通过测定馥芳香艾纳素的含量鉴定壮药山风真伪的方法

摘要

本发明公开了一种通过测定馥芳香艾纳素的含量鉴定壮药山风真伪的方法，其中，主要是采用液相色谱技术和外标法来测定壮药山风馥芳香艾纳素的含量，本发明提供的检测方法准确可靠，能够有效消除样品中其他杂志的干扰，可获得满意的分离检测效果；并且本方法操作简便，易行，成本低，实用性强，非常适合产品质量的检测。

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种通过测定馥芳香艾纳素的含量鉴定壮药山风真伪的方法。

背景技术

壮药山风[Blumea aromatica(Wall.)DC.]又名棵矮瓤、香艾纳、黄药、大开门等，为菊科(Asteraceae)香艾纳属(Blumea)多年生草本植物，全草入药。主产自广西、广州、贵州、云南、台湾等省区，生长于低山林缘、荒坡或山谷路旁，是广西道地壮族用药，在多种壮瑶药方剂中使用(如华佗风痛宝、地灵丢棒汤)，性温味辛，具有祛风消肿，活血止痒，透疹消斑，消炎镇痛的功效，主要用于治疗风湿性关节痛，湿疹、皮肤瘙痒，外伤出血。目前，国内外对山风化学成分的研究及报道较少，尤其没有指标成分的含量测定方法，对其质量控制研究不够。而质量标准是中医药现代化过程中的关键环节，加强质量标准研究，建立起符合中医药理论和中药特点的质量标准体系尤为重要。

馥芳香香艾纳素在壮药山风中的含量为0.05％～0.07％，馥芳香艾纳素对EV71病毒的IC₅₀是6.73μM，因此，该化合物是该药的主要活性成分之一。并且馥芳香香艾纳素为黄酮类化合物，在含量检测中灵敏度和准确度较高，可作为壮药山风质量标准评价的指标成分，但是，现有技术中还没有利用馥芳香香艾纳素含量检测壮药山风质量的相关报道。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少下述将说明的优点。

本发明的另一个目的是，提供一种通过测定馥芳香艾纳素的含量鉴定壮药山风真伪的方法。

为实现上述目的和一些其他的目的，本发明采用如下技术方案：

一种通过测定馥芳香艾纳素的含量鉴定壮药山风真伪的方法，其中，主要包括以下步骤：

步骤A、对壮药山风样品中的馥芳香艾纳素进行提取纯化，得到馥芳香艾纳素溶液；

步骤B、采用液相色谱技术和外标法对所述馥芳香艾纳素进行测定分析，得到所述样品中馥芳香艾纳素的含量；

步骤C、当所测定的馥芳香艾纳素含量值超过0.05％时，判断所测壮药山风样品为真品；当所测定的馥芳香艾纳素含量值低于0.05％时，则判断所测壮药山风样品非真品或劣质产品。

一种通过测定馥芳香艾纳素的含量鉴定壮药山风真伪的方法，其中，包括以下步骤：

步骤a、对壮药山风样品和标准品中的馥芳香艾纳素进行提取纯化，得到样品馥芳香艾纳素溶液和标准品馥芳艾纳香素溶液；

步骤b、采用液相色谱技术分别对所述样品馥芳香艾纳素溶液和标准品馥芳艾纳香素溶液进行检测，得到色谱图Ⅱ和样品馥芳香艾纳素溶液的色谱峰面积，以及色谱图Ⅰ以及标准品馥芳艾纳香素溶液的色谱峰面积；

步骤c、按照以下方程式计算，得到馥芳香艾纳素的含量X％：

$X=\frac{A_s\times V\times c\times 100}{A_{sd}\times m\times 1000}$

其中：

V：样品溶液体积，单位为ml；

A_s：样品馥芳香艾纳素溶液的色谱峰面积；

A_sd：标准品馥芳艾纳香素溶液的色谱峰面积；

c：标准品溶液的浓度，单位为mg/ml；

m：样品的质量，单位为g。

步骤d、当所测定的馥芳香艾纳素含量值超过0.05％时，判断所测壮药山风样品为真品；当所测定的馥芳香艾纳素含量值低于0.05％时，则判断所测壮药山风样品非真品或劣质产品。

