樟菇酸类化合物用以改善藻华现象的用途

摘要

一种樟菇酸类化合物用以改善藻华现象的用途，该樟菇酸类化合物投于一淡水水体，以抑制该淡水水体中藻细胞的过度增殖；其中，该樟菇酸类化合物选自樟菇酸A、樟菇酸B、樟菇酸C、樟菇酸H或樟菇酸K。

说明书

技术领域

本发明关于一种樟菇酸类化合物的用途，特别关于一种樟菇酸类化合物用以改善藻华现象的用途。

背景技术

藻华现象（algal bloom）又称为水体富营养化，为淡水水体中氮磷含量过高，超出环境容量及自净能力，导致藻类过度增殖的现象，可能会造成饮用水源的污染，而对人体健康造成危害。

发明内容

本发明目的是提供一种樟菇酸类化合物用以改善藻华现象的用途，将樟菇酸类化合物作为用以抑制藻细胞过度增殖的活性成分。

本发明所述的樟菇酸类化合物用以改善藻华现象的用途，该樟菇酸类化合物投于一淡水水体，以抑制该淡水水体中藻细胞的过度增殖；其中，该樟菇酸类化合物选自樟菇酸A、樟菇酸B、樟菇酸C、樟菇酸H或樟菇酸K。

本发明所述的樟菇酸类化合物用以改善藻华现象的用途，其中，该樟菇酸类化合物为樟菇酸A，且以每个月一次，每次30～500 μg/mL的投予剂量投予该淡水水体。

本发明所述的樟菇酸类化合物用以改善藻华现象的用途，其中，该樟菇酸类化合物为樟菇酸B，且以每个月一次，每次30～500 μg/mL的投予剂量投予该淡水水体。

本发明所述的樟菇酸类化合物用以改善藻华现象的用途，其中，该樟菇酸类化合物为樟菇酸C，且以每个月一次，每次700～2500 μg/mL的投予剂量投予该淡水水体。

本发明所述的樟菇酸类化合物用以改善藻华现象的用途，其中，该樟菇酸类化合物为樟菇酸H，且以每个月一次，每次30～500 μg/mL的投予剂量投予该淡水水体。

本发明所述的樟菇酸类化合物用以改善藻华现象的用途，其中，该樟菇酸类化合物为樟菇酸K，且以每个月一次，每次30～500 μg/mL的投予剂量投予该淡水水体。

本发明的樟菇酸类化合物用以改善藻华现象的用途，借助以该樟菇酸类化合物作为用以抑制藻细胞过度增殖的活性成分，以防止藻华现象所造成的饮用水源污染问题，达到维护人体健康的功效。

附图说明

图1a：是樟菇酸A的化学结构式。

图1b：是樟菇酸B的化学结构式。

图1c：是樟菇酸C的化学结构式。

图1d：是樟菇酸H的化学结构式。

图1e：是樟菇酸K的化学结构式。

图2a：是樟菇酸类化合物的总离子层析结果。

图2b：是樟菇酸类化合物的选择性离子层析结果。

图3a：是樟菇酸类化合物樟菇酸A对藻细胞存活率的影响（趋势线公式：y=92.699*e^(-0.0045757x)，R²=0.9691）。

图3b：是樟菇酸类化合物樟菇酸B对藻细胞存活率的影响（趋势线公式：y=106.19*e^(-0.0054494x)，R²=0.98493）。

图3c：是樟菇酸类化合物樟菇酸C对藻细胞存活率的影响（趋势线公式：y=89.828*e^(-0.00088987x)，R²=0.90144）。

图3d：是樟菇酸类化合物樟菇酸H对藻细胞存活率的影响（趋势线公式：y=105.09*e^(-0.0065006x)，R²=0.98735）。

图3e：是樟菇酸类化合物樟菇酸K对藻细胞存活率的影响（趋势线公式：y=84.873*e^(-0.010659x)，R²=0.93987）。

具体实施方式

为让本发明的上述及其他目的、特征及优点能更明显易懂，下文特举本发明的较佳实施例，并配合附图，作详细说明如下：

本发明所述的“淡水水体”，泛指各种水累积之处，可以为河川、湖泊、池塘、溪涧等自然水体，亦包含水库及港湾等人工水体。

本发明的樟菇酸类化合物，可以投于一淡水水体，以抑制该淡水水体中藻细胞的过度增殖，其中，该樟菇酸类化合物可以为樟菇酸A（zhankuic acid A，其化学结构式如图1a所示）、樟菇酸B（zhankuic acid B，其化学结构式如图1b所示）、樟菇酸C（zhankuic acid C，其化学结构式如图1c所示）、樟菇酸H（zhankuic acid H，其化学结构式如图1d所示）、樟菇酸K（zhankuic acid K，其化学结构式如图1e所示）。前述樟菇酸类化合物可以为经人工合成的合成化合物，或者为萃取自牛樟芝等中草植物药材的天然化合物，于此不加以设限。

