一种具有治疗肿瘤放化疗骨髓抑制的中药组合物的质量检测方法

摘要

本发明公开了一种具有治疗肿瘤放化疗骨髓抑制的中药组合物的质量检测方法，该方法包括黄芪、女贞子、骨碎补和淫羊藿的薄层鉴定和黄芪、女贞子的高效液相色谱法含量测定方法。本发明针对现有技术检测方法的诸多不足，通过大量实验筛选出最佳的薄层鉴别方法，活性成分检测方法(包括流动相组成，检测波长、色谱柱，柱温等分析条件)，经实验验证表明，本发明提供的检测方法，可以全面、客观、准确的检测和评价具有治疗肿瘤放化疗骨髓抑制的中药组合物的质量，为保证临床疗效具有重要意义。

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药组合物的质量检测方法，具体涉及一种具有治疗肿瘤放化疗骨髓抑制的中药组合物的质量检测方法。

背景技术

双黄升白口服液是用现代先进工艺提炼精制而成的一种纯天然中药制剂，由常熟雷允上制药有限公司生产，由黄芪、酒制黄精、酒制女贞子、烫制骨碎补、天花粉、淫羊藿制成。具有益气养阴、补肾生髓，临床用于治疗肿瘤放化疗骨髓抑制所引起的白细胞降低症，疗效可靠。现有技术中关于双黄升白口服液的检测方法并未报道，其中单一药味的检测报道，并不能全面、客观的检测和评价双黄升白口服液的质量。

发明内容

发明目的：本发明的目的是解决现有技术的不足，提供一种具有治疗肿瘤放化疗骨髓抑制的中药组合物(双黄升白口服液)的质量检测方法，该检测方法可以客观、全面、准确的评价具有治疗肿瘤放化疗骨髓抑制所引起的白细胞降低症的中药组合物(双黄升白口服液)的质量，对控制该具有治疗肿瘤放化疗骨髓抑制所引起的白细胞降低症的中药组合物(双黄升白口服液)的质量与保证临床疗效具有重要意义。

技术方案：为了实现以上技术目的，本发明采取的技术方案为：

一种具有治疗肿瘤放化疗骨髓抑制的中药组合物的质量检测方法，按重量份数计，所述的中药组合物由黄芪500～1000份、酒制黄精500～1000份、酒制女贞子250～500份、烫制骨碎补500～1000份、天花粉500～1000份、淫羊藿250～500份制成口服液制剂，所述检测方法包括黄芪、女贞子、骨碎补和淫羊藿的薄层鉴定，包括以下步骤：

黄芪的薄层鉴定，包括以下步骤：

(1)制备供试品溶液：取中药组合物口服液10～20ml，用水饱和正丁醇振摇提取2～3次，每次40～80ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2～4次，每次40～80ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；

(2)制备对照品溶液：取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1～5mg的溶液，作为对照品溶液；

(3)照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为13∶7∶2三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，样品日光下显相同的棕褐色斑点，紫外光灯下显相同的橙黄色荧光斑点；

骨碎补的薄层鉴定，包括以下步骤：

(1)制备供试品溶液：取中药组合物口服液10～20ml，加乙醚提取2～3次，每次20～40ml，弃去乙醚液；药液加乙酸乙酯提取2～3次，每次20～40ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；

(2)制备对照品溶液：取柚皮苷对照品，加甲醇分别制成每1ml含1～5mg的溶液，作为对照品溶液；

(3)照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比4∶6∶6∶1∶0.5的甲醇-丁酮-氯仿-水-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同天蓝色的荧光斑点；

淫羊藿的薄层鉴定，包括以下步骤：

(1)制备供试品溶液：取中药组合物口服液10～20ml，加乙醚提取2～3，每次20～40ml，弃去乙醚液；药液加乙酸乙酯提取2～3次，每次20～40ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；

(2)制备对照品溶液：取淫羊藿苷对照品，加甲醇分别制成每1ml含1～5mg的溶液，作为对照品溶液；

(3)照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为13∶7∶2的三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同棕黄色的斑点；

女贞子的薄层鉴定，包括以下步骤：

(1)制备供试品溶液：取中药组合物口服液10～20ml，通过D101型大孔吸附树脂柱，以水洗脱，弃去水液，再用体积浓度20％乙醇洗脱，弃去洗脱液，继用体积浓度30％乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇使溶解，作为供试品溶液；

(2)制备对照品溶液：取特女贞苷对照品，加甲醇分别制成每1ml含1～5mg的溶液，作为对照品溶液；

(3)照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为13∶7∶2三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，将薄层板置碘缸中熏蒸，至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同黄色斑点。