优选的是，所述的通过测定馥芳香艾纳素的含量鉴定壮药山风真伪的方法中，步骤A或a中，所述提取方法为：将提取剂与所述壮药山风样品混合超声波处理28～32分钟，提取2～3次，得到提取溶液。

优选的是，所述的通过测定馥芳香艾纳素的含量鉴定壮药山风真伪的方法中，所述提取剂是质量浓度为45～100％以上的甲醇溶液、质量浓度为45～100％以上的乙醇溶液或质量浓度为45～100％以上的丙酮溶液。

优选的是，所述的通过测定馥芳香艾纳素的含量鉴定壮药山风真伪的方法中，所述提取剂是质量浓度为50％的甲醇溶液。

优选的是，所述的通过测定馥芳香艾纳素的含量鉴定壮药山风真伪的方法中，步骤A或a中，所述纯化方法为：将提取溶液过Alltech固相萃取柱得到滤液，将所述滤液蒸干后用质量浓度为45～100％的甲醇溶液溶解，过滤得到馥芳香艾纳素溶液。

优选的是，所述的通过测定馥芳香艾纳素的含量鉴定壮药山风真伪的方法中，步骤A或a中，所述馥芳香艾纳的分子式为C₁₇H₁₄O₇，结构式为4,5,6-三羟基-3,7二甲氧基黄酮。

优选的是，所述的通过测定馥芳香艾纳素的含量鉴定壮药山风真伪的方法中，步骤B或b中，所述液相色谱技术检测条件为：

柱温：26～28℃

流动相：甲醇-水溶液，其中甲醇与水的体积比为60:40；

检测器：紫外线检测器，使用波长341nm；

进样量：20μl；

流速：1.0ml/min。

本发明至少包括以下有益效果：本发明通过提取状药山风中的主要活性成分-馥芳香艾纳素，并其含量作为壮药山风质量标准评价的指标，可准确鉴定状药山风的真伪，并对其质量做出准确的评价，具有检测灵敏度和准确度较高、可重复性高、简便易行的优点，实现了山风药材及其制剂质量的稳定和可控，为广西壮药山风的广泛的应用推广及带动了民族药的发展提供理论与方法支持。本发明经过线性关系试验、精密度试验、稳定性试验、重复性试验、加样回收率试验对该方法进行验证，结果表明本发明提供的检测方法准确可靠，能够有效消除样品中其他杂志的干扰，可获得满意的检测效果；并且本方法操作简便，易行，成本低，实用性强，非常适合产品质量的检测。

本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。

附图说明

图1为本发明所述的馥芳香艾纳素结构图；

图2为本发明所述的标准品中馥芳香艾纳素的色谱图；

图3为本发明所述的样品中馥芳香艾纳素的色谱图；

图4为本发明所述的馥芳香艾纳素标准曲线。

具体实施方式

下面结合附图以及实例对本发明做详细说明，以令本领域普通技术人员参阅本说明书后能够据以实施。

一种通过测定馥芳香艾纳素的含量鉴定壮药山风真伪的方法，其中，主要包括以下步骤：步骤A、对壮药山风样品中的馥芳香艾纳素进行提取纯化，得到馥芳香艾纳素溶液；步骤B、采用液相色谱技术和外标法对所述馥芳香艾纳素进行测定分析得到图2、图3以及图4，对所述图2、图3以及图4分析得到所述样品中馥芳香艾纳素的含量；步骤C、当所测定的馥芳香艾纳素含量值超过0.05％时，判断所测壮药山风样品为真品；当所测定的馥芳香艾纳素含量值低于0.05％时，则判断所测壮药山风样品非真品或劣质产品。

一种通过测定馥芳香艾纳素的含量鉴定壮药山风真伪的方法，其中，包括以下步骤：步骤a、对壮药山风样品和标准品中的馥芳香艾纳素进行提取纯化，得到样品馥芳香艾纳素溶液和标准品馥芳艾纳香素溶液；步骤b、采用液相色谱技术分别对所述样品馥芳香艾纳素溶液和标准品馥芳艾纳香素溶液进行检测，得到图3和样品馥芳香艾纳素溶液的色谱峰面积，以及图2以及标准品馥芳艾纳香素溶液的色谱峰面积；步骤c、按照以下方程式计算，得到馥芳香艾纳素的含量X％：