值得注意的是，该樟菇酸类化合物的投予剂量及使用频率可以依据藻华现象的形成与否而有所不同。例如：于该淡水水体中尚未形成藻华现象时，可以借助该樟菇酸类化合物的投予，以预防该淡水水体发生藻华现象，此时，该樟菇酸类化合物的使用频率可以为每个月1次，且投予剂量可以为30～200 μg/mL（樟菇酸A、樟菇酸B、樟菇酸H或樟菇酸K）或700～1000 μg/mL（樟菇酸C）；又或者，于该淡水水体中已形成藻华现象后，则可以借助该樟菇酸类化合物的投予，促进过度增殖的藻细胞的死亡，以达到清除该淡水水体的藻华现象，此时，该樟菇酸类化合物的使用频率可以为每个月1～2次，连续投予至少3个月，且投予剂量可以为200～500 μg/mL（樟菇酸A、樟菇酸B、樟菇酸H或樟菇酸K）或1000～2500 μg/mL（樟菇酸C）。

为证实本发明樟菇酸类化合物确实具有抑制藻细胞的生长，进而可以作为用以改善藻华现象的活性成分，遂进行以下试验：

（A）樟菇酸类化合物的萃取、纯化

本试验取一牛樟芝（Antrodia>）样品，先行粉碎至粒径约为100 nm后，以一乙醇水溶液（体积百分浓度为95%）进行萃取2小时（每公斤的牛樟芝样品以1～3公升的乙醇水溶液进行萃取），续进行减压浓缩，以获得一初萃物。

续将该初萃物进行液相─液相分配萃取，将该初萃物溶于纯水后，加入等体积的正己烷，均匀摇晃混合后，静置待其完全分层，以取得一水层溶液，将该水层溶液混合等体积的乙酸乙酯，均匀摇晃混合后，静置待其完全分层，以取得一乙酸乙酯层溶液，将该乙酸乙酯层溶液进行减压浓缩，以获得一乙酸乙酯层萃取物。

以乙酸乙酯回溶该乙酸乙酯层萃取物后，吸附于硅胶颗粒，并将该硅胶颗粒充填于管柱中，以水及氰甲烷的混合液作为流动相，以2 mL/min的流速进行冲提，以取得分别包含樟菇酸A、樟菇酸B、樟菇酸C、樟菇酸H及樟菇酸K的数个冲提液，续将该数个冲提液进行洗结晶或再结晶，以获得超高纯度的樟菇酸A、樟菇酸B、樟菇酸C、樟菇酸H及樟菇酸K。

续将经由前述流程所获得的樟菇酸A、樟菇酸B、樟菇酸C、樟菇酸H及樟菇酸K进行总离子层析（total ion chromatogram，简称TIC）及选择性离子层析（selective ion monitoring，简称SIM）结果分别如图2a、图2b所示，而樟菇酸A、樟菇酸B、樟菇酸C、樟菇酸H及樟菇酸K的质荷比（m/z）及滞留时间（retention time，简称RT）分别纪录于表1。

表1、本试验各樟菇酸类化合物的质荷比及滞留时间。

樟菇酸类化合物m/z [M+H]⁺RT（分钟）樟菇酸A455.311.45樟菇酸B469.459.23樟菇酸C470.558.13樟菇酸H487.58.56樟菇酸K489.54.12

据此，即可以自该牛樟芝样品萃取、纯化出樟菇酸A、樟菇酸B、樟菇酸C、樟菇酸H、樟菇酸K等五种樟菇酸类化合物。

（B）樟菇酸类化合物对藻细胞存活率的影响

本试验以铜绿微囊藻（Microzystis>）的藻细胞进行测试，其为淡水产的藻类，具有产毒性，故于过度增殖形成藻华后，可能会危害人体健康。

分别将不同浓度的樟菇酸A、樟菇酸B、樟菇酸C、樟菇酸H、樟菇酸K加入已培养至稳定期的藻细胞中，以流式细胞仪观察72小时后的藻细胞存活率，结果分别如图3a～图3e所示。

依据图3a～图3e所示的结果可以得知，樟菇酸A、樟菇酸B、樟菇酸C、樟菇酸H、樟菇酸K确实都可以抑制藻细胞的生长，且经计算可以得知，樟菇酸A、樟菇酸B、樟菇酸C、樟菇酸H、樟菇酸K的IC₅₀数值分别为135>

综合上述，本发明的樟菇酸类化合物用以改善藻华现象的用途，借助以该樟菇酸类化合物作为用以抑制藻细胞过度增殖的活性成分，以防止藻华现象所造成的饮用水源污染问题，达到维护人体健康的功效。

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