异长春花苷内酰胺在制备治疗肠应激综合征的药物中的应用

摘要

本发明公开了一种异长春花苷内酰胺的药物新用途，即异长春花苷内酰胺用于制备治疗肠易激综合征的药物的新用途。异长春花苷内酰胺用于治疗肠易激综合征，安全、有效。

说明书

技术领域

本发明涉及一种化合物的新用途，具体涉及一种化合物在治疗肠应激综合征 方面的应用。

背景技术

肠易激综合征(IrritableBowelSyndrome，IBS)，也称肠易激综合症、肠应激 综合征、过敏性肠综合征、过敏性大肠综合征、过敏性结肠炎、结肠痉挛、黏液 性结肠炎、易激结肠、应激性结肠综合征，是一种常见的功能性肠道疾病，临床 上以腹痛或腹部不适，伴有大便性状改变(稀便、黏液便)和排便习惯改变(腹 泻、便秘)等为特征，可持续存在或反复发作，但检查无明显生态学及生化异常 改变。临床上十分常见、发病率高，严重干扰了患者的生活质量和工作。IBS发 病原因较为复杂，是多种因素综合的结果，其中心理、情绪、社会及环境因素在 致病过程中起着极为重要的作用，并直接受中枢神经、内分泌和免疫系统的制约。 根据临床表现不同，IBS可分为便秘型(IBS-C)和腹泻(IBS-D)，临床上以腹泻型 (IBS-D)最为常见，在已确诊为IBS的病例中占74.1％。

目前市场上治疗IBS的药物种类繁多，但是很多药物存在不良反应，如抗胆 碱药虽能缓解腹痛、止泻但易引起腹胀，并且长期服用会导致药物依赖，反而增 加便秘的顽固性，以及药物治疗对症不全面等。

异长春花苷内酰胺是一种吲哚类生物碱糖苷，具有一定的抗肿瘤、抗炎、解 热、止痛、镇咳平喘、抗色素沉着等方面的活性，专利及期刊文献已有公开。而 将异长春花苷内酰胺用于治疗肠易激综合征未见报道。研究表明，异长春花苷内 酰胺在治疗肠易激综合征方面有显著的功效，相比目前市场上的其他药物，具有 毒副作用小、不易产生依赖性、药效显著等特点。

说明书

本发明提供了异常春花苷内酰胺在制备治疗肠易激综合征药物中的新用途。

本发明所述异长春花苷内酰胺为市售或从含有该成分的植物或中药材或中 药饮片中提取，包括但不限于乌檀、钩藤、长春花、蛇根木、短小蛇根草、黄长 春花、风箱树、鸡仔木、蛇根木。

本发明所述异常春花苷内酰胺的新用途，是以异长春花苷内酰胺为有效成分 加入药学常用辅料制成临床常用剂型。

为更好地理解本发明，发明人提供了以下研究资料说明本发明的技术效果， 下述试验仅用于说明本发明但不限于本发明。

试验一：异长春花苷内酰胺(STR)静脉注射给药治疗肠易激综合征

一、试验材料

马来酸曲美布汀片，天津田边制药有限公司；匹维溴铵片，法国苏威制药； 大黄药材和番泻叶药材均购于康济大药房；5-羟色胺(5-HT)ELISA试剂盒(美国 R&D公司)；乌拉坦，上海化学试剂一厂；0.9％生理盐水；墨汁。

异常春花苷内酰胺注射剂：将异长春花苷内酰胺以注射用水为溶剂，然后加 入亚硫酸钠、氯化钠，充分搅拌，使全部溶解；然后加入针用活性炭，75℃搅拌 20分钟，再用注射用水定容，以0.45μm的滤膜过滤除炭，再用0.22μm的滤膜 滤过；灌装，充氮，压塞，轧盖，于120℃灭菌20min，放冷，即得。

动物：SD大鼠，SPF级，40只，雌雄各半，体重180～220g，由苏州工业园 区爱尔麦特科技有限公司提供。KM种小鼠，清洁级，40只，雌雄各半，体重 18～22g，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供。

仪器：AL104电子天平，梅特勒-托利多仪器有限公司；一次性使用无菌导 尿管；玻璃均浆器；LDZ5-2型低速离心机，北京京力离心机有限公司；酶标仪， MolecularDevices。

