一种大青鲨年龄鉴定用素材的制备方法

摘要

本发明公开了一种大青鲨年龄鉴定用素材的制备方法，不同的尺寸脊椎骨使用不同的素材，大个体脊椎骨素材制备方法采用纵切片方法，小个体脊椎骨素材制备方法采用染色法；本发明通过上述方法解决了大青鲨脊椎骨不易研磨、研磨过程中易受损、切片轮纹清晰度不高等问题，大青鲨纵切片的研磨包括提取、清洗、切片、磨片、固定、抛光等过程；对大青鲨脊椎骨的纵截面进行打磨，用力均匀，打磨抛光的脊椎骨切片用封片剂封片，保证轮纹能保持较长的时间。

说明书

技术领域

本发明涉及一种海洋生物年龄鉴定用素材的制备方法，特别涉及一种大青 鲨年龄鉴定用素材的制备方法。

背景技术

大青鲨是软骨鱼类中的重要种类，位于海洋生态系统的顶端，作为延绳钓 渔业的主要兼捕鱼种，它的经济价值较高。脊椎骨具有稳定储存生长信息的特 点，是研究鲨鱼类年龄和生长最有效的材料；脊椎骨呈双凹型，脊椎骨上年轮 特征为宽阔的不透明层(宽层)和狭窄的半透明层(狭层)交替排列，呈同心圆 状。宽层形成于温度上升生长迅速的春夏季节，狭层形成于温度下降生长缓慢 的秋冬季节，当年的宽层和翌年的狭层交界处即为年轮；大青鲨脊椎骨作为一 种生长信息载体，它能稳定的储存机体输入的生长信息，揭示大青鲨的幼仔长 度、鱼体的年龄和各年的生长等信息，因此成为鲨鱼类年龄鉴定的最佳材料。

大青鲨具有生长缓慢、性成熟期晚、繁殖周期长、寿命长等特征，一旦遭 受过渡捕捞，种群资源的恢复困难，故对大青鲨进行资源评估必不可少，而年 龄和生长信息是评估种群资源状态的基本信息；大青鲨的脊椎骨伴随着鱼体的 生长而生长，但随着鱼体的继续生长，脊椎骨会出现停滞生长现象，但鱼体的 生长信息仍会继续储存于脊椎骨中，这样在鲨鱼生长后期易出现轮纹重叠现 象，因此，选择何种年龄鉴定方法至关重要。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种大青鲨年龄鉴定用素材的制备方法。

为达到上述目的，本发明的技术方案如下：

一种大青鲨年龄鉴定用素材的制备方法，其特征在于，不同的尺寸脊椎骨 使用不同的素材，大个体脊椎骨素材制备方法包括如下步骤：

(1)提取：自第一背鳍处取约3-5节脊椎骨，冷冻保存；

(2)清洗：将脊椎骨置于沸水中煮约5min，除去多余的结缔组织，若仍 不干净，将其置于0.5％氢氧化钠溶液中浸泡，根据脊椎骨的尺寸，浸泡时间为 约8h-12h，后至于蒸馏水浸泡中约30min；

(3)切片：脊椎骨固定于低速切片机上，纵切片切割至1-2mm，将纵切片 的近椎体中心面在1200^#的砂纸上打磨至椎体平面，于抛光机上抛光研磨面；

固定：用强力速粘胶将纵切片粘在载玻片上，椎体中心面朝下；

磨片：用800^#的砂纸、1200^#的砂纸细磨切片，并随时在透射光解剖镜下观 察其研磨程度，至接近椎体中心处，切片研磨厚度为0.4-0.5mm，在抛光机上 抛光研磨面；

封片：将载玻片泡在60℃水中5-10分钟后取下切片，干燥后用PermountTM 封片剂固定脊椎骨纵切片于载玻片上，盖上盖玻片；

小个体脊椎骨素材的制备方法包含如下步骤：

(1)提取：自第一背鳍处取约3-5节脊椎骨，冷冻保存；

(2)清洗：将脊椎骨置于沸水中煮约5min，除去多余的结缔组织，若仍 不干净，将其置于0.5％氢氧化钠溶液中浸泡，根据脊椎骨的尺寸，浸泡时间为 约8h-12h，后至于蒸馏水浸泡中约30min，并晾干；

