶液调节步骤(1)所得溶液的pH至11，过滤，取滤液，用0.1mol/L的HCl调pH至6，向溶液中加入丙酮萃取（50ml/次，3次），收集有机相，蒸干得到总黄酮粗提物；

(3)将步骤(2)得到的总黄酮粗提物加入到23%C₂H₅OH-17%(NH₄)₂SO₄形成的双水相体系中，总黄酮粗提物在双水相体系中的质量分数为17%，然后加入质量分数为2.5%的NaCl，调节pH值为7，混匀，分相，减压干燥得到太行菊总黄酮11.63g，UV检测含量为97.04%。

实施例4

一种太行菊总黄酮的提取方法，其具备包括如下步骤：

(1)将100g太行菊进行粉碎，过60目筛，加入200g的水，用5wt%NaOH调pH值至9，搅拌15min，向其中依次加入0.3g碱性纤维素酶、0.1g碱性果胶酶、3.5g亚硝酸钠、6g三乙醇胺、4g氟化钠、5g椰子油脂肪酸二乙醇胺和100g粒径为150-250μm的氧化铝颗粒，保持温度在40±2℃的条件下搅拌2h。

(2)用10wt%NaOH溶液调节步骤(1)所得溶液的pH至12，过滤，取滤液，用0.1mol/L的HCl调pH至6，向溶液中加入丙酮萃取（50ml/次，3次），收集有机相，蒸干得到总黄酮粗提物；

(3)将步骤(2)得到的总黄酮粗提物加入到23%C₂H₅OH-17%(NH₄)₂SO₄形成的双水相体系中，总黄酮粗提物在双水相体系中的质量分数为17%，然后加入质量分数为2.5%的NaCl，调节pH值为7，混匀，分相，减压干燥得到太行菊总黄酮10.92g，UV检测含量为96.94%。

实施例5

一种太行菊总黄酮的提取方法，其具备包括如下步骤：

(1)将100g太行菊进行粉碎，过60目筛，加入200g的水，用5wt%NaOH调pH值至8.5，搅拌15min，向其中依次加入0.5g碱性纤维素酶、0.3g碱性果胶酶、9.6g亚硝酸钠、14g三乙醇胺、7g氟化钠、12g椰子油脂肪酸二乙醇胺和150g粒径为150-250μm的氧化铝颗粒，保持温度在40±2℃的条件下搅拌2h。

(2)用10wt%NaOH溶液调节步骤(1)所得溶液的pH至11，过滤，取滤液，用0.1mol/L的HCl调pH至6，向溶液中加入丙酮萃取（50ml/次，3次），收集有机相，蒸干得到总黄酮粗提物；

(3)将步骤(2)得到的总黄酮粗提物加入到23%C₂H₅OH-17%(NH₄)₂SO₄形成的双水相体系中，总黄酮粗提物在双水相体系中的质量分数为17%，然后加入质量分数为2.5%的NaCl，调节pH值为7，混匀，分相，减压干燥得到太行菊总黄酮11.23g，UV检测含量为97.16%。

对比例1

一种太行菊总黄酮的提取方法，其具备包括如下步骤：

(1)将100g太行菊进行粉碎，过60目筛，加入200g的水，用5wt%NaOH调pH值至9，搅拌15min，向其中依次加入0.4g碱性纤维素酶和0.2g碱性果胶酶，保持温度在40±2℃的条件下搅拌2h。

(2)用10wt%NaOH溶液调节步骤(1)所得溶液的pH至11，过滤，取滤液，用0.1mol/L的HCl调pH至6，向溶液中加入丙酮萃取（50ml/次，3次），收集有机相，蒸干得到总黄酮粗提物；

(3)将步骤(2)得到的总黄酮粗提物加入到23%C₂H₅OH-17%(NH₄)₂SO₄形成的双水相体系中，总黄酮粗提物在双水相体系中的质量分数为17%，然后加入质量分数为2.5%的NaCl，调节pH值为7，混匀，分相，减压干燥得到太行菊总黄酮。

对比例2

一种太行菊总黄酮的提取方法，其具备包括如下步骤：

(1)将100g太行菊进行粉碎，过60目筛，加入200g的水，用5wt%NaOH调pH值至9，搅拌15min，向其中依次加入0.4g碱性纤维素酶、0.2g碱性果胶酶和120g粒径为150-250μm的氧化铝颗粒，保持温度在40±2℃的条件下搅拌2h。

(2)用10wt%NaOH溶液调节步骤(1)所得溶液的pH至11，过滤，取滤液，用0.1mol/L的HCl调pH至6，向溶液中加入丙酮萃取（50ml/次，3次），收集有机相，蒸干得到总黄酮粗提物；

