用内源安全标记表达胃毒杀虫蛋白的转基因生防工程真菌及其构建方法

摘要

本发明公开了用内源安全标记表达胃毒杀虫蛋白的转基因生防工程真菌及其构建方法。本发明是将杀虫蛋白Vip3Aa1的编码基因置于内源强启动子之下，构建带有该杀虫蛋白基因的表达载体。利用球孢白僵菌内源ura3营养缺陷型作为安全标记，将其携带上述表达载体的感受态芽生孢子转入球孢白僵菌野生菌株中，获得高表达杀虫蛋白Vip3Aa1的重组工程菌株。本发明公布的无外源抗性标记表达胃毒杀虫蛋白Vip3Aa1的转基因生防工程真菌为BbHUV5，具有球孢白僵菌天生缺乏的胃毒杀虫活性，整体杀虫效果大幅提高，而且不携带任何外源除草剂抗性基因标记的环境风险隐患。本发明采用的工程菌株构建思路及其工程菌株为开发增效且环境相容度高的转基因真菌杀虫剂开辟了新的技术途径。