(3)染色：将干燥的完整脊椎骨置于10％硝酸钴溶液中24h，取出后，并 蒸馏水洗干净，最终晾干。

在本发明的一个实施例中，大个体脊椎骨为叉长≥220cm的大青鲨个体， 所述小个体脊椎骨为叉长＜220cm的大青鲨个体。

通过上述技术方案，本发明的有益效果是：

本发明方法是对大个体(叉长≥220cm)和小个体(叉长＜220cm)的大青 鲨年龄鉴定用素材进行制备，根据实验发现叉长小于220cm小个体大青鲨适宜 利用完整脊椎骨染色法进行素材制备，通过试验确定硝酸钴染色为最佳；而叉 长达到220cm及以上的样本相应的脊椎骨较大，轮纹在边缘会出现重叠，选择 进行切片观察，由于脊椎骨材质中具部分软骨，纵切片制备素材效果会更佳。

大青鲨脊椎骨的制片是一个复杂而精细的过程，制片效果的好坏直接关系 到年龄鉴定的准确性及可靠性；染色剂处理可以加深年轮的清晰度，对鉴定的 精确性尤为重要。

本发明通过染色方法使完整脊椎骨上轮纹更加清晰，解决了脊椎骨切片不 易研磨、研磨过程中易受损、切片轮纹清晰度不高等问题，提供一种能够快速 准确不同尺寸大青鲨年龄鉴定用素材的制备方法，制备出的素材极大的缩短了 鉴定时间，保证较高的鉴定成功率，同时使打磨后的脊椎骨轮纹能保持较长的 时间。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施 例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述 中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付 出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明叉长≥220cm的大青鲨脊椎骨形态示意图；

图2为本发明叉长≥220cm的大青鲨脊椎骨形态纵切片示意图；

图3为本发明叉长＜220cm的大青鲨脊椎骨染色图；

图中数字和字母所表示的相应部件名称：

10、椎体20、椎体中心30、椎体中心面40、生长轮纹。

具体实施方式

为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解， 下面结合具体图示，进一步阐述本发明。

本发明公开了一种大青鲨年龄鉴定用素材的制备方法，不同的尺寸脊椎骨 使用不同的素材；

参见图1和图2所示，大个体脊椎骨(叉长≥220cm)素材制备方法包括 如下步骤：

(1)提取：自第一背鳍处取约3-5节脊椎骨，冷冻保存；

(2)清洗：将脊椎骨置于沸水中煮约5min，除去多余的结缔组织，若仍 不干净，将其置于0.5％氢氧化钠溶液中浸泡，根据脊椎骨的实际尺寸，浸泡时 间为约8h-12h，后至于蒸馏水浸泡中约30min；

(3)切片：脊椎骨固定于低速切片机上，纵切片切割至1-2mm，将纵切片 的近椎体中心面在1200^#的砂纸上打磨至椎体平面，于抛光机上抛光研磨面；

固定：用强力速粘胶将纵切片粘在载玻片上，椎体中心面朝下；

磨片：用800^#的砂纸、1200^#的砂纸细磨切片，并随时在透射光解剖镜下观 察其研磨程度，至接近椎体中心处，切片研磨厚度为0.4-0.5mm，在抛光机上 抛光研磨面；

封片：将载玻片泡在60℃水中5-10分钟后取下切片，干燥后用PermountTM 封片剂固定脊椎骨纵切片于载玻片上，盖上盖玻片；

参见图3所示，小个体脊椎骨(叉长＜220cm)素材的制备方法包含如下 步骤：

(1)提取：自第一背鳍处取约3-5节脊椎骨，冷冻保存；

(2)清洗：将脊椎骨置于沸水中煮约5min，除去多余的结缔组织，若仍 不干净，将其置于0.5％氢氧化钠溶液中浸泡，根据脊椎骨的实际尺寸，浸泡时 间为约8h-12h，后至于蒸馏水浸泡中约30min，并晾干；

(3)染色：将干燥的完整脊椎骨置于10％硝酸钴溶液中24h，取出后，并 蒸馏水洗干净，最终晾干。

以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业 的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中 描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明 还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本 发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。