(3)将步骤(2)得到的总黄酮粗提物加入到23%C₂H₅OH-17%(NH₄)₂SO₄形成的双水相体系中，总黄酮粗提物在双水相体系中的质量分数为17%，然后加入质量分数为2.5%的NaCl，调节pH值为7，混匀，分相，减压干燥得到太行菊总黄酮。

对比例3

一种太行菊总黄酮的提取方法，其具备包括如下步骤：

(1)将100g太行菊进行粉碎，过60目筛，加入200g的水，用5wt%NaOH调pH值至9，搅拌15min，向其中依次加入0.4g碱性纤维素酶、0.2g碱性果胶酶和6.5g亚硝酸钠，保持温度在40±2℃的条件下搅拌2h。

(2)用10wt%NaOH溶液调节步骤(1)所得溶液的pH至11，过滤，取滤液，用0.1mol/L的HCl调pH至6，向溶液中加入丙酮萃取（50ml/次，3次），收集有机相，蒸干得到总黄酮粗提物；

(3)将步骤(2)得到的总黄酮粗提物加入到23%C₂H₅OH-17%(NH₄)₂SO₄形成的双水相体系中，总黄酮粗提物在双水相体系中的质量分数为17%，然后加入质量分数为2.5%的NaCl，调节pH值为7，混匀，分相，减压干燥得到太行菊总黄酮。

对比例4

一种太行菊总黄酮的提取方法，其具备包括如下步骤：

(1)将100g太行菊进行粉碎，过60目筛，加入200g的水，用5wt%NaOH调pH值至9，搅拌15min，向其中依次加入0.4g碱性纤维素酶、0.2g碱性果胶酶、6.5g亚硝酸钠和10g三乙醇胺，保持温度在40±2℃的条件下搅拌2h。

(2)用10wt%NaOH溶液调节步骤(1)所得溶液的pH至11，过滤，取滤液，用0.1mol/L的HCl调pH至6，向溶液中加入丙酮萃取（50ml/次，3次），收集有机相，蒸干得到总黄酮粗提物；

(3)将步骤(2)得到的总黄酮粗提物加入到23%C₂H₅OH-17%(NH₄)₂SO₄形成的双水相体系中，总黄酮粗提物在双水相体系中的质量分数为17%，然后加入质量分数为2.5%的NaCl，调节pH值为7，混匀，分相，减压干燥得到太行菊总黄酮。

对比例5

一种太行菊总黄酮的提取方法，其具备包括如下步骤：

(1)将100g太行菊进行粉碎，过60目筛，加入200g的水，用5wt%NaOH调pH值至9，搅拌15min，向其中依次加入0.4g碱性纤维素酶、0.2g碱性果胶酶、6.5g亚硝酸钠和8g椰子油脂肪酸二乙醇胺，保持温度在40±2℃的条件下搅拌2h。

(2)用10wt%NaOH溶液调节步骤(1)所得溶液的pH至11，过滤，取滤液，用0.1mol/L的HCl调pH至6，向溶液中加入丙酮萃取（50ml/次，3次），收集有机相，蒸干得到总黄酮粗提物；

(3)将步骤(2)得到的总黄酮粗提物加入到23%C₂H₅OH-17%(NH₄)₂SO₄形成的双水相体系中，总黄酮粗提物在双水相体系中的质量分数为17%，然后加入质量分数为2.5%的NaCl，调节pH值为7，混匀，分相，减压干燥得到太行菊总黄酮。

对比例6

一种太行菊总黄酮的提取方法，其具备包括如下步骤：

(1)将100g太行菊进行粉碎，过60目筛，加入200g的水，用5wt%NaOH调pH值至9，搅拌15min，向其中依次加入0.4g碱性纤维素酶、0.2g碱性果胶酶、6.5g亚硝酸钠和5.5g氟化钠，保持温度在40±2℃的条件下搅拌2h。

(2)用10wt%NaOH溶液调节步骤(1)所得溶液的pH至11，过滤，取滤液，用0.1mol/L的HCl调pH至6，向溶液中加入丙酮萃取（50ml/次，3次），收集有机相，蒸干得到总黄酮粗提物；

(3)将步骤(2)得到的总黄酮粗提物加入到23%C₂H₅OH-17%(NH₄)₂SO₄形成的双水相体系中，总黄酮粗提物在双水相体系中的质量分数为17%，然后加入质量分数为2.5%的NaCl，调节pH值为7，混匀，分相，减压干燥得到太行菊总黄酮。

对比例7

一种太行菊总黄酮的提取方法，其具备包括如下步骤：

(1)将100g太行菊进行粉碎，过60目筛，加入200g的水，用5wt%NaOH调pH值至9，搅拌15min，向其中依次加入0.4g碱性纤维素酶、0.2g碱性果胶酶、6.5g亚硝酸钠、10g三乙醇胺和5.5g氟化钠，保持温度在40±2℃的条件下搅拌2h。