二、试验方法

1、对大黄致小鼠腹泻模型的影响

健康KM小鼠称重后随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组(马来酸曲 美布汀)、试验组(异长春花苷内酰胺注射剂)。除正常对照组外，各组灌胃给予 大黄水煎液(1g/只)，连续8d，正常对照组给予同体积的蒸馏水，最后一次灌 胃大黄水煎液后，记录各组小鼠体重及稀便率。从第10天开始，试验组以20 mg/kg的剂量注射异长春花苷内酰胺注射剂，阳性对照组灌胃给予马来酸曲美布 汀，正常对照组、模型组给予蒸馏水，容积为10mL/kg，每天给药一次，连续 3d。最后一次给药前再次记录各组小鼠体重及稀便率，记录完毕后禁食不禁水 24h，最后一次给药后30min灌胃墨汁，20min后颈部脱臼处死小鼠并迅速解剖 取出肠道，用直尺记录小肠总长度和墨汁在肠道中推进的距离(幽门到墨汁推进 前端的距离)，计算推进率。

推进率＝(墨汁推进距离/小肠全长)×100％

表1STR对大黄致小鼠腹泻模型的影响(x±s，n＝10)

注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

表1结果显示，试验组药物对大黄所致小鼠腹泻具有明显的治疗作用。与模 型组比较，试验组药物能够显著促进腹泻小鼠体重的恢复(P＜0.01)，显著降低 腹泻小鼠的稀便率(P＜0.05，0.01)，显著降低小鼠的肠推进距离和推进率(P＜ 0.05)，改善小鼠肠道功能。

2.对番泻叶腹泻型肠易激综合征大鼠的影响

健康SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组、试验组，分别记 录每只动物体重，除正常对照组外，其余组第1、2周灌胃番泻叶煎液[6g/(kg/d)]； 第2周直到第4周，灌服完番泻叶煎液后即用胶带束缚前肩、前上肢胸部，限制 前上肢搔抓头面部，但不限制其活动，束缚时间2h/d。第4周开始每次束缚完 毕后立即给予相应试验药物，试验组静脉注射异长春花苷内酰胺注射剂(20 mg/kg)，阳性对照组灌胃给予马来酸曲美布汀，正常对照组及模型组给予同体 积蒸馏水；每天给药一次，连续3d。第3周开始记录各组动物的体重和肠道敏 感性。肠道敏感性测定方法：测试前一天大鼠禁食不禁水24h，大鼠头部固定后， 将导尿管沿大鼠肛门插入，深度约5cm，用橡皮筋把导管和大鼠尾巴根部缠在一 起，15min后待大鼠适应环境，用2.5mL注射器逐渐向导尿管内推注蒸馏水0.5～ 1.2mL扩张肠道，分别观察引起大鼠腹部抬起以及背部拱起的蒸馏水体积阈值， 进行行为评估；15min后对每一阈值重复评估，共3次，最后一次给药前，再按 上述方法记录每只动物的体重和肠道敏感性。最后一次给药后半小时，各组大鼠 灌胃墨汁，20min后处死，打开腹腔，将消化管自幽门至盲肠部，分离取出。不 加牵引平铺于木板上，测量幽门到墨汁推进最前端的长度，计算推进率。剖取结 肠组织，生理盐水冲洗干净后，称取0.5g，用生理盐水制成10％匀浆，1000g离 心10min后，取上清采用ELISA法测定5-HT。结果见表2、3。

表2STR对番泻叶腹泻型肠易激综合征大鼠体重的影响(x±s，n＝10)

注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

表3STR对番泻叶腹泻型肠易激综合征大鼠肠道的影响(x±s，n＝10)

注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

表2、3数据显示，与模型组相比，试验组可明显升高番泻叶腹泻型肠易激 综合征大鼠的体重(P＜0.01)，明显提高肠道敏感性阈值(P＜0.05)，降低肠推进率 (P＜0.01)，并且能显著降低结肠组织5-HT水平(P＜0.05，0.01)，从而改善腹泻型 肠易激综合征大鼠肠道运动功能异常。

试验二：异长春花苷内酰胺(STR)灌胃给药治疗肠易激综合征

一、试验材料

试验材料同试验一所述材料。

二、试验方法

1、对大黄致小鼠腹泻模型的影响

健康KM小鼠称重后随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组、试验组。 除正常对照组外，各组灌胃给予大黄水煎液(1g/只)，连续8d，正常对照组给予 同体积的蒸馏水，最后一次灌胃大黄水煎液后，记录各组小鼠体重及稀便率。从 第10天开始，试验组以80mg/kg的剂量灌胃给予异长春花苷内酰胺注射剂，阳 性对照组灌胃给予匹维溴铵片，正常对照组、模型组给予蒸馏水，容积为10mL/kg， 每天给药一次，连续3d。最后一次给药前再次记录各组小鼠体重及稀便率，记 录完毕后禁食不禁水24h，最后一次给药后30min灌胃墨汁，20min后颈部脱臼 处死小鼠并迅速解剖取出肠道，用直尺记录小肠总长度和墨汁在肠道中推进的距 离(幽门到墨汁推进前端的距离)，计算推进率。