作为优选方案，以上所述的具有治疗肿瘤放化疗骨髓抑制的中药组合物的质量检测方法，按重量份数计，所述的中药组合物由黄芪500份、酒制黄精500份、酒制女贞子250份、烫制骨碎补500份、天花粉500份、淫羊藿250份制成口服液制剂，所述检测方法包括黄芪、女贞子、骨碎补和淫羊藿的薄层鉴定，包括以下步骤：

黄芪的薄层鉴定，包括以下步骤：

(1)制备供试品溶液：取中药组合物口服液10ml，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；

(2)制备对照品溶液：取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；

(3)照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为13∶7∶2三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热到105℃至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，样品日光下显相同的棕褐色斑点，365nm紫外光灯下显相同的橙黄色荧光斑点；

骨碎补的薄层鉴定，包括以下步骤：

(1)制备供试品溶液：取中药组合物口服液10ml，加乙醚提取2次，每次20ml，弃去乙醚液；药液加乙酸乙酯提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；

(2)制备对照品溶液：取柚皮苷对照品，加甲醇分别制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；

(3)照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比4∶6∶6∶1∶0.5的甲醇-丁酮-氯仿-水-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同天蓝色的荧光斑点；

淫羊藿的薄层鉴定，包括以下步骤：

(1)制备供试品溶液：取中药组合物口服液10ml，加乙醚提取2，每次20ml，弃去乙醚液；药液加乙酸乙酯提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；

(2)制备对照品溶液：取淫羊藿苷对照品，加甲醇分别制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；

(3)照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为13∶7∶2的三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同棕黄色的斑点；

女贞子的薄层鉴定，包括以下步骤：

(1)制备供试品溶液：取中药组合物口服液10ml，通过D101型大孔吸附树脂柱，以水洗脱，弃去水液，再用体积浓度20％乙醇50mL洗脱，弃去洗脱液，继用体积浓度30％乙醇50mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇使溶解，作为供试品溶液；

(2)制备对照品溶液：取特女贞苷对照品，加甲醇分别制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；

(3)照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为13∶7∶2三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，将薄层板置碘缸中熏蒸，至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同黄色斑点。

作为优选方案，以上所述的具有治疗肿瘤放化疗骨髓抑制的中药组合物的质量检测方法，其特征在于，中药组合物口服液制剂通过以下方法制备得到：按重量份数取黄芪、酒制黄精、酒制女贞子、烫制骨碎补、天花粉、淫羊藿，加药材8～12倍量水，煎煮2～3次，每次1.5～2小时，滤过，合并滤液并浓缩至60℃相对密度约为1.12～1.18，加入乙醇使含醇量达到55～65％，0℃～4℃冷藏24～48小时，滤过，滤液调pH至7.0～7.2，减压回收乙醇并浓缩至60℃相对密度为1.30～1.40，，调pH至4.5，0℃～4℃冷藏24～48小时，滤过，取甜菊素和木糖醇加水溶解，加入滤液中混匀，调节pH至7.5～8.0，搅匀，滤过，灌封，100℃灭菌30min，即得。

作为优选方案，以上所述的具有治疗肿瘤放化疗骨髓抑制的中药组合物的质量检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括采用高效液相色谱法检测中药组合物中黄芪的含量，包括以下步骤：

(1)对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5～1mg的溶液，即得；

(2)供试品溶液的制备：精密量取中药组合物口服液10ml，用水饱和的正丁醇振摇提取2～4次，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2～3次，弃去氨液，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，上清液离心过膜，即得。

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以A相乙腈-B相水为流动相按下表进行梯度洗脱；采用蒸发光散射检测器检测，理论塔板数按黄芪甲苷峰计算应不低于3000；

测定法:分别精密吸取对照品溶液5μl、15μl及供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得；

每1ml中药组合物口服液含黄芪以黄芪甲苷计，不得少于0.15mg。

作为优选方案，以上所述的具有治疗肿瘤放化疗骨髓抑制的中药组合物的质量检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括采用高效液相色谱法检测中药组合物中女贞子的含量，包括以下步骤：

(1)对照品溶液的制备：取特女贞苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含有0.1mg的溶液，即得。；

(2)供试品溶液的制备：精密量取中药组合物口服液5ml至50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，上清液离心过膜，即得；

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为19:81乙腈-水为流动相；检测波长为224nm；理论塔板数按特女贞苷峰计算应不低于3000；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