(2)用10wt%NaOH溶液调节步骤(1)所得溶液的pH至11，过滤，取滤液，用0.1mol/L的HCl调pH至6，向溶液中加入丙酮萃取（50ml/次，3次），收集有机相，蒸干得到总黄酮粗提物；

(3)将步骤(2)得到的总黄酮粗提物加入到23%C₂H₅OH-17%(NH₄)₂SO₄形成的双水相体系中，总黄酮粗提物在双水相体系中的质量分数为17%，然后加入质量分数为2.5%的NaCl，调节pH值为7，混匀，分相，减压干燥得到太行菊总黄酮。

对比例8

一种太行菊总黄酮的提取方法，其具备包括如下步骤：

(1)将100g太行菊进行粉碎，过60目筛，加入200g的水，用5wt%NaOH调pH值至9，搅拌15min，向其中依次加入0.4g碱性纤维素酶、0.2g碱性果胶酶、6.5g亚硝酸钠、10g三乙醇胺和8g椰子油脂肪酸二乙醇胺，保持温度在40±2℃的条件下搅拌2h。

(2)用10wt%NaOH溶液调节步骤(1)所得溶液的pH至11，过滤，取滤液，用0.1mol/L的HCl调pH至6，向溶液中加入丙酮萃取（50ml/次，3次），收集有机相，蒸干得到总黄酮粗提物；

(3)将步骤(2)得到的总黄酮粗提物加入到23%C₂H₅OH-17%(NH₄)₂SO₄形成的双水相体系中，总黄酮粗提物在双水相体系中的质量分数为17%，然后加入质量分数为2.5%的NaCl，调节pH值为7，混匀，分相，减压干燥得到太行菊总黄酮。

对比例9

一种太行菊总黄酮的提取方法，其具备包括如下步骤：

(1)将100g太行菊进行粉碎，过60目筛，加入200g的水，用5wt%NaOH调pH值至9，搅拌15min，向其中依次加入0.4g碱性纤维素酶、0.2g碱性果胶酶、6.5g亚硝酸钠、5.5g氟化钠和8g椰子油脂肪酸二乙醇胺，保持温度在40±2℃的条件下搅拌2h。

(2)用10wt%NaOH溶液调节步骤(1)所得溶液的pH至11，过滤，取滤液，用0.1mol/L的HCl调pH至6，向溶液中加入丙酮萃取（50ml/次，3次），收集有机相，蒸干得到总黄酮粗提物；

(3)将步骤(2)得到的总黄酮粗提物加入到23%C₂H₅OH-17%(NH₄)₂SO₄形成的双水相体系中，总黄酮粗提物在双水相体系中的质量分数为17%，然后加入质量分数为2.5%的NaCl，调节pH值为7，混匀，分相，减压干燥得到太行菊总黄酮。

对比例10

一种太行菊总黄酮的提取方法，其具备包括如下步骤：

(1)将100g太行菊进行粉碎，过60目筛，加入200g的水，用5wt%NaOH调pH值至9，搅拌15min，向其中依次加入0.4g碱性纤维素酶、0.2g碱性果胶酶、6.5g亚硝酸钠、10g三乙醇胺、5.5g氟化钠和8g椰子油脂肪酸二乙醇胺，保持温度在40±2℃的条件下搅拌2h。

(2)用10wt%NaOH溶液调节步骤(1)所得溶液的pH至11，过滤，取滤液，用0.1mol/L的HCl调pH至6，向溶液中加入丙酮萃取（50ml/次，3次），收集有机相，蒸干得到总黄酮粗提物；

(3)将步骤(2)得到的总黄酮粗提物加入到23%C₂H₅OH-17%(NH₄)₂SO₄形成的双水相体系中，总黄酮粗提物在双水相体系中的质量分数为17%，然后加入质量分数为2.5%的NaCl，调节pH值为7，混匀，分相，减压干燥得到太行菊总黄酮。

对比例11

一种太行菊总黄酮的提取方法，其具备包括如下步骤：

(1)将100g太行菊进行粉碎，过60目筛，加入200g的水，用5wt%NaOH调pH值至9，搅拌15min，向其中依次加入0.4g碱性纤维素酶、0.2g碱性果胶酶、10g三乙醇胺、5.5g氟化钠、8g椰子油脂肪酸二乙醇胺和120g粒径为150-250μm的氧化铝颗粒，保持温度在40±2℃的条件下搅拌2h。

(2)用10wt%NaOH溶液调节步骤(1)所得溶液的pH至11，过滤，取滤液，用0.1mol/L的HCl调pH至6，向溶液中加入丙酮萃取（50ml/次，3次），收集有机相，蒸干得到总黄酮粗提物；

