一种苗药伤科止痛液的质量检测方法

摘要

本发明公开了苗药伤科止痛液的质量检测方法，该苗药伤科止痛液由如下重量份数的原料药制成：水冬瓜根皮9份，透骨香6份，伸筋草6份，黄芩6份，黄连6份，生栀子6份，黄柏6份，煅石膏6份，紫草6份，天花粉6份，醋乳香3份，醋没药3份，姜黄3份，醋延胡索3份，当归3份，红花3份，泽兰3份，川芎3份，烫骨碎补3份，生大黄3份，续断3份，冰片2份，薄荷脑2份；其质量检测方法包括如下各项：性状：本品为棕褐色液体；气辛，味苦；鉴别：包括红花、黄芩、大黄的薄层色谱鉴别；含量测定：包括黄芩苷(C

说明书

技术领域

本发明涉及中医药质量检测技术领域，具体涉及一种用于治疗急性软组织损伤的药物——苗药伤科止痛液的质量检测方法。

背景技术

急性软组织损伤在中医属“筋伤”的范畴，是骨伤科最常见的疾病。临床主要症状为局部的瘀肿、疼痛、畸形和功能障碍。中医认为“气伤痛、血伤肿”，明确指出损伤之证多伤及气血，血离脉道，瘀血凝结，血瘀气滞，气血运行受阻，出现局部青紫、肿痛、活动障碍。此病虽不危及生命，但却给患者的生活和健康以及工作带来严重的影响，需要我们及时地进行有效的治疗。

对于本类疾病的治疗，西医尚无特效的治疗方法，而中医及民族医药外治方法较多，疗效较好且安全，在临床中得到广泛的应用。疗效学研究已经证明中药在治疗急性软组织损伤所导致的疼痛、肿胀，关节功能障碍方面有明显的效果，且外用方法可以直达病所，通过皮肤为媒介吸收药物，使药物作用于损伤局部，迅速减轻局部炎症水肿，达到消除炎症、缓解疼痛的效果。现代的药理学研究也表明了中药在抗炎消肿、对抗致炎因子、增加痛阈值、改善微循环等多方面有着明显的作用。

目前治疗治疗急性软组织损伤的中成药主要有：三七活血膏、云南白药酊、展筋酊、消痛酊剂、花红消肿止痛酊、复方红花酚等。这些药物都经过多年的临床应用，具有各自的特点和疗效，然而，如何在这些现有药物的基础上进一步开发出新的具有更好效果的治疗急性软组织损伤的药物，依然是广大医药领域学者专家们面临的一个技术难题。

贵州中草药资源丰富，苗药为具有贵州特色的民族药物。苗医是中国民族医药的重要组成部分，至今已经有三千多年的历史，尤以其内病外治的疗法闻名中外。在苗医的理论体系中，损伤的的病机是一个人身体过于疲劳，无法抵御过量的负荷，导致人体的气血、经络的运动不正常，产生疼痛不适的症状。苗医治病的过程就是要采用各种手段使人体气血、经络疏通，达到疼痛消除，各个器官功能恢复正常的目的。

贵阳中医学院第二附属医院研究出一种苗药伤科止痛液，它以水冬瓜根皮、透骨香为君药；以伸筋草、黄连、黄芩、生栀子、黄柏、煅石膏、紫草、天花粉共为臣药，川芎、醋乳香、醋没药、醋延胡索、姜黄、当归、红花、泽兰、烫骨碎补、生大黄、续断共为佐药；以冰片、薄荷脑为使药。以上诸药合用，共收活血化瘀，消肿止痛之功。苗药伤科止痛液组成药物分别具有抗炎消肿、对抗致炎因子、止血、镇痛、改善微循环、增强免疫、促进修复等各方面的功效。但目前没有该药物适用的质量检测方法，难以保证制剂的稳定性和疗效。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于治疗急性软组织损伤的苗药伤科止痛液的质量检测方法，从而保证该制剂的稳定性和疗效。