推进率＝(墨汁推进距离/小肠全长)×100％

表4STR对大黄致小鼠腹泻模型的影响(x±s，n＝10)

注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

2.对番泻叶腹泻型肠易激综合征大鼠的影响

健康SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组、试验组，分别记 录每只动物体重，除正常对照组外，其余组第1、2周灌胃番泻叶煎液[6g/(kg/d)]； 第2周直到第4周，灌服完番泻叶煎液后即用胶带束缚前肩、前上肢胸部，限制 前上肢搔抓头面部，但不限制其活动，束缚时间2h/d。第4周开始每次束缚完 毕后立即给予相应试验药物，试验组灌胃给予异长春花苷内酰胺注射剂(80 mg/kg)，阳性对照组灌胃给予匹维溴铵片，正常对照组及模型组给予同体积蒸 馏水；每天给药一次，连续3d。第3周开始记录各组动物的体重和肠道敏感性。 肠道敏感性测定方法：测试前一天大鼠禁食不禁水24h，大鼠头部固定后，将导 尿管沿大鼠肛门插入，深度约5cm，用橡皮筋把导管和大鼠尾巴根部缠在一起， 15min后待大鼠适应环境，用2.5mL注射器逐渐向导尿管内推注蒸馏水0.5～ 1.2mL扩张肠道，分别观察引起大鼠腹部抬起以及背部拱起的蒸馏水体积阈值， 进行行为评估；15min后对每一阈值重复评估，共3次，最后一次给药前，再按 上述方法记录每只动物的体重和肠道敏感性。最后一次给药后半小时，各组大鼠 灌胃墨汁，20min后处死，打开腹腔，将消化管自幽门至盲肠部，分离取出。不 加牵引平铺于木板上，测量幽门到墨汁推进最前端的长度，计算推进率。剖取结 肠组织，生理盐水冲洗干净后，称取0.5g，用生理盐水制成10％匀浆，1000g离 心10min后，取上清采用ELISA法测定5-HT。结果见表5、6。

表5STR对番泻叶腹泻型肠易激综合征大鼠体重的影响(x±s，n＝10)

注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

表6STR对番泻叶腹泻型肠易激综合征大鼠肠道的影响(x±s，n＝10)

注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

表4结果显示，与模型组相比，灌胃给予STR对大黄所致小鼠腹泻均具有明 显的治疗作用，能够显著促进腹泻小鼠体重的恢复(P＜0.01)，显著降低腹泻小鼠 的稀便率(P＜0.01)，显著降低小鼠的肠推进距离和推进率(P＜0.05)。表5、6数 据显示，与模型组相比，STR可明显升高番泻叶腹泻型肠易激综合征大鼠的体重 (P＜0.05，0.01)，明显提高肠道敏感性阈值(P＜0.05)，降低肠推进率(P＜0.01)， 并且能显著降低结肠组织5-HT水平(P＜0.05，0.01)。

试验三：异长春花苷内酰胺(STR)局部皮肤给药的抗肠易激综合征

一、试验材料

异长春花苷内酰胺巴布剂：取异长春花苷内酰胺，加入辅料NP-700，甘羟 铝，酒石酸，EDTA，甘油，交联聚维酮，纯化水，明胶，氮酮，丙二醇，水杨酸 甲酯，制成巴布剂。