(3)将步骤(2)得到的总黄酮粗提物加入到23%C₂H₅OH-17%(NH₄)₂SO₄形成的双水相体系中，总黄酮粗提物在双水相体系中的质量分数为17%，然后加入质量分数为2.5%的NaCl，调节pH值为7，混匀，分相，减压干燥得到太行菊总黄酮。

对比例12

(1)将100g太行菊进行粉碎，过60目筛，加入200g的水，用30%柠檬酸调pH值至6，向其中依次加入0.4g纤维素酶、0.2g果胶酶、6.5g亚硝酸钠、10g三乙醇胺、5.5g氟化钠、8g椰子油脂肪酸二乙醇胺和120g粒径为150-250μm的氧化铝颗粒，保持温度在40±2℃的条件下搅拌2h。

(2)用10wt%NaOH溶液调节步骤(1)所得溶液的pH至11，过滤，取滤液，用0.1mol/L的HCl调pH至6，向溶液中加入丙酮萃取（50ml/次，3次），收集有机相，蒸干得到总黄酮粗提物；

(3)将步骤(2)得到的总黄酮粗提物加入到23%C₂H₅OH-17%(NH₄)₂SO₄形成的双水相体系中，总黄酮粗提物在双水相体系中的质量分数为17%，然后加入质量分数为2.5%的NaCl，调节pH值为7，混匀，分相，减压干燥得到太行菊总黄酮。

对比例13

(1)准确称取粉碎的太行菊粉末5g，以1：50（g:ml）料液比加入体积分数70%乙醇中，超声60℃，提取40min，抽滤，收集获得的太行菊总黄酮粗提液，减压蒸馏，得到总黄酮提取物；

(2) 将步骤(1)得到的总黄酮物提液加入到23%C₂H₅OH-17%(NH₄)₂SO₄形成的双水相体系中，总黄酮粗提物在双水相体系中的质量分数为17%，然后加入质量分数为2.5%的NaCl，调节pH值为7，混匀，分相，减压干燥得到太行菊总黄酮。

效果例1

1 破壁率检测：用低倍显微镜进行观测，以每个视野为单位，读取100个视野取平均值后按下式进行计算：

破壁率(％)＝(1-A/B)×100％

式中：A为破碎后的完整细胞数；

B为原始细胞数。

2 总黄酮含量的检测，对实施例1、对比例1-5得到的总黄酮进行含量检测，具体方法如下：

2.1 标准曲线的制备

准确称取120℃干燥至恒重的芦丁标准品5.00 mg，60%乙醇超声溶解，定容于50 ml容量瓶得0.1 mg/ml的标准溶液。准确量取0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 ml的标准溶液，分别置于10 ml容量瓶，加0.5 mol/L NaNO₂溶液0.50>3溶液0.50>2=0.99922。

2.2总黄酮含量的测定

量取样品溶液 1 ml 于 10 ml 试管，加0.5 mol/L NaNO₂溶液0.50>3溶液0.50>

。

3总黄酮得率的测定：

对实施例1、对比例1-12步骤(1)得到的溶液按上述方法1检测破壁率，对实施例1、对比例1-12得到的总黄酮按上述方法2和3分别进行含量检测和提取率测定，结果见表1：

表1

破壁率(%)总黄酮质量(g)总黄酮的提取率(%)总黄酮的含量(%)实施例199.3612.3412.3497.89对比例164.325.875.8796.21对比例267.595.955.9596.34对比例357.645.725.7295.97对比例462.785.865.8696.61对比例563.035.775.7796.58对比例670.246.166.1696.91对比例772.456.336.3397.01对比例863.675.915.9196.83对比例971.296.136.1396.98对比例1077.847.917.9197.37对比例1199.2110.0610.0697.09对比例1253.274.954.9596.21对比例1355.389.879.8797.53

由上表所示，单纯的加入三乙醇胺、氟化钠和椰子油脂肪酸二乙醇胺，破壁效果和溶出效果并不理想，氧化铝颗粒、三乙醇胺、氟化钠和椰子油脂肪酸二乙醇胺同时加入会对破壁以及溶出有较为有利的促进作用，亚硝酸钠的加入可以有效降低太行菊总黄酮在提取过程中的不稳定性。非碱性条件下的酶解破壁，效果并不理想，本发明方法较常规的醇提工艺，总黄酮的提取率可提高25%以上。

本发明中的碱性纤维素酶可为短小芽孢杆菌AC-4所产的酶，也可为现有技术中其他已经分离获得的碱性纤维素酶。碱性果胶酶可选用现有技术中的分离获得的碱性果胶酶。

以上所述实施方式仅为本发明的优选实施例，而并非本发明可行实施的穷举。对于本领域一般技术人员而言，在不背离本发明原理和精神的前提下对其所作出的任何显而易见的改动，都应当被认为包含在本发明的权利要求保护范围之内。

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