本发明的技术方案是这样的：

1、一种苗药伤科止痛液的质量检测方法，其特征在于：所述苗药伤科止痛液由如下重量份数的原料药制成：水冬瓜根皮9份，透骨香6份，伸筋草6份，黄芩6份，黄连6份，生栀子6份，黄柏6份，煅石膏6份，紫草6份，天花粉6份，醋乳香3份，醋没药3份，姜黄3份，醋延胡索3份，当归3份，红花3份，泽兰3份，川芎3份，烫骨碎补3份，生大黄3份，续断3份，冰片2份，薄荷脑2份；

其质量检测方法包括如下各项：

性状：本品为棕褐色液体；气辛，味苦；

鉴别：包括红花、黄芩、大黄的薄层色谱鉴别；

含量测定：包括黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₁)的含量测定。

2、根据权利要求1所述的苗药伤科止痛液的质量检测方法，其特征在于：红花的薄层色谱鉴别方法如下：取本品，自然挥干至体积为原来的一半，作为供试品溶液；另取红花对照药材，加丙酮溶液，密塞，超声提取，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇溶解，作为对照品溶液；吸取上述供试品溶液和对照品溶液，分别点于聚酰胺薄膜板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇按10:2:1:0.2体积比的溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝乙醇液，热风吹至斑点显色清晰，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的绿色斑点。

3、根据权利要求1所述的苗药伤科止痛液的质量检测方法，其特征在于：黄芩的薄层色谱鉴别方法如下：取本品，自然挥干至体积为原来的一半，作为供试品溶液；另取黄芩对照药材，加乙酸乙酯-甲醇按3:1体积比的混合溶液，加热回流，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，取上清液作为对照药材溶液；再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取供试品溶液、对照品溶液及对照药材溶液，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸按7:3:1:2体积比的溶液为展开剂，预饱和后展开，取出，晾干，喷以三氯化铁乙醇液，日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

4、根据权利要求1所述的苗药伤科止痛液的质量检测方法，其特征在于：取本品，水浴蒸干，加水溶解，置分液漏斗中，用氯仿萃取，取氯仿层，蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材，加甲醇，浸泡，滤过，取滤液，蒸干，残渣加水使溶解，再加盐酸，加热回流后立即冷却，用乙醚分2次振摇提取，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷溶解，作为对照药材溶液；再取大黄酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取供试品溶液、对照品溶液及对照药材溶液，分别点于同一硅胶H薄层板上，以石油醚-甲酸乙酯-甲酸按15:5:1体积比的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的四个橙黄色荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点。

5、根据权利要求1所述的苗药伤科止痛液的质量检测方法，其特征在于：黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₁)的含量测定方法为：

色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.2％磷酸水溶液梯度洗脱：0～16min(47:53)，l7～24min(95:5)，25～30min(47:53)；检测波长为280nm；柱温30℃；流速为1ml/min；

对照品溶液的制备：精密称取减压干燥的黄芩苷对照品，置量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀；再精密量取后置容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制成含黄芩苷104.2161μg/ml的对照品溶液；

供试品溶液的制备：取试验样品，精密量取，置锥形瓶中，加乙醇，加热回流，放冷，滤过，滤液转移至量瓶中，用少量乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。

通过以上方法，能够制定出苗药伤科止痛液的质量标准，从而实现对苗药伤科止痛液的质量检测，经实验证明，以该方法为标准检测苗药伤科止痛液，可以很好的保证制剂的稳定性，从而保证其疗效。