其余所述试验材料同试验一所述材料。

二、试验方法

1、对大黄致小鼠腹泻模型的影响

健康KM小鼠称重后随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组(匹维溴铵)、 试验组(异长春花苷内酰胺巴布剂)。除正常对照组外，各组灌胃给予大黄水煎 液(1g/只)，连续8d，正常对照组给予同体积的蒸馏水，最后一次灌胃大黄水煎 液后，记录各组小鼠体重及稀便率。给药前仔细剃净阳性对照组和试验组动物腹 部皮肤的毛，面积为3.0cm×3.0cm，阳性对照组灌胃给予匹维溴铵片，腹部给 予空白贴剂，连续给药7d，试验组给予异长春花苷内酰胺巴布剂，贴于脱毛部 位，覆以纱布，用胶布固定6h以上，每日换药1次，连续给药7d，动物试验期 间未出现皮肤刺激性，停止给药后未出现红斑、水肿，偶有局部皮肤充血，但 24小时内消失。正常对照组及模型组给予同体积蒸馏水；每天给药一次，连续 7d。小鼠最后一次给药前记录各组小鼠体重及稀便率，给药后灌胃墨汁并处死， 记录小肠总长度和墨汁在肠道中推进的距离，计算推进率。结果见表7.

推进率＝(墨汁推进距离/小肠全长)×100％

表7STR(TP)对大黄致小鼠腹泻模型的影响(x±s，n＝10)

注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

2.对番泻叶腹泻型肠易激综合征大鼠的影响

健康SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组(匹维溴铵)、试验 组(异长春花苷内酰胺巴布剂)，分别记录每只动物体重，除正常对照组外，其 余组第1、2周灌胃番泻叶煎液[6g/(kg/d)]；第2周直到第4周，灌服完番泻叶 煎液后即用胶带束缚前肩、前上肢胸部，限制前上肢搔抓头面部，但不限制其活 动，束缚时间2h/d。第4周开始每次束缚完毕后立即给予相应试验药物，给药 前仔细剃净阳性对照组和试验组动物腹部皮肤的毛，面积为3.0cm×3.0cm，阳 性对照组灌胃给予匹维溴铵片，腹部给予空白贴剂，连续给药7d，试验组给予 异长春花苷内酰胺巴布剂，贴于脱毛部位，覆以纱布，用胶布固定6h以上，每 日换药1次，连续给药7d，正常对照组及模型组给予同体积蒸馏水；每天给药 一次，连续7d。第3周开始记录各组动物的体重和肠道敏感性。肠道敏感性测 定方法：测试前一天大鼠禁食不禁水24h，大鼠头部固定后，将导尿管沿大鼠肛 门插入，深度约5cm，用橡皮筋把导管和大鼠尾巴根部缠在一起，15min后待大 鼠适应环境，用2.5mL注射器逐渐向导尿管内推注蒸馏水0.5～1.2mL扩张肠道， 分别观察引起大鼠腹部抬起以及背部拱起的蒸馏水体积阈值，进行行为评估； 15min后对每一阈值重复评估，共3次，最后一次给药前，再按上述方法记录每 只动物的体重和肠道敏感性。最后一次给药后半小时，各组大鼠灌胃墨汁，20min 后处死，打开腹腔，将消化管自幽门至盲肠部，分离取出。不加牵引平铺于木板 上，测量幽门到墨汁推进最前端的长度，计算推进率。剖取结肠组织，生理盐水 冲洗干净后，称取0.5g，用生理盐水制成10％匀浆，1000g离心10min后，取上 清采用ELISA法测定5-HT。结果见表8、9。

表8STR(TP)对番泻叶腹泻型肠易激综合征大鼠体重的影响(x±s，n＝10)

注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

表9STR(TP)对番泻叶腹泻型肠易激综合征大鼠肠道的影响(n＝10)

注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

表7结果显示，与模型组相比，STR局部给药对大黄所致小鼠腹泻均具有明 显的治疗作用，能够显著促进腹泻小鼠体重的恢复(P＜0.01，0.05)，显著降低腹泻 小鼠的稀便率(P＜0.05，0.01)，显著降低小鼠的肠推进距离和推进率(P＜0.05，0.01)， 改善小鼠肠道功能。表8、9数据显示，与模型组相比，STR透皮给药可明显升高 番泻叶腹泻型肠易激综合征大鼠的体重(P＜0.05，0.01)，明显提高肠道敏感性阈 值(P＜0.05)，降低肠推进率(P＜0.05，0.01)，并且能显著降低结肠组织5-HT水平 (P＜0.05，0.01)，从而改善腹泻型肠易激综合征大鼠肠道运动功能异常。

综上所述，异长春花苷内酰胺可明显改善肠道敏感性，降低肠推进距离和推 进率，并显著降低结肠组织5-HT水平，从而改善腹泻型肠易激综合征所致的腹 泻、肠道运动功能异常等。另外，异长春花肝内酰胺在早期的研究中发现还具有 毒副作用小等优点，本发明可应用于制备治疗肠易激综合征药物。