每1ml中药组合物口服液含女贞子以特女贞苷计，不得少于0.50mg。

由于本发明治疗肿瘤放化疗骨髓抑制所引起的白细胞降低症的中药组合物(双黄升白口服液)含有6味药材构成，提取物中含有强极性，中等极性等活性成分，现有技术的色谱分离条件还不能全面反映其内在质量，本发明通过大量实验筛选能客观反映和评价该中药组合物的检测方法，优选得到最佳的色谱条件，包括最佳流动相的组成和最佳的梯度洗脱程序，检测波长，流速，色谱柱和柱温等。采用本发明优选得到的色谱条件，可以对中药组合物中各成分进行科学检测，且重现性和稳定性优。

有益效果：本发明提供的中药具有治疗肿瘤放化疗骨髓抑制所引起的白细胞降低症的中药组合物的质量检测方法具有以下优点：

本发明针对现有技术检测方法的诸多不足，通过大量实验筛选出最佳的薄层鉴别方法，活性成分检测方法(包括流动相组成，检测波长、色谱柱，柱温等分析条件)，经实验验证表明，本发明提供的检测方法，可以全面、客观、准确的检测和评价具有治疗肿瘤放化疗骨髓抑制所引起的白细胞降低症的中药组合物的质量，为保证临床疗效具有重要意义。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。

实施例1

1、具有治疗肿瘤放化疗骨髓抑制的中药组合物口服液制剂(双黄升白口服液)通过以下方法制备得到：按重量份数取黄芪500g、酒制黄精500g、酒制女贞子250g、烫制骨碎补500g、天花粉500g、淫羊藿250，加药材12倍量水，煎煮2次，每次1.5小时，滤过，合并滤液并浓缩至60℃相对密度约为1.12～1.18，加入乙醇使含醇量达到55％，0℃～4℃冷藏248小时，滤过，滤液调pH至7.0，减压回收乙醇并浓缩至60℃相对密度为1.30～1.40，调pH至4.5，0℃～4℃冷藏48小时，滤过，取甜菊素和木糖醇加水溶解，加入滤液中混匀，调节pH至7.5～8.0，搅匀，滤过，灌封，100℃灭菌30min，即得。

2、仪器与试药

MS105DU、AL204、MT5电子天平(梅特勒公司)；ZF-20C暗箱式紫外分析仪(上海宝山顾村电光仪器厂)；KQ-100B型超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)；DHG-9070A型电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)。

黄芪甲苷由中国药品生物制品检定所提供(批号:110781-200613)，供含量测定用；特女贞苷由中国药品生物制品检定所提供(批号:111926-201203)，供含量测定用；淫羊藿苷由中国药品生物制品检定所提供(批号:110737-200415)，供含量测定用；柚皮苷由中国药品生物制品检定所提供(批号:110722-201111)，供含量测定用；D101型大孔树脂(南京南奥有限公司)；正丁醇、氨水、乙醚、乙酸乙酯、三氯甲烷、乙醇、甲醇等试剂(南京化学试剂有限公司)；薄层板(青岛海洋化工有限公司)。

3、一种具有治疗肿瘤放化疗骨髓抑制的中药组合物的质量检测方法，检测方法包括黄芪、女贞子、骨碎补和淫羊藿的薄层鉴定，包括以下步骤：

(1)黄芪的鉴别

供试品溶液的制备：取以上中药组合物口服液制剂10ml，用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加5ml甲醇溶解，作为供试品溶液。

对照品溶液的制备：另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

阴性对照溶液的制备：按供试品溶液制备方法，同法制得不含黄芪阴性对照溶液。

薄层层析：照薄层色谱法(《中国药典》2010版一部附录ⅥB)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。

结果：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，样品日光下显相同的棕褐色斑点，紫外光灯(365nm)下显相同的橙黄色荧光斑点，而阴性无斑点。结果见表1。

表1双黄升白口服液黄芪鉴别试验结果

结论：经十批样品验证，该法鉴别制剂中黄芪专属性好，重现性好，阴性对照无干扰，将黄芪的薄层鉴别列入质量标准正文。

(2)骨碎补的鉴别

供试品溶液的制备：取以上中药组合物口服液制剂10ml，加乙醚提取2次，每次20ml，弃去乙醚液。药液加乙酸乙酯提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。

对照品溶液的制备：另取柚皮苷对照品，加甲醇分别制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

阴性对照溶液的制备：按供试品溶液制备方法，同法制得不含骨碎补阴性对照溶液。

薄层层析：照薄层色谱法(《中国药典》2010版一部附录ⅥB)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲醇-丁酮-氯仿-水-甲酸(4∶6∶6∶1∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视。

结果：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同天蓝色的荧光斑点，而阴性样品无此斑点。结果见表2。