附图说明

图1是苗药伤科止痛液中紫草薄层鉴别一；图中，1、紫草对照药材；2-4、苗药伤科止痛液供试品；5、阴性供试品(缺紫草药材)；

图2是苗药伤科止痛液中紫草薄层鉴别二；图中，1、紫草对照药材；2-4、苗药伤科止痛液供试品；5、阴性供试品(缺紫草药材)。

图3是苗药伤科止痛液中当归薄层鉴别一；图中，1、当归对照药材；2-4、苗药伤科止痛液供试品；5、阴性供试品(缺当归药材)；

图4是苗药伤科止痛液中当归薄层鉴别二；1、当归对照药材；2-4、苗药伤科止痛液供试品；5、阴性供试品(缺当归药材)；

图5是苗药伤科止痛液中红花薄层鉴别；图中，1、红花对照药材；2-4、苗药伤科止痛液供试品；5、阴性供试品(缺红花药材)；

图6是苗药伤科止痛液中黄芩薄层鉴别；图中，1、黄芩对照药材；2、黄芩苷对照品；3-5、苗药伤科止痛液供试品；6、阴性供试品(缺黄芩药材)；

图7是苗药伤科止痛液中大黄薄层鉴别；图中，1、大黄对照药材；2、瓜氨酸对照品；3-5、苗药伤科止痛液供试品；5、阴性供试品(缺大黄药材)；

图8是苗药伤科止痛液中天花粉薄层鉴别；图中，1、天花粉对照药材；2、瓜氨酸对照品；3-5、苗药伤科止痛液供试品；6、阴性供试品(缺天花粉药材)；

图9是苗药伤科止痛液中天花粉薄层鉴别；图中，1、天花粉对照药材；2、瓜氨酸对照品；3-5、苗药伤科止痛液供试品；6、阴性供试品(缺天花粉药材)；

图10是苗药伤科止痛液中骨碎补薄层鉴别；图中，1、骨碎补对照药材；2、柚皮苷对照品；3-5、苗药伤科止痛液供试品；6、阴性供试品(缺骨碎补药材)；

图11是苗药伤科止痛液中骨碎补薄层鉴别；图中，1、骨碎补对照药材；2、柚皮苷对照品；3-5、苗药伤科止痛液供试品；6、阴性供试品(缺骨碎补药材)；

图12是苗药伤科止痛液中冰片薄层鉴别；图中，1、冰片对照药材；2-4、苗药伤科止痛液供试品；5、阴性供试品(缺冰片药材)；

图13是苗药伤科止痛液中冰片薄层鉴别；图中，1、冰片对照药材；2-4、苗药伤科止痛液供试品；5、阴性供试品(缺冰片药材)；

图14是苗药伤科止痛液中伸筋草薄层鉴别；图中，1、伸筋草对照药材；2-4、苗药伤科止痛液供试品；5、阴性供试品(缺伸筋草药材)；

图15是苗药伤科止痛液中伸筋草薄层鉴别；图中，1、伸筋草对照药材；2-4、苗药伤科止痛液供试品；5、阴性供试品(缺伸筋草药材)。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步的详细说明，但本发明的保护范围不受具体实施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。

实施例1：

1制备工艺研究

1.1剂型选择及规格确定的依据：本发明为中药复方，质量稳定，临床疗效确切，将该品制成酊剂，既能起到局部理疗的作用，又能使药液直接到达患处而起到活血化瘀，消肿止痛之功，对病例选择上无禁忌。经试验研究，本品密封冷浸2次，两次浸液合并，加入冰片2g、薄荷脑2g(用少量乙醇溶解)，混匀，定容到1000ml，分装每袋规格：150ml。

1.2制法及工艺参数：处方中除冰片、薄荷脑药材外，其余混合装纱布袋置容器中，加入60％乙醇，密封冷浸2次，第一次加5.6倍量，第二次加4倍量，每次冷浸7天，每日搅拌一次，过滤，弃渣。两次浸液合并，混匀；取冰片2g、薄荷脑2g，混合，加入适量乙醇使溶解，加60％乙醇至1000ml，缓缓加入上述药液中，搅匀，分装，即得。

1.2.1提取工艺：首先，对影响醇提取的因素主要有以下几个方面：加醇量、醇浓度、浸提时间、浸提次数。因此我们对这4个主要因素进行了3因素3水平的正交考察，以黄芩苷的含量为指标优选最佳工艺参数。最终确定提取工艺为：处方中除冰片、薄荷脑2味药材外，其余药材用纱布袋包装，置容器中，加入60％乙醇，密封冷浸2次，第一次加5.6倍量，第二次加4倍量，每次冷浸7天，每日搅拌一次，过滤，弃渣。两次浸液合并，混匀；取冰片2g、薄荷脑2g，混合，加入少量乙醇使溶解，缓缓加入上述药液中，加60％乙醇至1000ml，搅匀，分装，即得。