$X=\frac{A_s\times V\times c\times 100}{A_{sd}\times m\times 1000}$

其中：V：样品溶液体积，单位为ml；A_s：样品馥芳香艾纳素溶液的色谱峰面积；A_sd：标准品馥芳艾纳香素溶液的色谱峰面积；c：标准品溶液的浓度，单位为mg/ml；m：样品的质量，单位为g。步骤d、当所测定的馥芳香艾纳素含量值超过0.05％时，判断所测壮药山风样品为真品；当所测定的馥芳香艾纳素含量值低于0.05％时，则判断所测壮药山风样品非真品或劣质产品。

所述的通过测定馥芳香艾纳素的含量鉴定壮药山风真伪的方法中，步骤A或a中，所述提取方法为：将提取剂与所述壮药山风样品混合超声波处理28～32分钟，提取2～3次，得到提取溶液。

所述的通过测定馥芳香艾纳素的含量鉴定壮药山风真伪的方法中，所述提取剂是质量浓度为45～100％以上的甲醇溶液、质量浓度为45～100％以上的乙醇溶液或质量浓度为45～100％以上的丙酮溶液。

所述的通过测定馥芳香艾纳素的含量鉴定壮药山风真伪的方法中，所述提取剂是质量浓度为50％的甲醇溶液。

所述的通过测定馥芳香艾纳素的含量鉴定壮药山风真伪的方法中，步骤A或a中，所述纯化方法为：将提取溶液过Alltech固相萃取柱得到滤液，将所述滤液蒸干后用质量浓度为45～55％的甲醇溶液溶解，过滤得到馥芳香艾纳素溶液。

所述的通过测定馥芳香艾纳素的含量鉴定壮药山风真伪的方法中，步骤A或a中，所述馥芳香艾纳的分子式为C₁₇H₁₄O₇，结构式为4,5,6-三羟基-3,7二甲氧基黄酮。

所述的通过测定馥芳香艾纳素的含量鉴定壮药山风真伪的方法中，步骤B或b中，所述液相色谱技术检测条件为：

柱温：26～28℃

流动相：甲醇-水溶液，其中甲醇与水的体积比为60:40；

检测器：紫外线检测器，使用波长341nm；

进样量：20μl；

流速：1.0ml/min。

所述的线性关系试验是：通过本发明提供的方法提取标准品中的馥芳香艾纳溶液，然后配制成质量溶度为100μg/ml的溶液，接着依次取1、2、4、6、8、10ml，置于10ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，按本发明提供的方法得到标准曲线图4，所述标准曲线的纵坐标为色谱峰面积，横坐标为进样量单位为μg，标准曲线线性方程为y＝51.639x-6.4916，R2＝0.9997。结果表明，馥芳香艾纳素溶液进样量在0.2μg～2.0μg之间时，进样量与峰面积之间有良好线性关系。

所述的精密度试验是：吸取通过本发明提供的方法从标准品中提取的馥芳香艾纳素溶液，通过本发明提供的液相色谱技术连续重复进样6次，记录色谱图，分析比较各个色谱图的峰面积，得到相对标准偏差为1.09％，表明本发明提供的方法精密度良好。

所述的稳定性试验是：取6份通过本发明提供的方法从壮药山风标准品中提取的馥芳香艾纳素，每份1ml，依次放置0、1、2、4、8、12h后，分别吸取20μL注入高效液相色谱仪测定，记录色谱图，分析比较各个色谱图的峰面积，得到相对标准偏差为1.81％，表明所述馥芳香艾纳素溶液在12h内稳定。

所述的重复性试验是：称取同一批壮药山风样品粉末6份，每份约1g，通过本发明提供的方法检测每份样品中馥芳香艾纳素的含量，并进行分析比较，得到相对偏差值为1.23％，表明本发明提供的方法重复性良好。

所述的加样回收率试验是：称6份质量浓度为100μg/ml的馥芳香艾纳溶液20μl，按本发明提供的方法进行测定后，计算回收率得到平均回收率为99.41％，相对标准偏差为1.72％，表明本发明提供的方法加样回收率较好。

尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。