表2双黄升白口服液骨碎补鉴别试验结果

结论：经十批样品验证，该法鉴别制剂中骨碎补专属性好，重现性好，阴性对照无干扰，故将骨碎补的薄层鉴别列入质量标准正文。

(3)淫羊藿的鉴别

供试品溶液的制备：取以上中药组合物口服液制剂10ml，加乙醚提取2次，每次20ml，弃去乙醚液。药液加乙酸乙酯提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。

对照品溶液的制备：另取淫羊藿苷对照品，加甲醇分别制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

阴性对照溶液的制备：按供试品溶液制备方法，同法制得不含淫羊藿阴性对照溶液。

薄层层析：照薄层色谱法(《中国药典》2010版一部附录ⅥB)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰。

结果：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同棕黄色的斑点，而阴性无此斑点。结果见表3.

表3双黄升白口服液淫羊藿鉴别试验结果

结论：经十批样品验证，该法鉴别制剂中淫羊藿专属性好，重现性好，阴性对照无干扰，故将淫羊藿的薄层鉴别列入质量标准正文。

(4)女贞子的鉴别

供试品溶液的制备：取以上中药组合物口服液制剂10ml，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，柱高为12cm)，以水100ml洗脱，弃去水液，再用20％乙醇50ml洗脱，弃去洗脱液，继用30％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加30％乙醇5ml使溶解，作为供试品溶液。

对照品溶液的制备：另取特女贞苷对照品，加甲醇分别制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

阴性对照溶液的制备：按供试品溶液制备方法，同法制得不含女贞子阴性对照溶液。

薄层层析：照薄层色谱法(《中国药典》2010版一部附录ⅥB)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视，并将薄层板置碘缸中熏蒸。

结果：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同褐色斑点，而阴性无此斑点。将薄层板置碘缸中熏蒸，至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同黄色斑点，而阴性无此斑点；综合比较发现采用碘缸显色更为清晰明显，故将碘缸显色作为显色方式列入质量标准内。

结果见表4。

表4双黄升白口服液女贞子鉴别试验结果

结论：经十批样品验证，该法鉴别制剂中女贞子的专属性好，重现性好，阴性对照无干扰，故将女贞子的薄层鉴别列入质量标准正文。

4、中药组合物中黄芪甲苷的含量测定

(1)对照品溶液的制备

取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.512mg的溶液，即得。

(2)供试品溶液的制备

精密量取以上中药组合物口服液制剂10ml，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，上清液过膜，即得。

(3)色谱条件

色谱柱：Waters Symmetry-C₁₈(4.6×250mm,5μm)；以乙腈(A)-水(B)为流动相按下表进行梯度洗脱，如表5；采用蒸发光散射检测器检测。

表5梯度洗脱表

(4)专属性考察

在此条件下黄芪甲苷与其他组分的分离度大于1.5，峰形良好，理论塔板数以黄芪甲苷峰计不低于3000，阴性样品无黄芪甲苷峰。结果表明本方法系统适应性良好。

(5)线性关系考察

精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇配成每毫升含有黄芪甲苷512μg的对照品溶液；精密吸取2、5、10、15、20μl对照品溶液，按上述色谱条件进样测定，记录峰面积。以进样量(μg)的常用对数为横坐标，峰面积的常用对数为纵坐标，计算得回归方程为：Y＝1.9822X+4.8698，r＝0.9989。结果表明：黄芪甲苷在1.02～10.24μg之间呈良好的线性关系。(见表6)。

表6线性关系考察

(6)精密度考察

精密吸取同一对照品溶液，连续进样6次，记录峰面积，RSD为1.42％，结果表明精密度良好。如表7

表7精密度试验

(7)稳定性考察

取黄芪样品溶液，室温放置，每隔4h进行连续测定，测定6次，以黄芪甲苷的保留时间及质量浓度评价样品的稳定性，计算RSD，结果表明样品稳定性良好。如表8

表8稳定性试验

(8)重复性考察

取按以上1所述的方法制备得到的同一批中药组合物口服液(双黄升白口服液)，同法制备样品溶液6份，在上述色谱条件下分别进样测定，结果样品中黄芪甲苷的平均质量浓度为0.41mg/ml，RSD为4.24％，表明重复性良好。如表9。

表9重复性试验

(9)准确度考察

精密吸取已知浓度样品溶液2.5ml至容量瓶中，精密加入黄芪甲苷对照品溶液2ml(浓度0.635mg/ml)，加水稀释至10ml，按上述供试品制备方法制备6份样品，样品残渣加甲醇溶解，定容至5ml容量瓶中，取样测定，计算回收率和RSD；结果平均加样回收率为100.53％，RSD为2.33％，表明本方法准确度良好。如表10

表10准确度考察

结果黄芪甲苷的平均回收率为100.53％，RSD＝2.33％(n＝6)。

(10)样品含量测定

按以上1所述的方法制备得到的中药组合物口服液制剂(双黄升白口服液)7批小试及3批中试样品，每批平行2份，按供试品样品制备方法制备样品，在上述色谱条件下进样测定，精密吸取样品溶液，进样测定，计算每批样品中黄芪甲苷的浓度。结果如表11.