2质量检测方法

2.1性状：本发明为棕褐色液体；气辛，味苦。

2.2鉴别：

2.2.1紫草的薄层色谱研究

取本发明制剂30ml，水浴蒸干，加水20ml溶解，用石油醚(60-90℃)20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。取紫草的阴性模拟制剂30ml，同法制备阴性对照溶液。另取紫草药材粉末0.5g，同法制备对照品溶液。照《中国药典》2015年版四部薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:5:0.5:0.1)的溶液为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，无相应的斑点(见图1)。参照“银花散中药材的薄层色谱鉴别及研究”中对紫草的薄层色谱研究：取本品30ml，水浴蒸干，加20ml水溶解，用乙醚萃取3次，每次20ml，合并乙醚层，蒸干，残渣加1ml甲醇溶解。取紫草的阴性模拟制剂30ml，同法制备阴性对照溶液；另取紫草对照药材0.5g，加入乙醚20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml溶解，作为对照品溶液。照《中国药典》2015年版四部薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮-氯仿-冰醋酸(10:1:0.25:0.5)的溶液为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，无相应的斑点(见图2)。故紫草的定性鉴别未列入标准。

2.2.2当归的薄层色谱研究

取本制剂20ml，水浴蒸干，加入乙醚20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加1ml乙醇溶解，作为供试品溶液。取当归对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。另取缺当归阴性模拟试剂20ml，同法制备阴性对照液。照《中国药典》2015年版四部薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点样于同一硅胶G板上，以正己烷-乙酸乙酯(4:1)的溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品溶液与阴性对照溶液相互干扰(见图3)。参照“乳康平颗粒剂中赤芍、当归及黄芪的薄层鉴别”中对当归的薄层色谱研究：取本品20ml，水浴蒸干，加20ml水溶解，用乙醚萃取3次，每次15ml，合并乙醚层，蒸干，残渣加1ml甲醇溶解。取当归的阴性模拟制剂20ml，同法制备阴性对照溶液；另取当归对照药材0.5g，加入乙醚20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml溶解，作为对照品溶液。照《中国药典》2015年版四部薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点样于同一硅胶G板上，以石油醚(30-60℃)-乙酸乙酯(4:1)的溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品溶液与阴性对照溶液相互干扰(见图4)。故当归的定性鉴别未列入标准。

2.2.3红花的薄层色谱研究

取本品和缺红花阴性模拟试剂各1ml，自然挥干至0.5ml，分别作为供试品溶液和阴性对照溶液。另取红花药材1g，加80％丙酮溶液50ml，密塞，超声提取30分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加1ml甲醇溶解。照《中国药典》2015年版四部薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述三种溶液各3μl，分别点于聚酰胺薄膜板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇(10:2:1:0.2)的溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铝乙醇液(95％乙醇)，热风吹至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的绿色斑点，阴性对照无干扰。经3批中试样品验证，此方法重复性好，故将其收入质量标准草案正文。(见图5)。

2.2.4黄芩的薄层色谱研究

取本品和缺黄芩阴性模拟试剂各1ml，自然挥干至0.5ml，分别作为供试品溶液和阴性对照液。另取黄芩对照药材1g，加乙酸乙酯-甲醇(3:1)的混合溶液30ml，加热回流30min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，取上清液作为对照药材溶液。再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照《中国药典》2015年版四部薄层色谱法(通则0502)试验，吸取供试品溶液、阴性对照液、对照品及对照药材各10μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(7:3:1:2)的溶液为展开剂，预饱和30min，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁乙醇液，日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的墨绿色斑点，阴性对照无干扰。(见图6)。

2.2.5大黄的薄层色谱研究

取本品30ml，水浴蒸干，加30ml水溶解，置分液漏斗中，用30ml氯仿萃取，取氯仿层，蒸干，残渣加1.0ml甲醇溶解，作为供试品溶液。取缺大黄的阴性模拟制剂30ml，同法制备阴性对照溶液；另取大黄对照药材1g，加甲醇20ml，浸泡1小时，滤过，取滤液5ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，再加盐酸1ml，加热回流30分钟，立即冷却，用乙醚分2次振摇提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml溶解，作为对照药材溶液。再取大黄酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照《中国药典》2015年版四部薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述4种溶液各5μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的四个橙黄色荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点；在缺大黄药材的阴性样品色谱相应位置上，阴性对照无干扰。(见图7)。