表11含量测定结果(n＝2)

(11)结论

双黄升白口服液小试七批样品、中试规模三批样品制备过程中黄芪甲苷的转移率基本稳定，在63.53％～78.85％之间，因不同批次黄芪饮片中黄芪甲苷含量的波动而导致样品中黄芪甲苷的含量稍有差异。根据以上中药组合物口服液制剂10批样品黄芪甲苷含量测定结果(0.21～0.41mg/ml)，将黄芪甲苷按含量最低值下浮30％，暂规定以上中药组合物口服液制剂每毫升口服液含黄芪以黄芪甲苷(C₄₁H₆₈O₁₄)计，不得少于0.15mg。

5、中药组合物中特女贞苷的含量测定

(1)对照品溶液的制备

取特女贞苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含有特女贞苷382.7μg的对照品储备溶液，即得。

(2)供试品溶液的制备

稀释5倍样品制备：精密量取以上中药组合物口服液制剂10ml至50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，上清液离心过膜，即得；

稀释10倍样品制备：精密量取以上中药组合物口服液制剂5ml至50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，上清液离心过膜，即得；

(3)色谱条件

色谱柱：Waters sunfire-C₁₈(4.6×250mm>

(4)专属性考察

理论板数以特女贞苷峰计应不低于3000，拖尾因子1.05，此条件下特女贞苷与其它组分的分离度应不低于1.5；阴性样品无特女贞苷峰。结果表明本方法系统适应性良好。

(5)线性关系考察

精密吸取不同体积的对照品储备溶液至容量瓶，加甲醇定容，分别制备成每毫升含有38.27、76.54、153.08、191.35、382.7μg的对照品溶液，按上述色谱条件进样10μl测定峰面积。以峰面积积分值为横坐标，对照品质量为纵坐标，计算得回归方程为：Y＝11133X-64127，r＝0.9999。结果表明，特女贞苷在38.28～382.7μg/ml之间呈良好的线性关系。如表12.

表12线性关系考察

(6)精密度考察

精密吸取同一对照品溶液，分别进样6次，记录峰面积，RSD为1.09％。如表13

表13精密度试验

(7)重复性考察

取按以上1所述的方法制备得到的同一批中药组合物口服液(双黄升白口服液)，同法制备稀释5倍样品溶液6份，在上述色谱条件下分别进样测定，结果样品中特女贞苷的平均质量浓度为228.47μg，RSD为1.93％，表明重复性良好。如表14。

表14重复性试验

(8)稳定性考察

精密吸取稀释5倍样品溶液，室温放置，每隔4h连续进样测定，测定6次，记录峰面积，结果特女贞苷峰面积的RSD为2.04％。如表15。

表15稳定性试验

(9)准确度考察

精密吸取双黄升白口服液5ml至50ml容量瓶中，加水定容，制得稀释10倍样品，取稀释10倍样品1.5ml至5ml容量瓶中，精密加入特女贞苷对照品溶液2ml(浓度76.54μg/ml)，加50％甲醇定容，平行制备6份样品，进样测定，计算回收率和RSD。结果特女贞苷的平均回收率为104.56％，RSD＝1.50％(n＝6)，表明本方法准确度良好。如表16。

表16加样回收率表

(10)样品含量测定

在上述色谱条件下，精密吸取样品溶液，进样测定，计算每批样品中特女贞苷的浓度。如表17。

表17含量测定结果

(11)结论

中药组合物口服液(双黄升白口服液)小试七批样品、中试规模三批样品制备过程中特女贞苷的转移率基本稳定，在33.04％～44.44％之间，因不同批次女贞子饮片中特女贞苷含量的波动而导致样品中特女贞苷的含量稍有差异。根据以上中药组合物口服液制剂10批样品特女贞苷含量测定结果(0.71～1.20mg/ml)，将特女贞苷按含量最低值下浮30％，规定以上中药组合物口服液制剂每毫升口服液含女贞子以特女贞苷(分子式：C₃₁H₄₂O₁₇)计，不得少于0.50mg。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。