2.2.6天花粉的薄层色谱研究

取本制剂20ml，水浴蒸干，加入稀乙醇20ml，超声处理30分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。取天花粉的阴性模拟制剂20ml，同法制备阴性对照溶液。取天花粉对照药材2g，同法制成对照药材溶液。再取瓜氨酸对照品，加稀乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照《中国药典》2015年版四部薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述四种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-无水乙醇-冰醋酸-水(8:2:2:3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。供试品色谱中，供试品溶液与阴性对照溶液相互干扰(见图8)。参照“阿胶、藕节、天花粉等氨基酸薄层层析方法研究与改进”中天花粉的方法”中对天花粉的薄层色谱研究：取本制剂30ml，水浴蒸干，加入盐酸-水(1:1)溶液20ml，加热回流1小时，趁热滤过，滤液蒸干，残渣加适量甲醇转移至25ml容量瓶中，加甲醇至刻度线，摇匀，作为供试品溶液。取天花粉的阴性模拟制剂30ml，同法制备阴性对照溶液。取天花粉对照药材2g，同法制成对照药材溶液。再取瓜氨酸对照品，加稀乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照《中国药典》2015年版四部薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述四种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丙醇-36％乙酸(7:3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。供试品色谱中，供试品溶液与阴性对照溶液相互干扰(见图9)。因此，天花粉的定性鉴别未列入质量标准草案。

2.2.7骨碎补的薄层色谱研究

取本品20ml，水浴蒸干，残渣加甲醇20ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。取骨碎补的阴性模拟制剂20ml，同法制备阴性对照溶液。另取骨碎补对照药材粉末0.5g，加甲醇30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。再取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照《中国药典》2015年版四部薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述四种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(1:12:2.2.5:3)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铝试液，105℃烘烤5分钟，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，无相应的斑点(见图10)。参照“接骨续筋胶囊薄层色谱鉴别方法研究”和“壮骨关节丸中淫羊藿、骨碎补的薄层色谱鉴别”中对骨碎补的薄层色谱研究：取本品30ml，水浴蒸干，加30ml水溶解，置150ml分液漏斗中，用30ml氯仿萃取，弃去氯仿层，水层用30ml乙酸乙酯振摇提取，取乙酸乙酯层，蒸干，残渣加1.0ml甲醇溶解，作为供试品溶液。取阴性样品30ml，同法制成缺骨碎补药材阴性样品。另取骨碎补对照药材粉末0.5g，加甲醇30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。再取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2015年版四部通则0502)试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液和阴性样品溶液各10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一GF254薄层板上，以环己烷-乙酸乙醋-甲酸-水(l:12:2.2.5:3)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铝试液，105℃烘烤5分钟，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，供试品溶液与阴性对照溶液相互干扰(见图11)。因此，骨碎补的定性鉴别未列入质量标准草案。

2.2.8冰片的薄层色谱研究

参照“TLC、GC法检测冠心苏合胶囊中的冰片”中对冰片薄层色谱研究：取本品10ml，水浴蒸干，加入乙酸乙酯10ml，萃取，取乙酸乙酯液，作为供试品溶液。取缺冰片阴性模拟试剂10ml，同法制备阴性对照液。另取冰片对照药材1g，加乙酸乙酯制成浓度为2mg/ml的溶液，作为对照品溶液。照《中国药典》2015年版四部薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于硅胶G板上，以石油醚(30～60℃)-乙酸乙酯(9:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，供试品溶液与阴性对照溶液相互干扰(见图12)。参照“复方消炎散中冰片和姜黄的薄层色谱鉴别”中对冰片薄层色谱研究：取本品10ml，水浴蒸干，加三氯甲烷萃取，取三氯甲烷液10ml，萃取，作为供试品溶液。取缺冰片阴性模拟试剂10ml，同法制备阴性对照液。另取冰片对照药材，加乙酸乙酯制成浓度为1mg/ml的溶液，作为对照品溶液。照《中国药典》2015年版四部薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于硅胶G板上，以环己烷－乙酸乙酯(17:3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，供试品溶液与阴性对照溶液相互干扰(见图13)。因用两种方法均有干扰，故冰片的定性鉴别未列入标准。

2.2.9伸筋草的薄层色谱研究

取本品20ml，水浴蒸干，加乙醚20ml，超声30min，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液。取伸筋草的阴性模拟制剂20ml，同法制备阴性对照溶液。另取伸筋草对照药材1g，加乙醚15ml，浸泡过夜，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。照《中国药典》2015年版四部薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述3种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(40:1)的溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，供试品溶液与阴性对照溶液相互干扰(见图14)。参照“仙加颈痛散剂的薄层色谱鉴别”中对伸筋草薄层色谱研究：取本品20ml，水浴蒸干，加三氯甲烷20ml，萃取，取三氯甲烷液，作为供试品溶液。取缺伸筋草阴性模拟试剂20ml，同法制备阴性对照液。另取伸筋草对照药材1g，加乙醚15ml，浸泡过夜，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。照《中国药典》2015年版四部薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于硅胶G板上，以石油醚(60-90℃)－乙酸乙酯(5:3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硫酸乙醇试液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，供试品溶液与阴性对照溶液相互干扰(见图15)。因用两种方法均有干扰，故伸筋草的定性鉴别未列入标准。

2.3检查 按照酊剂项下的有关规定(《中国药典》2015年版四部通则0120)进行检查。分别检查装量、乙醇量、微生物限度，应符合规定。

2.3.1装量 按照《中国药典》2015年版四部最低装量检查法(通则0942)项下的规定检查，应符合规定。

2.3.2乙醇量测定 按照《中国药典》2015年版四部乙醇量测定法(通则0711)项下蒸馏法的第二法(法2)进行测定，应不低于46.0％—56.0％。

2.3.3微生物限度 按照《中国药典》2015年版四部非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法(通则1105)和控制菌检查法(通则1106)及非无菌药品微生物限度标准(通则1107)检查，应符合规定。

各项检查结果表明，本品符合《中国药典》2015年版四部通则0120酊剂项下的有关规定。

2.4含量测定

色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.2％磷酸水溶液梯度洗脱：0～16min(47:53)，l7～24min(95:5)，25～30min(47:53)；流速为1ml/min；柱温30℃；检测波长为280nm。理论板数按黄芩苷峰计，应不低于2500。

对照品溶液的制备精密称取在60℃减压干燥4小时的黄芩苷对照品0.01117g，置50ml量瓶中，用70％甲醇稀释至刻度，摇匀；再精密量取5ml置10ml容量瓶中，用70％甲醇稀释至刻度，摇匀，制成含黄芩苷104.2161μg/ml的对照品溶液。

供试品溶液的制备取试验样品10ml，精密量取，置50ml锥形瓶中，加70％乙醇约30ml，加热回流30min，放冷，滤过，滤液转移至50ml量瓶中，加70％乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。

本发明每袋含黄芩以黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₁)计，不得少于57.1mg。

3稳定性实验资料

根据《医疗机构制剂注册管理办法》(试行)、《药物研究技术指导原则》关于药品稳定性考察的要求，以本品的质量标准草案为依据，进行了6个月的恒温加速试验和13个月长期稳定性考察。

试验方法：

加速稳定性试验：在袋装，23～27℃，相对湿度18～22％条件下，放置6个月，进行加速稳定性试验。分别于0、1、2、3、6月进行考核。

长期稳定性试验：在袋装的条件下，室温放置13个月，进行长期稳定性试验。分别于0、1、3、6、9、13月进行考核。

药品包装：透明复合膜[PET]聚乙烯(中药包装卷)，每袋150ml。

考察指标为：性状、鉴别、检查，试验方法按该制剂药品的质量标准草案中的方法进行及《中国药典》2015年四部相应方法操作。

苗药伤科止痛液经6个月加速试验和13个月长期试验，各项指标基本稳定，表明本品稳定，其有效期可暂定为12个月。

当然，以上只是发明的具体应用范例，本发明还有其他的实施方式，凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本发明所要求的保护范围之内。